玫瑰石斛原球茎的诱导与增殖研究

以玫瑰石斛植株茎段为材料,研究了不同的植物生长调节剂及配比、附加物等因子对玫瑰石斛原球茎的诱导和增殖的影响,以期通过组织培养诱导玫瑰石斛茎段获得原球茎,并对原球茎进行增殖,为进一步诱导玫瑰石斛丛生芽和培养玫瑰石斛小苗提供大量的原材料。结果表明:促进玫瑰石斛原球茎诱导的不同植物生长调节剂配比最优水平的组合为MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L+2,4-D 1.0mg/L,该组合最有利于玫瑰石斛原球茎的诱导;促进玫瑰石斛原球茎增殖的植物生长调节剂配比最佳组合为6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5mg/L,该组合最有利于玫瑰石斛原球茎的增殖;添加椰汁和马铃薯有利于玫瑰石斛原球茎的增殖。

玫瑰石斛HPLC特征图谱研究

目的：建立玫瑰石斛HPLC特征图谱.方法：采用ZORBAX SB-Aq色谱柱,流动相为乙腈-0.2％甲酸,梯度洗脱,流速1.0 mL＆#183; min-1,柱温30℃,检测波长270 nm.结果：建立了12批玫瑰石斛HPLC特征图谱,标记出41个共有峰,相似度为0.901～0.986.结论：该法稳定可靠、重复性好,为玫瑰石斛的鉴别提供依据.

玫瑰石斛的生药学鉴定

采用原植物鉴别、性状鉴别、显微鉴别等方法,对玫瑰石斛进行系统生药学鉴定,结果发现玫瑰石斛在原植物、性状、显微等方面具有专属特征,该方法简便易操作,可作为该药材定性鉴别的依据,同时为其开发利用提供理论指导。

玫瑰石斛中的非生物碱类成分研究

从兰科石斛属植物玫瑰石斛Dendrobium crepidatum Lindx.的干燥茎中分离鉴定了10个化合物,分别为2个联苄类成分：4′-羟基-3,4,5,3′-四甲氧基联苄（1）和4,4′-二羟基-3,5,3′-三甲氧基联苄（2）;3个有机酸衍生物：4-羟基-3-甲氧基苯甲醛（3）,对羟基苯甲醛（4）,3-甲氧基-4-羟基反式肉桂酸二十四烷酯（5）;其他类成分：4′,5,7-三羟基二氢黄酮（6）,木栓酮（7）,5α,8α-epidioxy-24（R）-methylcholesta-6,22-dien-3β-ol（8）,β-谷甾醇（9）和胡萝卜苷（10）。化合物2~10均首次从该种植物中分离得到。

玫瑰石斛的化学成分及其生物活性

目的研究玫瑰石斛化学成分,发现其抗肿瘤活性成分。方法玫瑰石斛经甲醇提取、硅胶和凝胶柱色谱分离,波谱分析确定结构。MTT法进行部分化合物体外抗肿瘤活性筛选。结果9个化合物从玫瑰石斛中分离鉴定,分别为p-hydroxybenzaldehyde(1)、p-methoxyphenol(2)、p-Hydroxybenzyl alcohol(3)、hydroquinone(4)、(24R)-ethylcholest-5-en-3-ol-7-one(5)、sinalexin(6)、bis(2-ethylhexyl)benzene-1,2-dicarboxylate(7)、pinoresinol(8)、Chaenomin B(9),对化合物5~9进行抗肿瘤活性测试,发现化合物9对A549细胞株抑制活性较好。结论化合物2~5,7~8为首次从本植物中分离得到,化合物6,9为首次从本属植物中分离得到,9对A549细胞株IC_(50)为29.35μM。

玫瑰石斛组培快繁体系的建立

以玫瑰石斛蒴果为外植体,通过种子无菌萌发诱导原球茎、原球茎增殖与丛生芽分化、生根壮苗试验,建立玫瑰石斛组培快繁体系,为玫瑰石斛繁育和优质种苗生产提供了参考依据。结果显示:玫瑰石斛蒴果经外植体消毒后,将蒴果内种子撒播于1/2MS培养基上,种子可快速萌发形成原球茎;玫瑰石斛原球茎增殖与分化最佳培养基为1/2MS+1.0 mg·L^(-1)6-BA+0.5 mg·L^(-1)NAA,原球茎的增殖系数达6.04,丛生芽生长速度快;玫瑰石斛最适的生根壮苗培养基为1/2MS+0.2 mg·L^(-1)NAA+50 g·L^(-1)土豆泥,生根率达100%,平均根数为5.14条,平均株高达5.54 cm。

玫瑰石斛叶片培养与原球茎诱导

将玫瑰石斛组培苗叶片接种于含有不同激素的MS培养基上培养,以诱导原球茎的产生,然后将诱导出的原球茎进行增殖培养。结果显示,在MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA的培养基上原球茎诱导效果较好,诱导率可以达到94%;原球茎在MS+1.0 mg/L BA+0.2 mg/L NAA的培养基上增殖速度较快且质地较硬、结构松散。本试验结果可为玫瑰石斛人工种子的研究提供一定的参考价值。

玫瑰石斛壮苗生长培养基成分优化

为筛选适宜的玫瑰石斛壮苗生长培养基,以玫瑰石斛无菌幼苗为试验材料,对活性炭、NAA、水解乳蛋白、MS培养基有机成分4个因素3个水平设置正交试验,采用极差分析、方差分析和相关性分析方法,对其株高、茎粗、叶片、生根、分蘖和4个因素3个水平进行研究。结果表明:4个因素中,活性炭对玫瑰石斛组培苗生长影响最大,对玫瑰石斛无菌幼苗的株高、生根量有极显著影响,且与株高、生根之间全部均呈现出显著性正相关,而其他3个因素对玫瑰石斛无菌苗生长影响不大,与株高、茎粗、叶片、生根、分蘖之间没有相关关系。经综合分析,试验最终确定玫瑰石斛组培苗壮苗生长最佳培养基组合为0.05 g·L^(-1)活性炭+0.5 mg·L^(-1)NAA+0.2 g·L^(-1)水解乳蛋白+2倍有机成分。本研究以期为完善玫瑰石斛快速繁殖提供理论依据和实践参考。

基于UPLC-Q-TOF-MS/MS代谢组学的铁皮石斛和玫瑰石斛化学成分差异研究

铁皮石斛和玫瑰石斛均为石斛属植物,前者为我国名贵中药材,后者为云南地方用药,都有滋阴养胃的作用。为揭示两种石斛及其不同部位间化学成分差异,本研究采用超高效液相色谱-串联四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS/MS)技术分别对铁皮石斛和玫瑰石斛的茎和叶进行化学成分分析,并通过主成分分析(PCA)和偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等多元变量分析方法研究石斛种间和部位间代谢产物差异,结果在两种石斛物种中共鉴定到58种化学成分。通过质谱规律的解析发现生物碱类成分的物质在质谱中与氮连接的侧环更容易断裂。PCA分析结果表明铁皮石斛茎叶与玫瑰石斛茎叶可以明显分离,说明铁皮石斛和玫瑰石斛化学成分差异显著。通过OPLS-DA分析发现玫瑰石斛与铁皮石斛茎间有16种差异代谢物,叶间有22种差异代谢物,两种石斛间的差异成分主要为玫瑰石斛碱B、玫瑰石斛碱C、玫瑰石斛啶碱等,玫瑰石斛茎叶之间存在14种差异代谢物,铁皮石斛茎叶间代谢产物差异不大。综上,本研究发现两种石斛化学成分差异较大,铁皮石斛小分子化合物以萜类和黄酮类成分为主,生物碱含量较低,茎叶间成分差异不大。玫瑰石斛则以生物碱和萜类成分为主,玫瑰石斛碱、玫瑰石斛胺等为其特有成分,茎叶间成分差异较大。该研究为石斛资源的开发利用提供了理论依据。

束花石斛及其相似种的DNA分子鉴别

目的 :探讨束花石斛与同属相似种 :玫瑰石斛、喇叭唇石斛、报春石斛、兜唇石斛等植物及药材鉴别的DNA分子标记。方法 :对束花石斛及其相似种进行rDNAITS区序列比较研究。结果 :尽管束花石斛及其相似种的外部形态差异较小 ,但在rDNAITS序列上却存在着显著而稳定的差异。在rDNAITS区域中 ,作者共挑选了 15个碱基位点用作鉴别束花石斛及其相似种的DNA标记。结论 :根据rDNAITS区碱基序列差异 。

石斛属27种药用植物的性状鉴定特征比较

目的比较中国西南地区产27种石斛属药用植物药材(茎)的性状特征,为石斛药材质量标准的制定提供依据。方法考察药材来源,并比较性状鉴定。结果描述了27种石斛属药用植物药材的性状鉴别特征。结论可为石斛属药用植物药材的准确鉴定提供参考。

基于网络药理学探讨金钗石斛和霍山石斛治疗阿尔茨海默病的作用机制

目的基于网络药理学探讨及比较金钗石斛Dendrobium nobile Lindl.和霍山石斛D.huoshanense活性成分治疗阿尔茨海默病的作用机制。方法基于中国知网、万方和PubMed数据库收集金钗石斛、霍山石斛的有效成分;PubChem平台查询活性成分结构;SwissADME平台筛选金钗石斛、霍山石斛活性成分的靶点;SwissTartgetPrediction平台预测各活性成分的作用靶点;GeneCards和OMIM数据库检索阿尔茨海默病相关靶点;Cytoscape 3.9.1构建"活性成分-疾病-靶点"网络图;String数据库分析并构建药物与疾病的蛋白质相互作用(PPI)网络;利用Metascape进行基因本体(GO)功能及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。结果共获得金钗石斛有效成分84个,核心成分为crepidatin、N-isopentenyl-6-hydroxydendroxinium、3-O-methylgigantol等;霍山石斛有效成分56个,核心成分为erianin、dendrocrepine、dendrocandin U等;金钗石斛和霍山石斛映射疾病靶点分别为255、243个,共同靶点208个,核心靶点为蛋白激酶B(Akt)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)、白蛋白(ALB)等;GO功能和KEGG富集分析结果显示,金钗石斛、霍山石斛治疗阿尔茨海默病的共同作用部位主要在树突;主要通路为磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)-Akt信号通路、神经退行性变的途径-多种疾病、阿尔茨海默病通路等。此外,金钗石斛可作用于神经元细胞体,调节Toll样受体信号通路;霍山石斛可作用于轴突,调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路。结论金钗石斛与霍山石斛都可能通过不同成分和不同通路治疗阿尔茨海默病。

滋兰笔记(十一)

四勿（2013年5月15日） 去年引种的两苗红花建兰＂娇颜＂迫不及待地开了,全无神采。苗未壮而放花,其花也弱。老子云：大器曼成。为兰为人皆不可揠苗助长,急于事功。 兰也好,人也罢,这辈子不过如此。脚踏实地,不论有无功与名;随缘自在,莫管是非雨或风。成功又怎样,无非一遭辛劳迎名誉名毁;无名便如何,不过几番闲看花落花开。