基于网络药理学与分子对接探究当归芍药散作用甾体激素受体治疗糖尿病认知障碍

目的:运用网络药理学与分子对接技术,探究当归芍药散(danggui-shaoyao-san,DSS)作用甾体激素受体来治疗糖尿病(diabetes mellitus,DM)认知障碍。方法:以DSS中的当归、白芍、白术、川芎、茯苓、泽泻为研究对象,应用TCMSP数据库筛选出6味中药主要化学成分和相应靶点;在OMIM数据库、GeneCards数据库检索获取DM认知障碍的相关基因靶点。通过文献和NCBI数据库中检索甾体激素受体与DSS治疗DM认知障碍潜在靶点一起输入STRING平台得到蛋白网络互作图。从PubChem数据库获得化合物的3D结构,PDB数据库获得甾体激素受体的3D结构,用AutoDock4.2.6软件进行分子对接,获取DSS有效成分与甾体激素受体的结合能。结果:获得DSS 47个有效成分,161个作用靶点;DM认知障碍8018个疾病靶点;DSS治疗DM认知障碍潜在靶点138个;甾体激素受体11种。对核心靶点蛋白网络互作图分析,筛选出激素受体α(estrogen receptorα,ERα)、糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、雄激素受体(androgen receptor,AR)、孕酮受体(progesterone receptor,PR)、雌激素受体β(estrogen receptorβ,ERβ)等甾体激素受体是DSS治疗DM认知障碍的重要靶点,最后进行分子对接。结论:基于网络药理学与分子对接的研究方法,结果筛选出DSS中主要是儿茶素、薯蓣皂苷元、柚皮素、槲皮素、紫杉叶素、山柰酚等活性成分,作用ERα、GR、AR、PR、ERβ等甾体激素受体来防治DM认知障碍。

超高效液相色谱-串联质谱法测定动物肌肉组织和鸡蛋中残留的11种甾体激素类药物

建立了采用超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定猪、牛、羊和鸡肌肉组织及鸡蛋中睾酮、甲基睾酮、黄体酮、群勃龙、勃地龙、诺龙、美雄酮、司坦唑醇、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙等11种甾体激素多残留的分析方法。试样在碱性条件下用叔丁基甲醚提取,冷冻离心脱脂净化,以乙腈和甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱,反相液相色谱分离。采用电喷雾离子化、多反应监测方式(MRM),对11种甾体激素同时进行定性定量测定。动物肌肉和鲜蛋中睾酮、甲基睾酮、勃地龙、美雄酮及司坦唑醇的检出限为0.3μg/kg,群勃龙、诺龙、黄体酮、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙的检出限为0.4μg/kg。在动物组织及鸡蛋中添加1,2及10μg/kg水平的药物回收试验中,睾酮、甲基睾酮、勃地龙、美雄酮及司坦唑醇的回收率均在62.3%～105%之间,相对标准偏差为0.5%～15%;群勃龙、诺龙、黄体酮、丙酸诺龙、丙酸睾酮及苯丙酸诺龙的回收率大于50.0%,相对标准偏差小于16%。11种甾体激素在1～100μg/L范围内,线性关系良好,相关系数都大于0.99。该方法的样品前处理简单、快速,测定灵敏、准确,选择性好,可满足动物源食品中甾体激素类药物多残留的同时测定。

液相色谱-四极杆/离子阱质谱同时确证和测定肌肉中16种同化甾体激素残留

采用液相色谱-四极杆/离子阱质谱(LC-Q/Trap-MS)建立了肌肉中16种同化甾体激素类物质(ASs)残留的同时确证及测定方法。肌肉中的ASs采用乙腈超声辅助提取,正己烷脱脂,氨基固相萃取柱净化,CAPCELL PAK C18MGⅢ柱(150 mm×2.0 mm,5.0μm)分离,0.1%(v/v)甲酸-乙腈溶液和0.1%(v/v)甲酸-5 mmol/L甲酸铵水溶液为流动相梯度洗脱;预设定多反应监测(sMRM)-信息依赖性采集(IDA)-增强子离子扫描(EPI)模式检测,在线EPI谱库确证,内标法定量。结果表明,16种ASs在线性范围内线性关系良好(r≥0.999);定量限(LOQ,S/N≥10)为0.029～0.36μg/kg;3个添加水平(0.5、2.0和20μg/kg)下的回收率为89.9%～118%;相对标准偏差(RSD)为6.3%～16.2%。该方法准确灵敏,一次性完成16种ASs的确证和测定,可有效用于肌肉组织中ASs残留的监测分析。

反相高效液相色谱法同时测定保健口服液中20种甾体激素的研究

建立了利用反相高效液相色谱法同时测定保健口服液中２０种甾体激素的方法，进行了色谱条件的优化和样品预处理方法的探讨，并应用于市售保健口服液中微量激素的测定。最低检出量为０．１６～３．１８ｎｇ，回收率为８０．５％～１０３．１％，相对标准偏差为３．４％～９．２％。

UPLC-MS法同时测定牛奶中磺胺类、喹诺酮类、甾体激素类及四环素类兽药残留

建立并优化了同时测定牛奶中10种磺胺类、6种喹诺酮类、8种甾体激素类以及1种四环素类药物共25种兽药残留的超高效液相色谱-串联质谱检测方法。样品中目标药物经5%乙酸乙腈提取,HLB固相萃取小柱净化后,通过UPLC-MS测定,外标法定量。25种兽药在不同加标浓度下的回收率为61.6%~119.2%,组内相对标准偏差（RSD）为2.5%~13.4%,组间RSD为5.8%~14.2%,方法检出限为0.5~2.0μg/kg。

低剂量棉酚与甾体激素联合用药抗男性生育协同作用

目的探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药发挥抗男性生育的药物协同作用。方法采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式[棉酚12.5mg/（kg·d）＋去氧孕烯125μg/（kg·d）＋炔雌醇25μg/（kg·d）＋十一酸睾丸酮100mg/（kg·d）],与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,应用形态学观察、半定量检测和体视学睾丸组织结构定量研究的方法,探讨低剂量棉酚和甾体激素抗生育的药物协同作用。结果在睾丸重量、附睾重量、睾丸精子产量和睾丸组织结构定量方面,低剂量棉酚和甾体激素无药物协同作用;在降低附睾精子计数和精子活动度方面,联合用药组的效果强于其他3组,低剂量棉酚和甾体激素具有药物协同作用。结论与单用低剂量棉酚和甾体激素比较,两者联合用药可以更快地减少附睾精子的数量和活动度,从而快速达到避孕效果。

合并应用甾体激素与低剂量棉酚对雄性大鼠的抗生育效果及其作用机制

目的 论证甾体激素与低剂量棉酚组合用药的雄性抗生育作用的可行性及其作用机制。方法 用低剂量棉酚 12 mg/ (kg· d) ,甲基睾丸素 2 0 mg/ (kg· d)、炔雌醇 10 0 μg/ (kg· d)喂服 Wistar大鼠 6周 ,部分取材 ,开始合笼 ;继续用棉酚 12 m g/ (kg· d)维持 12周 ,部分取材 ;余下大鼠停药 ,观察恢复情况。取材做大鼠睾丸精子计数、精子活动度 ,睾丸切片的形态学观察等。结果 用药 6周大鼠的生精过程受到不完全抑制 ,附睾精子全部失去活力。用药 6 + 12周大鼠的曲细精管 - 期数量比例为 (9.3± 3.4) % ,比对照组 (2 6 .8± 1.7) %显著下降 ; - 期数量比例为 (36 .7± 5 .0 ) % ,比对照组 (2 4.5± 2 .7) %显著上升 ; - 期数量比例为 (3.6± 0 .6 ) % ,比对照组 (6 .0±0 .4) %显著下降。附睾精子全部失去活力。结论 甾体激素与低剂量棉酚从不同的作用位点共同作用于生精过程 ,在短时间内完全可以达到抗生育效果 ;低剂量棉酚长时期作用 ,不仅在附睾行使其抗生育功能 ,还影响生精过程产生精子的质量。此雄性抗生育作用具有可逆性。

气质联用法监测尿中睾酮及其相关甾体激素

目的 :为了更好地监控运动员 ,保护运动员的身体健康 ,保证竞技体育的健康发展 ,降低滥用睾酮后假阴性出现的几率。方法 :利用GC/MS法对尿中睾酮及其相关甾体激素进行检测。结果 :在口服安雄后 ,尿中雄酮、苯胆烷醇酮、5α ,3α雄烷二醇、5 β ,3α雄烷二醇、表睾酮及睾酮的分泌均有增加 ,特别是雄酮、苯胆烷醇酮、5α ,3α雄烷二醇、5 β ,3α雄烷二醇及睾酮增加幅度较大 ,在用药后 2～ 6h内达到最高峰。在 6名志愿者的尿样中出现睾酮 /表睾酮 (T/E)比大于 6的仅有 2名 ,有的尿中的T/E即使与未用药前的对照尿样相比有所增加但比值也不大于 6 ,如按照国际奥林匹克委员会医学委员会将T/E >6∶1作为判断滥用外源性睾酮的依据 ,则会出现假阴性的结果 ;结论 :雄酮与表睾酮浓度比作为判定的依据之一 ,再结合睾酮表睾酮比要比单纯用T/E比来判定可减少假阴性的结果。

细胞渗透性神经酰胺可抑制大鼠离体黄体细胞甾体激素生成并诱导细胞凋亡(英文)

本文旨在观察神经酰胺对离体孵育的大鼠黄体细胞孕酮分泌及细胞凋亡的影响。以PMSG hCG处理的雌性Wistar大鼠为模型 ,分离制备黄体细胞。将外源性细胞渗透性神经酰胺与黄体细胞共同孵育 ,分别用放免法和流式细胞仪分析神经酰胺对黄体细胞孕酮生成和凋亡的影响 ,同时还检测了一氧化氮合酶 (NOS)活性和一氧化氮(NO)水平的变化。结果显示 ,神经酰胺可以剂量相关方式抑制hCG 诱导的孕酮分泌 ,而对基础孕酮没有显著影响。离体孵育 12h的大鼠黄体细胞存在自发性凋亡 ,5 μmol/L神经酰胺能显著增加凋亡率 (P <0 0 5 ) ,流式细胞仪分析可见增强的凋亡峰。实验还发现 ,5 0 μmol/L神经酰胺能明显促进NOS活性 (P <0 0 1)和NO生成 (P <0 0 0 1)。结果提示 ,神经酰胺可能通过调节甾体激素生成和细胞凋亡而作为一种重要的信息分子参与黄体退化等卵巢的生理过程。

甾体激素对免疫细胞快速作用的非基因组机制

神经内分泌系统和免疫系统存在双向的联系 ,构成复杂的信息网络。甾体激素对免疫细胞的调节作用是上述网络中的重要一环。越来越多的证据表明 ,甾体激素对免疫细胞亦广泛存在着非基因组机制介导的快速作用 。

细胞外信号激酶蛋白5在卵泡刺激素介导的卵泡颗粒细胞甾体激素生成中的作用

目的研究细胞外信号激酶蛋白5(ERK5)在卵巢颗粒细胞甾体激素生成中的作用。方法采用Western blot检测在卵泡刺激素(FSH)刺激原代颗粒细胞甾体激素生成过程中ERK5的表达变化和激活情况,荧光共聚焦技术分析ERK5的亚细胞定位,腺病毒技术观察活化型ERK5和显性负性ERK5对颗粒细胞甾体激素生成的影响。结果 Western blot检测结果表明,FSH处理颗粒细胞后ERK5的表达随处理时间延长而下调,而ERK5活性形式的表达随处理时间延长而逐渐上升。荧光共聚焦技术分析结果显示,FSH的处理并没有明显影响ERK5在颗粒细胞中的定位。腺病毒技术观察结果发现,在细胞中联合感染活化型MEK5重组腺病毒和野生型ERK5重组腺病毒能促进FSH引起的细胞内StAR的表达升高和孕酮分泌,而显性负性ERK5重组腺病毒感染细胞则出现相反的效应。结论 ERK5可能促进了FSH介导的颗粒细胞甾体激素生成。

低剂量棉酚和甾体激素联合用药对精母细胞凋亡和支持细胞吞噬作用的影响

目的探讨低剂量棉酚和甾体激素联合用药对睾丸精母细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用的影响。方法本实验采用大鼠喂服棉酚与甾体激素联合用药方式[棉酚12.5mg/(kg·d)+去氧孕烯125μg/(kg·d)+炔雌醇25μg/(kg·d)+十一酸睾丸酮100mg/(kg·d)],与单独喂服相同剂量的棉酚或激素的大鼠及喂服载体溶剂的大鼠相对照,用药4、6和8周取睾丸组织,应用体视学、原位缺口末端标记(TUNEL)和油红O染色的方法,观察精母细胞和球形精子细胞数量、凋亡和支持细胞吞噬作用。结果联合用药中,甾体激素成分可明显减少精母细胞和球形精子细胞的数量,精母细胞凋亡增加并同时伴有生精上皮油红O染色的增强。结论精母细胞凋亡并被支持细胞吞噬是联合用药抗生育机制之一。

双抗夹心ELISA法测定水资源、食品及饲料中总甾体激素含量

基于睾丸酮丛毛单胞菌(C.test)具有降解甾体类物质的特性,其细胞中3α-羟基类固醇脱氢酶/碳酰基还原酶(3α-HSD)是诱导酶,建立了以3α-HSD的测定总甾体激素含量的双抗夹心酶联免疫反应(ELISA)方法。实验结果表明,睾丸酮类甾体激素的量在0.5～600μg/g之间,与3α-HSD酶表达量具有明显线性关系。应用这种方法对多种水资源、饲料、肉食品进行了检测。检测结果表明,松花湖水中的睾丸酮类甾体激素含量为34.5μg/g,明显高于其它水系;被测饲料中睾丸酮类甾体激素含量均大于2μg/g;肉类样品的检测结果均低于检测下限。本方法与高效液相色谱法的测定结果相符。

多囊卵巢综合征患者胰岛素抵抗对甾体激素水平的影响

目的:探讨多囊卵巢综合征相关疾病糖代谢及甾体激素代谢方面的特征。方法:108例患者根据血睾酮水平及卵巢B超表现分为三组:多囊卵巢综合征(PCOS)组、多囊卵巢(PCO)组、单纯性卵巢高雄激素血症(OHA)组,18例正常妇女作为对照组。于月经期进行糖耐量试验(OGTT),随后联合应用人绒毛膜促性腺激素(HCG)5000IU及人绝经促性腺激素(HMG)150IU进行卵巢功能兴奋试验,观察糖代谢及甾体激素代谢情况。结果:基础状态下,LH及LH/FSH浓度PCOS组>OHA>PCO组>对照组,PCOS组显著高于对照组,PCO和OHA组相似。OHA和PCOS组T水平相似,对照组和PCO组相似,OHA和PCOS组T明显高于对照组和PCO组;OGTT后,三患者组O4点胰岛素水平、胰岛素/葡萄糖比值相似,高于对照组。结论:就糖代谢和甾体激素代谢而言,PCO和OHA分别是PCOS和正常对照妇女的一种中间状态,在临床的诊断和治疗上值得重视。

酶水解-高效液相色谱法测定肉类食品及牛奶中11种甾体激素

碎肉用乙腈超声提取,挥干后加入KH2PO4缓冲液（牛奶直接加入KH2PO4缓冲液）,再加β-葡萄糖醛酸酐酶,37℃恒温24 h,稀释后过SPE小柱,用乙腈洗脱,线性梯度变化的KH2PO4-CH3CN分离,二极管阵列检测器检测。所测11种激素的检出限为0.009-0.020 mg·kg^-1;平均回收率为51.0%-107.0%;相对标准偏差为0.77%-6.42%之间;相关系数为0.999 5-0.999 9之间。酶水解-高效液相色谱法测定肉类食品及牛奶中11种甾体激素是一种简便、快速、灵敏、线性好的检测方法。

过表达SGK3肝癌细胞BEL-7402在去甾体激素血清中的抗凋亡研究

目的:构建过表达血清与糖皮质激素调节激酶3(SGK3)的质粒以及稳定表达SGK3的肝癌细胞系BEL-7402,研究其在去甾体激素胎牛血清(FBS)中的抗凋亡能力。方法:PCR扩增SGK3基因,将扩增产物连接到p CDH载体,构建出p CDH-SGK3的慢病毒载体质粒,将其同空白对照p CDH-NC分别与慢病毒包装载体共转入293T细胞,包装成慢病毒p CHD-SGK3和p CDH-NC;将构建的慢病毒感染肝癌细胞BEL-7402并用嘌呤霉素筛选,Western印迹检测SGK3的表达;观察细胞在FBS及去甾体激素FBS中的生长情况。结果:包装出p CDH-SGK3重组慢病毒,此慢病毒感染肝癌细胞系BEL-7402后获得表达;CCK8实验表明过表达SGK3可促进肝癌细胞的生长,BEL-7042细胞中有雄激素的表达,去甾体激素FBS中细胞生长受到抑制,过表达SGK3可增强肝癌细胞在去甾体激素血清中的抗凋亡能力。结论:在肝癌细胞BEL-7402中过表达SGK3可促进细胞生长,可增强细胞在去甾体激素FBS中的抗凋亡能力。

子宫内膜增生及子宫内膜癌的内分泌特征、甾体激素受体及超微结构研究

对４８例子宫内膜增生，２４例子宫内膜癌进行了血甾体激素放免分析及组织雌、孕激素受体生化定量检测，对３８例子宫内膜增生及２２例子宫内膜癌进行了受体免疫组化定性检测，对６例子宫内膜增生及１２例子宫内膜癌进行了扫描电镜及透射电镜观察。结果表明，子宫内膜增生与内膜癌之间血甾体激素水平无明显差别。但绝经后的子宫内膜增生及内膜癌患者的雌激素水平高于正常绝经后的妇女；从子宫内膜增生，腺囊样增生，腺瘤样增生到内膜癌，其雌、孕激素受体含量逐渐降低；受体含量与临床分期、细胞分化程度、宫颈浸润、肌层浸润及复发情况相关。经对雌、孕激素受体的定性分析，子宫内膜增生阳性率近１００％，非典型增生及原位癌为８３．３３％，内膜癌为７５％及８１．２５％。电镜观察子宫内膜增生的雌激素依赖性结构明显增加，而内膜癌的雌激素依赖性结构减少，细胞器形态排列异常伴有核异型性及核小体，并出现假包涵体。

甾体激素受体功能特异性的结构基础

甾体激素受体家族包括雌激素受体、雄激素受体等五个亚家族 ,在机体组织细胞的生长分化、发育生殖、内环境稳定等几乎所有生理过程中都起着重要的作用。研究甾体激素受体亚家族的特异性可以加深对该家族功能的理解 ,并且具有潜在的临床应用价值。采用进化踪迹方法对该家族的配体结合域 (LBD)进行分析 ,探讨了决定亚家族功能特异性的结构基础。结果表明 ,甾体激素受体的各亚家族可能同相应的内源性配体存在着共进化关系 ;配体结合处的踪迹残基决定了受体-配体间的氢键作用和疏水相互作用模式并导致了亚家族的配体结合特异性。上述结论可用于甾体激素受体的配体结合特异性的改造以及新型组织选择性配体 (如选择性雌激素受体调节剂 ,SERM)

三种甾体激素在湛江海域的紫红笛鲷体内的残留调查

本文采用放射免疫分析法测定了湛江海域养殖紫红笛鲷与野生紫红笛鲷肌肉中雌二醇、孕酮、睾酮三种甾体激素的残留量。结果表明,在养殖紫红笛鲷与野生紫红笛鲷肌肉中均检出三种激素,养殖紫红笛鲷肌肉中三种甾体激素的残留量分别是野生紫红笛鲷的4.50、1.57、5.00倍;野生紫红笛鲷中的甾体激素残留量较低,但仍能被检出,可能与环境激素有关。实验研究提示,放射免疫分析法可作为水产品中激素残留量的有效检测手段。

体外受精-胚胎移植周期卵泡液中甾体激素水平与卵母细胞发育的关系

目的 :初步了解卵泡液中甾体激素水平与卵母细胞发育、成熟、胚胎着床的关系。方法 :用Gn RHa/FSH/h MG/h CG方案控制下超排卵进行体外受精 -胚胎移植 (IVF-ET)治疗 5 3例不孕患者 ,在取卵时留取卵泡液用放射免疫法测定雌二醇 (E2 )、孕酮 (P)、睾酮 (T)水平。结果 :受精组 P水平显著高于未受精组 (P<0 .0 1 ) ,E2 /P比显著低于后者 (P<0 .0 1 ) ;未卵裂组 P水平低于卵裂组 ,T高于卵裂组 ,E2 水平在各组间无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;胚胎着床与胚胎未着床之间各参数无显著差异 (P>0 .0 5 ) ;含过熟卵冠丘复合物 (OCCC)的卵泡液中 P水平显著低于成熟和未成熟组 (P均<0 .0 1 ) ,E2 /P显著高于后两者 (P>0 .0 1 )。结论 :排卵前卵泡液中高孕酮水平提示卵泡成熟健康 ,可能有助于卵母细胞受精 ,E2 与卵母细胞成熟、受精、卵裂无关 ,高睾酮水平可能与胚胎分裂低有关 ,卵泡液中甾体激素水平与胚胎着床无关。