湘西地区猕猴桃溃疡病病原菌分离及其全基因组分析

通过了解湘西地区猕猴桃溃疡病致病菌分类地位和基因类型,初步探讨其致病的分子机理。采用纯培养法分离猕猴桃溃疡病菌;基于16S~23S rRNA基因内转录间隔序列进行病原菌的系统发育分析;通过基因组测序和生物信息学分析解析其致病的分子机理。从“米良1号”和“红阳”猕猴桃感病枝条中分离获得5株溃疡病菌,编号为L211、L212、L321、L322、L323;通过形态特征和16S~23S rRNA基因内转录间隔序列分析,鉴定5株细菌均为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidae,Psa)。以菌株L211为代表进行体外猕猴桃枝条接种实验表明能引起典型溃疡病症状。通过菌株L211的全基因组测序和生物信息学分析,获得5741条基因数目,长5412072 bp;基因功能注释发现菌株L211携带121种毒力因子、71个植物互作因子和77个耐药基因;同时,基因组单核苷酸多态性分析发现病原菌L211为基因Ⅲ型Psa。引起湘西地区猕猴桃溃疡病的病原菌是丁香假单胞菌猕猴桃致病变种基因Ⅲ型,与国内外报道的引起猕猴桃溃疡病大流行的致病菌一致。猕猴桃溃疡病发病原因可能是病原菌的多种毒力基因和互作基因协同作用的结果。

十堰猕猴桃溃疡病病原鉴定及防治试验

由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种侵染引起的猕猴桃溃疡病严重影响了各地猕猴桃的生长。为明确鄂西北猕猴桃溃疡病病原形态及生物型,筛选合适的杀菌剂,探索避雨栽培对病害的控制效果,为防治病害提供科学依据,采用形态学和分子生物学技术鉴定猕猴桃溃疡病病原菌及生物型,使用抑菌圈法筛选15种杀菌剂对其抑制效果,调查避雨栽培和露天不同情况下猕猴桃溃疡病的发病率、病情指数和防治效果。结果表明,通过形态特征、16S rDNA及特异性引物鉴定到的菌株K-2为Pseudomonas syringae,生物型为biovar 3。室内毒力测试筛选到7种药剂对猕猴桃溃疡病菌有抑制效果,避雨栽培对猕猴桃溃疡病菌的防治效果可以达到58.06%,通过在避雨栽培下施用50%氯溴异氰尿酸可溶粉剂防治猕猴桃溃疡病,防治效果高达83.87%,说明避雨栽培对猕猴桃溃疡病具有较好的防治效果。

猕猴桃溃疡病“两前两后”关键防控技术示范效果

为做好秦岭北麓、四川盆地、湖南湘西、伏牛山区、大别山区的猕猴桃溃疡病防控工作,2023年分别在陕西、四川、湖南、湖北、河南、安徽等果区选择示范园开展溃疡病“两前两后”关键防控技术示范与应用,并于2024年春季调查枝干溃疡的发生情况。结果表明,“两前两后”关键防控技术在不同果区的应用效果稳定且高效,仅应用1年,与常规管理园相比,示范园防效平均达77.8%,最高达93.7%,有效控制了猕猴桃溃疡病的危害,对助力猕猴桃产业健康发展、提高果农收益具有积极的意义,建议广泛推广应用。

超声对猕猴桃溃疡病的抑制作用

首先通过设置不同超声频率、超声处理时长在体外对丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Psa)进行处理,检测处理后Psa的活菌数、呼吸链脱氢酶活性,筛选具有较好杀菌效果的超声处理条件,然后对Psa侵染后的湘吉红、贝木离体枝条进行不同条件的超声处理,培养30 d后观测湘吉红、贝木离体枝条溃疡病病斑大小,探究不同超声条件对猕猴桃枝条溃疡病的抑制效果.结果表明,60 kHz超声处理45 min或者80 kHz超声处理15 min能够将贝木枝条病斑控制在2 cm左右,80 kHz超声处理30 min能将湘吉红枝条病斑控制在2 cm内,且能完全抑制贝木枝条的溃疡病感染.

猕猴桃溃疡病预防技术

猕猴桃是一种猕猴桃属落叶藤蔓果树,近年在中原地区被广泛种植。但是,随着种植时间和规模的增加,猕猴桃溃疡病为害严重,给现有果园造成了不同程度的损失。笔者通过实地调查漯河市的猕猴桃园并结合现有文献资料,总结出一套预防猕猴桃溃疡病的综合技术,以期减少农户经济损失,为猕猴桃增产增收提供一定的技术支持。

猕猴桃溃疡病的发生与绿色防控技术

猕猴桃溃疡病是猕猴桃生产中普遍发生的一种毁灭性细菌病害,近年来河南省豫西产区普遍发生危害并蔓延成灾。据2021—2022年在嵩县、孟津发生重点区调查,感病株率37.4%~65.6%,其中红阳品种感病植株率达88.7%。按照绿色农产品的标准要求,巧妙选择农药,结合农业、生物、物理等技术措施,绿色防控猕猴桃溃疡病,达到控制病害发生危害和果品无污染的双重目的。

陕西省猕猴桃溃疡病病原菌分离鉴定及分型研究

明确陕西省猕猴桃主产区丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)的变型,从而有针对性地制定猕猴桃溃疡病的综合防治策略,采集陕西省猕猴桃主产区周至、眉县、灞桥、渭南、长安和鄠邑不同年份发病样本进行病原菌的分离,对病原菌进行初步鉴定后再应用特异性PCR进行分子鉴定,并进行回接实验。从鉴定出的Psa菌株中选出16株不同年份不同地区的代表性菌株应用7个管家基因进行MLSA分型分析。共分离鉴定出86株不同地区不同年份的Psa菌株,并通过回接实验验证了其致病性。MLSA分型结果表明16株代表性Psa菌株均属于Psa3,且Psa3与Psa6的遗传距离最近。陕西省猕猴主产区的Psa变型为Psa3,近十年未发生变异。研究结果为今后Psa的检测鉴定及防治研究提供参考。

防治猕猴桃溃疡病涂抹剂的研制及其应用

由丁香假单胞菌猕猴桃致病变种Pseudomonas syringae pv. actinidiae (Psa)引起的猕猴桃溃疡病是猕猴桃产业上的毁灭性病害,生产中常施用水基型制剂进行防治,但因其附着性低且不易成膜保护树体,防治效果并不理想。为研制可有效防治猕猴桃溃疡病的新技术措施,本研究通过对不同填料和增稠剂进行筛选,并将两者混合后得到成膜助剂,再加入优化后的渗透剂制备得到基础涂抹剂(涂抹剂基^(#)),对其成膜性、在树体上的附着性及耐雨水冲刷能力等性能指标进行了评价;向涂抹剂基^(#)中分别加入复配杀菌剂组合1^(#)(四霉素与戊唑醇质量比2:1)和组合2^(#)(四霉素与噻霉酮质量比5:1),制得涂抹剂1^(#)与涂抹剂2^(#);采用滤纸片法测定了涂抹剂基^(#)、涂抹剂1^(#)、涂抹剂2^(#)及所对应的杀菌剂组合对猕猴桃溃疡病菌的室内抑制活性,并通过田间试验验证了其对猕猴桃溃疡病的防治效果。结果表明:配方筛选所得最适填料为纳米膨润土,最适增稠剂为聚乙烯醇2488,将两者分别按质量分数3.00%与10.00%混合得到成膜助剂,再加入质量分数为1.60%的最适渗透剂奇功后制得涂抹剂基^(#),该涂抹剂基^(#)为乳白色粘稠液体,呈弱酸性,具有高黏度、高延展性、高拉丝度及强树体附着性,在玻璃板上涂抹123 min后可形成有韧性的薄膜,所得膜的固含量流失率为6.77%,耐雨水冲刷能力强。室内抑菌活性测定表明,涂抹剂基^(#)对猕猴桃溃疡病菌无抑制活性,涂抹剂1^(#)与涂抹剂2^(#)的抑菌活性明显高于其所对应的杀菌剂组合单独使用;田间试验结果表明,涂抹剂基^(#)对猕猴桃溃疡病的防效在30%以上,而涂抹剂1^(#)与涂抹剂2^(#)的防效均可达65%以上,且显著高于所对应的杀菌剂组合单独使用。本研究所制备的涂抹剂对猕猴桃溃疡病具有较好的防治效果,具有一定的开发应用价值,同时可为田间病虫害防治提供一种新途径。

林下套种对猕猴桃溃疡病的影响

为充分利用猕猴桃园资源,对猕猴桃溃疡病进行防控,增加果农收入,2021年,根据猕猴桃树栽培规律和方法,选择了油菜、黑豆、白菜、紫云英、苦荞以及蒲公英等6种作物进行林下套种对比试验。结果表明,选择的6个套作作物均能降低猕猴桃溃疡病的发病率,其中防控效果最好的是蒲公英,防效达64.56%。在次年对林下套种蒲公英进行进一步试验,结果表明,套种蒲公英可降低猕猴桃溃疡病的发病程度,病情指数防效为61.18%,病株率防效为48.57%。同时,蒲公英收获每年能为果农增加收入4 000元/667m^(2),提高了果园的资源利用率,实现了农民增收增产。

噻霉酮对猕猴桃溃疡病菌的抑菌机理研究

【目的】通过测定噻霉酮水乳剂处理后的丁香假单胞杆菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)的一系列指标变化,揭示噻霉酮对猕猴桃溃疡病菌的抑菌机理,为噻霉酮防控猕猴桃溃疡病提供理论依据。【方法】对Psa进行稀释10倍的噻霉酮处理(X10),原液噻霉酮处理(Y)以及无菌水处理(CK),利用试剂盒测定Psa抗氧化酶系过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)的酶活性,考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质量浓度;通过荧光显微镜和扫描电子显微镜观察Psa细胞膜结构的变化;通过流式细胞术进行细胞周期的检测。【结果】噻霉酮处理能明显抑制Psa生长和繁殖,缩短菌体细胞的对数生长期,使细胞膜破裂,细胞内容物外泄,细胞死亡量增加,最终处理组菌体量为CK的5.5%;Psa对噻霉酮存在氧化应激反应,处理后的Psa活性显著升高,呈先上升后下降的趋势。噻霉酮处理后Psa的CAT活性在10 h时到达峰值118.795U/mg,SOD活性在4 h时达到峰值1060.452 U/mg。X10、Y的菌体蛋白质量浓度在12 h与CK相比差异显著,分别降低了47.1%、73.4%;随噻霉酮浓度的增加,G0G1期细胞堆积越多,细胞百分比由CK的28.85%增加至Y的45.23%,S期细胞比例减少,由CK的58.84%降低至Y的41.86%。Y的G0G1期细胞比CK高56.8%,在S期比CK低23.7%。【结论】噻霉酮能使Psa菌体细胞膜破裂,引起Psa的氧化应激反应,并通过抑制菌体细胞的DNA合成抑制Psa生长,有效防控猕猴桃细菌性溃疡病。

猕猴桃溃疡病拮抗菌的抑菌物质分离及鉴定

对前期筛选得到的猕猴桃溃疡病病原菌丁香假单胞菌亚种(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,PSA)拮抗菌进行了鉴定和抗菌物质分离及分析。用革兰氏染色鉴别菌株;将硫酸铵沉淀溶液进行牛津杯抑菌试验,观察抑菌圈的大小;利用Tricine-SDS-PAGE电泳分析硫酸铵沉淀的抑菌物质;然后溶解沉淀进行去离子水透析脱盐,超滤浓缩后用葡聚糖凝胶柱进行分子筛凝胶过滤层析,最后采用高效液相色谱分析其分子量大小。结果发现:可判断有效抑制PSA生长的假单胞菌菌落形态特征为圆形菌落、乳白色、光滑、凸起、边缘整齐、不透明、不运动,为革兰氏阴性菌,菌体呈短杆状;其抑菌物质为细菌素,在40%和60%硫酸铵饱和度下提取效果最明显,抑菌作用最好,细菌素分子量大小为7 k Da左右。为研发细菌素产品提供了新思路,为防治猕猴桃溃疡病提供了理论基础和应用指导。

拮抗猕猴桃溃疡病致病菌的海洋细菌的筛选与鉴定

猕猴桃溃疡病是一种严重威胁猕猴桃生产的毁灭性细菌性病害,其致病菌为丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)。本实验旨在利用印度洋海泥中分离出来的115株海洋细菌,从中筛选出对丁香假单胞菌有拮抗作用的海洋细菌。运用滤纸片扩散法对海洋细菌进行初筛,得到33株具有拮抗丁香假单胞菌作用的海洋细菌,利用牛津杯法复筛,筛选出1株海洋细菌NO.357具有最优的抑制效果。对NO.357进行形态学鉴定和生理生化鉴定,通过16S r DNA序列测定和构建系统发育树,鉴定NO.357为低温甲基杆菌(Methylobacterium frigidaeris)。本实验为进一步研究海洋细菌对猕猴桃溃疡病致病菌的拮抗作用以及猕猴桃健康种植奠定基础。

宝鸡市猕猴桃溃疡病发生原因及防治对策

猕猴桃溃疡病属于丁香假单孢杆菌属的致病变种而诱发的细菌性病害,它传播快、易爆发、防治难,是制约猕猴桃产业健康发展的顽疾,发病重者可造成全田毁灭性危害。文章重点对猕猴桃溃疡病出现原因、发生规律、发病症状等展开探讨,制定了周年防控和以病斑刮治涂抹药剂、抓住主要时机全田喷防相结合的防治对策,以期为猕猴桃生产提供参考。

猕猴桃溃疡病流行的生态因子及药剂对病菌的抑菌作用

经 5年系统研究得出 ,影响猕猴桃溃疡病发生流行的特点是 ,海拔 75 0m以上的果园发病重 ,向阳坡发病重于背阳坡 ,不同品种发病差异显著 ,金丰品种易感病 ,金魁品种高度抗病 ;树龄越大 ,病株率越高 ;不同枝龄比较 ,一年生枝条病枝死亡率和枝条死亡率最高 .6种药剂以加瑞农和硫酸链霉素抑菌效果最好 .

植物内生放线菌活性物质防治猕猴桃溃疡病

以供试内生放线菌发酵液的皿内抑菌活性为指标,得到对猕猴桃细菌性溃疡病菌有抑制活性的菌株76株,其中35株的发酵液对猕猴桃溃疡菌的抑菌圈直径≥20mm,5株对猕猴桃溃疡病菌均具有显著的抑制活性。其中gCLA4菌株发酵液抑菌谱最广,不仅对4种靶标细菌具有抑制活性,还对10种植物病原真菌有较强的抑制活性。通过发酵液制备及大孔吸附树脂D101处理得到gCLA4菌粗提活性物质。田间防治结果表明,gCLA4菌株粗提活性物质100倍稀释液对猕猴桃溃疡病28d的相对防效达64.9%,明显优于化学药剂施那宁。

生防菌株B56-3防治猕猴桃溃疡病的初步研究

从猕猴桃根际土壤分离到的生防菌株B56-3对猕猴桃溃疡病菌具有较强的抑菌活性。盆栽试验结果表明该菌株的发酵滤液对猕猴桃溃疡病菌有较强的保护作用;田间试验结果表明,采用喷雾和病斑刮除涂抹相结合的方法防治较佳,稀释100倍的B56-3发酵滤液的治疗效果和病斑治愈率分别可达86.5%和91.4%。此外,施药后植株的SOD和POD酶活性变化趋势大致相同,先迅速增强,中间保持一段时间的高活性,后缓慢下降,最后保持一个相对较高的水平。

猕猴桃溃疡病菌拮抗菌的筛选、鉴定及其对植物病原真菌的抗性

从野生银杏中分离、筛选抗猕猴桃溃疡病内生细菌,并明确其对常见植物真菌病害的抑菌谱。采用“三步法”分离银杏内生细菌,并以猕猴桃溃疡病病原菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae,Psa)作为指标菌筛选拮抗菌;结合菌落形态特征、生理生化特征及16S rRNA基因序列对拮抗菌进行鉴定;开展盆栽防治实验研究其对猕猴桃溃疡病的防治效率,并应用平板对峙法研究其对多种植物病原真菌的拮抗作用。结果共得到7株对Psa具有拮抗活性的内生细菌,其中,以菌株MA23的拮抗活性最为显著,鉴定为蜡样芽孢杆菌。MA23发酵液上清对猕猴桃溃疡病的盆栽防治效率为93.6%,同时其对多种病原真菌也具有拮抗活性。从银杏中筛选到一株对Psa具有较好拮抗活性的内生蜡样芽孢杆菌MA23,其对多种植物病原真菌也具有拮抗活性。

猕猴桃溃疡病防治药剂的室内毒力及田间防治效果

为筛选出更多防效较好的药剂供生产上应用,采用抑菌圈法和喷雾+涂抹+刮除病斑相结合的方法测定了20种杀菌剂对猕猴桃溃疡病病菌的室内毒力,进行了田间防效试验。结果表明:20种杀菌剂中,有11种药剂对猕猴桃溃疡病病菌具有抑菌作用,其作用依次为20%溴硝醇>72%硫酸链霉素>64%恶霜.锰锌>75%百菌清>80%代森.锰锌>30%乙蒜素>80%代森锌>50%克菌丹>25%溴菌腈>78%波尔.锰锌>3%中生菌素,其中,7种商品杀菌剂表现出较高毒力,以20%溴硝醇的毒力最强,EC50为0.000 2mg/mL;其余依次为72%硫酸链霉素(0.003 0mg/mL)、64%恶霜.锰锌(0.003 2mg/mL)、75%百菌清(0.042 0mg/mL)、80%代森.锰锌(0.083 0mg/mL)、30%乙蒜素(0.159 3mg/mL)和80%代森锌(0.365 3mg/mL)。田间药效试验中,20%溴硝醇1 000倍液、72%硫酸链霉素1 000倍液、64%恶霜.锰锌500倍液、75%百菌清500倍液、80%代森.锰锌500倍液和30%乙蒜素800倍液田间防效较好,可作为防治猕猴桃溃疡病的有效药剂在生产上应用。

陕西关中地区猕猴桃溃疡病调查初报

通过对陕西关中（杨凌、周至、眉县）地区13个村65个猕猴桃园的猕猴桃溃疡病发病特点调查分析,发现树龄、品种与猕猴桃溃疡病的发生直接相关,表现为随着树龄的增大溃疡病危害逐渐加重（3-14 a生）;3个主栽品种（秦美、亚特和海沃德）中海沃德最感病。地区之间猕猴桃溃疡病严重程度存在着不同程度的差异,除地区间小气候外,管理水平和灌溉水平均为影响溃疡病发生的重要因素。

猕猴桃溃疡病菌在中国的适生性分析

通过分析猕猴桃溃疡病菌在中国的适生性,为科学制定有效的检疫监管措施,防范其入侵和扩散,确保猕猴桃产业健康发展提供理论依据。本研究根据前人研究结果,采用模糊数学综合评判的原理和方法,定量分析猕猴桃细菌性溃疡病菌(Pseudomonas syringae pv.actinidiae)在我国各个地区的适生性。猕猴桃溃疡病菌在我国最适宜的省份主要分布在四川、云南、贵州、福建、安徽、湖南、湖北、河南、江西、陕西、浙江、重庆、西藏。鉴于该病具有发生发展迅速,危害性强,防治难度大等特点,应当加强猕猴桃种苗等繁殖材料的检疫,加强对果园的管理和病害监测,积极采取有效的防治措施并加强抗病育种方面的研究。