玉米矮花叶病毒抗性资源鉴定的研究

利用人工接毒方法对 70份玉米种质资源进行了两年玉米矮花叶病毒B株系的抗性鉴定。依据病情指数 ( % )将抗病程度分为高抗、抗、中抗及感病 4个等级。试验筛选出高抗自交系 4份、高抗单交种 3个、抗病毒自交系 10份、抗病单交种 3个 ;中抗自交系 6份、中抗群体 3个。

山东省玉米矮花叶病毒的生物学特性及基因组全序列测定

对山东省玉米矮花叶病毒原分离物(SD)进行了寄主范围、血清学等普通生物学鉴定,测定了该病毒的基因组核苷酸全序列。该病毒基因组RNA由9596个核苷酸组成(不包括3′-polyA的长度),整个基因组按一个ORF编码一个3063个氨基酸的多聚蛋白。序列比较表明,该病毒分离物(SD)与玉米矮花叶病河南分离物(HN,EMBL登录号:AF494510)核苷酸全序列同源性最高,为98 2%,与已报道的甘蔗花叶病毒(SCMV)7个分离物同源性也高达79 5%～98 2%,但与玉米矮花叶病毒保加利亚分离物(MDMV-Bg,AJ001691)和高梁花叶病毒萧山甘蔗分离物(SrMV-XoS,AJ310197)的同源性仅为67 8%和69 3%,与约翰逊草花叶病毒(Z26920,JGMV)差异最大。系统进化树分析也表明,该病毒与SCMV分离物位于同一进化簇,而与MDMV进化关系很远。

玉米矮花叶病毒研究进展

玉米矮花叶病毒 (Maizedwarfmosaicvirus,MDMV)是在世界范围内广泛分布的重要病毒 ,文中从寄主范围、传播、株系状况、分子生物学及检测等方面 ,对MDMV的国内外研究现状进行了阐述。

玉米矮花叶病毒HC-Pro在蚜虫传毒过程中的作用机制

本文用亲合印迹法测定了玉米矮花叶病毒 ( MDMV)与 MDMV HC- Pro,及二者与蚜虫蛋白之间的互作。结果表明 ,MDMV HC- Pro可以与 MDMV结合 ,也可以直接与 MDMV的介体——麦二叉蚜 ( Schizaphis graminum)中分子量约为 56k D的可溶性蛋白结合 ,而 MDMV不能与麦二叉蚜的可溶性蛋白直接结合。无论是 MDMV HC- Pro,还是 MDMV,都不能结合非介体灰飞虱 ( Laodelphaxstriatellus)的可溶性蛋白。酶联板模型的结果与此一致。上述结果说明 ,病毒不能直接与蚜虫口针中的病毒附着位点 ( VAS)结合 ;HC- Pro一端连接病毒 ,一端连接 VAS,在蚜虫传播 MDMV的过程中起桥梁作用。这是关于病毒 HC-

玉米矮花叶病毒HC-Pro的纯化及抗血清制备

本实验提纯了玉米矮花叶病毒 ( MDMV)的辅助成份—蛋白酶 ( HC- Pro) ,并制备了其抗血清。MDMV HC- Pro的分子量约为 57k D,提纯产量为 0 .3mg/ 10 0 g病叶。琼脂免疫双扩散测定证明MDMV HC- Pro抗血清的效价为 1∶ 16;微量免疫沉淀法测定时其效价为 1∶ 10 2 4。该抗血清只与MDMV HC- Pro有明显的反应 ,与健康玉米汁液和 MDMV无反应。MDMV HC- Pro抗血清可以专化性地抑制 HC- Pro的蚜传活性。

玉米矮花叶病毒对玉米农艺性状影响的研究

以抗性不同的 10个玉米品种人工接种玉米矮花叶病毒 (MDMV_B) ,研究在大田和温室条件下接毒和对照植株农艺性状 ,发现病毒对玉米穗部性状的危害大于对株型性状的危害 ,株型性状损失率平均为 9 8% ,穗部性状损失率平均为 34 7%。病毒可使株高降低 15 8%、茎粗减少 7 6 %、叶长缩短 6 5 %、叶宽减窄 9 4%、百粒重降低 14 8%、穗重减轻 5 1 7%、穗长减少 32 5 %、穗粗减少 16 2 %、穗粒数减少 42 4%、穗粒重减轻 5 0 5 %。玉米生产上选择抗病品种至关重要。

应用直接组织印迹斑免疫法检测玉米矮花叶病毒

由玉米矮花叶病毒（ＭＤＭＶ）引起的玉米矮花叶病日趋严重，利用抗病品种是防治该病的根本措施。研究玉米抗病机理是快速培育抗病品种的基础，国外曾用免疫荧光法检测ＭＤＭＶ在接种叶片上的侵染和扩展。该法定位效果好，但对于叶片有较厚角质层的禾本科作物需要酶消解...

玉米矮花叶病毒CP基因dsRNA的原核表达与分离

根据玉米矮花叶病毒CP基因序列设计特异性引物,RT-PCR扩增玉米矮花叶病毒CP基因特异性干涉片段,将干涉片段及pUCCRNAi载体分别用BamH I及Sal I双酶切,然后将干涉片段分别正反向插入pUC-CRNAi载体中,构建CP基因反向重复克隆载体pUCCRNAi+2 F。再利用PstⅠ-Sal I位点插入到L4440质粒中构建原核表达载体LMCP。利用IPTG进行诱导表达并对诱导表达条件进行优化。结果表明,经过IPTG诱导,LMCP在大肠杆菌HT115(DE3)菌株中可表达产生预期大小的核酸片段,经DNase I和RNase A消化处理,证实为dsRNA。同时IPTG浓度为0.4～0.6mmol/L,诱导表达4h,dsRNA的表达量最高。另外,溶解于ddH_2O中的dsRNA稳定性要高于溶解在NaCl中的,且随着放置时间的延长,dsRNA将出现明显的降解。

玉米矮花叶病毒提纯及特性的研究

改进病毒纯化方法,获得了较高纯度、较强侵染活性的提纯病毒制品。提纯病毒的产量为0.7—1.2mg/100g病叶,病毒粒体大小为720—750×14nm,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测得的外壳蛋白分子量为36000道尔顿,用提纯病毒免疫家兔得到较高特异性的抗血清,微量沉淀反应的效价为1/2048,间接ELISA法测出的感病叶汁液的最高稀释倍数为3200—6400倍。

玉米矮花叶病毒对不同抗性玉米自交系侵染及其运转的研究

本文以抗病自交系黄野四 - 3、感病自交系 8112和 Mo17、耐病自交系 4 78为材料 ,采用直接组织斑免疫测定法 (IDDTB)和酶联免疫吸附测定法 (ELISA)结合生物学症状研究了玉米矮花叶病毒对玉米的侵染及其运转规律 ,试验表明玉米抗玉米矮花叶病毒主要是抗系统传导 ,其次抗病毒增殖和细胞间扩展 ,但不抗侵入。

玉米矮花叶病毒生物学特征研究概述

对玉米矮花叶病毒病原特性,侵染循环,寄主范围,发病因素及防治措施等国内外研究进展进行 了综述。

玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因的克隆研究

玉米(Zea mays L.)矮花叶病在国内外广泛发生,且在玉米生产中造成了重大损失.通过RT-PCR法从具有典型的玉米矮花叶病症状的玉米叶片中克隆了外壳蛋白(Coat protein,CP)基因,测序和同源性比较表明所克隆的CP基因来自玉米矮花叶病毒(Maize dwarf mosaic virus,MDMV)B株系,全长920个碱基对,开放阅读框编码219个氨基酸,该基因可进一步用于玉米抗矮花叶病的转基因研究,以获得生产应用的抗病材料.

辽宁省玉米矮花叶病毒外壳蛋白基因序列分析及株系鉴定

对辽宁地区近年发生的玉米矮花叶病毒株系进行了鉴定。电镜下病毒粒子形态呈线条状 ,大小为 (420～750)nm×(13～15)nm ,超薄切片中有风轮状内含体。以病毒RNA为模板 ,按已知的玉米矮花叶病毒外壳蛋白 (CP)基因核苷酸序列合成引物 ,逆转录合成cDNA ,以此为模板进行PCR ,扩增出了1kb左右的CP基因片段 ,将这一片段插入到载体pUC19中转化E.coliDH5a菌株 ,得到了CP基因克隆。cDNA序列分析表明 ,和中国已报道的玉米矮花叶病毒B株系 (MDMV -B)外壳蛋白基因序列同源率达98.4% ,氨基酸序列同源率99.4%。由此认为引起辽宁地区玉米矮花叶病的毒原为MDMV 。

玉米矮花叶病毒特性及受侵叶片的超微结构

对玉米矮花叶病毒的病毒粒子形态、结构及其特性,感病叶片的超微结构进行了初步的研究。提纯病毒研究结果表明,MDMV粒子形态为线状,宽度为14 nm,长度不等,完整粒子长度为720～750 nm。病毒悬浮液经紫外扫描获得了典型的核蛋白紫外吸收光谱,最高吸收峰在257.5 nm,最低峰在243.3 nm,O.D_(280)/O. D_(260)约为0.73。在电镜下观察感病叶片的超微结构,可在细胞质内观察到大量的病毒粒子及风轮状、柱状内含体,体现了马铃薯Y病毒组的典型特征。同时,在感病组织内还可看到许多破坏的叶绿体、线粒体等。

基于重组酶聚合酶扩增技术的玉米矮花叶病毒快速检测方法的建立

玉米Zea mays L.是重要的粮饲兼用作物。重要检疫性病毒玉米矮花叶病毒maize dwarf mosaic virus(MDMV)一直威胁玉米生产,为预防外来有害生物入侵,本研究以玉米可能携带的MDMV为目标,根据MDMV外壳蛋白(coat protein,CP)保守基因序列,基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),设计了3对RPA引物,筛选并优化了反应体系,建立了MDMV的快速检测方法,最终的RPA反应体系中引物终浓度为0.4μmol/L,反应温度为42℃,反应时间为20 min。该方法可特异性检测MDMV,对MDMV CP阳性质粒样品的检测灵敏度可以达到10^(5)拷贝/μL(≈369 fg/μL),高于RT-PCR的检测灵敏度。该方法具有快速准确等优点,可用于玉米种子或植株中携带MDMV的检测。

兼抗玉米矮花叶病毒及粗缩病毒无选择标记siRNA复合表达载体的构建

根据GenBank和MaizeSeq等数据库中的玉米矮花叶病毒和粗缩病毒外壳蛋白基因(CP)全序列设计特异性引物,RT-PCR扩增玉米矮花叶病毒及粗缩病毒的CP基因特异性RNA干扰片段,分别构建反向重复片段并串联成pBluscript+SM;Hind III-EcoR I双酶切2T-DNA真核表达载体pDTB,插入Ubiquitin启动子及Nos终止子,构建pDTBU;串联的反向重复片段插入pDTBU,构建兼抗玉米矮花叶病毒和粗缩病毒的siRNA复合表达载体pDTBUSM。酶切结果显示,目的片段均正确插入到相应的载体中。本研究对开展抗病毒RNA干扰调控技术研究,创建高抗病毒玉米新种质具有重要的理论和实践意义。

安哥拉玉米矮花叶病毒病对玉米农艺性状的影响

安哥拉玉米矮花叶病毒病对玉米农艺性状的影响研究结果表明,相对于株型性状,玉米穗部性状受到病毒危害后表现更重。在重病区,株型性状和穗部性状的损失率分别为17.4%、33.0%;在轻病区,株型性状和穗部性状的损失率分别为10.3%、11.1%。因此,玉米生产上选择抗病耐病品种至关重要。