改进的QuEChERS结合超高效液相色谱-串联质谱法检测饲料中的环匹阿尼酸

采用改进的QuEChERS前处理方法结合超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)分离检测,建立了饲料中真菌毒素环匹阿尼酸(CPA)的快速分析新方法。详细优化了UPLC-MS/MS分离检测条件和影响CPA回收率的QuEChERS条件,优化后的分析方法如下:1.0 g饲料加入2 mL水和4 mL 0.5%乙酸乙腈溶液进行提取,再加入提取盐包(0.4 g氯化钠和1.6 g无水硫酸镁),离心分层后,取1 mL乙腈提取液,加入150 mg无水硫酸镁和50 mg C_(18)吸附净化,上清液进行UPLC-MS/MS分离检测;采用Waters HSS T3柱(100 mm×2.1 mm, 1.8μm),以含0.5%甲酸的2 mmol/L乙酸铵水溶液和乙腈作为流动相,梯度洗脱,电喷雾正离子模式下以多反应监测(MRM)扫描模式定量。CPA在2~200 ng/mL的范围内具有良好的线性,相关系数良好(r=0.999 5),方法的检出限和定量限分别为0.6和2μg/kg,饲料中CPA在10、100、500μg/kg 3个加标水平下的回收率为70.1%~78.5%,日内RSD为4.1%~5.8%,日间RSD为6.1%~7.2%。将本方法应用于实际饲料样品中CPA的分析,取得了很好的效果。本研究将改进的QuEChERS方法应用于饲料中CPA的提取净化,为饲料中CPA的风险监测、评估和限量标准制定提供了一种有效的检测技术。

巯亚硝基卡托普利对环匹阿尼酸引起的平滑肌细胞胞浆游离Ca^(2+)浓度升高作用的影响

目的 探讨巯亚硝基卡托普利 (S nitrosocaptopril,CapNO)对Ca2 + 池操纵性Ca2 + 内流信号转导过程的影响。方法 以Fura 2荧光探针测定胞浆游离Ca2 + 浓度([Ca2 + ]i)。结果 ①CapNO(2 0～ 12 0 μmol·L-1)呈浓度依赖性抑制环匹阿尼酸 (cyclopiazonicacid ,CPA)引起的[Ca2 + ]i 升高 ,80 μmol·L-1CapNO为最大效应浓度。相同浓度的captopril对CPA升高 [Ca2 + ]i 无明显抑制作用。②在 80 μmol·L-1CapNO抑制CPA引起 [Ca2 + ]i 升高作用的基础上 (31%± 11% ) ;随后加入 1μmol·L-1硝苯地平不能降低 [Ca2 + ]i,再加入 2 0 μmol·L-1SK&F96 36 5 (最大效应浓度 )可进一步降低 [Ca2 + ]i(5 4%± 18% ) ,其中SK&F96 36 5净抑制率为 2 4%± 10 % ,与SK&F96 36 5单独作用抑制率(5 4%± 11% )比较差异有显著性。③不同顺序给予最大效应浓度CapNO (80 μmol·L-1)和tyrphostinAG490 (2 μmol·L-1)对CPA引起 [Ca2 + ]i 升高存在交叉抑制作用。结论 CapNO可通过阻断电压依赖性Ca2 + 通道和Ca2 + 池操纵性Ca2 + 通道抑制CPA引起的 [Ca2 + ]i 升高 ,CapNO对CPA引起 [Ca2 + ]i 升高的阻断作用存在酪氨酸激酶 (Janus2亚型 )

Bcl-2蛋白对环匹阿尼酸诱导CHO细胞凋亡的保护作用

Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色和ＤＮＡ电泳分析揭示了内质网钙泵抑制剂环匹阿尼酸（ＣＰＡ）呈浓度依赖性地诱导ＣＨＯ细胞凋亡，表现出染色体固缩和ＤＮＡ片断形成的典型特征．Ｂｃｌ－２的过度表达对ＣＰＡ诱导的ＣＨＯ细胞凋亡具有保护作用．采用Ｆｕｒａ－２技术测定细胞内游离钙浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）变化，观察到Ｂｃｌ－２对ＣＰＡ触发的细胞Ｃａ２＋库Ｃａ２＋释放无任何影响．结果表明Ｂｃｌ－２蛋白对ＣＰＡ诱导的ＣＨＯ细胞凋亡的保护作用不是通过抑制ＣＰＡ诱导的Ｃａ２＋释放。

液质联用法测定黄酒中环匹阿尼酸

采用高效液相色谱一三重四级杆质谱串联法（HPLC—MS／MS）技术，结合碱性甲醇水溶液及正己烷脱脂提取．乙酸铵水溶液与乙腈配比做流动相洗脱法，建立检测黄酒中环匹阿尼酸的分析方法。结果表明，液质联用法对黄酒中环匹阿尼酸检测限为50ug／kg，定量限为200ug／kg，线性范围为25～1050ug／kg（R〉0．999），回收率在80．1％～85．1％之间，相对标准偏差（RSD）在6．2l％～9．17％之间。液质联用法可对黄酒中环匹阿尼酸进行准确的定性和定量，且避免了对样品费时繁复的提取过程，提高了大批量样品检测前处理的效率，同时解决了检测中出现假阳性的问题，适合黄酒中环匹阿尼酸低残留检测要求。

硝苯地平和环匹阿尼酸对易卒中型肾性高血压大鼠血管平滑肌收缩功能的影响

观察了易卒中型肾性高血压大鼠（ＳＰＲＨＲ）主动脉环血管平滑肌在术后血压升高不同阶段收缩反应性．与假手术组相比，随着术后血压的升高，低浓度ＫＣｌ１０～２０μｍｏｌ·Ｌ－１使ＳＰＲＨＲ主动脉环的收缩反应明显增强；苯肾上腺素（Ｐｈｅ）在无钙Ｋｒｅｂｓ液中所致的收缩反应强度降低，而复钙后的收缩张力明显增强；ＳＰＲＨＲ主动脉环在无钙Ｋｒｅｂｓ液中温育１ｈ后，重新复钙后可致收缩反应且为硝苯地平（Ｎｉｆ）所抑制；肌浆网Ｃａ２＋泵抑制剂环匹阿尼酸（ＣＰＡ）在ＳＰＲＨＲ主动脉环上所致的持续收缩反应也明显强于对照并为Ｎｉｆ所阻断；连续给予Ｎｉｆ，卡托普利１８０±１１ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１８ｗｋ后，ＳＰＲＨＲ的血压均明显下降．在术后１，４ｗｋ，Ｎｉｆ对部分ＳＰＲＨＲ主动脉环在无钙液中复钙所致的收缩反应并无抑制作用且可进一步引起收缩反应．结果表明，肾性高血压大鼠血管平滑肌收缩功能的高反应性与高血压状态下Ｃａ２＋转运的失调有关，不同高血压时期的血管平滑肌细胞膜上的Ｃａ２＋通道特性可能存在差异性．

SKF96365和氯化镍对环匹阿尼酸诱导的大鼠PASMC[Ca^(2+)]_i升高的影响

目的研究SKF96365和氯化镍(NiCl2)对环匹阿尼酸(CPA)诱导的大鼠远端肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)变化的影响。方法培养大鼠PASMC,运用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测CPA、SKF96365和NiCl2对PASMC[Ca2+]i的影响。结果含5μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育PASMC,10μmol/L CPA使PASMC[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA使PASMC[Ca2+]i迅速显著升高;50μmol/L SKF96365和500μmol/L NiCl2均能明显抑制10μmol/L CPA引起的PASMC[Ca2+]i升高,但对高钾(60mmol/L KCl)溶液引起的PASMC[Ca2+]i升高无影响。结论 CPA可致大鼠PASMC[Ca2+]i升高,且能被SKF96365和NiCl2阻断,提示CPA可能诱发细胞外Ca2+经钙池操纵性钙通道(SOCC)内流,SKF96365和NiCl2能选择性抑制SOCC活性使经SOCC的Ca2+内流减少。

环匹阿尼酸对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度的影响

目的研究环匹阿尼酸(CPA)对大鼠远端肺静脉平滑肌细胞(PVSMC)细胞内钙浓度([Ca2+]i)的影响及可能机制。方法原代培养大鼠远端PVSMC,并通过形态学和免疫荧光染色鉴定,利用荧光显微镜和InCyte细胞内钙浓度检测系统观测高钾(60 mmol/L KCl)溶液及CPA对PVSMC的[Ca2+]i影响。结果原代培养的PVSMC表现出典型血管平滑肌细胞生长特征,并对平滑肌α-actin免疫荧光染色呈阳性反应;高钾溶液使PVSMC的[Ca2+]i显著升高,5μmol/L硝苯地平能完全阻断PVSMC的[Ca2+]i对高钾溶液的反应;10μmol/LCPA能使含5μmol/L硝苯地平的无钙Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i短暂小幅升高,恢复细胞外Ca2+至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA能使含5μmol/L硝苯地平的Krebs溶液孵育的PVSMC的[Ca2+]i迅速升高。结论 CPA能够使大鼠远端PVSMC的[Ca2+]i升高,其机制可能与Ca2+从肌浆网释放,并诱发细胞外Ca2+通过钙池操纵性钙通道(SOCC)内流有关。

硝苯地平和SK&F96365对环匹阿尼酸引起的平滑肌细胞质游离Ca^(2+)浓度升高作用的影响

目的 探讨介导 Ca2 +池操纵性 Ca2 +内流的 Ca2 +通道特性。 方法 以 Fura-2荧光探针测定细胞质游离 Ca2 +浓度 ( [Ca2 +] i)。 结果 ( 1 ) 1 0μmol/ L环匹阿尼酸 ( CPA)可触发大鼠主动脉平滑肌细胞 [Ca2 +] i的双相升高 (峰值和持续相 )。 ( 2 ) SK& F963 65( 5～ 4 0 μmol/ L)以浓度依赖性抑制 CPA触发的 [Ca2 +] i升高持续相。 ( 3 )1 μmol/ L硝苯地平阻断电压依赖性 Ca2 +通道后 ,2 0 μmol/ L SK& F963 65仍能抑制 CPA触发的 [Ca2 +] i升高持续相 ;而在 2 0μmol/ L SK& F963 65抑制 CPA触发 [Ca2 +] i升高持续相后 ,1μmol/ L硝苯地平不能产生进一步的抑制作用。 结论 电压依赖性 Ca2 +通道和 Ca2 +池操纵性 Ca2 +通道介导了 Ca2 +池操纵性 Ca2

Janu2亚型酪氨酸激酶在环匹阿尼酸触发的大鼠主动脉血管环收缩效应中的作用

目的 探讨 Janu2亚型酪氨酸激酶在 Ca2 + 池操纵性 Ca2 + 内流中的作用。 方法 记录大鼠主动脉环收缩反应。 结果 (1)不同剂量 Janu2亚型酪氨酸激酶抑制剂 tyrphostin AG4 90 (AG4 90 ,1～ 30μmol/ L )以浓度依赖性抑制环匹阿尼酸 (CPA)触发的大鼠主动脉血管环收缩持续相。 AG4 90的最大作用浓度为 10μmol/ L ,抑制率为 4 9%± 12 %。 (2 ) 10μm ol/ L AG4 90可显著抑制高 KCl触发的大鼠主动脉血管环收缩反应。 (3) 10μm ol/ LAG4 90和 1μm ol/ L硝苯地平对 CPA触发收缩反应的抑制作用存在部分重叠。 结论 CPA触发平滑肌的收缩过程中 ,蛋白质 Janu2亚型酪氨酸激酶参与了开启电压依赖性 Ca2 + 通道和受体操纵性 Ca2 +

急性缺氧对环匹阿尼酸诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞内钙浓度升高的影响

目的：研究急性缺氧对Ca2＋-ATPase抑制剂——环匹阿尼酸（CPA）诱导的大鼠远端肺静脉平滑肌细胞（PVSMC）内钙浓度（[Ca2＋]i）升高的影响及机制。方法：选用6只雄性SD大鼠（体重200~250 g）,培养大鼠PVSMC,运用荧光显微镜和细胞内钙浓度检测系统观测CPA及急性缺氧（4%O2）对PVSMC的[Ca2＋]i影响及钙池操纵性钙通道（SOCC）阻断剂氯化镍（Ni Cl2）和SKF96365的干预作用。结果：含5μmol/L硝苯地平（电压依赖钙通道阻断剂）的无钙Krebs溶液孵育PVSMC,10μmol/L CPA使PVSMC的[Ca2＋]i小幅度升高,急性缺氧能使[Ca2＋]i升高幅度增加;恢复细胞外Ca2＋至2.5 mmol/L后,10μmol/L CPA使[Ca2＋]i显著升高,急性缺氧可导致CPA诱导的[Ca2＋]i升高显著增强;SOCC阻断剂Ni Cl2（500μmol/L）和SKF96365（50μmol/L）均能明显抑制急性缺氧条件下CPA诱导的[Ca2＋]i升高,但对高钾（60 mmol/L KCl）Krebs溶液引起的[Ca2＋]i反应无影响。结论：急性缺氧能够使CPA诱导的大鼠远端PVSMC的[Ca2＋]i升高增强,[Ca2＋]i升高可被SOCC阻断剂阻断,提示急性缺氧能够增强SOCC活性,使细胞外Ca2＋通过SOCC内流增强,从而导致大鼠远端PVSMC的[Ca2＋]i升高。

环匹阿尼酸对一氧化氮、硝普纳和8－溴鸟苷环一磷酸松弛家兔主动脉作用的影响

环匹阿尼酸对一氧化氮、硝普纳和８－溴鸟苷环一磷酸松弛家兔主动脉作用的影响罗大力，杨宝峰，李光泽（哈尔滨医科大学药理教研室，哈尔滨１５００８６）硝酸酯类血管扩张剂对心绞痛和顽固性心衰等疾病的治疗发挥十分重要的作用。其松弛血管平滑肌的机理与内源性血管平滑...

高效液相色谱-串联质谱法测定黄酒中环匹阿尼酸含量的不确定评定

为提高检测结果的准确性,确定检测过程中的关键影响因素,对高效液相色谱-串联质谱法测定黄酒中环匹阿尼酸含量不确定度进行评定。建立数学模型,分析影响测定结果的各不确定度来源,计算合成不确定度和扩展不确定度。在置信区间P=95%,黄酒中环匹阿尼酸测定结果的扩展不确定度为1.12ng/mL,测定结果表示为(4.02±1.12)ng/mL(k=2)。黄酒中环匹阿尼酸含量测定的不确定度主要来源是标准曲线拟合(11%),其次是样品处理(6.92%)、高效液相色谱-串联质谱仪(4%)、提取回收率(3%),其他因素影响相对较小。

高效液相色谱-质谱联用法测定庆阳地产黄酒中环匹阿尼酸

目的:采用高效液相色谱-三重四极杆质谱联用法测定庆阳地产黄酒中环匹阿尼酸含量。方法:样品经甲醇提取,过C色谱分析柱,以0.1%甲酸水溶液与甲醇为流动相梯度洗脱,采用高效液相色谱-质谱联用法正模式内标法测定分析,建立检测黄酒中环匹阿尼酸的分析方法。结果:液质联用法对黄酒中环匹阿尼酸最低检出限为0.6 ng·mL^(-1),定量限为2.0 ng·mL^(-1),精密度为0.71%;黄酒样品中环匹阿尼酸的加标回收率在99.7%~110.3%。结论:以甲醇为提取液,采用液质联用法可以对黄酒中环匹阿尼酸进行准确定性和定量,解决了液相色谱检测中常出现的假阳性问题,避免了对样品烦琐重复的提取过程,提高了大批量样品前处理的效率。

高效液相色谱法测定花生和玉米中的环匹阿尼酸

建立一种高效液相色谱法测定花生和玉米中环匹阿尼酸含量的方法。样品经液液萃取净化处理,采用反相C18色谱柱Gemini C18（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈：4%乙酸水溶液（三氟乙酸调pH值2.2）=55：45为流动相,流速1 mL/min,检测波长280 nm,对花生和玉米中的环匹阿尼酸进行检测。在50、100、200μg/kg添加量范围内,花生和玉米的平均回收率分别为83.9%～98.5%和86.3%～102.3%,方法的检出限为8μg/kg,线性范围为0.3～12.0μg/mL（R＾2=0.9998）。所建立的方法快速、简便、准确,可以作为花生和玉米中环匹阿尼酸的检测方法。

米曲霉CPA毒素的5-氟色氨酸分子探针研究

米曲霉中往往含有完整的环匹阿尼酸(cyclopiazonic acid,CPA)毒素生物合成基因簇。鉴于CPAs对食品安全的潜在威胁和其不同的存在形式,依据CPA的生物合成机制推测可将外源氟代前体探针化合物嵌入CPA生物合成途径,从而形成氟代物用于靶向检测。结果显示,米曲霉CPA合成途径可以接受5-F-L-Trp为底物并经CpaS酶合成5-F-cAATrp。由于该化合物并不是其下游催化酶CpaD的合适底物,因而无法启动下游后修饰步骤,造成了5-F-cAATrp在菌株中富集。利用CPA生物合成途径对代谢产物的富集效应实现对CPA毒素更加方便和特异性的检测,这对于建立新型CPA毒素检测方法,保障食品安全具有积极意义。

Mg^(2+)对米曲霉HMP-F28所产α-CPA及β-CPA的调控作用

在米曲霉HMP-F28所产CPA(环匹阿尼酸)类化合物中,β-CPA是α-CPA的生物合成前体化合物,因此β-CPA的含量很低,而α-CPA是主要代谢产物。在研究HMP-F28所产CPA类代谢产物的调控过程中,采用SPE-LC-MS方法建立了一个对HMP-F28所产CPA类代谢物的快速定性分析方法。在此基础上,发现不同浓度的Mg^(2+)可调控α-CPA和β-CPA相对含量,高浓度Mg^(2+)(320 mmol/L)可使菌株显著提高生物合成中间体β-CPA的产量。由于β-CPA在结构上较α-CPA与IAA拮抗剂hypaphorine更类似,因此本研究为进一步研究其作为IAA拮抗剂诱导植物免疫反应的活性提供参考。

家兔主动脉细胞内钙池耗竭所致的基础张力变化(英文)

目的:研究动脉平滑肌细胞内钙池耗竭所致浆膜钙通透性的增加.方法:在无钙条件下,采用选择性肌浆网(SR)钙泵抑制剂环匹阿尼酸(CPA)和Thapsigargin(Tha)及SR钙释放剂Ryanodine(Rya)耗竭家兔主动脉环咖啡因和苯肾上腺素敏感的细胞内钙池,而当外钙加入时,以上三药均增大基础张力,此张力变化做为内钙耗竭后所致的浆膜钙通透性增加.结果:3 μmol·L^(-1) Tha和Rya及30 ^(-1)mol·L^(-1)CPA分别增加张力为0.94,1.1和0.14 g,Rya的张力增加不受CPA抑制.结论:(1)提示除细胞内钙耗竭外,SR钙通道开放也增加浆膜钙通透性;(2)Rya完全开放钙通道需咖啡因的存在.

血管内皮细胞中细胞钙的动态数字荧光率影像(英文)

AIM: To study the spatial and temporal distribution of intracellular Ca2+ concentration in cultured bovine pulmonary artery endothelial ( BPAE ) cells. METHODS: Cultured BPAE cells were loaded with Fura-2 and observed under an inverted microscope coupled to a microfluorimeter, which enables pixel-to-pixel ratio imaging of the BPAE cells in real time. RESULTS: Addition of Ca2+ 1-2 mmol·L-1 to BPAE cells, which were exposed to Ca2 + -fiee medium containing egtazic acid, resulted in a transient elevation of cytosolic Ca2+ concentration, which rapidly returned to the resting level. Biphasic elevation (a larger transient phase followed by a smaller sustained phase) of intracellular Ca2+ concentration was observed upon the addition of ATP (via activation of surface membrane receptor). 4-Chloro-3-ethyl phenol (CEP; an activator of Ca2+-induced Ca2+ channels) potently induced elevation of Ca2+ level. Cyclopiazonic acid (CPA; an inhibitor of endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase pump) offered a more sustained