生长阻滞特异性转录因子5剪接变异体GAS5_O1增强慢性髓系白血病细胞对伊马替尼的敏感性

在多种肿瘤中,生长阻滞特异性转录因子5(growth-arrest specific transcript 5,GAS5)高表达与患者的良好生存期相关。GAS5存在多种剪接变异体,本研究探讨GAS5部分剪接变异体在髓系白血病细胞系中的表达模式。并基于对凋亡诱导敏感的慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞系K562,研究GAS5部分剪接变异体对K562细胞自身增殖、凋亡以及对靶向药物伊马替尼(imatinib,IM)的敏感性的影响。反转录PCR结果显示,GAS5剪接模式在髓系白血病细胞系HL-60、K562、NB4和KASUMI-1之间未见明显差异。相较于指数增长期,GAS5_AE表达水平在细胞密度引起的生长停滞期有一定程度的累积。通过核转染,将GAS5剪接变异体(pcDNA3-GAS5_1B、-GAS5_2B、-GAS5_3A、-GAS5_4A、-GAS5_O1或-GAS5_AE)转入K562细胞的单克隆株中。通过台盼蓝染色、吖啶橙染色后进行细胞计数,克隆形成实验检测细胞集落形成能力。结果与对照组相比,瞬时转染GAS5剪接变异体并无抑制细胞的基础增殖或增强细胞对药物的敏感性。建立GAS5_O1的稳定转染株,延长培养时程并计算倍增时间,发现GAS5_O1的表达水平和倍增时间成正比(R^(2)=0.5692)。在稳转株O1-C8中观察到GAS5_O1可促进IM引起的细胞生长抑制(56.94%±2.84%vs.36.07%±2.32%,P<0.05)和凋亡(29.33%±1.30%vs.52.00%±2.52%,P<0.05)。上述结果表明,GAS5_O1的上调可能增加CML细胞的倍增时间,并使CML细胞对IM处理敏感。

鹿茸多肽对阿霉素所致心肌损伤模型大鼠心肌特异性转录因子Nkx 2.5、GATA4、ATF-2和MEF-2C的影响

目的观察鹿茸多肽对阿霉素所致心肌损伤模型大鼠心肌特异性转录因子Nkx 2.5、GATA4、ATF-2、MEF-2C表达的影响。方法 Wistar大鼠60只随机分为6组,每组10只。腹腔注射阿霉素建立心肌损伤大鼠模型,连续给药21d。末次给药结束后1h,PowerLab数据采集分析系统检测各组大鼠心率及心电图ST段变化,Elisa法检测各组大鼠血清中Nkx2.5、GATA4、ATF-2和MEF-2C含量,Western-blot检测各组大鼠心脏中Nkx2.5、GATA4、ATF-2和MEF-2C蛋白表达水平。结果鹿茸多肽可明显降低阿霉素所致心肌损伤大鼠模型的心率,ST段上调幅度明显降低,升高大鼠血清中Nkx 2.5、GATA4和MEF-2C含量及上调心脏中蛋白水平(P<0.05或P<0.01),ATF-2无明显变化(P>0.05)。结论鹿茸多肽可明显缓解阿霉素所致的大鼠心肌损伤,其作用机制可能与调节心肌特异性转录因子Nkx 2.5、GATA4、MEF-2C水平有关。

神经特异性转录因子DAT1 mRNA在大鼠中枢神经系统的定位

目的 观察神经特异性转录因子 (DAT1)在大鼠中枢神经系统中的定位。 方法 原位杂交组织化学染色。 结果 在大鼠中枢神经系统中 ,DAT1mRNA阳性反应产物主要位于胞质和突起内 ,DAT1mRNA阳性神经元可见于大脑、小脑、丘脑、脑干、脊髓。强阳性信号主要出现于嗅球、梨状皮质、纹状皮质、内嗅皮质、海马CA1区、齿状回、丘脑后外侧核、红核、被盖背侧核、延髓中央网状核、三叉神经运动核、舌下神经核、迷走神经核、楔束外核、疑核等部位 ;中等强度着色主要分布于大脑皮质Ⅱ～Ⅵ层、海马CA2区和CA3区、杏仁核、苍白球、内侧膝状体、外侧膝状体、视上核、未定带、弓状核、室旁核、黑质、中脑网状核、脑桥网状核、巨细胞网状核、外侧网状核、斜方体内侧核、前庭神经核、蜗神经背核、楔束核、中缝背核 ;在隔核、乳头体前核、上丘浅灰质层、下丘中央核、下丘外侧核、中央灰质、三叉神经中脑核、三叉脊束核、孤束核、下橄榄核、中央上核、小脑顶核、小脑间置核、小脑外侧核、脊髓灰质及丘脑的大部分核团可见弱的阳性细胞。 结论 DAT1广泛分布于大鼠中枢神经系统内 ,其分布与多巴胺能神经分布密切相关 ,提示该基因对大鼠中枢神经系统活动 ,尤其是多巴胺能神经递质活动具有重要的调节功能。

巢湖鸭生长素基因和垂体特异性转录因子1基因的PCR-SSCP检测

以生长素基因Ghrelin和垂体特异性转录因子1Pit-1基因为候选基因,采用PCR-SSCP和DNA测序技术检测2个候选基因在巢湖鸭群体中的单核苷酸多态性(SNPs)。结果表明,Ghrelin基因exon 3第54 bp位置有G→A碱基的点突变,在巢湖鸭群体中检测到AA、AB、BB 3种基因型,A等位基因频率为0.49,B等位基因频率为0.51;在exon 5第149位和166位发生了C→A和G→T的突变,检测到MM、MN、NN 3种基因型,M等位基因频率为0.19,N等位基因频率为0.81。Pit-1基因的2对引物的扩增片段均未检测到多态性,说明所检测的Pit-1基因外显子3和4序列比较保守。

Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病患儿肺血流异常发病机制中的作用

目的观察Th细胞分化特异性转录因子在低体质量先天性心脏病(CHD)患儿肺血流异常发病机制中的作用。方法回顾分析2016年4月—2018年10月河北省儿童医院心脏外科收治的低体质量先天性心脏病患儿100例的临床资料,根据患儿肺充血情况,分为肺充血组(n=62)和肺缺血组(n=38),另取同期在医院治疗的其他疾病低体质量患儿50例作为对照组。比较各组患儿外周血淋巴细胞转录因子T-bet和GATA-3 mRNA表达,血浆IL-4和IFN-γ水平及外周血淋巴细胞亚群Th1/Th2细胞百分率的变化,通过Pearson法分析T-bet、GATA-3 mRNA表达量与Th1/Th2、血浆IL-4、IFN-γ水平的相关性。结果与对照组比较,肺充血组和肺缺血组患儿T-bet、GATA-3 mRNA表达,血浆IFN-γ、Th1细胞百分率、Th1/Th2水平均明显降低,血浆IL-4、Th2细胞百分率水平明显升高,且肺充血组患儿上述指标变化较肺缺血组更为显著(F/P=6.547/<0.001,9.254/<0.001,2.196/<0.001,65.254/<0.001,39.875/<0.001,3.026/<0.001,26.598/<0.001)。CHD患儿T-bet mRNA表达与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈正相关,与血浆IL-4水平、Th2百分率呈负相关(r/P=0.513/0.005,0.685/0.027,-0.764/0.000,-0.985/0.002),GATA-3 mRNA表达与血浆IL-4水平、Th2百分率呈正相关,与血浆IFN-γ水平、Th1百分率呈负相关(r/P=0.784/0.015,0.793/0.011,-0.525/0.032,-0.652/0.025)。结论 GATA-3和T-bet表达的平衡失调对Th1/Th2细胞的平衡偏移具有重要的调控作用,从而影响血浆IFN-γ、IL-4水平,在CHD的发病机制中起着重要作用。

成骨特异性转录因子——核心结合因子Cbfa1在骨改建中的作用

成骨细胞由具有多向分化潜能的间充质细胞经骨原细胞、前成骨细胞分化而来,它一旦终末分化以后就分泌产生各种细胞外基质蛋白,如I型胶原、骨桥蛋白（osteopontin）和骨钙素（osteocalcin），并参与骨基质的钙化．

成骨细胞特异性转录因子2在乳腺癌中的表达及临床意义

目的:探讨成骨细胞特异性转录因子2(runt-related transcription factor 2,Runx2)在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测Runx2在乳腺浸润性导管癌和癌旁乳腺组织中的表达情况及其与乳腺癌临床病理特征间的关系。结果:Runx2在乳腺浸润性导管癌及癌旁乳腺组织中的阳性表达率分别为69.52%(73/105)和8.57%(9/105),乳腺浸润性导管癌组Runx2的阳性表达率显著高于癌旁乳腺组织,差异具有统计学意义,而且Runx2在乳腺浸润性导管癌中的表达与雌激素受体(estrogen receptor,ER)呈负相关。Runx2的表达与乳腺癌的组织学分级、淋巴结转移及临床分期相关,而与患者年龄及肿瘤大小无关。结论:Runx2可能参与了乳腺癌的发生,而且在ER阴性乳腺癌的发生过程中可能发挥了更加重要的作用。Runx2与乳腺癌的恶性程度、浸润、转移有关,提示Runx2可能成为乳腺癌患者预后评估的重要指标之一。

1,25二羟基维生素D_3对大鼠脾调节性T细胞及其特异性转录因子表达的影响

目的:探讨用1,25二羟基维生素D3[1,25(OH)2VitD3]预干预对大鼠辅助性T细胞(Th1)免疫应答中脾CD4+CD25+调节性T细胞及其特异性转录因子Foxp3基因表达的影响。方法:采用近交系大鼠,随机分为对照组、脂多糖(LPS)组和VitD3组。分别给予对照组和LPS组赋形剂,VitD3组用1,25(OH)2VitD3(0.25μg/只.d-1),连续灌胃14 d。第15天LPS组和VitD3组腹腔注射致死剂量LPS(10 mg/kg)。6 h后处死,用流式细胞仪检测脾CD4+CD25+调节性T细胞比例,用Realtime RT-PCR检测脾中Foxp3 mRNA的表达。结果:1,25(OH)2VitD3明显上调大鼠Th1免疫应答中脾CD4+CD25+调节性T细胞的比例及其特异性转录因子Foxp3 mRNA的表达。结论:1,25(OH)2VitD3预干预对大鼠Th1免疫应答中脾CD4+CD25+调节性T细胞及其特异性转录因子Foxp3的基因表达有显著影响。1,25(OH)2VitD3有可能通过促进CD4+CD25+调节性T细胞的发育,发挥其免疫调节作用。

人甲状腺特异性转录因子-1基因的分子克隆及鉴定

目的 克隆人甲状腺特异性转录因子 - 1基因片段 ,为进一步从事分子甲状腺学研究打下基础。 方法 采用 RT- PCR法从人甲状腺组织 RNA中扩增出甲状腺特异性转录因子 - 1基因片段( 44 0～ 80 3bp) ;应用 TA克隆技术对 PCR产物进行分子克隆 ;Eco R I双酶解法鉴定重组体。 结果 获得 TTF- 1c DNA的阳性重组体 ( p CRTM / TTF- 1) ,经 Eco RI双酶解表明克隆成功。 结论 TTF- 1基因的分子克隆可进一步研究 TTF- 1基因对甲状腺特异蛋白质基因表达调控作用。

神经特异性转录因子DAT1酵母双杂交诱饵载体的构建

目的:用神经特异性转录因子DAT1构建酵母双杂交系统中的诱饵载体。方法:根据GenBank中提供的DAT1序列设计引物,以小鼠脑组织cDNA文库为模板,PCR扩增DAT1,并与pLexA载体连接,测序鉴定。用醋酸锂法转化酵母菌EGY48,在选择性培养基上观察pLexA-DAT1在EGY48中的表达。结果:PCR扩增出的DNA片段约490bp,大小正确,构建的融合表达载体pLexA-DAT1,测序结果表明序列完全正确,融合区域的读码框正确。转化了pLexA-DAT1的酵母菌EGY48在加有X-Gal的SD/Gal/Raf/-His/-Ura营养缺陷型诱导平板上菌落不变蓝,证明LexA-DAT1融合蛋白本身不具有激活p8op-LacZ报告基因的能力,可以用作进一步的实验。结论:获得了在酵母细胞中正确表达且未自主激活报告基因的融合表达载体pLexA-DAT1,可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”。

RT-PCR法检测甲状腺特异性转录因子-1 mRNA

ＲＴ┐ＰＣＲ法检测甲状腺特异性转录因子┐１ｍＲＮＡ林玲１大野诚２远藤登代志２女屋敏正２１．福建医科大学附属第二医院内科（泉州３６２０００）２．日本山梨医科大学第三内科本文工作系第一作者在日本山梨医科大学研修期间完成（１９９５～１９９６年）关键词转录因...

鹿茸多肽对冠脉结扎心肌缺血模型大鼠心肌特异性转录因子Nkx 2.5、GATA4、ATF-2和MEF-2C表达的影响

目的观察鹿茸多肽对冠脉结扎心肌缺血模型大鼠心肌特异性转录因子表达的影响。方法Wistar大鼠随机分为6组,心脏左冠状动脉前降支结扎复制大鼠心肌缺血损伤模型,连续给药28d。PowerLab数据采集分析系统检测各组大鼠心率及心电图ST段变化,Elisa法检测各组大鼠血清中Nkx2.5、GATA4、ATF-2和MEF-2C含量,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理学形态变化。结果鹿茸多肽可明显降低心脏左冠状动脉前降支结扎所致心肌缺血损伤大鼠模型的心率,ST段上调幅度明显降低,升高大鼠血清中Nkx 2.5、GATA4和MEF-2C含量(P<0.05),ATF-2无明显变化(P>0.05)。结论鹿茸多肽可明显缓解冠状动脉结扎所致的大鼠心肌缺血损伤,其作用机制可能与调节心肌特异性转录因子Nkx 2.5、GATA4、MEF-2C水平有关。

骨折三期辨证治疗对大鼠骨折愈合特异性转录因子表达影响的实验研究

目的通过观察骨折不同分期治疗对SD大鼠骨折愈合特异性转录因子(Osx)表达的影响,为其能促进成骨细胞分化,促进骨折愈合提供一定的理论依据。方法选用SD大鼠40只,于双侧胫骨中下1/3段造成3 mm骨质缺损,随机分为生理盐水组、早期治疗组、中期治疗组、后期治疗组,每组10只,在相应时间段给予相应治疗,于造模后30 d处死大鼠,取胫骨标本,运用免疫组化法测定其Osx表达,并对相应的平均光密度值(MOD)进行分析。结果早、中、后三期治疗组对Osx表达均有促进作用,较生理盐水组高,差异有统计意义(P<0.05或P<0.01);各治疗组之间比较,后期治疗组对Osx的促进作用更显著(P<0.05),中期治疗组对Osx的促进作用亦优于早期治疗组(P<0.05)。结论中医辨证分期治疗骨折是必要的。

垂体特异性转录因子研究进展

垂体特异性转录因子（ＰｉｔｕｉｔａｒｙＳｐｅｃｉｆｉｃＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＦａｃｔｏｒ）于垂体前叶表达，是垂体生长激素（ＧＨ）细胞，催乳素（ＰＲＬ）细胞以及促甲状腺素（ＴＳＨ）细胞基因转录的调节者，能特异地识别基因上的ＤＮＡ序列，并与之结合，进而影响该基因转录。本文阐述已发现的两种垂体特异性转录因子（Ｐｉｔ－１和Ｐｉｔ－２），对垂体激素分泌功能及垂体疾病发病机理的重要意义。

人成骨特异性转录因子cDNA胞外区片段的克隆和序列分析

目的:克隆人成骨特异性转录因子(cbfa1)cDNA胞外区片段并进行序列分析。方法:提取人骨肉瘤细胞系MG63的总RNA,逆转录合成cDNA,用PCR法扩增cbfa1基因片段。将获得的预期大小的PCR产物插入pUC19克隆载体中,转化TOP10感受态细胞,蓝白筛选白色克隆,进行体外扩增,提取质粒进行酶切鉴定后进行序列分析。结果:从人骨肉瘤细胞系细胞提取的总RNA中成功获得人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,DNA序列分析证实其序列和文献报道一致。结论:采用基因克隆的方法得到人cbfa1基因片段和重组质粒pUC19-cbfa1,为进一步进行其结构和功能研究打下基础。

神经特异性转录因子DAT1绿荧光蛋白表达载体的构建及其在C8细胞中的表达定位

目的:构建神经特异性转录因子DAT1与绿荧光蛋白融合表达的表达载体,并检测其在C8星形胶质细胞中的表达。方法:采用基因重组技术将DAT1基因和绿色荧光蛋白基因融合,构建绿荧光蛋白表达载体pEGFP-C1-DAT1,测序验证序列无误后,用脂质体法将重组质粒转入C8细胞,荧光显微镜观察DAT1的表达及定位。结果:测序验证结果表明,重组质粒含有DAT1全长编码序列,转染实验表明EGFP-DAT1能在C8细胞中正确表达,且DAT1蛋白主要定位于细胞核中。结论:DAT1全长cDNA基因绿色荧光蛋白表达载体构建成功,在C8细胞中可以正确表达,为进一步研究DAT1的功能奠定了基础。

甲状腺特异性转录因子和钠/碘转运体与甲状腺肿瘤的关系

甲状腺滤泡细胞的主要功能是合成、分泌甲状腺激素,此过程需要碘、甲状腺球蛋白、甲状腺过氧化物酶、H2O2等四种重要成分并依赖TSH-cAMP系统的调节。甲状腺激素合成通路中多种甲状腺特有基因的表达受甲状腺特异性转录因子调控。三种甲状腺特异性转录因子TTF-1、TTF-2和Pax-8中,TTF-1和Pax-8与甲状腺肿瘤的发生有关;浓缩碘的能力是正常甲状腺组织的一个功能特征,钠/碘转运体介导活性碘的转运,与同位素扫描的“冷、凉”结节关联,是甲状腺癌放射性碘治疗的依据之一。它们与甲状腺肿瘤的关系是当今甲状腺分子病理学研究的热点。

成骨细胞特异性转录因子Cbfal研究进展

近年体内和体外研究表明Cbfal是成骨细胞分化和骨骼形成过程中特异性转录调控因子。在成骨细胞分化过程中,Cbfal的表达和活化除了通过自身的反馈调控之外,还受到细胞外基质和多种细胞因子及其所激活的相关信号通路的影响。成骨细胞内Cbfal mRNA和蛋白质的表达水平与其转录调控活性的不一致提示,该转录因子的活化主要是通过蛋白修饰以及与其他相关蛋白间相互作用而实现的。

成骨细胞特异性转录因子Osterix对骨形成作用的研究进展

骨形成是一个涉及从间充质干细胞向成骨细胞分化的复杂发育过程,研究骨形成过程中的关键因子并阐明其作用的具体分子机制对骨代谢性疾病的治疗具有重要意义。Osterix(Osx)是迄今为止发现的唯一一个成骨细胞特异性转录因子,Osx只在骨组织细胞中表达,在干细胞向成骨细胞分化过程中起决定性作用,没有Oxs就没有骨形成和骨再生。Osx的发现为整个骨形成领域的研究开启了新的窗口。基于Osx在骨形成过程中的重要地位,研究者们迫切希望开发出作用于Osx的合成代谢分子,这对骨代谢性疾病的治疗将起到革命性的进步,因此对Osx的上下游因子及信号通路之间具体作用机制的进一步研究和阐明显得尤其重要。笔者对其研究进展做一综述。

神经系统特异性转录因子Nhlh2的研究进展

Nhlh2(nescient helix-loop-helix2)基因,又名HEN2(HUA ENHANCER2)和NSCL2(neuronal stem cell leukemia2)(或NSCL-2),其编码蛋白是碱性螺旋-环-螺旋(bHLH)转录因子家族的新成员,在神经系统中尤其是神经内分泌组织中特异性表达。目前已在鸡、小鼠、大鼠、牛和人类等多种真核生物中发现其同源基因,该基因的功能研究主要集中在神经内分泌系统、视网膜发育和肿瘤等相关领域,对其分子调控机制的探询已经取得一些初步成果。本文将从Nhlh2的基因和编码蛋白的特性、表达时空、功能研究以及调控与被调控机制等方面对其研究进展进行综述,并对今后的研究提出了展望和思考。