犬尿氨酸通路在儿童神经发育障碍性疾病中的研究进展

色氨酸在体内主要通过犬尿氨酸通路(KP)代谢为血清素、褪黑素和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸等生物活性物质,与多种器官和细胞的生理功能密切相关。KP中重要酶活性和代谢物水平的改变通过影响受体和调节细胞信号传导的方式影响儿童脑发育。该研究主要围绕KP及其代谢产物在儿童神经发育中的作用进行综述,希望为儿童神经发育障碍性疾病的协助诊断和治疗干预提供新的切入点。

禾谷镰孢犬尿氨酸途径关键酶基因的鉴定与表达分析

为了鉴定禾谷镰孢中KP关键酶基因及其功能,本研究采用生物信息学方法对禾谷镰孢的KP关键酶基因进行了系统分析。研究发现,禾谷镰孢含有KP关键酶IDO(吲哚-2,3-双加氧酶)、AFMID(芳基甲酰胺酶)、KAT(犬尿氨酸氨基转移酶)、KMO(犬尿氨酸单加氧酶)、KYN(犬尿氨酸酶)和HAO(羟基酸氧化酶)。通过分析禾谷镰孢的表达谱数据,发现KP关键酶基因FgIDO、FgAFMID、FgKAT、FgKMO、FgKYN和FgHAO在分生孢子发育、菌丝生长和侵染玉米茎秆的不同阶段表现出较高的表达水平,表明这些基因可能参与分生孢子发育、菌丝生长和侵染过程。整合研究结果和现有文献信息,绘制了禾谷镰孢KP及其关键酶催化反应的模式图,为阐明禾谷镰孢KP调控病菌生长发育和致病力的功能与机制奠定了基础。

精神分裂症患者外周色氨酸-犬尿氨酸代谢通路中代谢物水平与临床症状的关系

背景精神分裂症是一种常见的重性精神障碍,其发病机制复杂,目前关于精神分裂症外周血清和尿液犬尿氨酸(KYN)代谢物相关性的研究有限。目的分析精神分裂症患者外周血清和尿液色氨酸(TRP)-KYN代谢物与白细胞介素-6(IL-6)的浓度以及血清与尿液KYN代谢物的相关性以及代谢物水平与临床症状的相关性,以期为探索精神分裂症的潜在生物标志物提供参考。方法纳入2021年12月—2022年12月在杭州市第七人民医院住院治疗或门诊就诊的、符合《精神障碍诊断与统计手册(第5版)》(DSM-5)精神分裂症诊断标准的38例患者为研究对象,同期在杭州市社区招募健康对照组共26例。采用阳性和阴性症状量表(PANSS)评定患者的精神病性症状,采用超高效液相色谱串联三重四极杆质谱技术检测所有受试者血清和尿液TRP、KYN、犬尿喹啉酸(KYNA)、喹啉酸(QUIN)、吡啶甲酸(PIC)、黄尿酸和5-羟色胺(5-HT)水平,采用酶联免疫分析检测血清和尿液IL-6水平。采用Pearson相关分析考查精神分裂症患者血清与尿液TRP-KYN代谢物之间的相关性以及代谢物水平与临床症状的相关性。结果精神分裂症患者血清IL-6水平高于健康对照组,差异有统计学意义(U=798.500,P<0.01)。精神分裂症患者尿液PIC水平低于健康对照组,差异有统计学意义(U=253.000,P=0.013)。精神分裂症患者血清KYN水平与尿液QUIN/KYNA、QUIN/PIC均呈正相关(r=0.562、0.438,P均<0.05)。精神分裂症患者血清5-HT/KYN与PANSS总评分和阴性症状分量表评分均呈正相关(r=0.458、0.455,P均<0.01)。结论精神分裂症患者血清TRP-KYN代谢物水平与尿液中神经毒性代谢物比值有关,并与阴性症状严重程度呈正相关。

犬尿氨酸/犬尿酸通路在原发性胆汁性胆管炎伴疲劳小鼠肌肉中的作用及机制研究

目的探究犬尿氨酸(kynurenine,KYN)/犬尿酸(kynuric acid,KYNA)通路在原发性胆汁性胆管炎伴疲劳小鼠肌肉中的作用及机制。方法随机将12只小鼠分成对照组、DDC组、DDC+抑郁组、DDC+抑郁+氯米帕明组,每组3只,对照组常规饲料喂养,DDC+抑郁组和DDC+抑郁+氯米帕明组采用慢性不可预见性温和应激方法复制小鼠抑郁模型;2周后DDC组、DDC+抑郁组、DDC+抑郁+氯米帕明组同时开始连续喂养含有0.1%的DDC饲料建立胆汁淤积模型,同时DDC+抑郁+氯米帕明组腹腔注射盐酸氯米帕明(7.5 mg·kg^(-1)·d^(-1))连续14 d,其余组小鼠经腹腔注射生理盐水。观察并记录小鼠体质量变化。进行负重游泳实验,记录各组小鼠的负重游泳时间。采用强迫游泳实验和悬尾实验评价小鼠抑郁效果。应用ELISA检测各组小鼠血清和肌肉中KYN、KYNA含量的变化;取肝脏和肌肉进行HE染色,观察肝脏和肌肉组织病理学变化;采用ROS染色分析肌肉氧化损伤的程度。结果与对照组相比,DDC组、DDC+抑郁组和DDC+抑郁+氯米帕明组小鼠表现出明显的疲劳和抑郁样行为(P<0.05);对比DDC组,DDC+抑郁组的疲劳和抑郁样行为加重(P<0.05);DDC+抑郁+氯米帕明组的疲劳和抑郁较DDC+抑郁组减轻(P<0.05)。小鼠肝组织和肌组织HE染色结果显示,相比对照组,DDC组、DDC+抑郁组和DDC+抑郁+氯米帕明组表现出不同程度病理损伤;DDC+抑郁+氯米帕明组小鼠的肝和肌组织病理损伤较DDC+抑郁组减轻。与对照组相比,DDC组、DDC+抑郁组和DDC+抑郁+氯米帕明组小鼠肌肉中ROS含量表现出不同程度升高;与DDC+抑郁组相比,DDC+抑郁+氯米帕明组小鼠肌肉中ROS含量显著下降。相比对照组,DDC组、DDC+抑郁组和DDC+抑郁+氯米帕明组小鼠血清和肌肉中KYN水平显著升高(P<0.05),KYNA水平显著下降(P<0.05);DDC+抑郁组小鼠血清和肌肉中KYN浓度比DDC组明显升高(P<0.05);DDC+抑郁+氯米帕明组小鼠血清和肌肉中KYN浓度比DDC+抑郁组明显降低(P<0.05)。结论KYN/KYNA通路在原发性胆汁性胆管炎伴疲劳小鼠中对外周疲劳有调控作用,抗抑郁治疗能改善肌肉疲劳。

色氨酸犬尿氨酸代谢、免疫细胞与炎症性肠病的研究进展

炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)是全球性疾病,现今仍无法根治,疾病负担日益加重,T细胞、DC细胞、NK细胞、巨噬细胞、ILC细胞等免疫细胞在IBD中发挥着重要作用。色氨酸犬尿氨酸代谢途径产物可通过多种方式调节免疫细胞的复制、功能、凋亡等,从而参与IBD的发生发展。该综述就关于多种免疫细胞在IBD中的作用、色氨酸犬尿氨酸途径通过调节免疫细胞参与IBD的机制进行阐述,可为生物治疗IBD以及IBD的靶向药物研究提供理论依据,为IBD患者提供更好的治疗。

孕晚期睡眠剥夺对孕鼠胎盘炎症、犬尿氨酸途径及幼鼠认知功能的影响

目的:探究孕晚期睡眠剥夺对孕鼠胎盘炎症、犬尿氨酸途径及幼鼠认知功能的影响。方法:24只孕18 d大鼠随机分为对照组和模型组,每组12只。水平台睡眠剥夺法建立睡眠剥夺模型,模型组接受为期72 h的睡眠剥夺,对照组不进行睡眠剥夺,正常饲养。建模完成后,对照组与模型组随机取6只孕鼠乙醚麻醉,腹主动脉采血,完整取出脑组织,剥离胎鼠、胎盘,其余6只自然分娩,正常饲养。于幼鼠出生后34 d、64 d进行行为学检测,苏木精-伊红(hematoxylin eosin,HE)染色观察胎盘组织形态,免疫荧光染色观察胎鼠海马小胶质细胞形态和神经元增殖情况。高效液相色谱法检测色氨酸、犬尿氨酸、犬尿喹啉酸(kynurenic acid,KYNA)水平。测定母鼠血浆皮质酮与胎盘组织细胞因子水平。结果:与对照组相比,模型组幼鼠64 d旷场实验活动总距离、34 d中央区域停留时间、64 d中央区域活动距离存在差异(P<0.05),34 d高架十字迷宫实验幼鼠进入开放臂的时间增多(P<0.05),进入闭合臂的时间减少(P<0.05),64 d强迫游泳实验幼鼠不动时间增加(P<0.05)。对照组胎盘结构清晰,细胞形态正常,模型组胎盘部分滋养细胞皱缩,呈空网状,血窦减少。与对照组相比,模型组胎鼠海马神经元增殖、突起数量减少(P<0.05),小胶质细胞数量增多(P<0.05),细胞表面积增大(P<0.05),胎盘色氨酸、犬尿氨酸、KYNA、白细胞介素-1β(inter⁃leukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、胎鼠脑组织KYNA、母鼠血浆皮质酮水平升高(P<0.05)。结论:孕晚期睡眠剥夺可能通过犬尿氨酸途径引发孕鼠胎盘炎症反应,影响幼鼠认知功能。

老年心力衰竭住院患者犬尿氨酸和色氨酸与短期预后的关系探索

目的 探讨心力衰竭住院患者犬尿氨酸/色氨酸比值波动及其与短期预后的关系。方法 回顾性选取2020年12月至2022年12月长沙市第一医院收治的心力衰竭住院患者150例,根据患者出院后6个月预后情况分为预后不良组48例和预后良好组102例。采用液相色谱-串联质谱法测定患者血清中犬尿氨酸、色氨酸浓度,比较2组患者入院时、出院时犬尿氨酸/色氨酸比值,采用ROC曲线分析犬尿氨酸/色氨酸比值对心力衰竭住院患者短期预后的预测价值,采用logistic回归分析心力衰竭住院患者出院后6个月发生不良事件的影响因素。结果 预后不良组总胆固醇低于预后良好组,B型钠尿肽、尿素高于预后良好组(P<0.05)。2组出院时犬尿氨酸/色氨酸比值均低于入院时(P<0.01);预后不良组出院时犬尿氨酸/色氨酸比值高于预后良好组(P<0.01)。ROC曲线分析显示,入院时、出院时犬尿氨酸/色氨酸比值预测心力衰竭住院患者短期预后的曲线下面积分别为0.863(95%CI:0.803~0.924)、0.701(95%CI:0.602~0.801),出院时犬尿氨酸/色氨酸比值预测效能高于入院时(P<0.05)。多因素logistic回归分析显示,总胆固醇(OR=0.696,95%CI:0.501~0.965)、B型钠尿肽(OR=1.530,95%CI:1.092~2.143)、尿素(OR=1.740,95%CI:1.077~2.813)、出院时犬尿氨酸/色氨酸比值(OR=2.280,95%CI:1.093~4.754)是心力衰竭住院患者出院6个月发生不良事件的影响因素(P<0.05)。结论 犬尿氨酸/色氨酸比值是心力衰竭住院患者短期不良预后的独立危险因素,且可有效预测短期预后情况。

犬尿氨酸途径在心力衰竭中的作用研究进展

心力衰竭作为多种心血管疾病的终末阶段,其病理生理过程极为复杂;近几年研究发现犬尿氨酸途径的代谢水平及代谢物的比率与心衰患者的预后、死亡率密切相关,通过调节炎症反应、氧化应激并参与心肌重构在心力衰竭的发生发展中起重要作用。本文就犬尿氨酸途径在心力衰竭的研究进展进行综述,以期为心力衰竭的诊断和治疗提供新的思路。

首发与复发抑郁症患者血清犬尿氨酸途径代谢物水平比较

背景抑郁症发病机制至今尚未完全清楚,既往研究表明,犬尿氨酸途径(KP)在抑郁症发病中具有重要作用。目的探讨首发和复发抑郁症患者血清KP代谢物水平的差异,并分析血清KP代谢物水平与抑郁症状严重程度的关系,为预防抑郁症复发提供参考。方法连续纳入2016年11月-2018年12月在广州医科大学附属脑科医院门诊就诊的符合《精神障碍诊断与统计手册(第5版)》(DSM-5)诊断标准的136例抑郁障碍患者为研究组,其中首发组62例,复发组74例。同时纳入60例健康被试作为对照组。所有患者均接受汉密尔顿抑郁量表17项版(HAMD-17)评定。采用液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法检测抑郁障碍患者和对照组血清色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)以及犬尿喹啉酸(KYNA)水平。采用偏相关分析考查抑郁症患者HAMD-17各因子评分及总评分与KP代谢物水平的关系。结果与对照组相比,首发组和复发组TRP水平更低(t=-3.044、-4.477,P<0.05或0.01),KYN/TRP更高(t=2.343、3.644,P<0.05或0.01),差异均有统计学意义。与复发组相比,首发组和对照组KYNA水平更高(t=2.490、2.636,P<0.05或0.01),KYNA/KYN更高(t=2.894、2.616,P均<0.01),差异均有统计学意义。偏相关分析显示,首发抑郁症患者KYN/TRP与HAMD-17的焦虑/躯体化因子评分呈正相关(r=0.261,P<0.05),KYNA/KYN与HAMD-17总评分及阻滞评分均呈负相关(r=-0.286、-0.282,P均<0.05);复发抑郁症患者KYN/TRP与焦虑/躯体化评分呈正相关(r=0.280,P<0.05)。结论首发和复发抑郁症患者血清KP代谢物水平存在差异,且复发患者KP代谢物水平异常更明显,KP代谢物可能是抑郁症辅助诊断及判断复发的潜在生物标志物。

抑郁症改良电抽搐治疗、肠道菌群和犬尿氨酸通路的相关性研究进展(综述)

抑郁症是一种高度异质性的精神疾病,对患者的思想、行为、感觉、动机和幸福感产生了极大的负面影响。肠道菌群是居住在胃肠道内与人类物种共生的的主要微生物,目前肠道菌群已被证实与抑郁症的发病密切相关。研究表明在已知的几种可能的色氨酸代谢途径中,犬尿氨酸代谢通路受肠道微生物群的调节和影响。改良电抽搐疗法(MECT)是临床上除药物外用于治疗抑郁症最广泛的手段,治疗效果明显,但MECT的作用机制并不明确。本文就MECT治疗、抑郁症肠道菌群及犬尿氨酸代谢通路相关性研究进展做一简要综述。

犬尿氨酸途径:帕金森病运动防治的一种可能新机制

帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种与年龄相关的神经退行性疾病。犬尿氨酸途径(Kynurenine pathway,KP)是PD发生发展相关因素(中枢神经炎症、谷氨酸兴奋性毒作用和多巴胺耗竭等)的共同作用通路。KP主要酶系的调节剂(如抑制剂或激动剂)及其主要神经保护性代谢产物对缓解PD进展有益。运动可显著改善PD相关行为功能障碍,也可以影响KP代谢动力学。促进KP产生神经保护性活性代谢产物可能是运动改善PD相关行为功能障碍的中枢机制之一。本文从KP入手,对其在PD神经退行性病变及PD运动防治中的可能作用进行综述。

首批L-犬尿氨酸国家药品对照品的研制

目的:建立首批L-犬尿氨酸国家对照品。方法:采用紫外吸收光谱、红外吸收光谱、核磁共振谱及高分辨质谱对犬尿氨酸进行结构确证,测定了原料的水分含量、炽灼残渣量及元素含量,并考察了其引湿性、均匀性和稳定性,最后采用氮分析法、液相色谱法及定量核磁共振法对其含量进行测定,最后采用质量平衡法对其含量进行赋值。结果:确证了犬尿氨酸的结构,以质量平衡法计算,将本批次犬尿氨酸的含量定值为97.4%。结论:经过结构确证和含量测定,本批次犬尿氨酸能够满足相关药品检查使用,首批L-犬尿氨酸国家对照品研制成功并通过审定,可用于相关氨基酸药物的检查,有利于提高相关药品质量,保证用药安全。

犬尿氨酸3单加氧酶抑制剂对慢性脑低灌注大鼠的认知功能影响及机制研究

目的观察犬尿氨酸3单加氧酶(KMO)抑制剂对慢性脑低灌注大鼠模型认知功能的影响及其相关代谢产物变化情况。方法选取成年健康雄性SD大鼠45只,随机分成假手术组、手术组、抑制剂组,每组15只。手术组和抑制剂组行血管性认知障碍模型制备。假手术组和手术组生理盐水灌胃,抑制剂组KMO抑制剂灌胃。Western Blot检测血细胞及海马区脑组织KMO活性。结果与手术组比较,抑制剂组第1、2、4、5天逃避潜伏期时间明显缩短,平台象限游泳距离百分比明显升高(P<0.05)。与假手术组比较,手术组大鼠血细胞和海马区KMO活性明显升高(0.297±0.012 vs 0.147±0.017,0.880±0.029 vs 0.690±0.035,P<0.05);抑制剂组大鼠血细胞KMO活性明显低于手术组(0.177±0.023 vs 0.297±0.012,P<0.05)。与手术组比较,抑制剂组大鼠血清和海马区犬尿喹啉酸水平明显升高,大鼠血清KMO、3-羟基犬尿氨酸及血清和海马区喹啉酸水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论KMO抑制剂可改善血管性认知障碍大鼠的认知功能,机制可能是升高犬尿喹啉酸,降低喹啉酸实现的。

萝卜硫素对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌保护作用及色氨酸-犬尿氨酸通路的影响

目的探究萝卜硫素(SFN)对心肌缺血再灌注(I/R)损伤大鼠色氨酸(TRP)-犬尿氨酸(KYN)信号通路及心肌损伤的影响。方法研究于2019年7月至2020年6月进行,将SD雄性大鼠随机分为假手术组(Control)、模型组(I/R)、SFN低(I/R+L SFN)、高(I/R+H SFN)剂量组。术后24 h,ELISA检测各组大鼠血清中炎性因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;HE染色观察各组大鼠心肌组织病理变化;TUNEL检测各组大鼠缺血心肌细胞凋亡情况;HPLC检测各组大鼠心肌组织中TRP、KYN浓度;蛋白质印迹法(Western blotting)检测各组大鼠心肌组织B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、活化胱天蛋白酶3(cleaved-capase3)、吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)蛋白表达情况。结果与Control组相比,I/R大鼠心肌细胞破碎、坏死,细胞排列不规则,心肌纤维断裂,伴有炎性细胞浸润,血清中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、心肌细胞凋亡指数[(32.85±3.13)比(1.07±0.08)]、心肌组织TRP[(783.75±30.32)pmol/L比(402.23±23.55)pmol/L]、KYN浓度[(567.54±28.18)pmol/L比(215.31±20.03)pmol/L]、KYN/TRP比值、cleaved-capase3、Bax、IDO蛋白水平显著升高(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著降低(P<0.05);与I/R相比,I/R+L SFN、I/R+H SFN剂量组心肌细胞上述病理症状明显减轻,大鼠血清中炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量、心肌细胞凋亡指数、心肌组织TRP、KYN浓度、KYN/TRP比值、Bax、cleaved-capase3、IDO蛋白水平依次降低(P<0.05),Bcl-2蛋白水平显著升高(P<0.05)。结论SFN可减少心肌细胞凋亡,缓解机体炎症反应,对心肌损伤有保护作用可能与TRP-KYN信号通路有关。

帕金森病认知功能与血清犬尿氨酸水平的相关性

目的:探讨血清犬尿氨酸(KYN)与帕金森病(PD)认知功能的关系并进行分析,为PD伴认知障碍患者的治疗和预后提供新的预测因素。方法:选取就诊的帕金森病患者40例为试验组,并选取同期健康体检者33例为健康对照组。采集所有受试者晨起空腹静脉血,采用液相色谱串联质谱法测定血清KYN。采用简易精神状态量表(MMSE)及蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评估入组者的认知功能。采用Spearman相关分析血清KYN与MMSE、MoCA之间相关性。采用单因素Logistic回归分析PD发生危险因素。血清KYN水平对发生PD的预测作用的大小,则选择用受试者工作特征(ROC)曲线来评价。结果:试验组血清KYN含量、MMSE及MoCA低于健康对照组,两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。但血清KYN含量与MMSE及MoCA分值之间未见明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。单因素Logistic回归分析可见PD患者病程是血清KYN水平的独立危险因素(OR>1),且血清KYN含量降低是PD的危险因素(OR>1)。ROC结果表明,KYN的最佳截止值为0.365μg/ml,灵敏度为62.5%,特异性为60.5%,曲线下面积为0.667(95%CI:0.539~0.795;P<0.05)。结论:当血清KYN≤0.365μg/ml时,人群发生PD的风险显著增加,即血清KYN水平可作为PD发生的有价值的评估指标。然而血清KYN水平与MMSE、MoCA之间未见明显相关性。

血清L-犬尿氨酸浓度对R-CHOP方案治疗的弥漫大B细胞淋巴瘤患者临床意义

研究弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)患者实施R-CHOP方案治疗后,将血清L-犬尿氨酸浓度作为其预后评价指标的问题。材料和方法 本实验采用前瞻性的、连续入组的实验设计。入组患者为我院2013年1月至2020年1月确诊为弥漫大B细胞淋巴瘤的56例患者。选择24位健康献血人员作为对照组,其中男性12位,女性12位。对70岁以下的患者,R-CHOP治疗方案为持续8周期;对70岁及其以上的患者则持续6周期。利用高效液相色谱法来对患者血清L-犬尿氨酸浓度进行检测。结果 测量所有病患血清L-犬尿氨酸的中位浓度,数值是1.488μm(范围0.612-9.468μm)。在完全分解率方面,L-犬尿氨酸浓度<1.5μm的患者是84%,而≥1.5μm的患者则为62%,差异显著(P<0.05)。L-犬尿氨酸浓度<1.5μm和≥1.5μm的病人的3年总生存率分别为88%、56%(P<0.05)。经过多变量分析发现,L-犬尿氨酸浓度可作为统计总生存率的的唯一独立预后因素。结论 实施R-CHOP方案治疗的DLBCL患者,可将血清L-犬尿氨酸浓度作为其预后评价指标。

原发性高血压患者血浆色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸浓度的变化

目的通过测定血浆色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)浓度,探讨外周吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性与原发性高血压(EH)的关系。方法采用高效液相色谱法(HPLC)测定100例EH患者和80名健康体检者(对照组)血浆TRP、KYN和KYNA浓度,计算产物/底物的百分比来评价酶活性,即IDO活性=KYN/TRP×100%,KAT活性=KYNA/KYN×100%。结果 EH组血浆TRP浓度为(59.85±9.89)μmol/L,明显高于对照组[(48.19±7.72)μmol/L,P<0.001];KYN浓度为(2.01±0.48)μmol/L,明显低于对照组[(2.17±0.43)μmol/L,P<0.05]。EH组和对照组血浆KYNA浓度分别为(24.10±9.12)、(23.59±7.27)μmol/L,二者差异无统计学意义(P>0.05)。EH组IDO活性为3.40%±0.85%,明显低于对照组(4.54%±0.81%,P<0.001);而KAT活性为1.20%±0.36%,明显高于对照组(1.09%±0.27%,P<0.05)。EH组血浆TRP浓度与年龄呈负相关(r=-0.316,P=0.001),而对照组二者之间无明显相关性(r=-0.208,P=0.064)。EH组和对照组血浆IDO活性均与年龄呈正相关(EH组:r=0.264,P=0.008;对照组:r=0.305,P=0.006)。2组血浆KYN、KYNA浓度及KAT活性与年龄均无明显相关性。结论EH组血浆TRP浓度明显增高而KYN浓度明显降低,提示外周TRP-KYN代谢途径的IDO活性可能与EH有关。

高效液相色谱——紫外、荧光双检测器同时测定人尿中犬尿氨酸和犬尿喹啉酸

目的建立高效液相色谱(HPLC)同时测定人尿中犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)方法。用KYNA/KYN比值评价人体犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性。方法采用HPLC测定KYN、KYNA,分析柱为安捷伦HCC18反相色谱柱;流动相为10mmol/L乙酸钠-乙酸缓冲液∶7%乙腈=93∶7;流速1mL/min;检测器波长:紫外365nm,荧光344nm(激发)/398nm(发射)。结果KYN和KYNA保留时间分别为6.9和11.5min。水溶液标准与标准加入工作曲线斜率差异无统计学意义(KYN:P=0.4068;KYNA:P=0.6462)。KYN和KYNA的平均回收率分别为98.74%±7.53%、95.17%±8.17%;稳定性试验的变异系数(CV)分别为3.35%和0.88%;精密度CV分别为2.73%和2.79%;最低检测限分别为0.4和0.2μmol/L。30份健康成年人尿样的KYNA/KYN比值为2.45±1.54。尿中KYNA与KYN含量呈正相关关系(r2=0.3758,P<0.001)。结论测定方法灵敏、准确、稳定。KYNA/KYN比值评测KAT活性具有简便、实用等特点,可用于相关疾病的临床辅助诊断和基础研究。

犬尿喹啉酸及3-羟基犬尿氨酸与阿尔茨海默病的相关性研究

目的探讨犬尿氨酸(KYN)通路主要代谢产物犬尿喹啉酸(KYNA)和3-羟基犬尿氨酸(3-HK)与AD的关系,以及KYN通路限速酶犬尿氨酸3-单加氧酶(KMO)基因多态性与AD的相关性。方法选取AD患者198例为AD组和健康体检者192例为对照组,采用简易智能状态检查量表(MMSE)、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)、日常生活活动能力量表(ADL)、临床痴呆评定量表(CDR)评估,检测各组KMOrs2275163、rs1053230等位基因频率和基因型频率。结果AD组MMSE和MoCA评分明显低于对照组,ADL和CDR评分明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。AD组血浆KYN水平明显低于对照组,KYNA、3-HK及3-HK/KYN明显高于对照组[(1.2±0.2)mmol/L vs(1.3±0.2)mmol/L,P=0.043;(40.0±8.8)nmol/L vs(28.4±9.2)nmol/L,P=0.036;(108.5±14.6)nmol/L vs(35.2±5.6)nmol/L,P=0.011;(94.3±11.9)vs(28.9±9.5),P=0.016]。对照组与AD组rs2275163、rs1053230等位基因频率及基因型频率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论KYN通路代谢产物水平在AD患者中发生变化,在AD发病过程中可能发挥作用,可能成为AD诊断的血清学标志物。

Arg188Gln(G/A)突变对犬尿氨酸酶活性的影响

目的:验证犬尿氨酸酶(KYNU)Arg188Gln(G/A)突变能否改变KYNU的活性。方法:抽提人肝脏细胞的总RNA,通过RT-PCR法获得KYNU基因全长cDNA,以KYNU基因Arg188Gln位点附近序列为模板设计定点突变引物,完成Arg188Gln(G/A)的定点突变,将突变型和野生型KYNU基因克隆到pcDNA载体质粒中,获得野生型和突变型pcDNA-KYNU重组表达质粒,经酶切鉴定和测序验证后转染HEK293细胞,蛋白质印迹法检测KYNU在细胞中的表达,用高效液相色谱法检测HEK293细胞的KYNU活性。结果:野生型和突变型pcDNA-KYNU重组质粒在HEK293细胞中均能表达有活性的KYNU,KYNU的米氏常数分别为(9.833±0.513)μmol/L和(29.900±0.265)μmol/L,最大酶促反应速率分别为(0·700±0.096)nmol·mg^(-1)·min^(-1)和(0.084±0.003)nmol·mg^(-1)·min^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:Arg188Gln(G/A)突变可以减弱KYNU的活性。