陕西渭北地区烟草环斑病毒(TRSV)的研究 Ⅱ、病毒的传播、种苗带毒检测及防治

试验表明桃蚜具有传播 TRSV 的能力,但是传毒率仅为4.2%,蚜虫最短获毒时间在2分钟以内,最短接毒时间也是2分钟,最长持毒时间则为125分钟,因而属于非持久性传毒。烟草种子带毒是传播病毒的主要途径,植株感染 TRSV 的早晚是决定种子带毒率高低的主要因素,但其子代幼苗常表现为无症感染。提纯 TRSV 制备的抗血清具有高度的专化性,只与同源的 TRSV 抗原起沉淀反应,而与 CMV、TMV、TNV、TEV 以及 TBRV 之间不存在血清学关系。抗血清的效价为1:516。利用酶联免疫吸附测定技术(ELISA)对 TRSV 检测获得成功。在受侵染后已恢复的植株中,以 ELISA 作为带毒检测手段比琼脂双扩散法更加灵敏和准确,但对单粒、10、25、50及75粒烟种的带毒检测没有获得肯定的结果,可用 ELISA 检测种苗的带毒情况来确定单粒种子的带毒率。经测定生产上种植的3个烟草品种均有不同程度的带毒。在混合感染的条件下,CMV 和 TMV 对 TRSV 有抑制作用,而 TEV 却对 TRSV 表现出协生现象。

甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2 EGF片段多克隆抗体的制备及鉴定

目的制备甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶2(MBL-associated serine protease-2,MASP-2)EGF功能区蛋白的多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法利用带有EGF基因片段的p GEX-6P-2原核载体诱导表达GST-EGF融合蛋白,并采用商品化GST-Beads进行纯化;将纯化的融合蛋白作为抗原,与弗氏完全佐剂充分混合后,免疫5周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体;利用琼脂双扩散法检测多克隆抗体的效价,并进一步应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及效价。结果成功表达并纯化EGF蛋白,以此成功制备出特异性强的GST-EGF融合蛋白的多克隆抗体,与其他蛋白无交叉反应;琼脂双扩散法检测的EGF抗体效价为1∶8;Western blot检测的EGF抗体效价大于1∶2 000。结论成功制备出具有特异性强且效价高的GST-EGF蛋白的多克隆抗体。