琼脂块法快速平板初筛米根霉L-乳酸高产菌

以米根霉(Rhizopus oryzae)CS-323为出发菌株,经过紫外线(UV)诱变后,利用溴钾酚绿平板变色圈法及高锰酸钾-溴化钾平板透明圈筛选出18株变异株。基于上述方法,设计琼脂块溴钾酚绿变色圈法及琼脂块高锰酸钾-溴化钾透明圈法,对18株变异株进行进一步筛选,经摇瓶初筛验证,琼脂块透明圈法能准确且迅速的判断菌株产酸大小,并对平板定量初筛检出高产株有较大的意义。

管碟琼脂块法筛选洁霉素产生菌

尽管采用人工诱变能提高微生物的突变率,但其突变率仍然很低,人们要从中筛选到自己所需理想菌株的机率则更低。因此,在微生物菌种选育中筛选方法显得十分重要。

琼脂块法的应用初报

改变或采用新的方法已成为微生物选育工作成败的重要关键。日本梅泽滨夫快速选育出春日霉素高产菌株时,曾采用琼脂块法。该法优点是单菌落琼脂块可直接在平板上进行生物效价测定;至于诱变则仍可采用传统法处理孢子。内疗素是刺孢吸水链霉菌(Strep.hygrospinosvs)的次级代谢产物。

琼脂块筛选法在多杀菌素菌种选育中的应用

目的创建一种新的、高效的多杀菌素菌种选育方法,提高菌种筛选的效率。方法采用琼脂块培养的方法进行单菌落的固体发酵,采用硅胶薄层层析法初步测定菌株的产量。结果琼脂块筛选法与摇瓶发酵筛选法具有相关性。琼脂块的最适培养时间为11 d,硅胶薄层层析法检测多杀菌素的最低质量浓度为100 mg.L-1。结论采用琼脂块筛选法进行多杀菌素高产菌种的选育,可显著提高筛选效率。

琼脂块培养法应用于林可霉素菌种选育

以林可霉素产生菌林肯链霉菌２－８９号菌株为实验对象，选用多种诱变剂处理。实验证明，琼脂块培养法在简化选育工艺、缩短时间上明显优于常规方法。

琼脂块检测筛选法在阿维菌素育种中的应用研究

现有技术中阿维菌素自然选育流程耗时长、筛选效率低、设备及功能间的利用率低,因此,提供一种快速初筛方法对于阿维菌素的生产来说具有非常重要的意义。

黄花忍冬提取物抑菌作用的研究

采用滤纸片法和琼脂块法对黄花忍冬不同部位不同溶剂提取物进行了抑菌试验。结果表明:黄花忍冬花和叶片的正丁醇提取物对真菌薏苡弯孢叶斑病菌的抑制效果最好,均达到100%,果的水提物效果最差,只有27.9%,二者达到极显著差异;黄花忍冬各部位的乙酸乙酯、正丁醇提取物对金黄色葡萄球菌抑制效果较好,水提取物对金黄色葡萄球菌抑制效果较差。试验表明,黄花忍冬花和叶的提取物中存在丰富的抗菌天然活性物质,为寻找植物源抑菌剂提供理论依据。

黄花忍冬提取物抑菌作用的研究

采用滤纸片法和琼脂块法对黄花忍冬不同部位不同溶剂提取物进行了抑菌试验。结果表明,黄花忍冬叶的正丁醇提取物对真菌细辛叶枯病病原菌的抑制效果最好,抑菌率达到100%,叶的乙酸乙酯提取物效果最差,抑菌率只有13.3%,两者达到极显著差异;黄花忍冬各部位的乙酸乙酯、正丁醇提取物对大肠埃希菌抑菌效果较好,水的提取物对大肠埃希菌无抑菌活性。试验表明,黄花忍冬叶的提取物中存在丰富的抗菌天然活性物质,为寻找植物源抑菌剂提供了理论依据。

高产纳他霉素的褐黄孢链霉菌选育

目的 以褐黄孢链霉菌 (Streptomyces gilvosporeus) S- 71为出发菌株 ,筛选纳他霉素的高产菌株。方法 紫外线对孢子悬浮液照射 4 0 s后 ,分别用链霉素抗性和琼脂块法进行筛选纳他霉素高产菌株 ,之后对高产菌株进行生产稳定性实验。结果 通过链霉素抗性法筛选获得了约 10 %的正选率突变株 ,其中突变株SG- 5 6摇瓶效价单位为 2 4 10μg/ ml,为出发菌株的 14 6 % ;通过琼脂块筛选法获得了约 1%的正选率突变株 ,其中突变株 SG- 2 0 0 2摇瓶效价单位为 2 6 5 0μg/ ml,为出发菌株的 16 1% ,该菌株无链霉素抗性标记。结论 链霉素抗性筛选和琼脂块筛选均可以获得纳他霉素的高产菌株 ,其中链霉素抗性筛选法效率高 ,琼脂块法筛选全面。

恩拉霉素高产菌株的快速选育

为筛选恩拉霉素高产菌株,降低生产成本,以生产用Streptomyces-483为出发菌株,进行紫外-氯化锂复合诱变。以金黄色葡萄球菌为指示菌,用琼脂块法测定抑菌圈大小,筛选出84株突变株,经摇瓶初筛、复筛、5L发酵罐验证,最终获得4株高产突变株。筛选得到的4株高产突变株经稳定性考察完全适用于生产。

盐霉素高产菌株的筛选研究

目的优化高通量筛选盐霉素高产菌株流程,高通量筛选出具有遗传稳定性的产盐霉素高产菌株。方法以核糖体工程理论为基础,常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)及高通量筛选技术(high-throughput screening,HTS)对产盐霉素的白色链霉菌(Streptomyces albus)S12诱变筛选,并以琼脂块扩散法为基础建立一种快速检测盐霉素的方法应用于高通量筛选过程初筛。结果获得具有氯霉素和四环素双重抗性的高产菌株Tet30Chl25。摇瓶发酵实验结果表明:突变株Tet30Chl25盐霉素效价由初始菌株的16306U/m L提高到34712U/m L,提高了112%,且遗传稳定性良好。同时建立一种快速检测盐霉素的方法——琼脂块扩散法并应用于高通量筛选过程初筛中,缩短筛选周期12d,优化了筛选流程。结论首次综合运用核糖体工程推理选育技术、常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma,ARTP)及高通量筛选技术(highthroughput screening,HTS)对产盐霉素的白色链霉菌(S.albus)诱变筛选,是很好的菌种选育策略,适合工业菌种的选育。

宁康霉素产生菌海洋地衣芽孢杆菌BAC-9912的诱变育种

宁康霉素(Nincomycin)产生菌BAC-9912经紫外线单因子和亚硝基胍化学试剂诱变后,获得两株高产菌株9912-7-2U(UV处理获得)和9912-2U-32N(NTG处理获得),其摇瓶效价分别为176.464×105u·L-1和217.808×105u·L-1。比出发菌株效价分别提高126.9%和180.0%。连续传代摇瓶效价稳定。初步建立了形态观察法和琼脂块大通量法两种初筛模型。