一种改进的核转录因子的电泳迁移率改变分析法

目的 建立一种简便、实用、成功率高的电泳迁移率改变分析法。方法 参照国内外介绍的实验方法并加以改进 ,并结合本室的实际情况。主要步骤为核蛋白快速抽提与定量 ,探针标记与纯化 ,DNA与蛋白质的结合 ,电泳及显影。结果 此方法操作时间较短 ,简化了核蛋白抽提 ,且省去了繁锁的干胶步骤 ,图像清晰 ,有可比性及重复性。结论 此方法本室运用过多次 ,稳定可靠 ,值得应用与推广。

脱氧核糖核酸分子在高分子溶液3个不同浓度区间的电泳迁移行为

借鉴高分子亚浓溶液线团收缩理论 ,研究了脱氧核糖核酸 (DNA)片段在高分子溶液全浓度区间的电泳迁移行为。结果表明 ,在高分子稀溶液、亚浓溶液和浓溶液 3个不同浓度区间 ,DNA的电泳迁移行为各不同 ,DNA片段的分离在这 3个浓度区间也存在差异。

红外荧光成像技术分析DNA-蛋白复合物电泳迁移率的变动

目的通过红外荧光技术研究糖皮质激素诱导亮氨酸拉链蛋白(GILZ)与过氧化物酶体增殖物活化受体γ2(PPARγ2)启动子寡核苷酸的结合,了解一种非放射性研究电泳迁移率变动分析的新方法。方法原核表达制备GILZ蛋白,与红外荧光染料IRDye800标记的PPARγ2启动子寡核苷酸结合,丙烯酰胺非变性胶电泳分离,Odyssey红外荧光成像系统扫描分析。结果一条DNA-蛋白结合复合物图像清晰直观,信号强度随着蛋白量的增加而增加。结论红外荧光技术可用于DNA-蛋白复合物电泳迁移率变动的分析,具有灵敏度高、操作方便的优点。

利用电泳迁移运动抑制膜面微粒沉积的研究

本文介绍了附加直流电场的十字流膜过滤，并着重探讨了附加电场使料浆中悬浮微粒产生电泳迁移的作用，作者还介绍了间断加电的研究，根据试验结果说明间断加电可望获得较好的节能效果。

毛细管区带电泳分离山酮类化合物的结构电泳迁移定量关系研究

研究了毛细管区带电泳分离中以β 环糊精(β CD)和磺酸化β CD为添加剂时10个山酮类化合物电泳行为的差异,并用毛细管电泳求得β CD和磺酸化β CD与山酮类化合物间的结合常数。在分子动力学基础上,运用计算机技术模拟了β CD、磺酸化β CD与山酮类化合物的包合过程,从而求得主客体间的相互作用能。同时,运用量子化学计算了山酮分子的物化参数,并选择相互作用能(INE)、疏水常数(logP;其中P为正辛醇 水分配系数)和山酮分子总能量(TE)作为分析结构 电泳迁移定量关系的物化参数,用以研究分离机制及在毛细管区带电泳分离中山酮类化合物与β CD和磺酸化β CD间的分子识别过程。对山酮类化合物以β CD和磺酸化β CD为添加剂时的毛细管区带电泳行为的差异做出了合理解释。

核因子-κB电泳迁移率变动分析方法的改进

目的:建立一种快速、简化的电泳迁移率变动分析(EMSA)方法检测DNA结合蛋白核因子-κB(NF-κB)。方法:NF-κB的提取和浓度测定,32P标记探针,探针与核蛋白结合,电泳和放射自显影。结果:该法可获得背景干净、条带清晰整齐的图片,能直接目测NF-κB的活性。结论:改良的EMSA用于检测NF-κB更简便、实用、敏感性高,值得推广。

100与123bp阶梯DNA电泳迁移距离多种曲线模型回归分析研究

本文应用多种曲线模型回归分析100bpDNA Ladder和123 bp DNALadder(线性双链)头十条条带bp数与其在琼脂糖凝胶中的电泳迁移距离的相互关系。结果发现,logistic方程及其改良式在拟合估计值、拟合度方面优于对数、多项式方程,且无极值。因此,作者认为logistic方程可能是线性双链DNA分子量(bp数)与其电泳迁移距离新的表达式。

电泳迁移率法检测中药复方对白血病CD34^+CD38^-细胞核因子-κB的影响

目的 观察中药复方对急性髓系白血病(AML)CD34+CD38-干细胞群核因子(NF)-κB的影响。方法 将符合纳入标准的30例AML患者骨髓提取单个核细胞,并进行免疫磁珠分选分离人白血病CD34+CD38-干细胞群,每一例标本分为中药原方组、扶正组、祛邪组、对照组。采用电泳迁移率法(EMSA)检测中药复方对NF-κB活化的影响。结果 NF-κB活化比较分析:中药原方组抑制NF-κB活化最明显,中药原方组与扶正组、祛邪组比较差异有统计学意义(P<0.05),扶正组与祛邪组比较差异无统计学意义(P>0.05),对照组NF-κB活化最明显。结论 中药复方可以抑制NF-κB活化,在促进细胞凋亡的层次上,此实验为中医药靶向治疗AML提供了平台。

人工神经网络预测7种药物的毛细管电泳迁移时间

目的建立毛细管电泳迁移时间的人工神经网络的预测方法。方法运用人工神经网络 ,通过毛细管区带电泳 (CZE)的实验电压 (V)和缓冲溶液的离子强度 (I)对维生素B1等 7种药物的迁移时间 (tmig)进行预测 ,网络采用三层结构即输入层 隐含层 输出层 ( 2 4 1型 ) ,权值修正采用误差反向传播算法 ,每种药物的样本数为 5 0 ,以“留一法”预测其迁移时间 ,网络学习次数为 1 0 0 0 0。结果当电压在 6～ 2 6kV以及硼砂溶液的离子强度为 1 0～ 1 0 0mmol/L时 ,网络预测的相对误差绝对值小于 1 2 %的概率占 82 3 %。

近红外荧光电泳迁移率变动分析的实验方法

目的:分析最新近红外荧光标记(NIRF)电泳迁移率变动分析(EMSA)技术的优缺点,在此基础上对NIRF-EMSA技术进行实验方法的改进。方法:设计了3种NIRF-EMSA实验方法,即扫胶法、染胶法和扫膜法,通过实验比较了3种方法的实验程序复杂性、优缺点及检测成本,并将3种方法与化学发光EMSA进行了比较。结果:采用3种方法都可以取得良好的EMSA检测效果,但比较而言,间接扫膜法不仅效果良好,而且实验成本最低。结论:间接扫膜法是值得推广应用的最经济便捷的基于Odyssey红外荧光成像系统的近红外荧光EMSA实验方法。

两种化学发光电泳迁移率变动分析技术的比较

采用DIG及Biotin标记寡核苷酸,研究了两种非放射性标记电泳迁移率变动分析的实验方法,即化学发光电泳迁移率变动分析实验(chemi-EMSA)的可靠性,并对两种标记体系的化学发光电泳迁移率变动分析实验进行了比较,以确立一种最佳的化学发光电泳迁移率变动分析实验技术。结果表明:通过对转录因子蛋白NF-κB的实验研究,两种标记体系均可以获得良好的电泳迁移率变动分析检测效果,其中“Biotin-streptavidin-HRP-ECL化学发光电泳迁移率变动分析”实验体系更好。

介电环境对DNA电泳迁移率及凝聚构象的影响

DNA在四价平衡离子精胺溶液中,会发生电荷逆转,这个现象无法用经典的Poisson-Boltzman理论解释,一般认为与离子-离子关联、介电环境等有关。当改变溶液的介电常数,DNA-精胺复合物呈现不同的逆转及凝聚状态。本文首先利用动态光散射研究不同介电环境(溶液中加入乙醇、甘氨酸及6-氨基己酸)下DNA-精胺的电泳迁移率的变化,发现乙醇会有利于DNA发生电荷逆转,在0.5 mmol·L-1的精胺浓度下,DNA的电泳迁移率为-0.6×10-4cm2V-1S-1。当加入90%的乙醇后,DNA的电泳迁移率变为0.11×10-4cm2V-1S-1,然而向精胺-DNA溶液中加入甘氨酸,6-氨基己酸等两性物质之后,DNA的电泳迁移率随着两性物质浓度的增加而向负向移动。在此基础上,作者用原子力显微镜观察精胺-DNA复合物在不同浓度乙醇及两性物质下的表面形貌变化,发现随着乙醇浓度的增加,精胺-DNA复合物的凝聚形态会更加紧凑;而随着两性离子浓度的增加,精胺-DNA复合物的凝聚形态变得越来越松散,说明介电环境在精胺导致DNA构象变化及电荷逆转中起着一定的作用。研究不同介电环境下DNA的电泳迁移率及凝聚构象的影响,能对认识DNA凝聚的动力学特性提供帮助,而且有助于获得理想的非病毒载体,促进基因治疗的发展。

糖化低密度脂蛋白电泳迁移率测定及其在糖尿病诊断中的应用

本文提出用R_f 值来表示低密度脂蛋白电泳迁移率(LDL_(Rf)).本法具有简单、快速,重复性好及可比性强的优点。批内CV 为1.93%,批间CV 为3.68%.34例正常成人LD_(Rf)为0.528±0.058((?)±SD),10例未控制好的糖尿病患者为0.66±0.040,二者有高度显著性差异(t=6.5347,P<0.01).LDL_(Rf)的测定对糖尿病的诊断、疗效判断及非酶促糖化作用的有关研究有意义,本法为此提供常规的定量手段.

乳及乳制品中乳铁蛋白含量的电泳迁移率检测

凝胶电泳迁移率(EMSA)是研究蛋白质和DNA分子相互作用的经典分子生物学方法。本研究根据乳铁蛋白(Lactoferrin,Lf)和DNA分子的特异性结合,基于Lf-DNA复合物和DNA分子迁移率差异,建立了一种聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测乳铁蛋白的方法。实验中以FAM荧光基团标记DNA分子,根据凝胶成像图中Lf-DNA复合物荧光条带的存在与否、荧光条带灰度值的大小,来判断样品中乳铁蛋白是否存在、含量多少,从而实现乳铁蛋白的定性与定量检测。结果表明,该方法具有良好的特异性及准确性,经过简单稀释后便可直接应用于乳及乳制品中乳铁蛋白的准确定量检测。

骆驼乳及其制品中非热变性乳铁蛋白含量的快速电泳迁移检测

骆驼乳具有丰富的营养价值和保健功能,但其活性蛋白—乳铁蛋白对热处理加工工艺敏感,因此骆驼乳及其制品中非热变性乳铁蛋白含量的快速测定对其生产工艺控制和营养价值评估至关重要。文章研究了乳铁蛋白热变性对DNA结合的影响,发现特异性的DNA序列仅能够结合非热变性驼乳铁蛋白而不结合热变性乳铁蛋白,据此建立了骆驼源乳铁蛋白的快速电泳迁移检测方法,仅需5 min即可完成一个样品检测,检出限为5.45μg/mL。该方法无需肝素亲和柱富集提取等复杂的样品前处理步骤,即可直接检测样品中活性乳铁蛋白含量,可用于包括骆驼乳在内的各种特色乳制品热加工工艺的精准控制及乳制品营养价值的评估。

浅谈缓冲液离子强度对电泳迁移率的影响

电泳技术是一项重要的生化分析技术,在临床上广泛用于血清蛋白质、尿蛋白、血清脂蛋白的检测及同工酶分析等,是历届检验专业教学的重点.其中实验--血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳及缓冲液离子强度对电泳迁移率的影响,对于中专检验专业学生来说是必做的实验.然而,通过实验笔者发现,实验结果与理论不符.现就此问题与同行们进行商榷.

冷冻干王浆对大鼠血脂、红细胞膜的微粘度、红细胞电泳迁移率的影响

冷冻干王浆可使正常大鼠的血脂降低,红细胞膜的微粘度降低。冷冻干王浆使进食高脂大鼠的血脂及红细胞膜的微粘度保持正常,红细胞膜较光滑,接近正常大鼠水平。冷冻干王浆对红细胞的电泳迁移率似有些影响。

乳及乳制品中羊乳铁蛋白含量的电泳迁移检测

乳铁蛋白(Lactoferrin)是一种广泛存在于哺乳动物外分泌液中的天然非血红素铁结合蛋白,具有多种生理活性应用于乳制品.羊乳营养组成更加趋近于人乳,以羊乳为基底物的“全羊”配方产品具有更广阔的市场诉求,对其乳铁蛋白的来源及含量监督有助于推动乳品“母乳化”研究的不断发展,对羊乳基婴幼儿配方乳粉的开发研究有重大的指导意义.研究利用DNA序列与羊乳铁蛋白的特异性结合,采集凝胶成像图中GLF-DNA序列复合物条带的灰度值,建立了一种简便、快速检测乳及乳制品中羊乳铁蛋白含量的电泳迁移技术.结果表明,该方法结果准确、操作简单,适用于乳及乳制品中羊乳铁蛋白含量检测,可以为特色生鲜乳中乳铁蛋白检测和营养价值评估提供参考.

线性聚丙烯酰胺凝胶毛细管电泳的迁移特性

使用线性聚丙烯酰胺作为筛分介质,对片段长度为80～584bp的标准DNA样品进行毛细管电泳,利用激光诱导荧光方法检测信号,荧光染料为溴化乙啶。改变电场强度100～375V/cm,得到的迁移率曲线与电场强度和DNA片段长度成复杂的函数关系,已有的经典理论模型:Ogston模型、Reptation无拉伸模型和Reptation拉伸模型都不能正确地描述实验观察到的迁移率随电场强度和DNA片段长度的变化情况。因此,提出一种修正的Ogston筛分理论,假定迁移的DNA分子在电场强度方向延展拉伸,如同小分子穿过凝胶筛孔。在该修正模型中,DNA的迁移率仅依赖于电场强度、筛分介质浓度和片段长度,很好地解释了实验现象。