牛羊布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验的建立与应用

【目的】建立并优化布鲁氏菌天然半抗原琼脂扩散试验(Native hapten agar gel immuno-diffusion test,NH-AGID),检测临床样品。【方法】建立NH-AGID方法,评价方法特异性、敏感性及重复性;检测免疫地区2287份、非免疫地区252份牛、羊血清。【结果】建立了NH-AGID方法,检测稳定,重复性好,具有较高的特异性;对自然感染阳性动物检测敏感性低于80%,对排菌动物的检测敏感性高于90%,检出布病阳性抗体的阈值高于RBT。免疫地区血清NH抗体平均检出率17.8%,LPS抗体平均检出率52.3%;非免疫地区血清NH抗体平均检出率40.9%,LPS抗体平均检出率54.8%。【结论】应用NH-AGID方法可鉴别区分免疫地区牛、羊布病感染动物和免疫动物。检出NH抗体动物处于布鲁氏菌活动期或排菌期为布病感染动物,应及时剔除出群。

犬瘟热琼脂扩散试验方法的建立及初步应用

采用犬瘟热鸡胚成纤维细胞弱毒疫苗免疫绵羊制备琼脂扩散抗体，应用犬瘟热病貉肝脏（电镜检查“＋＋”以上）制备琼脂扩散抗原，建立了琼脂扩散试验方法，用于犬瘟热病死动物肝、脾脏器中病毒抗原成分的检出。检测送检病料１０份，与电镜检查结果比较，阳性符合率为８５．７％（６／７），阴性符合率为７５％（３／４），总体符合率为９０％（９／１０）。本方法特异、敏感，操作简便，易于推广应用。

半抗原-琼脂扩散试验鉴别布鲁氏菌感染抗体和S2、Rev.1免疫抗体的研究与应用

目的布鲁氏菌病严重威胁着我国畜牧业生产和公共卫生安全,现有的常规血清学检测方法虽具有较高的敏感性与特异性,但无法区分布鲁氏菌感染抗体和S2、Rev.1疫苗免疫抗体(以下简称"鉴别诊断"),给我国执行扑杀布病感染动物的政策带来阻力。因此在S2和Rev.1疫苗免疫背景下研究天然半抗原-琼脂扩散试验(NH-GD)的鉴别诊断能力。方法优化NH-GD试验条件,测定其敏感性、特异性、重复性及鉴别诊断能力,并与荧光偏振测定法(FPA)作比较。结果 NH-GD试验具有很好的特异性和重复性,对S2免疫羊群从疫苗接种开始就具有鉴别诊断能力,而对Rev.1免疫羊群从疫苗接种122d开始具有鉴别诊断能力;与FPA作比较,一致性较好,且操作技术和所需仪器都非常简单,特别适合在基层推广使用,为我国羊布病监测提供了一个很好的检测方法。

用大肠杆菌K_(99)和F_(41)菌毛抗原检测牛血清抗体的琼脂扩散试验的研究

用含２ｍｏｌ／Ｌ尿素的磷酸盐缓冲液以热处理方法提取的Ｋ９９和Ｆ４１菌毛作为抗原，对琼脂扩散试验方法进行研究。结果表明本试验方法简便，特异性强，敏感性高，可用于血清抗体检测；所制备的抗原稳定、重复性好。

琼脂扩散试验检测羊口疮病毒

以羊口疮痂皮毒抗原接种家兔制备高免血清,经琼扩试验检测血清价为1∶16;通过抗原与兔抗羊口疮高免血清的方阵分析,确定兔抗羊口疮高免血清诊断抗体的最佳稀释度为1∶4;该诊断抗体对5份不同地区的羊口疮疑似病料都呈现特异性反应,不与山羊痘疫苗毒、口蹄疫疫苗毒和羊正常皮肤抗原发生交叉反应。琼脂扩散试验检测羊口疮病毒是一种简便、易于判断、实用性强的诊断方法。

免疫酶琼脂扩散试验在小鹅瘟诊断中的应用

利用抗小鹅瘟病毒酶标单克隆抗体建立了一种新的诊断方法一免疫酶琼脂扩散试验.该方法在检测小鹅瘟病毒抗原时,灵敏度比常规琼脂扩散试验高256倍左右.可直接检出鹅胚尿囊液及病料组织中的小鹅瘟病毒.15例自然病例肝组织的检验结果与病毒分离结果一致.在检测血清抗小鹅瘟病毒抗体时,灵敏度比常规琼脂扩散试验提高256倍。该方法灵敏、简便、快速、准确,适用于小鹅瘟临床诊断及免疫鹅抗体水平的监测.

鸭肝炎Ⅰ型琼脂扩散试验的研究

本试验用不同的鸭肝炎病料 ,通过氯仿去脂和反透析法进行病毒的提纯浓缩 ,研究鸭肝炎的琼脂扩散试验。结果显示用抗原检测抗体或用抗体 (血清 )检测病毒病原 ,均可达到 80 %的阳性检出率。试验中还发现 ,试验最佳的凝胶配方为 p H为 7.2 ,w(Na Cl)为 8%和琼脂糖的质量分数为 1 % ,病雏鸭肝浓缩抗原最为理想。

Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白琼脂扩散试验检测方法的建立

为了建立Ⅱ型猪圆环病毒的琼脂扩散试验检测方法,应用表达出的Ⅱ型猪圆环病毒Cap蛋白作为抗原,首先摸索出琼脂扩散试验的最佳工作条件,然后进行特异性试验、稳定性试验、符合率试验。结果表明:该检测方法使用的抗原浓度为0.91～1.83 mg/mL,具有良好的特异性、稳定性,与胶体金试纸条的检测方法检测符合率达到94.1%,适合于临床应用。

布鲁氏菌病M5、S2疫苗免疫血清半抗原-琼脂扩散试验方法检测评价

目的应用NH-AGID方法对布鲁氏菌M5、S2疫苗株免疫血清进行检测,评价该方法适用性。方法选取3~5月龄羔羊74只,随机分为3组。分别以S2株1.0×1010 CFU、5.0×109 CFU灌服和皮下注射接种羔羊各25只,M5株以1.0×10^(9) CFU皮下注射接种羔羊24只。免疫后7 d~150 d采集羊全血,分离血清,经RBT初筛和SAT确诊免疫抗体阳性血清。评估NH-AGID方法对M5和S2株疫苗免疫抗体与感染抗体的鉴别诊断特异性。结果NH-AGID方法对M5株疫苗免疫阳性血清的LPS抗体检出率为100%,NH抗体检出率8.3%~29.2%,鉴别诊断特异性为82.8%。对S2株疫苗口服组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为31.2%~66.7%,NH抗体检出率为0%;皮下注射组免疫阳性血清的LPS抗体检出率为45.4%~100%,NH抗体检出率为4.5%~20%。对S2株疫苗免疫血清的鉴别诊断特异性为96.5%。结论NH-AGID方法不完全适用于羊用布鲁氏菌疫苗M5株和S2株的鉴别诊断,该方法的鉴别诊断特异性与疫苗毒力、免疫剂量和途径等因素相关,应进一步研究明确该方法的适用范围及条件,以期合理应用于布病防控诊断工作中。

琼脂扩散试验检测附红细胞体抗体

采用琼脂扩散试验检测自然感染猪附红细胞体抗体和兔抗猪附红细胞体抗体,结果表明,猪附红细胞体抗原与自然感染附红细胞体猪血清、首免和二次免疫后收集的兔抗血清的琼脂扩散试验结果均呈阴性,第3次免疫后的血清效价为1∶16。

鸭坦布苏病毒琼脂扩散试验方法的建立

研究建立了一种检测鸭坦布苏病毒的琼脂扩散试验方法。经摸索最佳的抗体和抗原最适浓度后,通过特异性试验、重复性试验和灵敏性试验验证了该方法的可行性。结果表明,该方法的最佳抗体和抗原稀释倍数分别为1∶16和1∶8,该抗体不与H9亚型禽流感病毒、副黏病毒、胰腺炎型鸭甲肝病毒、小鹅瘟病毒、鸭源大肠杆菌发生交叉反应,敏感性为1∶32,且重复性良好。采用此方法检测样品的结果与RT-PCR的符合率达87.9%。本研究建立的琼脂扩散检测方法具有特异性强,稳定性好,敏感性高等优点,为坦布苏病毒的检测提供了简单的方法。

猪圆环病毒2型Cap蛋白琼脂扩散试验检测方法的建立

为便于快速、准确检测猪圆环病毒2型(PCV2),减少其对我国养猪业的威胁,建立了PCV2 Cap蛋白琼脂扩散试验(AGP)检测方法。应用表达制备好的PCV2 Cap蛋白,与弗氏佐剂乳化后免疫家兔,制备多克隆抗体并进行抗体效价测定。确定AGP最佳工作条件,并进行抗体特异性、稳定性及符合率试验。结果显示:制备的多克隆抗体ELISA效价可达1:12800,AGP效价可达1:32,表明其具有良好的特异性、稳定性;对20份PCV2 Cap蛋白抗原进行检测,发现其结果与应用标准猪血清抗体检测结果符合率为100%。结果表明,制备的抗PCV2 Cap蛋白多克隆抗体可替代标准抗体,用于PCV2 Cap蛋白的AGP试验检测。本研究为PCV2检测以及后续的免疫学特性研究提供了技术支撑。

应用琼脂扩散试验诊断绵羊副结核的研究报告

副结核病是由副结核分枝杆菌引起的慢性传染病。主要侵害牛、绵羊、山羊、鹿等反刍动物。为了更好的防治本病,研究一种简便易行、特异性高的诊断方法是十分必要的。我们于1986年应用琼脂扩散试验做了绵羊副结核病的诊断研究,现报告如下。材料与方法菌种:牛副结核分枝杆菌P18菌株,由中国兽药监察所惠赠。

鸭病毒性肝炎琼脂扩散试验方法的研究

雏鸭病毒性肝炎是一种急性接触性传染病,其特征是肝脏受到损害,1—30日龄的雏鸭最易感。康复鸭终身带毒并排泄病毒,生长发育迟缓。本病的死亡率高达50—90%,对养鸭业造成极大的经济损失。美国1950年(Levine Fabricant)最先报道本病。

间接免疫荧光染色法和琼脂扩散试验在禽脑脊髓炎流行病学调查中的应用

间接免疫荧光法和琼脂扩散试验检测鸡血清中抗传染性脑脊髓炎病毒抗体具有较强的特异性;用以检测江苏、山东、安徽、上海等地的69份鸡血清证明,这些地区均有传染性脑脊髓炎病毒感染。

应用琼脂扩散试验检测盱眙水牛病抗体的探讨

以盱眙水牛病自然发病牛或人工感染传代病牛后期血清与病牛肝、淋巴结组织匀浆提取物进行琼脂扩散试验.结果.以病牛肝、淋巴结、脾混合提取物为抗原对该病后期血清可产生沉淀反应(10/13).取其中2头阳性病牛血清作为特异性抗体,对7头病水牛肝、脾、淋巴结混合悬液起反应;对另1头病水牛肝、淋巴结组织分别起反应;对该牛的脾组织不发生反应.

琼脂扩散试验结果影响因素的分析

琼脂扩散试验是临床中病原诊断和抗体效价测定的主要方法之一,该方法简洁、快速,在临床中应用广泛。但是该试验容易受到多种因素的影响而导致试验特异性、敏感性、精确性以及结果判断的不准确。本文就抗原、抗体性质、琼脂板以及反应条件等影响因素对琼脂扩散试验的影响进行了逐一分析。

应用琼脂扩散试验检测新城疫抗原

应用PEG平板进行琼脂扩散试验检测病禽组织器官中的新城疫抗原 ,采用抗原与兔抗ND高免血清的点阵分析 ,确定了兔抗ND高免血清诊断抗体的最佳稀释度为 1∶2 ;采用多器官检查和统一判定方法 ,即心、肝、脾、肺、肾、脑、盲肠扁桃体。

琼脂扩散试验操作方法及注意事项

琼脂扩散试验（简称“琼扩”）是临床中病原诊断和抗体效价测定的主要方法之一。该方法简洁、快速，在临床中应用广泛，特别适用于大量血清样品的检测和流行病学群体的定性诊断。缺点是需要时间过长，灵敏度不高。琼脂扩散试验是根据沉淀试验的原理，利用可溶性抗原和抗体在半固体凝胶中进行的相向扩散反应，当抗原、抗体的分子相遇并达到适当的比例时，就会相互结合，凝集，形成抗原-抗体的结合物，在抗原、抗体比例较适合并有电解质的存在及一定温度的条件下，形成白色可见的沉淀线，此种沉淀反应，称为琼脂免疫扩散试验，本法可用已知抗原测定未知抗体，也可以用已知抗体测定未知抗原。在传染病的实验室诊断中，常用于鸡马立克氏病抗体检测。也曾有用此法检查鸡法氏囊病、小鹅瘟、猪瘟病和炭疽等疾病的报道。现以检测鸡马立克氏病的抗体为例，将其操作方法介绍如下。