川东北地区腹泻牛群中牛病毒性腹泻病毒的分子流行病学调查及病毒分离鉴定

为了掌握川东北地区腹泻牛群中牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的感染情况和主要流行基因型及亚型,采用RT-PCR方法对采集于川东北地区临床腹泻牛粪便样品进行了病原学检测。根据5'-UTR基因序列进行遗传变异分析和基因分型鉴定,并对RT-PCR阳性样品进行了病毒的分离鉴定。结果显示:97份腹泻样品中BVDV平均阳性感染率为9.28%,达州市的阳性率最高(13.04%)、巴中市的阳性率最低(5.26%)。在5'-UTR基因系统进化树中9份阳性样品均为BVDV-1型,包括BVDV-1a(n=2)和BVDV-1b(n=7),经细胞培养、RT-PCR检测、间接免疫荧光检测共分离鉴定出2株致细胞病变型BVDV。表明川东北地区腹泻牛群中均存在BVDV感染,流行的优势基因亚型为BVDV-1b,丰富了BVDV的分子流行病学资料,为川东北地区BVDV的综合防控提供了理论基础。

蛋鸡网状内皮组织增生病病毒分离鉴定

山东某鸡场饲养的10000只父母代海兰蛋种鸡于育成前期出现进行性消瘦、生长发育不良等症状;剖检以腺胃肿胀、淋巴器官萎缩为特征,至70日龄发病率达90%;经ELISA方法检测抗体及间接免疫荧光原位病原检测证明该病与网状内皮组织增殖病病毒(REV)感染有关。取7只病鸡肝脏研磨处理后接种鸡胚成纤维细胞(CEF),用REV单抗11B118进行间接免疫荧光检测,结果均呈阳性;根据REV-HA株前病毒基因组DNA env囊膜糖蛋白基因序列设计引物,提取阳性CEF基因组DNA作为模版,PCR扩增后得到438 bp的目的片段;PCR产物测序结果比对显示,该毒株与其他中国野毒株的同源性高于与REV-HA株的同源性。综合诊断判定该病可能与鸡群早期感染致病力较强的REV有关。

小鼠诺如病毒分离鉴定及病毒衣壳蛋白基因序列分析

目的了解广东地区小鼠诺如病毒（murine norovirus,MNV）的分子遗传特征和进化来源。方法采用小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞对RT-PCR检测为阳性的小鼠样本进行病毒分离,通过细胞病变、RT-PCR、间接免疫荧光试验、测序方法对病毒分离株进行鉴定。应用RT-PCR技术针对15株MNV分离株的VP1基因的1626个核苷酸片段进行基因扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体后转化到大肠杆菌中进行克隆。通过氨苄青霉素平皿筛选,将鉴定为阳性的克隆菌进行核苷酸序列测定及序列分析。将这15株MNV分离株与从GenBank获得的19株MNV参考株进行序列比较分析,基于VP1基因的1626核苷酸片段构建系统发生进化树,一起进行分子流行病学研究。结果从80个小鼠样本中分离到了15株MNV病毒,通过细胞病变试验、RT-PCR试验、间接免疫荧光试验和测序分析鉴定确认分离到的病毒为MNV。序列分析结果显示MNV分离株的VP1蛋白基因全长均为1626个核苷酸,广东地区15株MNV分离株的核苷酸和氨基酸同源性分别在89.7%~100%和94.8%~100%之间,15株MNV分离株与其他19株MNV参考毒株核苷酸和氨基酸同源性分别在87.5%~92.9%和92.4%~98.2%之间。进化树分析表明来自设施A和设施D的13株病毒之间的亲缘关系较近,同属一个进化分支。来自设施B的ZD-1毒株和设施C的ZYY-163毒株与来自广东（K162）、日本（S7-P2、S7-PP3）、韩国（K4）和德国（Berlin/04/06/DE、Berlin/05/06/DE）同属另一个进化分支。结论成功分离到15株MNV病毒。遗传进化分析表明广东地区的MNV分离株来源并不相同,来自设施B和设施C的MNV分离株与国外分离株的亲缘关系较近,而来自设施A和设施D的13株MNV分离株可能是本地固有的毒株。

张家口地区减蛋综合征病毒分离鉴定

2006年河北张家口市郊区某个体养鸡户的900只210日龄的海兰褐蛋鸡，出现突然性产蛋下降，产蛋率由93％降至71％，蛋壳颜色消退，并出现大量破壳蛋、软壳蛋和少量畸形蛋，破壳蛋和软壳蛋的比例约占13％，但没有其它明显的临床症状。经调查，该鸡群按照免疫程序接种了减蛋综合征（EDS）疫苗，但疫苗购自非正规生产厂家，根据临床症状及调查情况，排除了饲养管理等方面的因素，疑为EDS，采集病料进行病毒分离鉴定，获得1株EDSV，命名为EDSV-Z。

广西新型鸭肝炎病毒分离鉴定及其VP1基因研究初报

鸭病毒性肝炎（duckviralhepatitis，DVH）是由鸭肝炎病毒（duckhepatitisvirus，DHV）引起1周-3周内雏鸭发生高度致死性的、传播迅速的病毒性传染病。发病鸭临床特征主要为运动失调，死后呈现角弓反张，并以肝脏肿大及出血为主要病变。

猪流行性腹泻的病毒分离鉴定与免疫试验

猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒引起的猪的一种高度接触性肠道传染病,于1977年在比利时首次被发现,1982年被命名为猪流行性腹泻,我国于1980年首次分离得到PEDV。近年来,山东、河南、湖北等省多个地区陆续发生,渐呈流行之势,仔猪死亡率最高,可达100%,给养猪业造成非常严重的经济损失。本文就近期流行性腹泻的流行情况开展调查,对病毒进行分离鉴定后对市场上不同类的疫苗免疫效果进行研究,确立了PED的综合防控技术,为养猪户提供参考,以推动养殖业的快速发展。

云南省洱源县日本乙型脑炎流行病学监测及病毒分离鉴定

日本乙型脑炎作为一种自然疫源性疾病,在人、畜、媒介昆虫中间循环,一旦条件适宜即可酿成爆发流行。为了掌握乙脑流行的一般规律及其流行特征,必须对调查区域外环境、人群、家畜、媒介进行系统监测。1986年5月-1988年2月我们对乙脑高发流行区的洱源县右所区进行了蚊种种群组成、季节消长、成蚊自然带毒率、媒蚊密度与乙脑流行的关系。

包头某鸡场产蛋下降综合症(EDS_(76))的病毒分离鉴定

1992年11—12月,包头某鸡场产蛋鸡发生产蛋下降,产蛋率从80%迅速下降至40%左右,同时,褐壳蛋褪色,并出现软壳、无壳、薄壳蛋,这些畸形蛋约占总蛋量的10%—15%,经血清学调查,发病鸡对 EDS76病毒的 HI 抗体价为 25—211。

一株新城疫病毒分离鉴定及分子特性分析

新城疫 （Newcastle disease, ND） 是由新城疫病毒 （New castle disease virus, NDV） 所引起的禽类一种急性、 烈性传染病, 其主要侵害鸡和火鸡, 发病率和死亡率均非常高, 为危害我国养禽业的最严重疾病之一, 该病为世界动物卫生组织 （OIE） 所规定的A类动物疫病, 我国将其列为一类动物疫病, 并为国家中长期动物疫病防治规划 （2012-2020年）所规定的5种优先防治的一类动物疫病之一.

豫西地区猪伪狂犬病的分子流行病学调查与病毒分离鉴定

为了掌握豫西地区猪伪狂犬病病毒(PRV)的流行特征,采用PCR方法对2016—2020年采集自豫西地区的152份临床病料进行了PRV病原学检测,并对PCR阳性样品进行了病毒的分离鉴定与gE基因遗传变异分析。结果:152份临床病料样品中PRV野毒株阳性率为13.82%,不同区县中以嵩县(21.05%)和栾川县(20.0%)的阳性率较高,不同年份中以2017年(20.69%)和2018年(19.05%)的阳性率较高;8个分离毒株均能引起BHK-21细胞发生变圆变大、聚集拉网、脱落等典型细胞病变,其每毫升TCID50介于10^(-5.88)至10^(-6.77)之间,8个分离毒株对兔均有致病性;8个分离毒株gE基因与GenBank中登录的PRV流行毒株gE基因核苷酸序列同源性在97.4%-100%之间,且与国内2012年以来流行的变异毒株亲缘关系较近,与Ea株、LA株、Min-A株亲缘关系次之,与Kaplan株、Becker株亲缘关系较远。说明豫西地区存在PRV野毒株散发性流行,以2017年和2018年流行较为严重;获得的8个分离株具有较高的病毒滴度,对兔为高致病性毒株,且为国内近年来流行的变异毒株。

新城疫病毒的常规检测及病毒分离鉴定

新城疫是禽类常见的传染病,该疫病在我国常年流行,给养禽业带来了巨大的经济损失,虽然目前已经有多种类型的新城疫疫苗,然而由于疫苗与毒株的匹配度以及免疫程序等因素,该病目前仍然存时而发生。随着疫苗免疫以及毒株的进化,新城疫临床剖检症状越来越不典型,确诊需要依靠实验室检测进行,现将常规的实验室检测方法介绍如下。

江西省高安市两株汉城病毒分离鉴定及全基因组序列分析

目的对2021年江西省高安市采集的鼠肺样本进行肾综合征出血热汉坦病毒分离鉴定及全基因组序列进行分析。方法采用Vero-E6细胞分离肾综合征出血热汉坦病毒,采用实时荧光RT-PCR法和直接免疫荧光法对分离株进行鉴定,采用高通量测序技术对分离株进行全基因组测序,采用CLC、MEGA7.0等软件对基因组序列进行分析。结果从褐家鼠和罗赛鼠各分离到1株汉城病毒(Seoul orthohantavirus,SEOV),分别命名为GAW30/2021、GAW50/2021。2株分离株的3个基因片段大小相同,每个基因编码区长度一致。分离株S、M、L基因分别含1773、3651、6530个核苷酸,分别编码429、1133、2151个氨基酸。2株分离株3个基因核苷酸序列同源性分别为99.7%、99.0%、99.4%、氨基酸序列同源性分别为99.8%、99.7%、99.9%。2株分离株与国内外SEOV参考株全基因组核苷酸同源性为84.3%~94.9%,氨基酸同源性为96.1%~99.8%,在系统进化树上独立分枝。2株分离株与SEOV疫苗株基因组氨基酸同源性为97.6%~99.1%;核蛋白和糖蛋白免疫表位氨基酸序列与疫苗株一致。结论首次在江西省高安市鼠肺样本中分离到2株SEOV变异株,目前疫苗对变异株仍具有保护力。

犬瘟热病毒感染病例的诊断与病毒分离鉴定

犬瘟热（Canine distemper，CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus，CDV）引起的一种传染性极强的急性、病毒性传染病，宿主范围较广泛，能够使犬、貂、貉、狐、熊、小熊猫、大熊猫、狼、狮、虎、金猫、猞猁等多种动物发生自然感染和发病。CDV在我国犬中的发病率和致死率都很高，宠物犬一旦感染后发病率可达100％，死亡率也高达80％.

一例鹅副粘病毒病的病毒分离鉴定及病理组织学观察

鹅副粘病毒病是由禽副粘病毒I型引起的一种禽鸟共患的高发病率、高死亡率的传染病。以呼吸困难、肿头、流泪、喜卧、下痢、脾脏和胰腺肿大、散布大小不一坏死灶，肠道粘膜出血、坏死、溃疡、结痂为主要特征。该病于1997年7月在我国江苏、广东等地的部分县市雏鹅中首次发生，造成了重大的经济损失。2008年夏季，泰安某养鹅场暴发了类似传染病，引起鹅大量死亡。根据流行病学调查、临床症状、病理组织学观察及实验室诊断，确诊为鹅副粘病毒病，现报道如下。

鸭瘟病毒感染的诊断与病毒分离鉴定

鸭瘟（Duckplague，DP）俗称“大头瘟”，又名鸭病毒性肠炎（Duckviralenteritis，DVE），是由鸭瘟病毒（Duckplaguevirus，DPV）引起的一种急性、败血性及高度致死性的传染病。本病的特征是体温升高，病鸭肿头流泪，下痢，食道黏膜出血或坏死，两腿麻痹，排出绿色稀粪，剖检特征可见心脏表面有针尖大小的出血点，肝脏肿大明显，呈土黄色，质脆.

潍坊地区鸡场禽腺病毒分离鉴定

2016年4月份,从山东潍坊一个肉鸡场送检一批病死鸡,笔者对该病死鸡进行临床剖检和分子生物学诊断。临床诊断发现该病鸡出现心包积液,肝脏肿大,有坏死点。初步诊断为腺病毒。取病死鸡肝脏研磨并接种鸡胚后,提取尿囊液DNA,使用腺病毒特异性引物扩增出片段,并在NCBI上比对与I群腺病毒IV型相似度最高。因此诊断为腺病毒感染引起。本报道确诊了腺病毒在该地区养殖场中流行情况,给该病毒的预防和治疗提供理论依据。