甘草甜素对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的:探究甘草甜素(Gly)对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:体外培养正常人喉黏膜上皮细胞和喉癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白印迹实验检测微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)mRNA和蛋白表达水平。将喉癌Hep-2细胞分为对照组、Gly低浓度组、Gly中浓度组、Gly高浓度组、Gly高浓度+空载质粒组、Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组。各组给予相应浓度的Gly干预或转染对应质粒培养48 h。Transwell实验和划痕实验分别检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力。RT-qPCR法和蛋白印迹实验检测各组Hep-2细胞miR-205-5p、SIRT3 mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-205-5p与SIRT3的靶向关系。结果:与人喉黏膜上皮细胞比较,喉癌Hep-2细胞miR-205-5p水平降低,SIRT3 mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05)。与对照组比较,Gly低、中、高浓度组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平依次降低,miR-205-5p水平依次升高(均P<0.05)。与Gly高浓度组和Gly高浓度+空载质粒组比较,Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平升高,miR-205-5p水平降低(均P<0.05)。miR-205-5p可靶向调控SIRT3表达。结论:Gly能够抑制Hep-2细胞侵袭和迁移,其机制可能与上调miR-205-5p表达,进而靶向下调SIRT3表达有关。

甘草甜素调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤的影响

目的 研究甘草甜素(GL)是否可以通过调节TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤(RILI)产生影响。方法 取48只小鼠,先随机选出12只小鼠作为NC组,其余小鼠构建肺癌荷瘤小鼠模型并采用X射线照射全胸建立RILI模型,再将小鼠随机分为照射+Model组、照射+GL组(10 mg/kg)、照射+GL+SRI-011381组(10 mg/kg+30 mg/kg TGF-β激动剂)。使用酶联免疫吸附(ELISA)法检测小鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平;HE染色法检测小鼠肺组织病理损伤;试剂盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸(HYP)、髓过氧化物酶(MPO)含量;免疫组化法(IHC)检测肺组织中TGF-β、α-SMA表达;Western Blot检测小鼠肺组织中TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白表达。结果 与NC组比较,照射+Model组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达升高,肺组织病理损伤加重,Smad7蛋白表达降低(P<0.05);与照射+Model组比较,照射+GL组小鼠血清中IL-6、TNF-α水平、HYP、MPO、TGF-β和α-SMA表达、TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达减少,肺组织病理损伤减轻,Smad7蛋白表达增加(P<0.05);照射+GL+SRI-011381组中实验检测结果则与照射+GL组结果趋势相反,表明SRI-011381干预后减弱了GL对肺癌荷瘤小鼠RILI的改善作用。结论 甘草甜素可以通过抑制TGF-β/Smad信号通路对肺癌荷瘤小鼠放射性肺损伤进行修护改善。

甘草甜素对大鼠幽门螺杆菌相关性胃炎的改善作用及机制

目的探讨甘草甜素(GL)对大鼠幽门螺杆菌(HP)相关性胃炎的改善作用及机制。方法以接种1×10^(9) cfu/mL HP建立HP相关性胃炎大鼠模型,将造模成功大鼠随机分为模型组、阳性对照组(HP标准四联方案)和GL低、中、高剂量组(5、20、50mg/kg),每组12只;另取12只正常大鼠作为正常对照组。除正常对照组和模型组大鼠灌胃等体积生理盐水外,其他各组大鼠灌胃相应药物,每天1次,连续30 d。给药结束后大鼠行13C尿素呼气试验,记录超基准值(DOB);观察大鼠胃黏膜组织病理变化和细胞形态学变化,并进行病理评分;检测大鼠胃黏膜组织中白细胞介素8(IL-8)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平,高迁移率族蛋白B1(HMGB1)、核因子κB(NF-κB)m RNA相对表达量,一氧化氮合酶(iNOS)、HMGB1蛋白相对表达量以及NF-κB p65磷酸化水平。结果与正常对照组比较,模型组大鼠DOB值,胃黏膜组织病理评分,IL-8、IL-1β、TNF-α、ROS、MDA水平,HMGB1、NF-κB mRNA相对表达量,iNOS、HMGB1蛋白相对表达量和NF-κB p65磷酸化水平均显著升高(P<0.05);大鼠胃黏膜上皮细胞结构不完整且数量减少,细胞碎片及空泡增多,细胞固缩明显。与模型组比较,GL各剂量组和阳性对照组上述指标变化均显著逆转(P<0.05),且GL高剂量组上述指标变化均较GL低、中剂量组更显著(P<0.05);大鼠胃黏膜细胞病理变化均改善。结论GL可能通过抑制HMGB1/NF-κB信号通路的激活,抑制炎症和氧化应激反应,从而减轻HP引起的胃黏膜损伤。

甘草甜素调节HMGB1/RAGE信号通路对高糖诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响

目的:甘草甜素(Gly)调节高迁移率族蛋白(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路对高糖诱导的心肌细胞凋亡和自噬的影响。方法:体外培养大鼠心肌细胞H9c2,将其分为7组:对照组、高糖组、高糖+Gly组、高糖+pcDNA3.1空载体组、高糖+pcDNA3.1-HMGB1组、高糖+Gly+pcDNA3.1空载体组、高糖+Gly+pcDNA3.1-HMGB1组。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活力;V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙啶(PI)法检测细胞凋亡率;透射电镜观察细胞自噬;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测B细胞淋巴瘤/白血病基因-2相关X蛋白基因(Bax)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)和Beclin-1凋亡、自噬相关蛋白表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;2,7-二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针法检测活性氧(ROS)水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测HMGB1、RAGE mRNA表达水平。结果:与对照组比较,高糖组H9c2细胞活力下降,细胞凋亡率、自噬小体数量及Bax、LC3、Beclin-1蛋白表达增加,IL-1β、TNF-α、ROS水平及HMGB1、RAGE mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05);与高糖组比较,高糖+Gly组H9c2细胞活力升高,细胞凋亡率、自噬小体数量及Bax、LC3、Beclin-1蛋白表达减少,IL-1β、TNF-α、ROS水平及HMGB1、RAGE mRNA表达减少,差异均有统计学意义(P<0.05);与高糖+Gly组比较,高糖+Gly+pcDNA3.1-HMGB1组H9c2细胞活力下降,细胞凋亡率、自噬小体数量及Bax、LC3、Beclin-1蛋白表达增加,IL-1β、TNF-α、ROS水平及HMGB1、RAGE mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:Gly能够减轻高糖诱导的H9c2细胞炎症和氧化应激反应,抑制其凋亡和自噬,可能与抑制HMGB1/RAGE信号通路有关。

甘草甜素通过降低HMGB-1抑制良性前列腺增生

目的:探讨甘草甜素抑制良性前列腺增生的作用及其机制。方法:体内实验选取成年雄性SD大鼠随机分为6组(每组10只):正常对照组、甘草甜素对照组、高迁移率族蛋白B-1组(HMGB-1)对照组、模型组、甘草甜素组、HMGB-1组,干预21 d取材前列腺组织。HE染色观察大鼠前列腺组织病理学改变;免疫组化(IHC)和蛋白免疫印记法分析HMGB-1及自噬相关蛋白表达;测量法分析前列腺的质量、体积及其指数;透射电镜观察大鼠前列腺组织自噬小体形成。体内外实验选择BPH-1、WPMY-1细胞,分为丙酸睾丸素组、HMGB-1对照组、甘草甜素对照组、HMGB-1组、甘草甜素组,Western Blot检测HMGB-1、AR、Beclin-1、P62蛋白表达及LC-3bⅡ/Ⅰ水平,MDC法及吖啶橙染色及检测细胞的自噬水平。结果:体内实验中,与正常对照组比较,模型组大鼠前列腺腺体上皮细胞呈复层高柱状增生、部分细胞间质纤维结缔组织增生,前列腺质量、体积、指数显著增加,前列腺组织中AR、HMGB-1、AR、Beclin-1及LC-3bⅡ/Ⅰ水平显著升高,P62蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01),前列腺组织透射电镜下自噬小体数目明显增加。体外实验中,模型组细胞自噬水平升高,AR、HMGB-1、Beclin-1蛋白表达及LC-3Ⅱ/Ⅰ水平显著升高,P62蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01);HMGB1处理可引起和加剧细胞自噬,甘草甜素可降低细胞自噬水平。结论:甘草甜素能通过抑制HMGB-1来抑制良性前列腺增生。

甘草甜素通过调控circ_0009910表达对鼻咽癌6-10B细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨甘草甜素(GL)对鼻咽癌6-10B细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对circ_0009910的调控作用。方法采用不同浓度(10、20、40μmol/L)GL处理鼻咽癌细胞6-10B作为GL-L组、GL-M组、GL-H组。同时将正常培养的6-10B细胞记为Con组;si-NC、si-circ_0009910分别转染入6-10B细胞,记为si-NC组、si-circ_0009910组。pcDNA、pcDNA-circ_0009910转染入6-10B细胞6 h后加入GL处理,记为GL+pcDNA组、GL+pcDNA_circ000910组;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验检测细胞增殖能力;采用Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力;采用qRT-聚合酶链反应(PCR)法检测鼻咽癌组织、癌旁组织与6-10B细胞中circ_0009910的表达量。结果GL能够浓度依赖性地抑制细胞增殖、迁移及侵袭,并可抑制circ_0009910表达;与癌旁组织比较,鼻咽癌组织中circ_0009910表达水平显著升高(P<0.05);转染si-circ_0009910后,细胞增殖抑制率显著增加,迁移、侵袭细胞数显著降低(P<0.05);转染pcDNA-circ_0009910可拮抗GL对细胞增殖、迁移及侵袭的作用。结论GL可通过下调circ_0009910表达而减弱鼻咽癌细胞增殖、迁移及侵袭能力。

甘草甜素对病毒性脑炎小鼠神经元活性及血清NSE水平的影响

目的:探讨甘草甜素对病毒性脑炎小鼠神经元活性及血清神经元特异性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)的影响。方法:将SD小鼠30只随机分为生理盐水组、病毒性脑炎组和甘草甜素组,每组10只。注射柯萨奇病毒B3建立病毒性脑炎模型,甘草甜素组灌胃甘草甜素50 mg/kg,生理盐水组及病毒性脑炎组灌胃等剂量生理盐水。采用迷宫测试方法检测小鼠行为能力,甲酚紫(cresyl violet,CV)法检测神经元病理变化,酶联免疫法检测NSE与TUNEL法检测小鼠神经元凋亡情况,免疫印迹法检测神经元内Bax、Caspase-3。结果:3组小鼠逃避潜伏期与NSE值均随灌胃天数的增加而减少,其中病毒性脑炎组高于生理盐水组(P<0.05),甘草甜素组低于病毒性脑炎组(P<0.05);与生理盐水组相比,病毒性脑炎组S100B升高(P<0.05);与病毒性脑炎组相比,甘草甜素组S100B下降(P<0.05);小鼠神经元凋亡率,病毒性脑炎组高于生理盐水组(P<0.05),甘草甜素组低于病毒性脑炎组(P<0.05);生理盐水组小鼠几乎无Bax、Caspase-3蛋白表达,甘草甜素组Bax、Caspase-3蛋白相对表达量低于病毒性脑炎组(P<0.05)。结论:甘草甜素对病毒性脑炎小鼠行为能力及神经元活性改善有一定积极作用,其作用机制可能与调控NSE、S100B、Bax及Caspase-3水平有关。

甘草甜素脂质体和甘草甜素的药动学比较

目的:比较健康志愿者口服甘草甜素脂质体(Glycyrrhizinliposome,GL-L)和甘草甜素药片(Glycyrrhizin,GL)后的药动学。方法:用高效液相色谱检测血浆甘草次酸(Glycyrrhetinicacid,GA)的浓度,流动相为甲醇-水-醋酸-三乙胺(87∶12·15∶0·3∶0·55),流速为1·0mL·min-1,用乙腈提取,在254nm下检测。用上述HPLC法测定8例健康志愿者口服GL-L和GL后的药动学。结果:血浆GA的出峰时间大约为12min,检测限为0·0625μg·mL-1。口服两种制剂后,血浆中未检测到GL,仅检测到GA,口服GL-L后血中GA的浓度-时间曲线下面积(AUC)、血药峰值(Cmax)较口服GL高。结论:口服GL很少被吸收,而口服GL-L后可促进GL转变为GA和GA的吸收。

甘草甜素片联合熊去氧胆酸治疗妊娠期胆汁淤积症的效果及对肝功能指标的影响

目的探讨甘草甜素片联合熊去氧胆酸治疗妊娠期胆汁淤积症(ICP)的效果及对肝功能指标的影响。方法选取2018年1月至2020年12月本院收治的120例ICP患者为研究对象,按照患者入院编号的奇偶性将其分为对照组和观察组,各60例。对照组给予熊去氧胆酸片治疗,观察组在对照组基础上给予甘草甜素片治疗。比较两组的治疗效果。结果观察组的治疗总有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组的碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、直接胆红素(DBiL)、总胆汁酸(TBA)水平均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,观察组的降钙素原(PCT)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及白细胞介素-12(IL-12)水平均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组的不良妊娠结局总发生率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论甘草甜素片联合熊去氧胆酸治疗ICP效果显著,可改善肝功能指标,减轻炎症反应,降低不良妊娠结局发生率,具有重要的临床应用价值。

氧化苦参碱及甘草甜素对小鼠肝细胞凋亡的影响

目的：探讨氧化苦参碱（ＯＭ）及甘草甜素（ＧＬ）对撤除苯巴比妥钠（ＰＢ）诱导的小鼠肝细胞凋亡的影响。方法：选用昆明种小鼠，测定肝／体质量比、肝组织ＤＮＡ含量，观察组织学改变及原位凋亡细胞ＴＵＮＥＬ标记等指标，观察腹腔内注射ＯＭ１５０ｍｇ／ｋｇ及ＧＬ５０ｍｇ／ｋｇ，３次／ｄ，于３６ｈ后，对撤除ＰＢ后引起的小鼠肝细胞凋亡的影响。结果：阳性对照组肝／体质量比及肝ＤＮＡ含量分别回落１６．３％及３２．４％；ＧＬ组分别回落１６．１％及２８．９％；ＯＭ组无明显回落。组织学检查及凋亡细胞ＴＵＮＥＬ标记显示：阳性对照组及ＧＬ组小鼠肝细胞出现典型凋亡改变，ＴＵＮＥＬ标记阳性；阴性对照组及ＯＭ组小鼠肝细胞未见明显凋亡改变。结论：ＯＭ可阻断撤除ＰＢ诱导的小鼠肝细胞凋亡，ＧＬ对其无影响。

甘草甜素抑制致癌过程中对DNA损伤修复的影响

本文检测外周淋巴细胞非程序ＤＮＡ合成（ＵＤＳ），探讨甘草甜素（ＧＬ）在抑制二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）致肝癌前病变发生过程中，对ＤＮＡ损伤修复的影响。结果显示；大鼠腹腔注射ＤＥＮ(１００ｍｇ／ｋｇ）后５小时，ＵＤＳ值（１６８．５±３６．５ｃｐｍ／５×１０５ＬＣ）显著低于正常大鼠（２２６．７±４７．０）（Ｐ＜０．０５）；在加用ＧＬ的影响下，ＵＤＳ值（２１２．３±６９．２）显著提高，与正常者相接近（Ｐ＞０．０５）。在注射ＤＥＮ后４周，肝癌前病变的发生受到ＧＬ抑制，同时ＵＤＳ值（５０１．０±１４０．０）也显著高于不用ＧＬ者（３６７．０±３６．３）（Ｐ ＜０．０１），而与正常者（６０６．８±８３．８５）无明显差别(Ｐ＞０．０５）。提示ＧＬ抑制ＤＥＮ致肝癌作用与ＧＬ保护ＤＮＡ损伤修复有关。

甘草甜素等对黄曲霉毒素B_1致大鼠肝癌作用的影响

应用黄曲霉毒素B_1(AFB_1)致大鼠肝癌作用的短期体内实验模型,研究两种治疗慢性乙肝的中药制剂甘草甜素和水飞蓟素及可食植物柑果之果皮、果汁对AFB_1致肝癌作用的影响。发现甘草甜素具有明显抑制AFB_1诱发肝癌前病变的作用。文中对甘草甜素的抑制机理进行了讨论。

软坚护肝片及甘草甜素片对肝癌术后复发的干预性研究

探索有效、安全、价廉的预防肝癌根治术后复发的药物。对符合入选条件的小肝癌根治术后患者按自愿分为治疗组和对照组。治疗组服用软坚护肝片加甘草甜素片 ,对照组服用葫芦素片加肌苷。治疗 12个月以上 ,长期追踪。治疗组 3、5年肝癌术后复发率 11 6 9%及 15 5 % ,比对照组 30 36 %及 39 2 9%显著低 (P <0 0 5 )。治疗组 3、5年肝癌术后生存率 80 0 %、6 8 8% ,明显高于对照组 5 6 0 %、37 7% (P <0 0 5 )。

甘草甜素通过抑制炎症反应和氧化应激改善大鼠蛛网膜下腔出血后血脑屏障损伤

目的:探究甘草甜素对大鼠蛛网膜下腔出血(SAH)后血脑屏障损伤的改善作用以及与炎症反应、氧化应激反应的关系。方法:将大鼠分为假手术组、模型组、甘草甜素低剂量组、中剂量组、高剂量组(25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg)、阳性组(40 mg/kg尼莫地平),每组30只大鼠,对大鼠神经行为进行评分,给药结束后24、48、72 h测定大鼠脑组织含水量,采用伊文氏蓝渗出量(EB)评估法检测血脑屏障通透性,HE染色观察大鼠基底动脉血管形态学变化,透射电镜观察脑组织超微结构变化情况,酶联免疫法检测脑组织中IL-1β、IL-6、TNF-α、MDA、3-NT、8-OHDG表达;分别采用比色法、氮蓝四唑光还原法及硫代巴比妥酸法测定脑组织中氧化应激指标GSH-Px、SOD、MDA水平; RT-PCR检测脑组织中COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达;蛋白免疫印迹法(WB)检测ZO-1,occludin、claudin-5、Bax、Bcl-2蛋白表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠神经行为学评分降低,给药后24、48、72 h脑含水量升高,EB含量升高;模型组大脑皮层细胞凋亡率升高;与模型组相比,甘草甜素组大鼠神经行为学评分升高,脑含水量、EB含量、细胞凋亡率降低,具有剂量依赖性(P <0. 05)。与假手术组相比,模型组IL-1β、IL-6、TNF-α、3-NT、8-OHDG、MDA水平升高,SOD、GSH-Px水平降低;与模型组相比,甘草甜素组和阳性组IL-1β、IL-6、TNF-α、3-NT、8-OHDG、MDA水平均降低,SOD、GSH-Px水平升高,具有剂量依赖性(P <0. 05)。与假手术组相比,模型组COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达升高,ZO-1、occludin、claudin-5、Bcl-2蛋白表达降低,Bax蛋白表达升高;与模型组相比,甘草甜素组和阳性组COX-2、iNOS、ICAM-1、VCAM-1 mRNA表达降低,ZO-1、occludin、claudin-5、Bcl-2蛋白表达升高,Bax蛋白表达降低,具有剂量依赖性(P <0. 05)。结论:甘草甜素能够降低大鼠蛛网膜下腔出血后的血脑屏障通透性增加,缓解基底动脉血管痉挛以及减少内皮细胞紧密连接丢失,其机制可能与抑制炎症反应和氧化应激反应有关。

复方甘草甜素(美能)治疗儿童过敏性紫癜的临床疗效观察

美能注射液(日本美能发源制药公司生产)的主要成分是甘草甜素(甘草酸)、 0.1% L-半胱氨酸和 2%甘氨酸,其中的甘草酸具有抗变态反应的作用 [1].过敏性紫癜可能与多种过敏原损伤血管有关.笔者应用美能注射液治疗儿童过敏性紫癜 36例,取得了较好的疗效,现报道如下:

甘草甜素联合苦参碱对TAA引致大鼠肝纤维化的抑制作用

目的:研究甘草甜素-苦参碱合剂对TAA引致大鼠肝纤维化的抑制作用。方法:大鼠采用TAA诱导肝纤维化模型,模型组给予生理盐水,治疗组给予低、中、高剂量甘草甜素-苦参碱合剂,阳性对照组给予秋水仙碱。测定肝组织羟脯氨酸(Hyp)、血清透明质酸(HA)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白(ALB)和总蛋白(TP)含量及肝组织病理学形态分析评价肝纤维化程度。结果:治疗组肝纤维化程度显著低于模型组(P<0.01)。与模型组比较,治疗组Hyp、HA、ALT和AST显著降低(P<0.05),ALB和TP显著升高(P<0.05)。结论:甘草甜素-苦参碱合剂对TAA引起的大鼠肝纤维化有抑制作用。

甘草甜素抗炎镇痛作用的研究

目的研究甘草甜素的抗炎镇痛作用。方法采用小鼠热板技术,醋酸扭体法观察小鼠的镇痛作用;采用二甲苯所致小鼠耳廓炎症实验观察药物的抗炎作用。结果甘草甜素高、中剂量组均能明显的提高小鼠的痛阈值;甘草甜素高、中、低剂量组均能明显减少小鼠扭体次数;甘草甜素高、中、低剂量组对二甲苯致小鼠耳廓肿胀均有明显的抑制作用。结论甘草甜素具有显著的抗炎镇痛作用。