负压处理梯度电泳凝胶对PCR-DGGE实验结果的影响

目的比较负压处理前后变性梯度凝胶电泳(DGGE)胶凝固时间的变化,验证负压处理是否影响PCR-DGGE实验结果。方法使用两种不同引物扩增的PCR产物,在不同的负压处理前后,分别进行两种上述PCR产物的变性梯度凝胶电泳。结果 1)不同的负压处理对变性胶的凝固时间没有明显的影响;2)不同负压处理前后,对PCRDGGE的实验结果有明显的影响。结论负压处理对PCR-DGGE的实验结果有显著影响。

尿嘧啶DNA糖苷酶活性的电泳凝胶成像分析测定

尿嘧啶DNA糖苷酶(UNG)是防止PCR假阳性反应的工具酶,参照限制性DNA内切酶活力测定法的原理(以完全消化DNA带型的最高稀释度为一个活性单位)和应用凝胶成像分析技术,建立了UNG酶活性的非同位素检测新方法.反应体积为20μL,底物dU ung(dU DNA)为165μg,加UNG后在适当温度下反应10min,使底物去除尿嘧啶,其AP位点经碱降解.通过琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像分析,测定底物dU ung的残留量以测定UNG酶活性.酶活力以37℃每分钟降解1ngdU ung的酶量为一个单位,检测灵敏度为1ng,检测线性范围为0～165ng.该法简便易行、客观、精密,重复性好(CV<3%),结果显示直观.

一种适用于双向电泳凝胶的染色方法

一种适用于双向电泳凝胶的染色方法＊王台（中国科学院植物研究所，北京１０００９３）ＡＭＥＴＨＯＤＴＯＳＴＡＩＮＴＨＥＧＥＬＯＦＴＷＯ－ＤＩＭＥＮＳＩＯＮＡＬＧＥＬＥＬＥＣＴＲＯＰＨＯＲＥＳＩＳＷａｎｇＴａｉ（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｏｔａｎｙ，Ａｃａｄ...

聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳凝胶的干膜制作法

聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)操作简单,分辨率高,是生物化学技术和医学检验中常用的一种电泳方法。为便于电泳毕标本保存,一般将电泳毕凝胶制成干膜。具体制作方法文献中未见介绍。若制作不当,膜易发生皱缩、干裂。本人在工作中试验出一种凝胶干膜制作法,操作简单易掌握。制成的膜美观、光滑、平整。现介绍如下。

脉冲场凝胶电泳技术用于脑膜炎奈瑟菌的研究

目的利用脉冲场凝胶电泳技术分析流行性脑脊髓膜炎(简称"流脑")病例及其密切接触者分离出的脑膜炎奈瑟菌(Nm)的同源性以及不同病例分离出Nm的相关性。方法对6例疑似流脑病例的血液和脑脊液标本以及对密切接触者咽拭子进行脑膜炎奈瑟菌的培养分离,分离菌进行氧化酶试验、血清学分群鉴定、糖原利用试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)鉴定试验。结果 6例疑似流脑病例与其密切接触者共分离出21株菌,均为Nm C群,5株为AH 1型,14株为AH 2型,2株为AH 47型。结论流脑病例分离出的Nm与其密切接触者分离出的Nm完全同源,其中4例病例病原菌来自同一菌株。

双向凝胶电泳飞行时间质谱技术筛选食管癌相关蛋白

目的:建立分辨率高和重复性好的人食管癌组织及其癌旁正常上皮组织的双向凝胶电泳分析方法,并筛选食管癌相关蛋白质。方法:选取10例食管癌及其癌旁正常上皮组织,提取总蛋白质进行双向凝胶电泳分析,并采用Blue silver法染色。凝胶图像分析后,对差异蛋白质进行MALDI-TOF质谱分析。结果:在所鉴定的6个差异蛋白质在中,磷酸丙糖异构酶1、锰超氧化物歧化酶和热休克蛋白27在食管癌组织中表达上调,而鳞状细胞癌抗原1、细胞角蛋白4和膜联蛋白Ⅰ在食管癌中表达下调。结论:所鉴定的这些差异蛋白将为阐明食管癌发生机制提供线索,也为寻找食管癌潜在标志奠定理论基础。

脉冲场凝胶电泳检测电离辐射诱发DNA损伤及其修复

目的:评价脉冲场凝胶电泳(PFGE)法检测电离辐射诱发小鼠脾细胞DNA损伤及其修复的可行性。方法:采用PFGE法测定不同剂量γ射线诱发小鼠脾细胞DNA单、双链断裂及4Gyγ射线照射后不同时间脾细胞DNA单、双链断裂及其修复情况,并与未照射组(对照组)进行比较。结果:γ射线照射小鼠后,脾细胞DNA单、双链断裂数目随照射剂量的增加均呈增加趋势,单链断裂数目多于双链,1Gy所致DNA双链断裂及2Gy所致DNA单链断裂显著高于对照组(t=2.668,P<0.05;t=5.117,P<0.01)。以4Gy照射后经过不同时间修复,单、双链断裂均呈下降趋势,起初DNA链断裂的修复为快速修复,1h后大多数损伤已得到修复。单链断裂的修复速度高于双链,当修复时间超过2h后,单链断裂又呈现上升趋势。结论:本实验方法有可能成为一种快速、敏感地检测活体动物细胞DNA损伤及其修复的方法。

时相温度梯度凝胶电泳在线粒体基因突变检测中的应用

目的 评价时相温度梯度凝胶电泳技术 (TTGE)在肿瘤患者线粒体基因同质性和异质性突变检测中的应用。方法 对117例肿瘤组织和配对正常组织的全线粒体基因进行PCR扩增和TTGE突变筛选分析 ,对TTGE显示在肿瘤和配对正常组织中具有不同类型电泳带型变化的片段进行测序。结果 TTGE在总共 36 5 4片段中发现 16 0个体细胞性线粒体基因突变片段 ,经与直接测序结果比较 ,TTGE检测体细胞性突变的敏感性和特异性分别达 96 2 7%和 94 0 5 %。结论 TTGE是筛选线粒体基因体细胞性同质性突变和各种比例异质性突变的一种敏感方法。

双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法的比较

目的对3种常用的双向凝胶电泳脑脊液蛋白质提取方法进行比较,优选脑脊液蛋白质提取方法。方法收集新诊断尚未经药物治疗的16例帕金森病患者和7例头痛患者的脑脊液,分别以3种不同的方法提取脑脊液中的蛋白质。①透析法:用PluseOne微透析试剂盒处理脑脊液样品。②丙酮沉淀法:以冷丙酮溶液处理脑脊液样品,丙酮的终浓度为80%。③三氯醋酸(TCA)/丙酮沉淀法:以4倍体积的10%TCA/丙酮溶液处理脑脊液样品,TCA的终浓度为8%,丙酮的终浓度为80%。取沉淀物进行双向凝胶电泳,用银染法对电泳后的凝胶进行染色,比较经3种不同方法提取的脑脊液蛋白质的双向凝胶电泳图谱。结果经透析法处理样品的电泳图谱显示的蛋白点较清晰、较圆,条纹较少,但所见几乎都是高丰度蛋白,低丰度蛋白很难显现;经丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横竖条纹均较多,大部分蛋白堆积在凝胶的上部,下面的点也显示不清晰,蛋白点出现横向漂移;经TCA/丙酮沉淀法处理样品的电泳图谱显示横条纹相对较少,低丰度蛋白能较清晰显现,样品中所含高丰度蛋白明显少于以上两种方法处理的样品。结论以TCA/丙酮沉淀法提取蛋白质进行双向凝胶电泳时聚焦效果较好,而且同时去除了大部分白蛋白,使低丰度蛋白能很好地显现出来,优于丙酮沉淀法和透析法。

凝胶滞留电泳法测定大鼠肝组织细胞核NF-κB结合活性

应用大鼠肝组织细胞核蛋白提取物与特异的NF -κB基因探针序列结合 ,经凝胶滞留电泳分析其结合能力。方法操作简便易行、重复性好。该方法的建立 ,为进一步研究核转录因子活性及其调控基因的表达 。

基于差异凝胶双向电泳技术的冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者血浆差异蛋白特征研究

目的通过对冠心病心绞痛血瘀证患者和健康人血浆的差异凝胶电泳图谱检测,寻找其血浆差异蛋白,探索其蛋白质组学特点。方法采用差异凝胶双向电泳和串联质谱对12例冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证患者、12例痰瘀互阻证患者和12名健康人去高丰度蛋白血浆进行比较蛋白质组学研究,寻找心绞痛血瘀证血浆差异蛋白。结果初步发现在冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证和痰瘀互阻证两组患者表达均变化的蛋白有Haptoglobin β chain、DBP、HBB、HBA、Transthyretin、ApoA-Ⅰ、ApoA-Ⅳ。仅在冠心病不稳定性心绞痛痰瘀互阻证表达变化的蛋白有Haptoglobin α1 chain、α-1-acid glycoprotein、ApoC-Ⅲ、ApoA-Ⅱ、ApoC-Ⅱ、ApoJ、Haptoglobin α 2 chain。仅在冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证表达变化的蛋白α1-antitryp-sin、Fibrinogen γ chain、Fibrin β。结论冠心病不稳定性心绞痛气虚血瘀证与痰瘀互阻证在蛋白质层面的部分共性特征表现为炎症反应、代谢紊乱(包括血脂、血氧等)。

兔缺血再灌注心肌的蛋白质组学双向凝胶电泳分析

【目的】研究缺血再灌注心肌的相关蛋白变化。【方法】将8只新西兰大白兔随机分为2组(n=4):正常心肌对照组(C组)和缺血再灌注心肌组(R组)。C组正常灌注160 min,不阻断左冠状动脉;R组左冠状动脉前降支阻断40 min,开放再灌注120 min。分别取各组左心室心肌进行二维凝胶电泳,利用ImageMaster 2D软件分析实验结果。【结果】R组和C组对比,有17个蛋白表达发生了显著变化,其中表达增强的有7个蛋白,表达降低的有4个蛋白,表达不匹配(仅在R组出现)的有6个蛋白点。【结论】这些差异表达的蛋白可能在心肌缺血再灌注损伤的保护中发挥作用。

脉冲场凝胶电泳在沙门菌食物中毒溯源中的应用研究

目的用脉冲场凝胶电泳(PFGE)方法,追踪某次沙门菌食物中毒的来源,确定中毒食品,快速控制传染源。方法对食物中毒中分离的肠炎沙门菌用XbaI酶切总DNA,用脉冲场凝胶电泳(PFGE)法进行分子分型,用BioNumerics软件对PFGE分型图谱进行电子化数据分析,绘出聚类分析图。结果脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型方法对患者样本分离的242株肠炎沙门菌进行分子分型,型别基本一致,表明是同一批食物中毒;从三文治等蛋糕制品中分离的9株菌株与患者分离株图谱完全一致,表明此次食物中毒的源头为某蛋糕厂生产的三文治等食品。结论脉冲场凝胶电泳技术适用于菌株的同源性的分析和传染源的追踪。

非浓缩尿SDS-琼脂糖凝胶蛋白电泳的临床应用

目的 探讨非浓缩尿蛋白电泳对早期肾损伤诊断的应用价值。方法 对 5 5例患者尿液标本分别进行尿蛋白半定量及尿蛋白 (U Pr)、尿微量白蛋白 (mAlb)、N 乙酰 β D 氨基葡萄糖苷酶 (NAG) ,β D 半乳糖苷酶(GAL)定量测定 ,与非浓缩尿的十二烷基磺酸钠 琼脂糖凝胶蛋白电泳 (SDS AGE)结果进行分析比较。结果 与SDS AGE结果相比较 ,尿常规及全自动生化仪定量测定有关指标的灵敏度相对较低。结论 SDS AGE检测灵敏度高 ,方法简便 ,省时 ,扫描后可得半定量结果 ,且结果较直观 ,对早期肾损伤诊断有较大的应用价值。

合欢皮与山合欢皮的凝胶蛋白电泳鉴别

目的 :提供合欢皮与山合欢皮的一种新的鉴别方法。方法 :采用凝胶蛋白电泳技术对合欢皮与山合欢皮进行分析。结果 :合欢皮与山合欢皮具有各自的鉴别谱带 ,而且在谱带的级别、分布区域及数量上均有明显的区别。结论

EHF 血清糖蛋白凝胶盘状电泳用 Schiff 试剂染色法的探讨

ＥＨＦ血清糖蛋白凝胶盘状电泳用Ｓｃｈｉｆ试剂染色法的探讨晏纪成（川北医学院生化教研室）糖蛋白是一类含糖的结合蛋白质。功能十分广泛，如细胞膜糖蛋白，涉及到细胞膜的许多受体功能，还与细胞分裂，细胞粘着等有关［１－２］。目前，血清糖蛋白染色技术方法种类颇多...

用梯度聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳法对雌、雄梭鱼血清蛋白的研究

实验采用梯度和单一浓度聚丙烯酰胺凝胶垂直板型电泳的方法,对梭鱼血清蛋白进行分析,其中梯度浓度(4.75％+7％)凝胶分离梭鱼血清蛋白得30条区带,比单一浓度(4.75％、7％、10％)凝胶分离的效果好,区带清晰,带数明显增加。同时发现0号、2号、5号、8号和12号雌梭鱼血清蛋白电泳图型中发现有一明显深带,此深带在雄鱼的血清蛋白电泳图型中则没有发现。在数次的重复实验中,结果完全一致。作者认为此深带可能与雌性特异血浆蛋白有关。

琼脂糖凝胶区带电泳应用于蛋白尿的分析

目的 :运用琼脂糖凝胶区带电泳进行蛋白尿的分析。方法 :采用血清琼脂糖凝胶区带电泳技术分析未经处理和处理后的蛋白尿样本。结果 :通过对 95例临床尿蛋白阳性标本进行琼脂糖凝胶区带电泳 ,可粗略区分出溢出性蛋白尿 2例、选择性蛋白尿 30例、非选择性蛋白尿 6 3例 ,5例健康组未检出蛋白峰。结论 :该法简便快速 ,在蛋白浓度较高时有很好的重复性 ,可用于尿蛋白的分析 。