人可溶性白介素-1受体真核表达载体pcDNA3/sIL-1R的构建

目的 本研究旨在构建人可溶性白介素_1受体 (sIL_1R)真核表达载体pcDNA3 sIL_1R ,为研究骨关节病的基因治疗奠定实验基础。方法 将人sIL_1R基因的RT_PCR纯化产物及质粒pcDNA3 1(+)DNA经KpnI和XhoI双酶切、胶回收纯化酶切片段后 ,体外连接酶切片段 ,使其定向重组 ,再将重组DNA转化E .coliCompetentCellsJM10 9,经复苏后 ,在含Ampr 的LB固体培养基上筛选出阳性克隆。结果 挑取的LB固体培养基上的 6个单菌落经酶切及测序鉴定 ,证实均为阳性克隆 ,即sIL_1R与pcDNA3 1(+)体外重组成功。结论 采用体外重组技术 ,成功地将人sIL_1RcDNA插入了真核表达载体pcDNA3 1(+)

被动吸烟大鼠椎间盘中白介素-1β和白介素-1受体Ⅰ的表达及意义

目的:观察被动吸烟大鼠椎间盘中白介素-1β(IL-1β)和白介素-1受体Ⅰ(IL-1RⅠ)的表达,探讨被动吸烟诱发椎间盘退变的机制。方法:取4周龄SD大鼠60只,随机分为6组,第1组不予吸烟,10只;第2￣4组分别吸烟2周、4周、8周,第5、6组吸烟8周后予停止吸烟4周、8周,每组10只。在相应时间点处死动物,取L4/5椎间盘行HE染色和IL-1β及IL-1RⅠ免疫组化染色,观察椎间盘退变情况和IL-1β及IL-1RⅠ的表达情况。结果:HE染色显示,吸烟2周时椎间盘无明显退变,吸烟4周时椎间盘出现2￣3级退变,吸烟8周时椎间盘出现3￣4级退变,停止吸烟后4周退变无明显修复;停止吸烟后8周退变部分修复。免疫组化染色显示,吸烟2周组IL-1β及IL-1RⅠ染色阳性细胞率增加,吸烟4周组染色阳性细胞率大于2周组;吸烟8周组达(76±3.2)%和(46±2.8)%,停止吸烟后4周开始下降,8周时降至(66±2.9)%和38±2.2%。结论:被动吸烟可以诱发大鼠椎间盘退变,且随吸烟时间延长退变加重;其导致退变的机制可能与上调椎间盘内IL-1β和IL-1RⅠ的表达有关。

白介素-1受体拮抗剂滴眼液治疗大鼠高危角膜移植免疫排斥反应

目的 观察白介素 1受体拮抗剂 (IL 1ra)滴眼液对高危角膜移植排斥反应的治疗作用。方法 SD大鼠为供体 ,Wistar大鼠为受体。缝线法诱导角膜新生血管后行角膜移植。对照组用生理盐水点眼 ,实验组分别用IL 1ra 1、3、5mg/mL点眼。同时设IL 1ra 1mg/mL结膜下注射组。观察植片的存活情况并检测植片中CD1阳性细胞。结果 与对照组相比 ,IL 1ra 3、5mg/mL组和结膜下注射组均可明显延长植片的存活时间 (P <0 0 5 )并减少植片中CD1阳性细胞的浸润。结论 IL

白介素-1受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤后神经元功能修复的影响

目的观察白介素-1(IL-1)受体拮抗剂对大鼠急性脊髓损伤后神经元功能修复的影响。方法 SD大鼠110只,随机分为假手术组30只,生理盐水组40只和IL-1Ra治疗组40只。采用改良Allen氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。在建模后1、48、72 h获取损伤段脊髓标本,免疫组织化学染色检测神经丝蛋白(NF)表达,运用改良Rivlin斜板实验和BBB评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分。结果 IL-1Ra治疗组NF的表达及行为学评分方面明显优于生理盐水组,差异有显著性。结论 IL-1Ra对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段脊髓有保护作用,可能与IL-1受体拮抗剂增加NF表达、抑制局部炎症效应有关。

白介素-1受体拮抗剂对双后肢大鼠椎间盘细胞凋亡的影响

目的:探讨白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)对双后肢大鼠椎间盘细胞凋亡的影响。方法:建立双后肢大鼠模型54只,随机分为试验组、空白对照组和阴性对照组,每组18只,试验组从造模当天即予腹腔注射IL-1Ra(50ng/kg体重),隔天1次重复注射至处死,空白对照组不予任何处理,阴性对照组隔天1次予腹腔注射等量生理盐水。于造模后1、3、6个月每组分别处死6只大鼠,完整取出L4/5椎间盘后进行固定、切片,使用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL法)检测各组大鼠椎间盘细胞的凋亡情况,并使用透射电镜观察凋亡细胞的超微结构。取L5/6椎间盘使用流式细胞仪检测各组大鼠椎间盘细胞的凋亡情况。结果:术后1个月试验组、空白对照组及阴性对照组椎间盘细胞的凋亡无显著性差异(P>0.05);术后3个月试验组与空白对照组及阴性对照组相比细胞凋亡明显减少,有显著性差异(P<0.05);术后6个月试验组与空白对照组及阴性对照组相比细胞凋亡率有非常显著性差异(P<0.01)。结论:IL-1Ra对双后肢大鼠椎间盘细胞凋亡有明显的抑制作用。

单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白基因腺病毒载体构建及其在体内外表达效力检测

目的:构建携带小鼠源性单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(mSIGIRR)基因重组腺病毒并对其体内外表达效力进行检测。方法:构建重组穿梭质粒pDC316-mSIGIRR,行酶切、测序鉴定。将穿梭质粒和骨架质粒共转293细胞,包装重组腺病毒Ad.mSIGIRR,行PCR及滴度鉴定。Ad.mSIGIRR感染A549细胞及小鼠肺组织后,通过RT-PCR、Western blot、免疫组化检测mSIGIRR表达情况。结果:扩增得到目的基因片段与Genbank中序列一致,获得表达mSIGIRR蛋白的重组腺病毒。病毒感染滴度为4×109pfu/mL,在体内外感染模型中均有较高表达效力。结论:成功构建携带mSIGIRR基因重组腺病毒,为进一步研究SIGIRR在炎症调控中的作用及分子机制奠定基础。

白介素-1受体拮抗剂对椎间盘基质代谢的影响

目的:探讨白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)对双后肢大鼠椎间盘基质代谢的影响。方法:建立双后肢大鼠模型36只,随机分为实验组和对照组,每组18只,实验组从造模当天即予腹腔注射IL-1R(a50ng/kg),隔天重复注射至处死,对照组18只不予任何处理。于造模后1、3、6个月每组分别处死6只大鼠,完整取出L4/5椎间盘固定、切片,予SABC法进行免疫组化染色,并使用图像分析系统对纤维环中Ⅱ型胶原染色进行灰度值扫描,同理取出L5/6椎间盘,使用间苯三酚法测量蛋白多糖含量。结果:术后第1个月,实验组椎间盘髓核中Ⅱ型胶原灰度值及蛋白多糖含量分别为83.67±7.97和2.376±0.161,对照组分别为87.25±8.70和2.297±0.101,两组间无显著性差异(P>0.05);第3个月时实验组Ⅱ型胶原染色的灰度值及蛋白多糖含量分别为107.42±6.50和2.093±0.131,对照组分别为145.91±7.42和1.039±0.092,两组间比较有非常显著性差异(P<0.01);第6个月时实验组Ⅱ型胶原染色的灰度值及蛋白多糖含量分别为129.83±4.03和1.796±0.065,对照组分别为203.76±5.98和0.654±0.048,两组间比较有非常显著性差异(P<0.01)。结论:IL-1Ra对双后肢大鼠椎间盘基质降解有明显的抑制作用。

IRAK-4在白介素-1受体/Toll样受体(IL-1R/TLRs)介导的炎症信号通路中的关键作用

白介素-1受体相关激酶4(interleukin-1 receptor-associated kinase 4;IRAK-4)是近年来发现的参与机体先天性免疫反应过程中的关键分子。它与另外3个成员IRAK-1、IRAK-2、IRAK-M同属于IRAK家族,目前经过对IRAK-4分子的激酶活性以及其对炎症反应的正向和负向的调控作用的研究表明,IRAK-4分子联系着上下游的信号转导,在TLRs/IL-1R介导的炎症信号通路中的作用更为关键。本文就IRAK-4分子的活性、以及IRAK-4分子在TLRs/IL-1R介导的炎症信号转导通路中的作用作一综述。以期设计出针对IRAK-4特异性的药物,或者通过基因治疗手段干预IRAK-4表达,为感染控制提供新的思路,开发出新的抗炎药物。

白介素-1受体拮抗剂基因多态性与胃癌易感性关系的研究

目的:探讨白介素-1受体拮抗剂(IL-1RN)基因在国人胃癌及正常人群中的多态性,初步分析其基因型与其胃癌的相关性。方法:收集50例胃癌癌旁正常组织和50名正常健康人外周血标本,提取DNA进行PCR扩增,经琼脂糖凝胶电泳对IL-1RN基因多态性进行分析。结果:IL-1RN基因有5种不同组合的等位基因,我们的研究结果只有1/1、1/2、2/2三种多态,其余多态均为阴性。其中IL-1RN*1等位基因频率在正常人和胃癌患者中分别为73％和49％,IL-1RN*2等位基因频率则分别为27％和51％。正常人和胃癌患者中3种基因型频率分别为1/1:54％(27/50)和24％(12/50);1/2:38％(19/50)和50％(25/50);2/2:8％(4/50)和26％(13/50)。携带IL-1RN*2等位基因会增加罹患胃癌的危险性,1/2杂合子和2/2纯合子比1/1纯合子分别增加2.96倍(P=2.96,95％ CI=1.22-7.21;x^2=-5.68,P<0.05)和7.31倍(P=7.31,95％ CI=2.13-25.09;x^2=10.01,P<0.01)。结论:IL-1RN基因1/2、2/2多态性与国人胃癌易患性相关,可作为胃癌遗传易感性的检测指标,用于胃癌易患个体的预警和胃癌的预防。

PCR方法检测人白介素-1受体拮抗剂基因内含子2多态性

白介素-1(IL-1)受体拮抗剂是一种酶链反应方法检测了130例正常人外周血IL-1受体拮抗利内含子2多态性。结果:发现了3种等位基因产物:410bp,240bp和500bp。结论:该基因区含有3个蛋白质结合点,可能与IL-1受体拮抗剂产生有关,该多态性可能与免疫介导的炎症反应有关。

白介素-1受体拮抗剂和C反应蛋白在缺氧缺血性脑病患儿血清中的水平及意义

目的探讨缺氧缺血性脑病(HIE)患儿血清白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和C反应蛋白(CRP)的水平及临床应用价值。方法采用ELISA法检测50例HIE患儿(轻度13例,中度22例,重度15例)和25例健康足月新生儿(对照组)血清IL-1Ra、CRP的水平。结果不同程度HIE患儿出生7d时的血清IL-1Ra、CRP水平均低于3d时(P<0.05);不同程度HIE患儿出生3d和7d时的血清IL-1Ra、CRP水平均高于对照组(P<0.05);HIE患儿血清IL-1Ra、CRP水平与HIE严重程度有关(P<0.05)。结论患儿血清IL-1Ra、CRP水平检测可用于HIE的诊断和预后评估。

白介素-1受体拮抗剂抑制角膜新生血管及血管内皮生长因子表达的研究

为了探讨白介素-1受体拮抗剂(interleukin 1 receptor antagonist,IL_1ra)对大鼠角膜新生血管(corneal neovascularization,CNV)中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响及其对CNV生长的作用,采用角膜缝线法建立大鼠CNV模型,分成正常对照组、单纯角膜缝线组和缝线加IL_1ra结膜下注射组三组,于术后1w、2w分别计算各组CNV面积,观察CNV生长情况;术后1w各组随机处死4只大鼠,取角膜组织采用RT_PCR检测VEGF的表达。结果表明,正常对照组无CNV生长,VEGF低表达;单纯缝线组CNV生长旺盛,VEGF高表达,CNV面积、VEGF mRNA相对吸光度值与其他两组相比有极显著差异(p<0.01);IL_1ra组CNV生长稀疏,VEGF表达较低,但仍高于正常对照组,差异有统计学意义(p<0.01)。

白介素-1受体相关激酶与神经系统疾病的研究进展

白介素-1受体相关激酶(the interleukin-1 receptor associated kinases,IRAK)是一类细胞内激酶,在Toll样受体及白介素-1受体介导的信号通路中发挥重要作用,对炎症反应起正向或负向调节作用。近年来的研究表明IRAK参与了脑缺血、脑出血、癫痫、阿尔茨海默病等神经系统疾病的发生发展。本文就IRAK与神经系统疾病的关系研究进展加以综述,有助于研究神经系统疾病的发病机制及寻找新的治疗方向。

白介素-1受体拮抗剂及白介素-1β基因多态性与脓毒症易感性的关系

目的 探讨白介素 1受体拮抗剂 (IL 1Ra)基因VNTR多态性及白介素 1β(IL 1β)基因外显子 5多态位点TaqI与脓毒症易感性的关系。方法 应用聚合酶链反应 (PCR)法和限制性片段长度多态性 (RFLP)方法 ,观察 5 4例脓毒症患者和 112例对照者IL 1Ra基因VNTR多态性及IL 1β基因外显子 5多态位点TaqI的分布。结果 脓毒症患者组IL 1RaA2等位基因频率显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,A1 A2基因型分布也显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而两组间IL 1βA2等位基因频率及IL 1βA1 A2基因型分布均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 IL 1Ra基因VNTR多态性与脓毒症易感性有关 。

白介素-1受体拮抗剂对大鼠肠缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探究白介素^(-1)受体拮抗剂(interleukin^(-1) receptor antagonist,IL^(-1)Ra)对大鼠肠缺血/再灌注损伤的保护作用。方法将35只♂SD大鼠随机分为假手术(S)组、模型(I/R)组、不同剂量给药组(C1、C2、C3)。采用夹闭肠系膜上动脉法制备肠缺血/再灌注模型,缺血1 h后松开动脉夹再灌注1 h,给药组于再灌注前15 min尾静脉注射10、20、50mg·kg^(-1)的IL^(-1)Ra。结果缺血/再灌注2 h后,与S组相比,I/R组肠黏膜严重损伤,髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量增高,超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性降低,肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素^(-1)β(interleukin^(-1)β,IL^(-1)β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)大量释放,差异有显著性。给药组大鼠的肠黏膜病理损伤均明显改善,氧化应激和炎症反应指标有不同程度的改善。结论 IL^(-1)Ra通过缓解氧化应激反应和炎症反应,对肠缺血/再灌注损伤有明显的保护作用,有望用于临床上肠缺血/再灌注损伤的治疗。

白介素-13、白介素-1受体拮抗剂和环氧合酶-2在炎症性肠病患者血清中的表达及临床意义

目的探究白介素(IL)-13、白介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)和环氧合酶-2(COX-2)在炎症性肠病(IBD)患者血清中的表达及临床意义。方法选择2018年3月至2019年3月在深圳市宝安区中心医院治疗的124例均处于活动期的IBD患者为试验组,其中克罗恩病(CD)60例为A组和溃疡性结肠炎(UC)64例为B组,CD参照克罗恩病简化内镜(SES-CD)评分标准,将A组分别为18例轻度活动期为组A1、26例中度活动期为A2组和16例重度活动期为A3组;UC参照改良Truelove和Witts疾病严重程度评分标准,把B组分别为21例轻度活动期为组B1、25例中度活动期为B2组和18例重度活动期为B3组;同期选健康组100例为对照组;均采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)法检测各组受检者血清IL-13、IL-1Ra和COX-2水平,分析血清IL-13、IL-1Ra和COX-2水平与疾病活动度。结果实验组的IL-13、IL-1Ra和COX-2表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);血清IL-13、IL-1Ra和COX-2联合检测对于IBD的诊断效能较单独检测高,B组的IL-13、IL-1Ra和COX-2表达跟A组比较,差异有统计学意义(P<0.05);B组中B1、B2和B3患者血清IL-13、IL-1Ra和COX-2水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),IL-13、IL-1Ra和COX-2表达水平与UC疾病严重程度呈正相关(R^(2)分别为0.78、0.85和0.82,P<0.05);A组中A1、A2和A3患者血清IL-13、IL-1Ra和COX-2水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),IL-13、IL-1Ra和COX-2表达水平与CD疾病严重程度呈正相关(R^(2)分别为0.76、0.84和0.81,P<0.05)。结论IBD患者血清IL-13、IL-1Ra和COX-2水平明显升高,且与UC和CD活动性有关。IL-13、IL-1Ra和COX-2的表达和UC及CD的活性密切相关,可作为判断UC及CD活性的指标。

重组人白介素-1受体拮抗剂治疗特发性间质性肺炎

目的分析重组人白介素-1受体拮抗剂(recombinant human interleukin-1 receptor antagonist,rhIL-1ra)联合醋酸泼尼松治疗特发性间质性肺炎(idiopathic interstitial pneumonias,IIPs)的疗效及对肺功能、血清细胞因子水平的影响。方法选取60例IIPs患者为对象,采用随机数字表法分为对照组和观察组,各30例,对照组给予醋酸泼尼松治疗,观察组在对照组的基础上联合rhIL-1ra治疗。比较2组治疗后的临床疗效、呼吸功能、肺功能指标[用力肺活量(FVC)、第1秒钟用力呼气量(FEV 1)、最大自主通气量(MVV)]、血清白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1(IL-1)水平的变化。结果治疗后观察组总有效率为88.33%,高于对照组的65.00%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组[FEV 1(80.84±10.13)L、FVC(3.32±0.85)L、FEV 1/FVC(75.72±8.78)%],均高于对照组[FEV 1(72.52±3.68)L、FVC(2.80±0.52)L、FEV 1/FVC(70.53±7.17)%],差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组IL-6(248.82±38.85)ng/L、IL-1(562.18±45.72)ng/L,均分别低于对照组的(267.43±37.15)ng/L和(584.95±43.67)ng/L,差异有统计学意义(P<0.05)。结论rhIL-1ra联合醋酸泼尼松治疗IIPs的临床疗效较好,能有效改善患者肺功能,降低炎症因子水平。