单抗药物还原毛细管电泳法方法学验证研究

目的对还原十二烷基硫酸钠毛细管电泳法(reduced capillary electrophoresis-sodium dodecyl sulfate,rCE-SDS)用于单抗药物的纯度检测进行方法学验证,为业界此类质量控制方法的方法学验证提供参考。方法按照2020版《中华人民共和国药典》通则<3127>的方法检测样品,对该方法的专属性、线性、准确度、精密度、范围、定量限、耐用性进行验证。结果本方法专属性较好;线性拟合结果良好(均R^(2)>0.99)。各分析用样品主峰的准确性结果满足98%~102%,总杂质和非糖基化重链(non-glycosylated heavy chain,NGHC)的准确性结果均满足70%~130%;重复性和中间精密度的RSD均≤15%;主峰的范围为≥92.4%,总杂质范围为0.36%~7.6%,NGHC的范围为0.12%~3.8%;总杂质和NGHC的定量限分别为0.36%和0.12%。结论本方法验证各项指标均符合预设可接受标准,且该研究可以为此类方法学验证的科学性和合理性设计提供参考。

高效毛细管电泳法在生物技术产品分析研究中的应用进展

本文综述了高效毛细管电泳法在生物技术产品分析研究中的应用，并概述了毛细管等速电泳法，双向毛细管等速电泳法及毛细管等速电泳法与毛细管自由溶液区带电泳法联用技术等的进展。

毛细管区带电泳法测定儿童药品中6种着色剂

建立羟丙基-β-环糊精修饰的毛细管区带电泳法测定儿童药品中6种着色剂的含量。选择未涂层石英毛细管柱(68.5 cm×75μm),分离缓冲液为10 mmol/L硼酸盐缓冲液(含20 mmol/L的聚乙二醇4000和20 mmol/L的羟丙基-β-环糊精,pH 8.0),检测波长为210 nm,电泳电压为20 kV,进样压力为5 kPa,进样时间为5 s。酸性橙7、诱惑红、酸性蓝74、苋菜红、柠檬黄、丽春红4R分离效果良好,其质量浓度在0.3~3.0 mg/L范围内与对应的电泳峰面积线性关系良好,线性相关系数均不小于0.9990,检出限为0.001~0.004 mg/L,定量限为0.003~0.013 mg/L,样品加标平均回收率为94.0%~99.9%,测定结果的相对标准偏差为0.7%~3.2%(n=6)。该方法操作简单、分析速度快、成本低、有实际应用价值,适用于儿童药品多种着色剂的同时分离和检测。

电泳法在食品过敏原检测中的应用

本文简要介绍了食品过敏原的检测特点和难点,比较了目前常用的聚合酶链式反应法、环介导等温扩增法、酶联免疫法、液相色谱法和液相色谱质谱法等检测方法的优劣势。主要介绍了电泳技术的特点,总结了经典电泳技术在食品过敏原分析上的应用现状。详细介绍了近年来毛细管电泳技术在食品过敏原检测研究方面取得的进展,列举了区带毛细管电泳法、亲和毛细管电泳法、凝胶毛细管电泳法、动态涂层毛细管电泳法和芯片毛细管电泳法在致敏蛋白分析方面的应用,并对电泳法在食品过敏原分析中的发展趋势进行了展望。

全柱成像等电聚焦毛细管电泳法对双特异性Fc融合蛋白的电荷异质性分析

建立全柱成像等电聚焦毛细管电泳(WCID-CIEF)分析双特异性Fc融合蛋白电荷异质性方法。方法 通过非还原毛细管电泳法观察酶处理前后峰型的变化,初步确认了该Fc融合蛋白电荷异质性唾液酸相关;结合唾液酸酶酶切和方法优化手段,建立了此融合蛋白的WCID-CIEF分析平台;通过液相质谱法(LC-MS)鉴定了唾液酸相关N-糖构型;通过液相荧光法(LC-FLR)测定了唾液酸的含量。结果 经唾液酸酶酶切和方法优化后,此方法在2.5~7.5 mgmL-1浓度范围内线性良好,R2=0.998,回收率在96.3%~104.6%之间,准确性、专属性和耐用性均满足要求。结论 结合酶处理和方法优化手段,WCID-CIEF可较好地分析融合蛋白的电荷异质性,提供了一种简单、有效的融合蛋白质控手段,并可应用于产品放行及稳定性监测。

火箭免疫电泳法测定人血浆纤溶酶原含量及其临床应用

血浆纤溶酶原(Plg)是体内纤溶系统的基质,正确定量测定Plg含量,有助于判断体内的纤溶状态。目前国内外定量测定Plg含量的方法大都是放射免疫法、ELISA法、单向免疫扩散法等。本文采用火箭免疫电泳法测定Plg含量,效果满意,现报告如下。

毛细管电泳法检测化妆品中对羟基苯甲酸酯类防腐剂

采用毛细管区带电泳法同时测定化妆品中4种对羟基苯甲酸酯类防腐剂。色谱条件是:75 μm× 57 cm(有效长度50 cm)毛细管,电解质为25 mmol/L硼砂(pH 10.0)缓冲溶液,分离电压20kV,温度25℃,0.5 psi进样5s,检测波长200 nm。对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯在10 min内基线分离,10～500 μg/mL范围内线性关系良好(r>0.9949),检出限为0.60～1.20 μg/mL,样品加标回收率为75.5%～112.0%。

高效毛细管电泳法在临床药学中的应用进展

高效毛细管电泳法(High peformancecapilary electrophoresis,HPCE)是八十年代后期才发展起来的新的色谱分析有关技术。近年来,随着生物药物分析的发展,使高效毛细管电泳法在临床药学中的应用更有了新的进展。

中药菟丝子的高效毛细管电泳法鉴别

提取菟丝子种子植物蛋白用高效毛细管电泳法进行生药鉴定。实验表明，同属不同种菟丝子的碱溶性或酸溶性蛋白在成分和含量上均存在显著差异。根据其种子植物蛋白的电泳谱图，可有效地鉴别菟丝子的来源。运用此法对１３个生药样品进行了鉴定。

毛细管电泳法测定青菜中敌百虫的残留量

建立了一种测定青菜中有机磷农药敌百虫的方法,样品以二氯甲烷提取,活性炭脱叶绿素,毛细管电泳法检测,最低检出限为2×10-6mol L,敌百虫浓度在5×10-5～2×10-6mol L之间,呈现良好的线性关系,r=0.9914,样品加标回收率为90%～102%。

高效毛细管电泳法同时测定红花中腺苷、芦丁和槲皮素的含量

目的 用高效毛细管电泳法对红花中的有效成分腺苷、槲皮素和芦丁同时进行含量测定。方法 采用熔融石英毛细管柱 (66 5cm× 5 0 μmID ,有效长度 5 8cm)作为分离通道 ;以 5 0mmol·L- 1 硼砂其中含 18%甲醇的溶液 (pH9 7)为运行缓冲液 ;运行电压 :2 4kV ;毛细管柱温 :2 0℃ ;检测波长 :2 10nm。结果 以利福平为内标 ,腺苷、芦丁和槲皮素分别在 10～ 160mg·L- 1 ,10 0～ 2 0 0 0mg·L- 1 和 10 0～ 160 0mg·L- 1 线性关系良好 (r>0 998) ;平均回收率分别为98 5 %～ 10 0 5 % ,96 9%～ 99 5 %和 99 1%～ 99 5 % ;RSD分别为 6 5 % ,5 2 %和 5 6% (n =5 )。结论 此法操作简便快速 ,回收率及重现性好 ,可作为红花质量控制的方法。

毛细管区带电泳法测定阿托伐他汀钙片的含量及降解产物

目的 制定阿托伐他汀钙的含量 ,并对其中降解产物进行控制。方法 采用毛细管区带电泳法 (CZE)以 0 .0 3mol·L- 1的磷酸盐缓冲液 (pH8.5)做运行液 ,运行电压 :1 6kV(运行电流 :90～ 1 0 0 μA) ;进样时间 :1 0s;检测波长 2 1 4nm ;并以磺胺醋酰钠为内标。结果 阿托伐他汀钙在 0 .0 5～ 0 .50mg·mL- 1 的范围内呈良好的线性关系 ,相关系数为r=0 .9999。平均回收率为 1 0 0 .63 % (n =5) ,RSD为 0 .77%。阿托伐他汀钙与降解产物分离良好。结论 本方法简便、快速。

变性梯度凝胶电泳法研究我国不同土壤氨氧化细菌群落组成及活性

实验选用了我国3种不同土壤研究土壤硝化活性、硝化细菌数量,并使用变性梯度凝胶电泳(DGGE)的方法研究了不同土壤中氨氧化细菌(AOB)区系变化。通过28d的土壤培养实验研究发现,潮土具有最强的硝化势,几乎100%的铵态氮转化为硝态氮;而红壤中的硝化势最弱,只有4.9%的铵态氮转化为硝态氮。对这3种土壤硝化细菌进行计数发现,3种土壤氨氧化菌数量差异显著,而3种土壤亚硝酸氧化菌(NOB)处于一个数量级。采用氨氧化菌功能基因amoA(氨单加氧酶ammoniamonooxygenase)特异PCR结合DGGE的方法对土壤氨氧化菌区系进行分析。红壤有4个氨氧化菌种属,与潮土和黄泥土没有共同的氨氧化菌种属。4个种属中两个是与潮土和黄泥土亲源性比较远的,特有的氨氧化菌种属,这两个种属与已知的Nitrosospira属的cluster3bz97838和Nitrosospira属的cluster3aAF353263亲源性比较近。潮土有5个氨氧化菌种属,潮土与黄泥土有两个共同的氨氧化菌种属,这两个种属中的一个是潮土和黄泥土特有的,与其他氨氧化菌种属亲源性比较远的氨氧化菌种属,这个种属与已知的Nitrosospira属的cluster3bZ97849亲源性比较近。黄泥土有4个氨氧化菌种属,除了与潮土共有的一个种属是两种土壤特有的氨氧化菌种属外,黄泥土还有一个与其他氨氧化菌种属亲源性比较远的,黄泥土特有的种属,与Nitrosospira属的cluster3aAF353263亲源性很近。3种土壤中分离到的硝化细菌表现出不同的硝化能力。实验结果表明,以amoA基因为目标的PCR-DGGE是比以16SrDNA为目标的PCR-DGGE更有效的研究氨氧化菌种群的方法;3种土壤的氨氧化菌种群差异显著,尤其是红壤的氨氧化菌种群与另外两种土壤差异明显,这种差异可能与红壤的低pH条件对氨氧化菌种群的长期选择有关;3种土壤中的硝化活性与土壤中的硝化细菌数量没有显著相关,可能由于3种土壤差异显著的土壤环境对硝化活性的影响造成。因此在对不同土壤硝化细菌进行研究时不仅需要对硝化细菌数量进行研究,还需要研究不同土壤中硝化细菌的种属及不同土壤环境条件对硝化细菌硝化活性的影响。

毛细管电泳法检测美普他酚手性拆分中的光学纯度

目的 建立测定二对甲苯甲酰酒石酸美普他酚对映体的毛细管区带电泳法,并检测其光学纯度。方法 采用72 cm×50 μm未涂层石英毛细管,30 mmol／L磷酸缓冲液(pH 8.05,内含0.5％TM-β-CD,乙腈12％),运 行电压20 kV,毛细管柱温20℃,压力进样3 kPa×3 s,检测波长200 nm。结果 在选定的实验条件下二对甲苯 甲酰酒石酸美普他酚对映体达到基线分离。两对映体在0.10-0.80 mg/mL的浓度范围内,浓度与峰面积的响 应均呈良好的线性关系,相关系数分别为:0.999 6和0.999 8。迁移时间的RSD在3％以内,峰面积的RSD在 10％以内,左旋体的加样回收率为100.26％(n=6),最低检测浓度为0.02 mg／mL。测定3批样品的光学纯度 分别为84.10％、92.54％、≥99.60％。结论 本法适用于实验室中二对甲苯甲酰酒石酸美普他酚光学纯度的常 规测定。

高效毛细管电泳法同时测定减肥类功能食品中7种违禁成分

建立了同时测定减肥类功能食品中违禁成分芬氟拉明、伪麻黄碱、去甲伪麻黄碱、安非拉酮、两布曲明、两地那非和十的宁的高效毛细管电泳分析方法。以20mmol／L硼砂10mmol／LSDS-5％乙腈溶液（pH9．0）为运行缓冲液，在25℃，17kV条件下测定，检测波长为195nm。各待测物线性范围上限均为100mg／L，线性相关系数均大于0．998，相对标准偏差为4．5％～7．9％（n=7）；平均加标回收率为79．6％～112．0％；检出限（S／N3）为0．16～0．65mg／L。本方法简便快速、灵敏准确、分析成本低，已成功应用于功能食品中上述减肥类违禁添加成分的测定。

十大功劳属部分植物茎中生物碱的高效毛细管电泳法测定

目的 :对十大功劳属植物中 3种生物碱的含量进行测定 ,为其内在质量的评价提供科学依据。方法 :运用毛细管区带电泳 (CZE)模式 ,以马钱子碱为内标化合物 ,测定了小檗碱、巴马亭和药根碱的含量。背景缓冲溶液为0 1mol·L-1磷酸缓冲液 (pH 7 0 )与甲醇 ( 2∶1)的混合体系。线性范围 :盐酸小檗碱为 4 9～ 4 98 6μg·mL-1(γ =0 9990 ) ;盐酸巴马亭为 5 0～ 5 0 4 9μg·mL-1(γ =0 9996) ;盐酸药根碱为 5 1～ 5 0 5 8μg·mL-1(γ =0 9984 )。回收率 :盐酸小檗碱为 96 0 0 %～ 10 1 66% ;盐酸巴马亭为 10 0 15 %～ 10 2 97% ;盐酸药根碱为 96 68%～ 10 2 4 4%。结果 :不同品种、不同产地、不同采集时间的植物中的生物碱含量均有较大差别。结论 :高效毛细管电泳法是中草药质量控制的一种简便、快速、有效的方法。十大功劳属多种植物生物碱含量较高 。

毛细管电泳法测定双氢青蒿素的含量

使用自行设计的毛细管电泳柱端安培检测系统,在乙醇为有机添加剂的条件测定了双氢青蒿素。研 究了工作电极、缓冲溶液浓度及其pH、有机溶剂的选择及其含量、检测电位和分离高压对测定的影响。结果 表明:选用Ag工作电极,检测电位为-0.6V,在20mmol/L硼砂,pH为9的运行介质的优化条件下,双氢青蒿 素在4min左右出峰,在1～200mg/L范围内,峰高与浓度呈良好的线性关系,检出限为0.05mg/L。

高效毛细管电泳法测定石榴皮中鞣花酸的含量

目的:建立以高效毛细管电泳法测定石榴皮提取物中鞣花酸含量的方法.方法:毛细管柱为未涂层毛细管,缓冲液为30mmol/L氨基丁三醇-30mmol/L磷酸二氢钾(20:9),分离电压为20kV,检测波长为254nm,柱温为25℃,进样条件为25mbar、5.0s.结果:鞣花酸检测浓度在0.0 398～0.3 184mg/ml范围内与峰面积积分值线性关系良好(r=0.9 993);平均加样回收率为97.42%(RSD=1.84%).结论:本方法准确、可靠,可用于石榴皮药材的质量控制.

分子烙印固相萃取-毛细管电泳法分析大米中神经性毒剂降解产物

采用自制分子烙印聚合物固相萃取柱来分离净化实际样品大米中的神经性毒剂降解产物，并用毛细管电泳法进行检测，方法简便，准确、灵敏度高。在０．２～５．０μｇ／ｇ浓度范围内，大米样品中５种神经性毒剂降解产物的标准回归曲线线性关系良好，检出限为０．０５ μｇ／ｇ，方法的ＲＳＤ小于６．２０％。

榧子蛋白高效毛细管电泳法鉴别

对国产榧属植物种子进行蛋白电泳鉴别。采用高效毛细管电泳法对榧属植物种子蛋白进行分析。榧属植物种子蛋白高效毛细管电泳谱图有明显的种间差异。高效毛细管电泳可作为中药榧子的鉴别方法。