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泛素活化酶Ube1活性中心疏水区关键苯丙氨酸位点的丙氨酸突变对泛素传递活性的影响 被引量:2
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作者 方帅 彭康莉 +1 位作者 金博 赵博 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期187-195,共9页
泛素化系统调节真核细胞中几乎所有的生命活动,参与细胞内绝大多数蛋白质的降解,而疾病的发生往往伴随着相关蛋白质的异常。研究与疾病相关蛋白质的泛素化途径,通过该途径促进或抑制其活性对疾病的研究和治疗具有重大的意义。然而,细胞... 泛素化系统调节真核细胞中几乎所有的生命活动,参与细胞内绝大多数蛋白质的降解,而疾病的发生往往伴随着相关蛋白质的异常。研究与疾病相关蛋白质的泛素化途径,通过该途径促进或抑制其活性对疾病的研究和治疗具有重大的意义。然而,细胞内的泛素传递网络错综复杂,天然条件下很难确认某一特定蛋白质的泛素化途径。我们前期工作建立的正交泛素传递途径中的泛素和泛素化酶含有特殊的突变,是鉴定某一特定E3下游蛋白质底物的有效手段。但E1与E2结合位点的突变设计仍有待完善。本研究重新审视了E1-E2的相互作用,着眼于泛素活化酶Ube1活性中心内的疏水区,突变了该区上3个关键的苯丙氨酸残基为丙氨酸,即F637A、F729A、F741A,并设置合理的实验对照来探究此突变对泛素从E1向E2传递活性的影响。结果表明,突变体m Ube1较好地阻断了与UbcH7的识别及Ub的传递,提示本研究涉及的3个关键苯丙氨酸位点对E1-E2互相识别的重要性,及其作为新的正交泛素传递途径中E1突变位点的合理性。 展开更多
关键词 泛素化 正交泛素传递 Ube1疏水区 泛素传递活性
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HAP蛋白疏水区的聚合功能及其与细胞凋亡的关系
2
作者 甘淼 刘青珍 +1 位作者 齐义鹏 齐兵 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期206-212,共7页
asy和hap是一对新的细胞凋亡诱发基因 .二者单独转染细胞均能诱发细胞凋亡 ,能在酵母和哺乳动物细胞中形成同源二聚体 ,二者共转染酵母和哺乳动物细胞能形成异源二聚体 .同源二聚体诱发细胞凋亡 ,异源二聚体降低同源二聚体诱发细胞凋亡... asy和hap是一对新的细胞凋亡诱发基因 .二者单独转染细胞均能诱发细胞凋亡 ,能在酵母和哺乳动物细胞中形成同源二聚体 ,二者共转染酵母和哺乳动物细胞能形成异源二聚体 .同源二聚体诱发细胞凋亡 ,异源二聚体降低同源二聚体诱发细胞凋亡的活性 .氨基酸序列表明 ,HAP(homologousofASYprotein)含有内质网挽回模体 (KKKAE)、第一疏水区和第二疏水区 .对 3个功能区的缺失突变体研究显示 ,缺失内质网定位信号的HAPΔERS蛋白保留着同源聚合和与ASY异源聚合的能力 ,而分别缺失第一、第二疏水区的突变体HAPΔ4 8 139、HAPΔ15 7 2 18则丧失以上功能 ;通过流式计数法计算 3个缺失突变体诱发细胞凋亡比率 ,用生物统计学方法说明不同的比率与HAP诱发细胞凋亡的比率相比都有显著差异 .说明内质网定位信号、疏水区在HAP蛋白的诱发细胞凋亡过程中起重要作用 ,进一步揭示了HAP诱发细胞凋亡的机制 . 展开更多
关键词 HAP 蛋白疏水区 聚合功能 细胞凋亡 缺失突变体
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OE-PCR法扩增获得犬瘟热病毒缺失疏水区的融合蛋白基因片段
3
作者 乌仁高娃 杨敬 陈振文 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期585-587,共3页
根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR... 根据犬瘟热病毒(CDV)O nderstepoort株的核苷酸序列,设计合成引物,通过RT-PCR,从CDV O nderstepoort株RNA中扩增出2 197 bp的CDV全长融合蛋白(F)基因。将其与pGEM-T easy载体连接,通过软件分析其序列中的疏水区后,以pGEM-T/F为模板,PCR扩增出约254 bp和1 017 bp的F蛋白疏水区外编码序列。以2个扩增产物为模板,以OE-PCR(overlap ex tens ion-PCR)扩增出约1 271 bp的缺失疏水区的F基因(dF),测序结果表明,dF的序列除在疏水区以4个甘氨酸序列替代外,其余部分与F基因的同源性为99.2%。这表明,OE-PCR扩增法已成功地使CDV F基因疏水区缺失。 展开更多
关键词 CDV F基因 疏水区缺失 重叠延伸聚合酶链反应
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幽门螺杆菌细胞空泡毒素的N端疏水区介导跨膜蛋白二聚化
4
作者 赵蔚 《国外医学(微生物学分册)》 2002年第6期43-43,共1页
幽门螺杆菌(Hp)的细胞空泡毒素(VacA)在消化性溃疡和胃腺癌中发挥重要的病理作用,能在细胞的脂质双层形成一个通道,诱导真核细胞多种结构和功能的变化。纯化的VacA活性受pH值激活,是形成膜通道所必需,并与其结构变化相联系。已有研究表... 幽门螺杆菌(Hp)的细胞空泡毒素(VacA)在消化性溃疡和胃腺癌中发挥重要的病理作用,能在细胞的脂质双层形成一个通道,诱导真核细胞多种结构和功能的变化。纯化的VacA活性受pH值激活,是形成膜通道所必需,并与其结构变化相联系。已有研究表明VacA的N端在其发挥毒素活性中起重要作用。由于VacA 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 细胞空泡毒素 N端疏水区 跨膜蛋白二聚化
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嵌合信号肽提高α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌中的分泌 被引量:1
5
作者 张春晓 冉从国 +1 位作者 徐志斌 王丽丽 《河北科技大学学报》 CAS 北大核心 2023年第5期485-492,共8页
为提高α-淀粉酶的分泌效率,将不同天然信号肽的N,H和C区进行组合,以期筛选出优于天然信号肽的嵌合信号肽。首先从天然信号肽库中筛选了适合解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中... 为提高α-淀粉酶的分泌效率,将不同天然信号肽的N,H和C区进行组合,以期筛选出优于天然信号肽的嵌合信号肽。首先从天然信号肽库中筛选了适合解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中分泌的天然信号肽,以其中4种天然信号肽(SPyvcE,SPyoqM,SPBglS和SPyobB)的H区替换信号肽SPsacB的H区,构建4种嵌合信号肽RSP1—RSP4指导α-淀粉酶的基因工程菌株。结果表明,适合α-淀粉酶的最适天然信号肽和嵌合信号肽分别为SPyoqM和RSP1,且RSP1指导α-淀粉酶在枯草芽孢杆菌的分泌效率较SPyoqM提高27%,较具有相同H区的SPyvcE提高了3.6倍,较仅H区不同的SPsacB提高了2.07倍。嵌合信号肽构建策略是一种有效提高α-淀粉酶分泌效率的方法,可为其他蛋白质的高效分泌提供参考。 展开更多
关键词 基因工程 Α-淀粉酶 枯草芽孢杆菌 信号肽 疏水区
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HCV C基因在E.coli中的高效表达
6
作者 逯好英 金灵 +4 位作者 王宇 王捷 张晓晖 尚丹 马贤凯 《生物技术通讯》 CAS 1995年第3期110-113,共4页
本文在基因克隆和序列分析基础上,设计并构建了五种不同的HCV C基因表达工程菌株,研究了影响HCVC基因在E.coli中高效表达的因素。结果表明疏水区编码序列的存在与否对基因表达水平影响较大;翻译通读现象可直接影响目的表达产物的累积水... 本文在基因克隆和序列分析基础上,设计并构建了五种不同的HCV C基因表达工程菌株,研究了影响HCVC基因在E.coli中高效表达的因素。结果表明疏水区编码序列的存在与否对基因表达水平影响较大;翻译通读现象可直接影响目的表达产物的累积水平;不同宿主细胞对外源基因表达水平的影响也同样具有重要意义。通过试验研究,获得了高表达工程菌株,其表达水平达38.5%,为制备高质量重组HCV C抗原并研究其在疾病防治中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 HCV C基因 高效表达 疏水区编码序列 翻译通读 宿主细胞
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狂犬病病毒糖蛋白信号肽序列分析 被引量:4
7
作者 乔斌 段铭 +3 位作者 关振宏 栾维民 钱爱东 张茂林 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期346-350,354,共6页
为比较不同狂犬病病毒株糖蛋白信号肽序列的差异,测定了2株固定毒(CVS、3aG株)及2株街毒(SX、PB3)的糖蛋白核苷酸序列,并推导了氨基酸序列。DNAstar软件分析表明:2株街毒糖蛋白信号肽同源性为100%,2株固定毒株同源性为84.2%,街毒株... 为比较不同狂犬病病毒株糖蛋白信号肽序列的差异,测定了2株固定毒(CVS、3aG株)及2株街毒(SX、PB3)的糖蛋白核苷酸序列,并推导了氨基酸序列。DNAstar软件分析表明:2株街毒糖蛋白信号肽同源性为100%,2株固定毒株同源性为84.2%,街毒株与CVS、3aG的同源性分别为78.9%和73.7%;2株街毒的信号肽序列与NCBI收录的我国近年来分离的街毒株的序列完全相同;街毒株与常用疫苗株间的同源性介于68.4%~84.2%,疫苗株PV与SRV9、PV与ERA、PV与SAG同源性均为100%。对糖蛋白信号肽疏水区(-15位到-4位)的二级结构预测和疏水值计算显示,街毒株信号肽的二级结构和疏水值均与常用疫苗株和固定株存在明显差异;在N2A细胞上效价测定显示,2株街毒的效价明显低于2株固定毒。 展开更多
关键词 狂犬病病毒 糖蛋白 信号肽 街毒株 疏水区
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兔精子成熟过程初探
8
作者 刘秀德 《实验动物与比较医学》 CAS 1993年第3期154-156,共3页
采用紫外扫描显微分光光度计,应用单细胞显微荧光定量、荧光偏振及显微扫描技术对成年青紫兰兔睾丸、附睾头、附睾尾及输精管各部位精子的乳酸脱氢酶同工酶(LDH_x)活性、麦胚凝集素(WGA)受体的量、Feulgen染色性能、蛋白质大分子有序度... 采用紫外扫描显微分光光度计,应用单细胞显微荧光定量、荧光偏振及显微扫描技术对成年青紫兰兔睾丸、附睾头、附睾尾及输精管各部位精子的乳酸脱氢酶同工酶(LDH_x)活性、麦胚凝集素(WGA)受体的量、Feulgen染色性能、蛋白质大分子有序度等进行了定量研究。结果发现:兔精子成熟过程中,精子的LDH_x活性愈来愈强,膜表面WGA受体量逐渐增加,质膜蛋白质大分子疏水微区对1-苯胺基萘-8-磺酸镁盐(1,8-ANS)的荧光偏振度越来越大,膜蛋白疏水区域1,8-ANS荧光强度愈来愈弱,Feulgen染色性能也递减。 展开更多
关键词 青紫兰兔 精子 麦胚凝集素受体 孔酸脱氢酶同工酶 膜蛋白疏水区 Feulgen染色性能
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关于小分子热休克蛋白Hsp16.3各功能区作用的初步研究 被引量:2
9
作者 常咏 李雪梅 饶子和 《自然科学进展》 北大核心 2003年第10期1099-1103,共5页
小分子热休克蛋白Hsp16.3是一种存在于结核杆菌中的重要抗原,具有小分子热休克蛋白家族成员典型的3个功能区:N端疏水区,α-crystallin域和C端较短的非保守区.为了进一步研究其各功能区的作用,我们定义了Hsp16.3的3个功能区并在大肠杆菌... 小分子热休克蛋白Hsp16.3是一种存在于结核杆菌中的重要抗原,具有小分子热休克蛋白家族成员典型的3个功能区:N端疏水区,α-crystallin域和C端较短的非保守区.为了进一步研究其各功能区的作用,我们定义了Hsp16.3的3个功能区并在大肠杆菌中分别克隆、表达和纯化了N端区或C端区缺失的两个Hsp16.3残体蛋白.远紫外和近紫外圆二色谱分析结果显示,残体蛋白表现出与野生型蛋白相似的二级和三级结构.在九聚体野生型蛋白进行亚基重组装时,C端缺失的Hsp16.3残体蛋白能与野生型蛋白发生相互作用,形成异源寡聚体.在对野生型蛋白进行胰酶消化时,Hsp16.3的α-crystallin域对胰酶的消化具有抵抗能力.所有这些结果显示:在Hsp16.3的3个功能区中,α-crystallin域是一个相对独立和稳定的结构单元,它对该蛋白各级结构的维持十分重要. 展开更多
关键词 小分子热休克蛋白 HSP16.3 功能区 N端疏水区 α—crystallin域 C端非保守区 结构
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轮状病毒的分子生物学研究进展
10
作者 汪亚东 徐德启 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 1989年第2期1-4,共4页
轮状病毒(RV)为双层壳病毒,基因组含11个双股RNA片段。临床上RV是婴幼儿腹泻最主要的病原,RV的基础研究对防治腹泻具有重要意义。本文综述近年来RV的分子生物学研究的一些进展和现状。
关键词 轮状病毒 婴幼儿腹泻 抗原变异 病毒颗粒 免疫保护作用 氨基酸置换 疏水区 抗原决定基 单克隆抗体 氨基酸顺序
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鸡新城疫病毒F蛋白的研究进展
11
作者 梁华 于立辉 《中国畜牧兽医文摘》 2005年第6期24-24,34,共2页
鸡新城疫病毒为有囊膜的负链 RNA 病毒。NDV 基因组编码6种结构蛋白:L 蛋白为 RNA 依赖聚合酶,与核衣壳相联;HN 蛋白具有血凝素和神经氨酸酶活性,构成副粘病毒二种纤突中的大纤突;F 为融合蛋白,构成小的纤突;NP为核衣壳蛋白;P 为磷酸化... 鸡新城疫病毒为有囊膜的负链 RNA 病毒。NDV 基因组编码6种结构蛋白:L 蛋白为 RNA 依赖聚合酶,与核衣壳相联;HN 蛋白具有血凝素和神经氨酸酶活性,构成副粘病毒二种纤突中的大纤突;F 为融合蛋白,构成小的纤突;NP为核衣壳蛋白;P 为磷酸化的核衣壳相联蛋白;M 为基质蛋白,是构成囊膜的支架。其中的融合蛋白是 NDV 的功能性糖蛋白之一,在致病和免疫应答过程中起重要作用,已成为研究 NDV 致病性的热点。 展开更多
关键词 毒株 遗传学 序列 核衣壳 鸡新城疫病毒 蛋白 裂解位点 抗原位点 NDV 信号肚 氨基酸残基 分子流行病学 细胞融合 疏水区 纤突 膜粒 蚀斑
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Water slip flow in superhydrophobic microtubes within laminar flow region 被引量:1
12
作者 Zhijia Yu Xinghua Liu Guozhu Kuang 《Chinese Journal of Chemical Engineering》 SCIE EI CAS CSCD 2015年第5期763-768,共6页
The fabrication of superhydrophobic surfaces and the studies on water flow characteristics therein are of great significance to many industrial areas as well as to science and technology development. Experiments were ... The fabrication of superhydrophobic surfaces and the studies on water flow characteristics therein are of great significance to many industrial areas as well as to science and technology development. Experiments were car- ried out to investigate slip characteristics of water flowing in circular superhydrophobic microtubes within lam- inar flow region. The superhydrophobic microtubes of stainless steel were fabricated with chemical etching- fluorination treatment. An experimental setup was designed to measure the pressure drop as function of water flow rate. For comparison, superhydrophilic tubes were also tested. Poiseuille number Po was found to be smaller for the superhydrophobic microtubes than that for superhydrophilic ones. The pressure drop reduc- tion ranges from 8% to 31%. It decreases with increasing Reynolds number when Re 〈 900, owing to the transition from Cassie state to Wenze] state. However, it is almost unchanged with further increasing Re after Re 〉 900. The slip length in superhydrophobic microtubes also exhibits a Reynolds number dependence similarly to the pressure drop reduction. The relation between slip length and Darcy friction factor is theoretically analyzed with consideration of surface roughness effect, which was testified with the experimental results. 展开更多
关键词 Slip flow Superhydrophobic Microtube Pressure dropSlip length Darcy friction factor
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丙型肝炎病毒C基因在E.coli中的高效表达
13
作者 逯好英 金灵 +4 位作者 王宇 王捷 张晓晖 尚丹 马贤凯 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 1998年第2期94-97,共4页
目的:通过观察影响HCVC基因在大肠杆菌中表达的因素,研制高表达工程菌株,制备重组抗原,用于免疫诊断和生物学功能研究。方法:将2种不同大小的HCVC基因片段克隆到带有PL启动子的表达载体中,通过SDS-PAGE和免疫... 目的:通过观察影响HCVC基因在大肠杆菌中表达的因素,研制高表达工程菌株,制备重组抗原,用于免疫诊断和生物学功能研究。方法:将2种不同大小的HCVC基因片段克隆到带有PL启动子的表达载体中,通过SDS-PAGE和免疫印迹分析基因表达产物。结果:在观察影响表达因素的基础上,获得了高表达工程菌株,其基因表达产物占菌体蛋白的38.5%。结论:本研究表明。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 C基因 基因表达 疏水区编码序列
原文传递
绵羊肺腺瘤病毒NM株囊膜蛋白B细胞抗原表位预测
14
作者 刘月 张宇飞 +2 位作者 张亚坤 孙晓林 刘淑英 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期322-322,共1页
为了制备用于双抗体夹心ELISA方法检测绵羊肺腺瘤病(OPA)的特异性和高效价的多克隆抗体。参照本实验室上传到Genbank中的绵羊肺腺瘤病毒NM株env基因序列,登录号(JQ837489),利用DNAStar软件分析推导的氨基酸序列,与绵羊肺腺瘤病毒代表株J... 为了制备用于双抗体夹心ELISA方法检测绵羊肺腺瘤病(OPA)的特异性和高效价的多克隆抗体。参照本实验室上传到Genbank中的绵羊肺腺瘤病毒NM株env基因序列,登录号(JQ837489),利用DNAStar软件分析推导的氨基酸序列,与绵羊肺腺瘤病毒代表株JSRV21(AF105220)和JSRVJS7(AF357971.1)的囊膜蛋白氨基酸序列比较同源性均为99.5%。 展开更多
关键词 绵羊肺腺瘤病 B细胞抗原表位 NM 囊膜蛋白 氨基酸序列 基因序列 GENBANK 抗原指数 双抗体夹心 疏水区
原文传递
重组斑马鱼Gli2蛋白N端肽段的表达及纯化
15
作者 谭训刚 张培军 杜少军 《海洋科学集刊》 CAS 2006年第1期140-148,共9页
Based on the protein comparison between zebrafish Gli2 and fruit fly C_i and the analysis of hydrophilicity/hydrophobicity of Gli2 protein by computer programmer, the recombination N-terminal partial protein of Gli2 p... Based on the protein comparison between zebrafish Gli2 and fruit fly C_i and the analysis of hydrophilicity/hydrophobicity of Gli2 protein by computer programmer, the recombination N-terminal partial protein of Gli2 protein was designed.After the DNA fragment encoding the N-terminal part was cloned out by PCR, it was ligated with an expression vector containing His-tag and transformed into BL-21, a bacterial expression strain, to express this protein.After the expression condition was optimized, the protein can be expressed at high level after having been induced for 3 hours when the inducer—IPTG was at 0.6 mmol/L.The protein is soluble in solution, a bacterial protein extraction solution.After the protein solution was diluted in B-per solution, the recombination protein can bind to the Ni-NTA column and be purified highly. 展开更多
关键词 斑马鱼 GLI2 N端 重组蛋白 疏水区 目标基因 BamHI 电泳纯 pBluescript 蛋白
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甘油甲基丙烯酸酯—苯乙烯共聚物乳胶微粒的免疫学凝集试验
16
作者 李练兵 《国际生物医学工程杂志》 CAS 北大核心 1990年第6期354-354,共1页
对甘油甲基丙烯酸酯(GMA)—苯乙烯制备的乳胶微粒(LPS)进行了免疫凝集试验。按SP和uSP的方法挑选聚合物和非聚合物微粒,样品经过400转/分钟的速度添加苯乙烯0.9ml,制备GMA—苯乙烯混合物。LPS经过人免疫球蛋白(HIgG)处理,从家兔中收集抗... 对甘油甲基丙烯酸酯(GMA)—苯乙烯制备的乳胶微粒(LPS)进行了免疫凝集试验。按SP和uSP的方法挑选聚合物和非聚合物微粒,样品经过400转/分钟的速度添加苯乙烯0.9ml,制备GMA—苯乙烯混合物。LPS经过人免疫球蛋白(HIgG)处理,从家兔中收集抗HZgG的免疫血清用于凝集试验。 展开更多
关键词 甲基丙烯酸酯 凝集试验 免疫血清 人免疫球蛋白 免疫学 凝集反应 转/分 试验结果 疏水区 大盈
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