抗TREM2抗体的制备及生物学活性的初步研究

目的制备抗髓系细胞触发受体2(TREM2)抗体并初步探究其生物学活性。方法采用杂交瘤筛选的方法,获得稳定分泌抗TREM2抗体的杂交瘤细胞株,并对杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行筛选,选择结合效果最佳的单克隆抗体进行人源化改造得到嵌合抗体;对嵌合抗体进行进一步的人源化改造,采用酶联免疫吸附法(ELISA)及流式细胞术(FACS)检测人源化抗体的抗原抗体结合活性;采用生物膜干涉技术(BLI)检测人源化抗体与人TREM2结合动力学;通过基于报告基因的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)生物学活性测定方法,检测人源化抗体的依赖细胞介导的细胞毒效应;使用免疫缺陷小鼠对人源化抗体进行体内药效实验。结果利用杂交瘤技术成功筛选到稳定表达抗TREM2抗体的杂交瘤细胞株,对杂交瘤细胞株进行进一步人源化改造,获得纯度高于95%的人源化抗体h7B6-11,抗体h7B6-11与TREM2-His蛋白具有高度亲和性,且对293T-TREM2细胞的ADCC活性明显强于对照抗体。体内药效实验结果显示,h7B6-11与程序性死亡受体1(PD1)抗体联合用药抑制肿瘤生长效果明显。结论抗体h7B6-11具有高度亲和力和良好的生物学活性,有望开发成为新一代肿瘤免疫治疗的抗体药物。

肠道菌群对黄酮类化合物的代谢作用及生物学活性影响研究进展

黄酮类化合物是广泛存在于日常饮食中、由植物合成的次生代谢产物,具有多重生物学活性,如抗氧化、抗炎、抗癌、抗心血管疾病等。然而,黄酮类化合物的结构特点导致其在体内的生物利用度极低。近年来,研究发现黄酮类化合物能够在肠道菌群的作用下发生代谢转化,一定程度上提高了生物利用度,且其代谢产物具有与母药相似或更高的生物学活性。因此,解析黄酮类化合物在肠道菌群作用下的代谢规律及其代谢产物的生物学活性可为阐释其体内药效机理提供重要的理论参考依据。文章综述了黄酮类化合物在肠道微生物作用下的代谢反应,对黄酮类化合物经体内肠道菌群作用后代谢产物的生物学活性及机制进行相应的讨论,为明确黄酮类化合物在体内发挥生物学活性的有效形式提供理论支撑。

重组犬IFN-γ的原核表达及生物学活性研究

为了探究犬γ干扰素(canine interferon gamma,CaIFN-γ)的原核可溶性表达方法及其生物学活性,试验首先采用PCR方法扩增优化后的CaIFN-γ基因成熟肽序列,以此构建重组表达质粒pCold-SUMO-10His-CaIFN-γ;然后将重组表达质粒转化至表达菌株Lyophilized BL21(DE3)Chaprone中,并用IPTG进行诱导表达;最后对表达的重组蛋白rCaIFN-γ进行SDS-PAGE分析、Western-blot鉴定、IPTG浓度优化、Ni-IDA亲和层析,以及采用CCK-8法测定重组蛋白rCaIFN-γ的细胞毒性,实时荧光定量PCR(相对定量)法检测凋亡相关基因和干扰素刺激基因(ISGs)转录水平变化,用细胞病变(CPE)法测定抗水疱性口炎病毒(VSV)效价,实时荧光定量PCR(绝对定量)法测定抗犬流感病毒(CIV)H3N2亚型感染的能力。结果表明:优化后的CaIFN-γ基因PCR扩增产物大小为494 bp,且重组表达质粒pCold-SUMO-10His-CaIFN-γ经菌液PCR、双酶切和测序验证构建成功;阳性菌株经诱导后表达的重组蛋白rCaIFN-γ大小为35.1 ku,该蛋白质能以可溶性形式表达,且可以与His Tag和HA Tag的鼠源单克隆抗体发生特异性反应;IPTG最佳诱导表达浓度为0.05 mmol/L;纯化后的重组蛋白rCaIFN-γ最大安全浓度为20μg/mL。以最大安全浓度的重组蛋白rCaIFN-γ分别作用MDCK细胞、MDCK(PB_(2))细胞4 h和6 h后,促凋亡基因p53和Bcl2相关X蛋白(Bax)的相对表达量无显著变化(P>0.05),γ干扰素受体2(IFNGR2)基因相对表达量降低(P<0.01或P>0.05),信号转导及转录激活因子1(STAT1)和干扰素调节因子1(IRF1)基因相对表达量均升高(P<0.05或P<0.01);MDCK细胞中,作用6 h IFNGR2、STAT1和IRF1基因相对表达量略高于4 h,但差异不显著(P>0.05);MDCK(PB_(2))细胞中,作用6 h IFNGR2和IRF1基因相对表达量极显著高于4 h(P<0.01),而STAT1基因相对表达量显著低于4 h(P<0.05)。再以最大安全浓度的重组蛋白rCaIFN-γ分别刺激MDCK和MDCK(PB_(2))细胞24 h,干扰素诱导跨膜蛋白1(IFITM1)、抗黏病毒蛋白1(MX1)、干扰素诱导蛋白与四肽重复1(IFIT1)、干扰素刺激基因15(ISG15)、2′-5′寡腺苷酸合成酶1(OAS1)5种ISGs转录水平均升高,且MDCK细胞中的转录水平均极显著高于MDCK(PB_(2))细胞(P<0.01)。该蛋白质在MDCK细胞中抗VSV的病毒活性效价为6.4×10~5 U/mL,并且对H3N2亚型CIV有一定的抑制作用。说明重组蛋白rCaIFN-γ在大肠杆菌中成功地实现了可溶性表达,并且具有良好的生物学活性。

抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性测定方法的建立

目的建立基于报告基因的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法。方法以WIL2-S细胞系作为靶细胞,以Jurkat-NF-κB-Luc转基因细胞系作为效应细胞,对抗体的量效范围、孵育时间、诱导时间、效靶比及细胞接种密度进行优化,构建可用于测定抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性的报告基因法。依据ICHQ2的指导原则对方法进行全面验证,包括专属性、准确性、精密度、线性、稳定性。结果成功建立了具有量效关系的抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法的抗体起始浓度为500 ng/mL,稀释倍数为1∶4,共计8个浓度点(500,125,31.25,7.81,1.95,0.49,0.12,0.031 ng/mL),效靶比为4∶1,诱导时间为4 h。本方法具有良好的专属性;5个不同稀释组回收率样品经测定,相对效价分别为59.63%±4.57%,75.54%±4.05%,99.98%±9.63%,123.90%±5.54%和142.51%±12.82%;对应的回收率分别为93.17%±7.15%,94.42%±5.06%,99.98%±9.63%,99.12%±4.43%以及91.21%±8.21%,CV分别为7.67%,5.35%,9.63%,4.47%和9.00%,上述结果的变异系数CV值均<10%;实测效价与理论效价线性回归分析相关系数R^(2)=0.9823,线性良好;本研究建立的方法可以敏感检测出抗体结构变化对生物活性的影响,对双特异性抗体的稳定性检测有一定的指导意义。结论利用转基因细胞法成功建立了抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性检测方法,该方法专属性强、准确性高、重复性好,可用于评价抗CD3/CD20双特异性抗体生物学活性。

植物精油的生物学活性及其在仔猪生产上的应用

自抗生素在养殖业中的应用受到限制以来,植物精油作为绿色、高效、安全的抗生素替代品在提高动物生产性能和养殖效益等方面受到越来越多的关注,目前已被广泛应用于动物生产中。断奶仔猪的肠道发育不完全,在饲养过程中受多种因素的影响经常出现腹泻现象,影响生产性能。植物精油具有抑菌、抗氧化、抗炎等特性,能够有效改善断奶仔猪的肠道菌群结构、促进肠道健康发育、提高仔猪生长速度。本文从植物精油的理化特性、生物学活性及其在仔猪生产上的应用进行综述。

生姜提取物种类、生物学活性及其在食品包装上的应用研究进展

生姜作为一种生活中常见并且广泛使用的“药食同源”植物,含有丰富的多糖、萜烯类化合物、酚类化合物等多种活性物质,这些化合物使生姜具有抗氧化、抗炎、抗菌、抗癌、神经保护、抗糖尿病等药理特性。本文综述目前对生姜提取物种类和生物学活性的认识,并讨论生姜在食品包装上的应用研究进展,对生姜的未来发展方向进行展望,希望引起人们对生姜及其进一步应用的关注,以促进生姜资源的综合利用。

促伪狂犬病毒gD蛋白可溶性表达标签的筛选及融合蛋白生物学活性的检测

为筛选有助于伪狂犬病病毒(PRV)gD蛋白可溶性表达的标签,并检测其融合蛋白的生物学活性,本研究通过PCR扩增PRV gD基因后,分别连接携带MBP、SUMO、NusA和GST 4个不同促溶标签的原核表达载体,构建重组质粒pET21b-MBP-gD、pET21b-SUMO-gD、pET21b-NusA-gD和pET21b-GST-gD。经双酶切和基因测序鉴定正确后分别转化大肠杆菌BL21(DE3),采用IPTG诱导后经SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达,筛选可溶性表达效果最好的标签。结果显示,各重组质粒经酶切鉴定均获得852 bp的目的条带与各自的载体条带,均与预期相符,进一步测序结果显示插入基因序列与密码子优化后的PRV gD基因序列一致。SDS-PAGE检测结果显示,MBP标签融合gD蛋白的可溶性表达量最大,GST标签次之,SUMO标签和NusA标签融合的gD蛋白则均以包涵体形式表达。因此,选用重组MBP-gD蛋白(rMBP-gD)做后续鉴定。将rMBP-gD经Ni-NTA柱纯化后采用western blot和间接ELISA检测其反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测该重组蛋白与PK15细胞的结合;将该重组蛋白与PRV-GFP共孵育PK15细胞后,经流式细胞术检测其竞争结合PK15细胞,从而抑制PRV的感染情况。结果显示,rMBP-gD具有反应原性,且可以结合PK15细胞,rMBP-gD蛋白可竞争结合PK15细胞抑制PRV的感染。上述结果首次证实,可溶性原核表达的rMBP-gD表达效果好,且具有生物学活性,本研究为PRV基因工程亚单位疫苗的后续研究奠定了基础。

基于报告基因法检测白细胞介素-11生物学活性

白细胞介素-11(interleukin-11,IL-11)是一种多功能细胞因子,具有促进造血、免疫调节和组织修复等多种功能,在医学研究和临床治疗中具有重要的应用价值,因此,IL-11生物学活性的准确检测和评估至关重要。现采用的细胞增殖抑制法操作繁琐、耗时较长和易受到白细胞介素-6影响。本研究首先根据IL-11的作用机制(JAK-STAT信号通路),构建可稳定响应IL-11的萤光素酶报告基因表达单克隆细胞株,然后对IL-11的预稀释浓度及稀释梯度、接种细胞量和IL-11孵育时间进行优化,进一步对方法的准确性、精密度、特异性、稳定性以及和药典方法一致性进行全面验证,建立了基于报告基因法检测IL-11生物学活性的新方法。该方法可有效提高检测准确性和灵敏度,并且缩短检测时间,具有一定的应用前景。

甘精胰岛素生物学活性定量免疫荧光测定法和胰岛素生物测定法的等效性研究

目的建立甘精胰岛素基于转基因细胞CHO-INSRB 1284的定量免疫荧光生物学活性测定法(In-Cell Western,ICW),并将其与《中国药典》胰岛素生物测定法进行等效性研究。方法CHO-INSRB 1284细胞以1.5×10^(8) L^(-1)细胞密度铺板,1500μmol·L^(-1)甘精胰岛素稀释25倍后再进行3倍系列梯度稀释,在微孔板刺激细胞20 min,经固定、透化及抗体孵育步骤,利用odyssey双色红外荧光成像系统,进行定量免疫荧光生物学活性检测。结果ICW中甘精胰岛素的浓度与相对效价具有良好的量效关系;方法专属性好,相对准确度、中间精密度及线性均符合要求;7批甘精胰岛素样品采用两种方法测定的生物学活性结果相对偏差低于10%,用SPSS软件和SAS软件分析,表明方法具有相关性及等效性。结论建立的甘精胰岛素生物学活性定量免疫荧光测定法,方法专属性好,准确度及精密度高,与体内胰岛素生物测定法具有相关性和等效性,可用于甘精胰岛素的体外药效评价和质量控制。

没食子水提物对人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响

目的 探讨没食子水提物在防治口腔炎性疾病中的作用。方法 分离培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF),设立阴性对照组(PBS)、脂多糖组(1μg/mL)、没食子组(10 mg/mL)、氯己定组(0.2%,m/m)。对没食子水提物粉末进行大体检查,采用扫描电子显微镜观察没食子水提物粉末的微观特征。采用MTT法检测细胞活力,XTT法检测细胞增殖水平,以划痕伤口愈合迁移试验考察细胞迁移情况,采用酶联免疫吸试验(ELISA)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果 没食子水提物粉末大体检查及显微特征明显。没食子组细胞活力显著高于其他组(P <0.05)。给药后第3,5,7天,没食子组HPDLF增殖水平显著高于其他组(P <0.05)。与阴性对照组比较,没食子组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P <0.05)。没食子组细胞24 h划痕伤口几乎完全闭合。结论 没食子水提物可减轻HPDLF相关炎性反应。

植酸的生物学活性和化学性能在口腔医学中的应用进展

近年来,随着口腔医学领域的发展和技术进步,植酸作为一种重要的生物活性分子引起了广泛关注。植酸是一种多羧酸,具有多个羧基和磷酸根团,它在生物学活性和化学性能方面具有独特的特点,并且随着植酸的抗氧化性、抗瘤作用、抗癌等作用的发现,在医学领域也有着广泛的应用,因此,本文就植酸的生物学活性和化学性能在口腔医学中的应用进行综述。

白及多糖提取、生物学活性及应用研究进展

白及是一种源远流长的药材,数千年来广泛用于治疗各种疾病。它被誉为止血消肿、行水消肿、清热燥湿的神药。白及多糖作为白及块茎中最主要的活性成分,具有抗炎、促进创面修复、免疫调节、抗氧化、抗菌和抗肿瘤等多种药理作用,并在临床作为愈伤敷料的应用上发挥了独特优势。本文总结了白及多糖的提取方法,主要生物学活性及其应用,为白及多糖的开发利用及新药开发提供参考。

黄芩多糖的理化特性与生物学活性研究进展

黄芩(Scutellaria baicalensis G.)为唇形科黄芩属多年生草本植物,具有清热解毒、止血及安胎等功效。黄芩多糖(SBP)发挥着重要的药理作用,研究发现SBP的生物活性与其单糖组成、糖苷键类型、分子量空间结构等理化特性密切相关,而这些特性又受到提取及纯化方法的影响。主要综述了黄芩多糖的提取纯化工艺、结构特征、生物活性以及研究存在的问题,并对其发展前景进行了展望。

负载骨形态发生蛋白-2(BMP-2)对牙周干细胞生物学活性的影响

该探讨旨在理解骨形态发生蛋白-2(BMP-2)负载对牙周干细胞的生物活性影响。方法 实验研究,通过对比阿尔丁紫(ALP)染色结果、BMP-2、Runx2、DSPP和BSP数字符串的表达,以及蛋白表达水平,对照组、单纯诱导组与抑制剂组之间的差异被使显明。结果 单纯诱导组相较对照组,在ALP染色结果、mRNA数串以及蛋白表达水平上,可见一明显的提升(*P<0.05)。抑制剂组虽在这些指标上的表现未达单纯诱导组的水平(**P<0.05),但仍高出对照组(*P<0.05)。结论 综合研究结果表明,负载骨形态发生蛋白-2(BMP-2)能显著提高牙周干细胞的生物学活性,包括ALP活性、BMP-2、Runx2、DSPP和BSP的表达水平及其蛋白表达。然而抑制剂可以部分抑制其活性。这些发现为牙周病的治疗提供了新的研究依据。

槟榔提取物的生物学活性及其在动物生产中的应用

在动物养殖过程中,抗生素添加易产生微生物耐药性和药物残留问题,已引起广泛关注。开发毒副作用小、不易产生耐药性且无有害物质残留的新型绿色饲料添加剂,已成为我国动物饲料添加剂学科发展的重要方向。槟榔作为一种重要的中草药,具有多种生物学活性,在我国传统医学中已被广泛应用。研究表明,槟榔提取物具有提高动物生产性能的作用。因此,本文总结归纳了槟榔提取物的主要活性成分及其抗氧化、抗炎、抗寄生虫和抗微生物活性,并进一步讨论其在动物生产中的应用,旨在为槟榔提取物作为动物饲料添加剂的开发提供理论依据。

LncRNA NEAT1调控miR-22-3p对脂多糖诱导的人牙龈成纤维细胞生物学活性影响

目的探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)核富集转录本1(nuclear-enriched abundant transcript 1,Neat1)调控微小RNA miR-22-3p对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人牙龈成纤维细胞(human gingival fibroblasts,HGFs)生物学活性的影响。方法取对数生长期的HGFs细胞分为对照组、LPS组、si-NC组、si-Neat1组、si-Neat1+inhibitor NC组、si-Neat1+miR-22-3p inhibitor组。RT-qPCR检测Neat1、miR-22-3p表达水平;双荧光素酶验证Neat1、miR-22-3p的靶向关系;流式细胞仪、CCK-8、ELISA法分别检测细胞凋亡、细胞活力及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;蛋白质印迹检测Caspase-3、磷酸化核转录因子-κB(phosphorylated nuclear factor-κB,p-NF-κB)P65/NF-κB P65水平。结果与对照组比较,LPS组细胞活力、miR-22-3p表达显著降低,TNF-α、IL-1β、细胞凋亡率、p-NF-κB P65/NF-κB P65、Neat1、Caspase-3表达显著增加(P<0.05);与LPS组、si-NC组比较,si-Neat1组细胞活力、miR-22-3p表达显著增加,TNF-α、IL-1β、细胞凋亡率、p-NF-κB P65/NF-κB P65、Neat1、Caspase-3表达显著降低(P<0.05);下调miR-22-3p表达逆转了沉默Neat1对LPS诱导HGFs生物学活性的影响(P<0.05)。结论沉默Neat1可以抑制LPS诱导HGFs的细胞凋亡、炎症反应,可能与上调miR-22-3p表达有关。

八角茴香的生物学活性及其应用

八角茴香作为我国特色药食同源资源,具有多种活性成分,其药理作用广泛,有抑菌、杀虫、抗炎镇痛、抗氧化、抗病毒、抗焦虑、抗动脉粥样硬化等作用,在多领域具有开发应用价值。目前,对其开发利用主要集中于枝叶和果实,且多为粗加工产品,精深加工技术不足和新产品开发缺乏造成八角茴香资源综合利用度低的现状。深入研究其生物学活性作用机理,丰富八角茴香产品类型,对八角茴香产业多元化发展具有指导意义。该文介绍了八角茴香的主要生物学活性及其机理,阐述其在食品和动物饲料领域的开发应用现状,列出以八角茴香为原料制成的新产品,指出了目前存在的问题并提出研究建议,以期为后续研究提供参考。

大蒜素的生物学活性及在养殖生产中的应用

大蒜素是从自然界植物中提取的一种天然活性物质,有许多重要的生物活性功能(如抑菌、抗氧化、增强免疫力等),由于其价格低廉、多功能性、无残留、无耐药性、使用安全等特点在畜禽行业具有广阔的应用前景。文章主要从大蒜素的生物学功能及其在畜禽养殖生产中的应用等方面作以综述。

低氧条件下颌骨骨髓间充质干细胞生物学活性及长链非编码RNAs表达谱差异的分析

背景近年来,颌骨骨髓间充质干细胞(jaw bone marrow-derived mesenchymal stem cell,JBMMSCs)以其优秀的生物学特性备受瞩目。低氧作为一种常见的微环境,在增强JBMMSCs抗性方面发挥的作用尚未见报道,值得探究。目的探索低氧对JBMMSCs生物学活性的影响以及低氧处理JBMMSCs后差异表达的长链非编码RNA(long noncoding RNAs,lncRNAs)及mRNAs,为进一步探究lncRNAs在调控JBMMSCs生物学性能中的作用机制提供理论基础。方法从C57BL/6N小鼠下颌骨中分离培养JBMMSCs并对其进行鉴定。利用50μmol/L氯化钴(CoCl_(2))培养JBMMSCs,建立JBMMSCs低氧细胞模型,以常氧条件下细胞为对照,通过免疫荧光、Western blot检测低氧诱导因子-1α(hypoxiainducible factor-1α,HIF-1α)的表达情况,对细胞模型进行验证。在此基础上,区分低氧和常氧组,通过CCK-8、细胞划痕实验及Ki67免疫荧光染色观察低氧对JBMMSCs增殖、迁移等的影响。对低氧及常氧条件下的JBMMSCs进行高通量测序,以|log2FC|≥1且P<0.05为筛选标准,筛选差异表达的lncRNAs和m RNAs,并对其生物学功能和作用机制进行预测。结果从小鼠下颌骨中提取的JBMMSCs呈长梭形、漩涡状生长,经鉴定符合间充质干细胞特点。采用50μmol/L CoCl_(2)处理72 h后低氧标记物HIF-1α表达较对照组升高(P=0.0023)。CCK-8和Ki67免疫荧光染色结果显示,低氧可促进JBMMSCs的增殖能力(P=0.0057)。细胞划痕实验结果显示,低氧可增强JBMMSCs迁移能力(P=0.0040)。利用高通量测序技术,筛选出低氧条件下12个差异表达的lncRNAs,其中4个表达上调,8个表达下调。利用生物信息学分析对差异最为显著的lncRNA-4632427E13Rik的下游miRNAs和靶基因进行预测,初步形成lncRNA-miRNA-mRNA互作网络。通过GO和KEGG分析发现,低氧处理后可显著富集到14条信号通路,并且其中多条信号通路可能与调控干细胞增殖分化和可塑性维持相关。结论低氧可促进JBMMSCs的增殖、迁移等能力,预测lnc-4632427E13Rik可能在低氧调控JBMMSCs生物学性能过程中发挥作用。

饲料桑加工工艺、生物学活性及对动物生产应用的研究进展

桑叶作为一种重要的药食同源植物资源,具有无残留、无耐药性、毒副作用低和多功能等特点;富含蛋白质、碳水化合物、维生素和矿物质等营养成分,具有降血脂、降胆固醇、抗氧化等生物学功能,在动物生产中有广阔的应用前景。另外,桑叶的加工形式多样,不同的加工工艺使饲料桑产生不同的饲用效果。寻求更合理的加工工艺提高饲料桑作为饲料原料的利用效果是目前饲料桑资源开发利用的重要研究方向。文章综述了饲料桑的加工工艺、生物学活性及其在动物生产上的作用,并提出存在问题及开发应用前景,旨在为桑叶的作用机制及开发利用提供参考。