苦瓜枯萎病生防细菌ZB36的分离鉴定及其定殖特性研究

【目的】筛选并鉴定对苦瓜枯萎病具有稳定拮抗活性的生防菌株,明确其在苦瓜植株上的定殖特性。【方法】从山东省淄博市耕作地采集土壤样品,以苦瓜枯萎病菌为靶标,通过梯度稀释涂布平板法分离、纯化,获得1株具有稳定拮抗活性的纯培养细菌,命名为ZB36。根据菌株形态学特征、生理生化特性,以及16S rRNA基因和gyrA保守基因序列分析进行菌株鉴定。通过抗生素抗性标记法获得遗传特性和拮抗活性稳定的利福平标记菌株ZB36^(R),并对其在苦瓜上的定殖特性进行探究。【结果】菌株鉴定结果表明,ZB36为贝莱斯芽孢杆菌(Ba-cillus velezensis)。盆栽试验结果表明,ZB36不仅对苦瓜枯萎病具有显著的防治效果,防效高达74.76%,而且对苦瓜植株也具有显著促生作用,接种ZB36后苦瓜地上部鲜重和株高分别提高了28.65%和22.48%。定殖试验结果表明,ZB36在苦瓜根、茎和叶中均能定殖,且在接种后28 d仍能在这些组织中稳定定殖。【结论】贝莱斯芽孢杆菌ZB36不仅对苦瓜枯萎病具有良好的防治和促生效果,同时也具有较强的定殖能力,具备作为苦瓜枯萎病生防细菌资源开发利用的潜力。

菌毛在生防细菌定殖植物病原线虫中功能的研究进展

植物病原线虫对林业生产危害严重,缺乏有效的防控措施,已造成巨大的经济损失。生防细菌已被用于林木病原线虫的绿色防控,并已取得良好的防治效果。然而,生防细菌防控林木线虫病害的作用机制尚不明确,严重阻碍了防线虫微生物制剂的研发与高效应用。目前,已有大量的研究结果证实,生防细菌在线虫上的定殖能力与其杀线防病效果密切相关,且细菌菌毛在生防细菌于线虫宿主的定殖过程中发挥着重要功能。本文综述了革兰氏阴性细菌菌毛的种类以及菌毛在生防细菌定殖线虫中的功能,讨论了生防细菌菌毛对运动性、黏附性、生物膜形成等定殖相关生物学性状的影响,并对菌毛在细菌防控林木线虫病害中功能的研究与应用进行了展望。

抗烟草黑胫病菌生防细菌筛选、鉴定及体外拮抗机理初探

【目的】从云南烟草黑胫病高发区烟草根际土壤分离对烟草黑胫病菌具有高效拮抗作用的菌株,明确拮抗菌株的分类地位,并进行体外拮抗机理初探,为烟草黑胫病的防治提供生防资源和参考依据。【方法】采用平板对峙法从烟草根际土壤中分离对烟草黑胫病菌具有拮抗作用的菌株,通过生理生化特性及16S rDNA序列分析对具有较强拮抗活性的菌株进行鉴定,并测定生防细菌在体外对烟草疫霉的生物防治活性及作用方式。【结果】从采集的烟草根际土壤样品中共分离出6株对烟草疫霉具有拮抗活性的细菌菌株,其中菌株CD-1表现出最强的拮抗活性,其抑菌带宽度达10.12 mm;根据生理生化特性和16S rDNA序列分析,将该菌株鉴定为地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)。菌株CD-1具有广谱抗真菌特性,其胞内和胞外均存在抗真菌物质,其中使用二氯甲烷作为细菌发酵液萃取剂所提取的抗真菌物质的抑制效果最好;在pH 6~8、温度40~80℃时表现出相对稳定的抑制活性;菌株CD-1在NB培养基中培养的上清液提取物和细胞提取物对烟草疫霉均表现出较强的抑制活性,其抑制率分别达76.91%和67.23%;菌株CD-1分泌的抗真菌物质能破坏烟草疫霉的孢子质膜,抑制孢子萌发,其中以抗真菌粗提取物0.4 mg/mL处理烟草疫霉孢子6 h后的孢子失膜率达53.62%,孢子萌发被完全抑制,同时检测到有明显的离子和核酸渗漏。【结论】地衣芽孢杆菌CD-1产生的代谢产物抗菌谱广,抑菌活性强,具有开发成生防菌剂的潜力。

4株生防细菌对燕麦根腐病原菌抑菌特性研究

【目的】探究3株芽孢杆菌LSH11、R1、TZF-1和1株类芽孢杆菌CCM对燕麦根腐病病原菌的抑制效果及其抑菌特性。【方法】以燕麦根腐病病原菌麦根腐平脐孺孢菌(Bipolaris sorokiniana)和串珠赤霉菌(Gibberella moniliformis)为靶标菌,利用十字交叉法测定4株生防细菌的抑菌能力;采用透明圈法测定菌株产蛋白酶、纤维素酶及其淀粉酶的能力;采用结晶紫染色检测菌株形成生物膜的能力,利用分子生物学方法检测菌株是否具有合成相关脂肽类物质的基因。【结果】4株生防细菌对两种病原菌均具有较好的抑制效果,抑制率达53%以上,并导致真菌菌丝出现异常断裂、分枝、畸形、内含物质外泄的现象。4株菌均具备产蛋白酶、淀粉酶和纤维素酶的能力,并且均具有形成生物膜的能力。扩增脂肽物质相关基因(ituA、ituB、ituC、ituD、fenA、fenD、srfAA)发现3株芽孢杆菌均具有脂肽类物质合成的相关基因。【结论】4株生防细菌可分泌水解酶等抑菌类物质,具有良好的应用潜力,其中菌株R1和TZF-1综合生防特性较好,可用于后期生防菌肥的制作和燕麦根腐病的生物防治。

生防细菌LM-3的鉴定及其抗菌蛋白的研究

LM-3是一株来自土壤的广谱拮抗细菌.经革兰氏染色、形态特征、培养特征和生理生化特征等分析,LM-3菌株被鉴定为多粘类芽孢杆菌.采用盐析法提取获得了该菌株的抗菌粗蛋白,抑菌活性测定表明抗菌蛋白对辣椒炭疽病菌等多种植物病原真菌有强烈的抑制作用.抗菌蛋白对链霉蛋白酶E和胰蛋白酶不敏感,对蛋白酶K部分敏感;高温(120℃)处理20min后抗菌蛋白仍保留84.71%的活性;酸碱处理发现抗菌蛋白在pH 8.5时最为稳定,而在pH 2.5时80℃处理1h完全失活;25W紫外灯(2400lx)照射8h对其活性没有影响.发酵上清液经硫酸铵盐析、高温(100℃)处理和SDS-PAGE分析,该抗菌蛋白的分子量介于6kDa和14.2kDa之间.

烟草青枯病生防细菌的筛选与生防效果研究

从云南文山烟草种植田烟草植株根围土壤及植株根内生境中分离纯化获得195株细菌,以细菌菌株对青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)YN10的拮抗作用及其产蛋白酶、几丁质酶、纤维素酶和产嗜铁素的活性作为评价指标对其生防潜力进行赋值,对总赋值得分较高的84株菌株做了聚类分析,选择25株拮抗细菌进行了烟草青枯病温室防效试验。结果表明,聚类分析ARDRA图谱中位于不同组的25株拮抗细菌对烟草青枯病都有不同程度的防治效果,菌株K-1-8、R-3-16、R-3-18的温室防效分别为86.66%、84.94%、87.57%;拮抗细菌的生防效果与总赋值存在正相关,相关系数达0.86。

大豆根腐病生防细菌优势菌株的筛选、鉴定及生防效果验证

根腐病是影响大豆产量的主要病害之一,镰刀菌(Fusarium sp.)是引起我国大豆根腐病的主要病原菌。以致病尖孢镰刀菌为研究对象,通过平板对峙法从实验室保存的237株芽孢杆菌筛选到一株对该尖孢镰刀菌具有明显抑菌活性的芽孢杆菌8-32。对芽孢杆菌8-32经菌落、菌体形态,16S rRNA基因序列及生理生化性质鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。温室盆栽结果表明:该生防菌对大豆根腐病具有很好的防治效果,其病情指数减少32.08%。

番茄灰霉病生防细菌BAB-1的鉴定及发酵条件的优化

菌株BAB-1是从土壤中分离出的对番茄灰霉病具有较好防治效果的拮抗细菌。通过对该菌株进行形态特征观察、16SrDNA序列分析和API50CHB细菌鉴定试剂盒鉴定,确定菌株BAB-1为枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。采用16种培养基对菌株BAB-1进行了发酵培养,结果表明,3号培养基最适合该菌株菌体生长和抑菌物质的产生。进一步进行了培养条件的优化,发现在培养温度30℃,转速210rpm,初始pH7.24,接种量3%,装样量为70mL/250mL时菌体生产量最高,菌量达到1.63×109cfu/mL;而在培养温度30℃,转速210rpm,初始pH7.24,接种量2%,装样量为100mL/250mL时最适合抑菌物质的产生,对番茄灰霉病菌的抑菌圈直径达到1.81cm。

Biolog GEN Ⅲ微孔板在烟草青枯病、黑胫病生防细菌鉴定中的应用

采用Biolog全自动微生物鉴定系统的Biolog GEN III微孔板对24株烟草青枯、黑胫病未知生防细菌进行了鉴定。结果表明,鉴定准确率为100%,其中解淀粉芽孢杆菌12株(Bacillus amyloliquefaciens)、饲料类芽孢杆菌3株(Paenibacillus pabuli)、枯草芽孢杆菌2株(Bacillus subtilis)、萎缩芽孢杆菌2株(Bacillus atrophaeus)、地衣芽孢杆菌2株(Bacillus licheniformis)、短小芽孢杆菌1株(Bacillus pumilus)、亨氏普罗威登斯菌1株(Providencia heimbachae)。

产蛋白酶生防细菌的筛选及其对病原真菌的拮抗作用

从小麦根际土壤中分离到一株高产蛋白酶并对多种植物病原真菌具有拮抗作用的生防细菌T2。通过形态特征、生理生化及16S rDNA同源性序列分析,初步鉴定该菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。其发酵液经硫酸铵沉淀后的粗酶液可明显抑制棉花枯萎病菌菌丝生长及孢子萌发,在显微镜下观察到棉花枯萎病菌孢子萌发的芽管短、孢子膨大变形呈泡囊状,菌丝呈串珠状膨大、细胞破裂、细胞质外渗,表明该细菌菌株产生的胞外蛋白酶可能与病菌菌丝生长受抑制密切相关。

生防细菌与黄腐酸绿源宝促进棉花生长及防治黄萎病的效果

分析、测定内生细菌73 a、拮抗细菌JB52和化学药剂黄腐酸绿源宝单独使用、混合使用对棉苗生长、棉花产量的影响以及对棉花黄萎病的防治效果。结果表明:73 a和JB52都具有促进棉苗生长和提高棉花产量的作用,特别是73 a的作用最强,苗期株高可增长29.9%,鲜重增加45.2%,田间试验结果籽棉增产11.5%;73 a菌液灌根对棉花黄萎病的防治效果最好,达到50%;黄腐酸绿源宝对棉苗生长和棉花产量没有促进作用,但对防治棉花黄萎病有一定的效能;内生细菌73 a与拮抗细菌JB52或黄腐酸绿源宝混用都不如单独使用效果好。

生防细菌B579对土传病害的防治效果及促长作用

通过对生防细菌B579防治土传病害效果及促进黄瓜生长作用的研究,结果表明,生防细菌B579能够抑制立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)等5种天津地区常见土传病原菌,平皿抑菌率达到78%以上。盆栽试验表明,B579发酵液(10~8cuf/ml)浸泡黄瓜种子对黄瓜立枯病的防治效果达71.8%;提高黄瓜发芽率并且促进黄瓜生长,促长率达到30%以上。

生防细菌LM-3对水稻的促生性和诱导抗性研究

测定了LM-3菌株产抗菌蛋白对稻瘟病菌和稻纹枯病菌的平板抑制作用;研究了菌悬液浸种、浸芽和浇苗3种处理下对水稻的生长促进作用和对超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和过氧化物酶3种保护酶的诱导表达作用。结果表明:抗菌蛋白对稻瘟病菌和稻纹枯病菌的抑菌带分别为11.0和7.0 mm;以2×106cfu/mL的细胞浓度浇灌幼苗对水稻的生长促进作用最好,苗高等各项生理指标与对照及其它处理相比均达到显著水平;对3种保护酶均有良好的诱导表达作用。

松苗猝倒病不同病原物的致病性差异及其生防细菌的筛选

从3个湿地松苗圃土壤中分离出了66株松苗猝倒病的致病真菌,63个菌株为镰孢属真菌,2个为链格孢菌,1个为丝核菌属真菌。对66个真菌菌株进行松苗猝倒病的致病性测定表明:12个真菌菌株为无致病性或弱致病性真菌,17个镰孢属菌株为强致病性真菌,其余37个为中等程度致病性真菌。从湿地松幼苗根系分离到了细菌菌株320株,平皿拮抗测定表明其中的10个菌株对松苗猝倒病病原真菌有强拮抗作用,对松苗猝倒病有较大的生防潜力。16SrDNA序列分析表明这10个生防菌株的分类地位分别是:7株为洋葱伯克霍尔德菌,2株为枯草芽孢杆菌,1株为待定种。

番茄早疫病生防细菌B731的分离、鉴定及抑菌防病作用

利用对峙培养法,从分离自番茄根部土壤的细菌中筛选得1株对番茄早疫病菌具强拮抗活性的菌株B731。根据形态特征、生理生化反应及16S r DNA序列分析将其鉴定为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis。该菌在初始p H 7.0的NB培养液、装液量25 m L(250 m L锥形瓶)、28℃、120 r/min培养24~48 h抑菌能力最大,抑菌带宽达1.24 cm,且其在番茄植株及根际土壤中有很强的定殖能力。接种15 d后,在番茄植株叶片或果实表面,其定殖量可保持在2×102 cfu/cm2以上;而在番茄根际土壤中,其定殖量可达104 cfu/g。菌株B731的代谢产物能有效抑制番茄早疫病菌分生孢子的萌发和菌丝生长,抑制率分别高达89.72%和82.62%。喷施于叶面,具有很好的防病效果,预防处理防效可高达81.83%。

利用响应面分析方法优化生防细菌B579增殖培养基

采用响应面法（Response Surface Methodology,RSM）对影响生防细菌B579生长的黄豆饼粉、玉米粉、牛肉膏3个主要因子的最佳水平及其交互作用进行了研究与探讨。结果表明黄豆饼粉、玉米粉、牛肉膏分别在30.2、31和23.5g/L的条件下,可使B579获得最大菌体量。验证试验证实了该方程的预测值与实际值之间吻合较好。优化后的培养基使菌体量从起始LB培养基的8×10^9cfu/mL提高到8×10^11cfu/mL。

棉花黄萎病生防细菌NCD-2抑菌物质提取研究(英文)

应用微生物控制植物病害是非常有效的方法。枯草芽孢杆菌是最著名的产生抗生作用的拮抗细菌。本文所使用的防治棉花黄萎病生防细菌NCD2是枯草芽孢杆菌菌株,对16种植物病原真菌具有抑制作用,并且对棉花黄萎病具有较高的田间防病效果。通过发酵培养、有机溶剂萃取和盐析和透析提取了该菌株的胞外分泌产物,经抑菌作用测定证明该菌株分泌的有效抑菌成分为耐热蛋白。

水稻纹枯病菌生防细菌的筛选

从水稻种子和植株内分离到 5 0种内生和表生细菌菌株 ,通过与水稻纹枯病菌的对峙培养 ,得到了 S- 1 1 ,S-1 3,S- 1 4和 S- 1 8共 4种对水稻纹枯病菌菌丝生长有明显抑制作用的菌株 .将这 4种菌株的菌悬液浸种杂交水稻威优46 ,形成细菌化种苗 ,4叶期接种水稻纹枯病菌 ,表现出良好的抗病性 ;将它们的菌悬液以 3× 1 0 9/ m L 喷雾 ,发现菌株 S- 1 8对水稻纹枯病有一定的防治作用 。

植物土传病害生防细菌的筛选、鉴定及特性研究

为了防治植物土传病害,通过对峙培养法,从中药材根腐病重病田块的健康植株根际土样以及烟田土样中分离筛选拮抗菌株。共分离到10株细菌,它们对植物土传病菌具有一定的拮抗作用。其中,以DY-7菌株液体培养产生的抗菌物质对多种病原菌有较强的抑制作用,对何首乌根腐病菌的抑制率达96.14%,该抗菌物质具有较强的热稳定性、光稳定性和酸稳定性。通过对DY-7菌株培养物形态特征的观察和一系列的生理生化试验,初步鉴定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。