超高效液相色谱-串联质谱法测定燕麦粉和小米粉中白僵菌素和恩镰孢菌素

目的建立一种超高效液相色谱-串联质谱法测定谷物性食品燕麦粉和小米粉中白僵菌素(beauvercin,BEA)、恩镰孢菌素A、恩镰孢菌素A_(1)、恩镰孢菌素B和恩镰孢菌素B_(1)残留的分析方法。方法样品采用乙腈-水-甲酸(84:15:1,V:V:V)提取、经过Oasis Prime HLB固相萃取柱净化后,WatersBEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.8μm)分离,在正离子模式下,以5 mmol/L乙酸铵水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,在多反应监测模式下进行定性定量检测分析,基质匹配标准曲线外标法定量。结果BEA和4种恩镰孢菌素在各自的线性范围内具有良好的线性关系(r^(2)>0.999),方法检出限为0.02~0.05μg/kg,定量限为0.05~0.15μg/kg。按线性范围的最低浓度、中浓度和最高浓度3个水平进行加标回收实验,燕麦粉和小米粉的平均回收率分别是83.6%~105.2%和88.5%~104.2%,相对标准偏差分别为1.3%~8.2%和1.3%~3.2%(n=6)。对北京市采集的10份燕麦粉和10份小米粉样品进行检测,5种化合物均有不同程度检出,其中,恩镰孢菌素B和恩镰孢菌素B_(1)的检出率为100%。结论本方法简单快速、准确性好、灵敏度高,可以实现对燕麦粉和小米粉中白僵菌素和恩镰孢菌素进行准确的定性定量。

不同炮制白僵蚕中草酸铵和白僵菌素含量与外观性状的相关性研究

为探究不同炮制白僵蚕中草酸铵和白僵菌素含量与外观性状的相关性,采用HPLC-UV法分别测定不同批次白僵蚕与炒僵蚕中草酸铵和白僵菌素的含量,利用SPSS 26.0软件将白僵蚕和炒僵蚕的单体质量、长度、直径、丝腺环数与草酸铵和白僵菌素含量进行相关性分析。结果表明,白僵蚕中草酸铵和白僵菌素含量呈显著正相关,且这两个成分含量与白僵蚕外观性状也均呈显著正相关;炒僵蚕中白僵菌素含量与外观性状呈显著正相关,而草酸铵含量与白僵菌素含量及各外观性状指标均无相关关系。该结果可为白僵蚕、炒僵蚕饮片质量评价提供参考,也可为炒僵蚕炮制工艺的规范提供线索。

冷诱导液液萃取-分散固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法同时测定鸡蛋中白僵菌素和4种恩镰孢菌素残留

新型生物毒素白僵菌素(BEA)和恩镰孢菌素(ENNs)是由镰刀菌种产生的有毒代谢产物,主要污染谷物及其制品,会威胁人类健康,因此受到人们越来越多的关注。该工作建立了冷诱导液液萃取-分散固相萃取净化-超高效液相色谱-串联质谱法(CI-LLE-DSPE-UPLC-MS/MS)同时测定鸡蛋中白僵菌素和4种恩镰孢菌素残留的分析方法。以乙腈-水-乙酸(79∶20∶1,v/v/v)为提取溶剂,采用冷诱导液液萃取与分散固相萃取净化相结合的方法进行样品处理,同时,对影响待测物提取与净化效率的提取溶剂、冷冻萃取温度与时间、净化剂用量等因素和色谱条件进行了优化。样品经20 mL提取液涡旋提取20 min,放入-40℃冰箱静置30 min后,取2 mL上层溶液经70 mg C18粉末净化,离心,上清液于40℃浓缩至近干,残留物用1 mL 80%(v/v)乙腈水溶液溶解,进样分析。以乙腈与5 mmol/L甲酸铵溶液作为流动相进行梯度洗脱,经ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm)分离,采用ESI^(+)电离,在多反应监测模式下采集,白僵菌素采用稳定同位素内标法定量,4种恩镰孢菌素采用基质匹配曲线外标法定量。结果表明,5种待测物在0.1~50.0μg/L范围内线性关系良好,相关系数(r^(2))为0.9983~0.9997,该方法的检出限(LOD)为0.05~0.15μg/kg,定量限(LOQ)为0.20~0.50μg/kg。以阴性鸡蛋样品为基质,在低、中、高3个浓度水平(0.5、5.0、25.0μg/kg)下进行加标试验考察方法的准确度与精密度,各待测物的平均回收率为81.1%~106%,相对标准偏差(RSD)为0.27%~9.79%。采用所建立的方法对农村散养鸡蛋与市售鸡蛋进行检测,结果表明,BEA在散养鸡蛋的检出率为30.4%,4种ENNs均未被检出。该方法灵敏度高,稳定性好,回收率高,定量准确,简单易操作,适用于禽蛋食品中白僵菌素与恩镰孢菌素的同时快速测定。

一种安全快速测定僵蚕中白僵菌素含量的高效液相方法研究

目的优化高效液相测定方法及白僵菌素提取的前处理条件,为僵蚕质量控制提供依据。方法样品采用超声处理,色谱柱为Symmetry~C_(18)(4.6mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水溶液(70∶30),流速为1.0ml/min,柱温为30℃,波长215 nm。结果白僵菌素在1.749~81.885μg/ml范围内线性关系良好(R^2=0.9994);回收率为90.41%~96.99%,RSD为2.92%(n=6);17批僵蚕中白僵菌素含量在0~0.3153 mg/g之间,质量差别大。结论该方法安全快速,准确灵敏,重复性好,可用于僵蚕药材质量评价。

16批不同来源僵蚕白僵菌素含量测定及微量元素分析

目的:对16批不同来源僵蚕进行白僵菌素含量测定及微量元素分析.方法:采用HPLC法测定白僵菌素的含量,色谱柱为Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈—水—四氢呋喃(5.5∶3.5∶1)梯度洗脱;检测波长为215 nm,流速1 m L·min^(-1),柱温为常温.用原子光谱吸收法对药材中的Mg、Ca、Fe、Zn、Cu、Mn、Cr、Ni、Pb、Cd 10种元素进行测定.结果:白僵菌素含量在线性范围线性关系良好(r=0.9999),加样回收率为99.19%,不同来源僵蚕的蚕白僵菌素含量差异较大.微量元素测定发现,僵蚕中镁、铅的含量较高.结论:16批不同来源僵蚕白僵菌素质量差别较大,无明显地域特征.但条肥壮,断面充实,明亮,质硬的僵蚕及其炮制品,白僵菌素的含量普遍较高,质量较好,与传统经验鉴别一致.

大孔吸附树脂法分离纯化白僵菌素

采用大孔吸附树脂法分离纯化白僵菌素,对工艺条件进行了优化。结果表明,白僵菌素发酵液乙醇浸泡液经HZ801树脂吸附(上柱液酒精度40%、上柱流速2.0 BV·h^(-1))、80%乙醇解吸、乙酸乙酯萃取、3.0%~5.0%活性炭脱色、异丙醚结晶和重结晶,可得到HPLC含量高于98.5%的精粉。该工艺绿色环保,树脂和有机溶剂均可回收再利用,适合工业化生产。

僵蚕中有效成分白僵菌素的研究进展

目的:调查僵蚕中有效成分白僵菌素(BEA)的研究现状,为BEA的临床应用提供参考。方法:以“白僵菌素”“合成”“药理活性”“检测”“毒性”“临床应用”“Beauverin”“Synthesis”“Pharmacological action”“Detection”“Toxicity”“Clinical application”等为关键词,组合查询建库至2018年12月在中国知网、万方数据、维普网、PubMed、ScienceDirect、Web of Science等数据库中的相关文献,对BEA的合成、药理作用、检测方法、毒性等研究进展进行综述。结果与结论:共检索到相关文献690篇,其中有效文献47篇。BEA是僵蚕有效成分之一,近年来文献报道的BEA合成方式多为生物合成,其中采用不同培养基和培养条件由多种镰刀菌属菌种生物合成的报道最多。BEA在工业应用及实验室研究中表现出多种多样的生物活性,包括杀虫、抗肿瘤、抑菌、抗病毒、抗惊厥、抗结核和抗疟原虫等作用。目前通常采用高效液相色谱法或高效液相色谱-质谱法检测BEA,其中质谱法最低检测限可达到10 pg/mL以下,方法灵敏,特异性高。BEA有免疫毒性和基因毒性,但其毒动学行为研究很少。BEA作为一个有潜力的药物,有可能用于癌症或病毒和细菌感染;但基于其免疫毒性和基因毒性,可考虑将其作为先导化合物进行结构改造和活性机制研究。

UHPLC-Q-TOF-MS法测定僵蚕及其制剂中白僵菌素

目的建立UHPLC-Q-TOF-MS法测定僵蚕及其制剂中白僵菌素的含有量。方法僵蚕80%甲醇提取物的分析采用Agilent Eclipse Plus C18 UHPLC色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm);流动相乙腈-水(70∶30);体积流量0.3 mL/min;柱温45℃;检测波长215 nm。结果白僵菌素在0.0952~47.6μg/mL范围内线性关系良好(R2=0.9992),平均加样回收率为98.7%,RSD为3.2%。13批药材中白僵菌素质量分数为0.045~0.723 mg/g,3种制剂中为0.015~0.026 mg/g,炮制品中其含有量低于生品中。结论该方法灵敏度高,选择性好,可用于僵蚕药材及其制剂的质量控制。

高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中恩镰孢菌素和白僵菌素

建立高效液相色谱-串联质谱法测定果汁中恩镰孢菌素和白僵菌素检测方法.样品用V(乙腈):V(水):V(甲酸)混合液(79:20:1)提取,QuEChERS填料包(4 g无水MgSO_(4)、0.5 g无水CH_(3)COONa和0.5 g NaCl)盐析,100 mg C18净化,经过液相色谱柱分离,2 mmol·L^(-1)乙酸铵水溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,由ESI源扫描,多反应监测模式,基质外标法定量分析.该方法中,恩镰孢菌素A(ENA)、恩镰孢菌素B(ENB)和白僵菌素(BEA)在0.1~200μg·L^(-1)以及恩镰孢菌素A1(ENA1)和恩镰孢菌素B1(ENB1)在1~200μg·L^(-1)范围内线性关系良好,且线性相关系数(R^(2))均大于0.9989,相对标准偏差范围为1.7%~11.7%.3个不同加标浓度的添加回收率为88.0%~114.1%,样品检测限为1.5μg·kg^(-1),样品定量限为5μg·kg^(-1).本文建立的方法简单、高效、准确,满足果汁中恩镰孢菌素和白僵菌素污染筛查需求.

产白僵菌素镰孢菌发酵培养基的初步研究

目的本文为找到镰孢菌(Fusarium concentricum)发酵产白僵菌素的适合发酵条件,在固液两种发酵方式下研究了影响白僵菌素合成的关键因素。方法对固态发酵培养基的含水量、液态发酵培养基组分以及培养条件进行了考察。结果发现固态发酵培养基含水量为1mL水/g玉米渣时白僵菌素产量最高。经初步优化后的液态发酵培养基为(g/L):淀粉40;酪蛋白胨10;NaNO31.5;MgSO4·7H2O 0.05;KH2PO44;KCl 1,摇床转速为200r/min。结论液态发酵条件下较高溶氧在一定程度上能促进白僵菌素的合成,但是剪切力对菌体生长及白僵菌素合成有不利影响。

僵蚕及其附属物中白僵菌素含量研究

目的建立HPLC法测定僵蚕及其附属物中白僵菌素的含量。方法采用Diamonsil C;(200 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(75∶25)为流动相,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为215 nm,柱温为30℃。结果白僵菌素在0.01~0.12 mg·mL^(-1)范围内线性关系良好(R^(2)=0.9999)。从整体上看,不同产地僵蚕中白僵菌素含量有一定差异,以云南最高,广西最低;僵蚕附属物(蚕砂、外粉)含有少量的白僵菌素。结论所建立的方法准确、简便、重复性良好,可用于僵蚕的质量评价。僵蚕的质量参差不齐,僵蚕附属物有作为生物防治的潜力。

白僵菌素对支气管哮喘模型小鼠气道炎症的影响及其机理研究

目的:观察白僵菌素对支气管哮喘模型小鼠气道炎症的抑制作用并探索其机制。方法:以卵蛋白致敏建立支气管哮喘小鼠模型,随机分为模型组、地塞米松组和白僵菌素低、中、高剂量组,另取正常小鼠作为正常组。在小鼠致敏21d后,进行激发,诱发哮喘,并予相应药物治疗5d,正常组与模型组予生理盐水。治疗后所有小鼠取血留存,ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-12(IL-12)。每组小鼠行左肺灌洗,收集灌洗液行细胞计数。取右肺,行病理学和Western Blot检测Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达。结果:模型组病理学检查发现气道和肺泡炎细胞浸润,肺组织内成纤维细胞浸润,肺泡灌洗液多种炎症细胞计数增加。白僵菌素能显著降低支气管哮喘模型小鼠肺泡灌洗液中的炎症细胞计数,显著降低血清TNF-α和IL-12含量,且表现出剂量依赖性。同时白僵菌素能明显减轻支气管哮喘模型小鼠肺组织的炎性细胞浸润和肺气肿。Western Blot检测发现白僵菌素各剂量组小鼠肺组织中促凋亡因子Bax和Caspase-3表达增加,而抑制凋亡的Bcl-2表达减少。结论:白僵菌素对支气管哮喘模型小鼠的气道炎症有抑制作用,能减少炎症因子的表达,并可能促进炎症细胞凋亡。

白僵蛹中白僵菌素的分离和鉴定

从白僵蛹中分离得一白色结晶,经理化常数和光谱比较,鉴定为环酯肽类化合物白僵菌素。

韩国动物饲料中出现镰刀菌（霉）属的白僵菌素

研究的目的是确定镰刀菌毒素白僵菌在动物饲料中出现和污染的程度。2006-2007年，对整个韩国的143个饲料化合物样本和52个饲料原料样本采用高效液相色谱法进行白僵菌素水平分析。

香蕉枯萎病菌新毒素——白僵菌素的鉴定

调查并分离了广东、海南、广西、福建和云南等香蕉枯萎病疫区的一批病原菌样本。利用高效液相色谱—电喷雾离子阱质谱(HPLC-ESI-MS)法对所分离的28个Fusarium oxysporum f.sp.cubense菌株的次生代谢产物进行初步分析。发现了分子量为179D的镰刀菌酸及分子量约为783D的未知产物;利用1H-NMR对一株4号生理小种的未知产物进行了结构测定,结果表明该化合物为白僵菌素。离体试验表明白僵菌素能够导致香蕉假茎腐烂。

固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定大米粉和小麦粉中白僵菌素和恩镰孢菌素

目的建立大米粉和小麦粉中白僵菌素、恩镰孢菌素A、恩镰孢菌素A1、恩镰孢菌素B、恩镰孢菌素B1的超高效液相色谱-串联质谱分析方法。方法样品用乙腈-水提取、Oasis Prime HLB固相萃取柱净化,Waters BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)分离,电喷雾电离正离子模式下多反应监测进行测定,同位素内标法和基质匹配标准曲线外标法定量。结果白僵菌素和4种恩镰孢菌素在0.1~50.0 ng/mL范围内具有良好的线性关系(r>0.999)。大米粉和小麦粉中白僵菌素和4种恩镰孢菌素的平均回收率分别是96.4%~105.4%和99.1%~109.2%,相对标准偏差分别为1.01%~7.42%和1.09%~9.69%(n=6),检出限为0.03μg/kg,定量限为0.1μg/kg,基质效应分别为72.7%~99.3%和60.8%~100.4%。面粉中白僵菌素和恩镰孢菌素污染水平高于大米,恩镰孢菌素B在小麦粉和大米粉中的检出率最高,含量分别为0.03~9.57μg/kg和0.03~0.56μg/kg,检出率分别为98.5%和36.4%。结论本方法简单快速、准确性好、灵敏度高,可用于小麦粉和大米粉中白僵菌素和恩镰孢菌素的测定。

2017年山东省部分地区玉米及其制品中白僵菌素和恩镰孢菌素污染调查

目的调查山东省部分地区2017年产玉米及其制品中六酯肽类真菌毒素,包括白僵菌素(BEA)和恩镰孢菌素(ENNs)中恩镰孢菌素A(ENA)、恩镰孢菌素A_1(ENA_1)、恩镰孢菌素B(ENB)和恩镰孢菌素B_1(ENB_1)的污染情况。方法从山东省东部、西部、南部和中部四个地区采集2017年产玉米及其制品158份,样品经乙腈-水(85∶15,V/V)提取、固相萃取柱净化后高效液相色谱-串联质谱测定5种毒素的含量。结果 BEA是158份样品中的主要污染毒素,其阳性率和平均值分别为82.3%(130/158)和65.26μg/kg,4种ENNs的阳性率和平均值分别为ENA:55.1%(87/158)和0.28μg/kg,ENA_1:8.2%(13/158)和0.62μg/kg,ENB:3.8%(6/158)和1.19μg/kg,ENB_1:56.3%(89/158)和0.13μg/kg。玉米粒、玉米粉和玉米碴中5种毒素的平均值分别为BEA:46.96、86.45和0.17μg/kg,ENA:0.13、0.35和0.06μg/kg,ENA_1:0.14、0.76和0.00μg/kg,ENB:0.23、2.15和0.00μg/kg,ENB_1:0.21、0.15和0.08μg/kg。东部地区样品中BEA的污染最严重,其阳性率和平均值分别为87.0%(87/100)和95.75μg/kg;除南部地区ENA和ENB_1的阳性率较高(均为91.3%,21/23)外,4种ENNs在其他3个地区阳性率均较低,且4种ENNs在4个地区的平均值均低于BEA。结论山东省部分地区玉米及其制品可受5种六酯肽类真菌毒素的污染,BEA的污染水平高于4种ENNs的污染水平;毒素污染存在种类和地域差异,建议在山东省开展大范围监测的基础上,重点监测东部沿海地区玉米及其制品中BEA的含量。

食品中白僵菌素和恩镰孢菌素的污染情况及分析方法研究进展

介绍了食品中白僵菌素(beauvericin,BEA)和包括恩镰孢菌素A(enniatin A,ENA)、恩镰孢菌素A_1(enniatin A_1,ENA_1)、恩镰孢菌素B(enniatin B,ENB)、恩镰孢菌素B_1(enniatin B_1,ENB_1)在内的4种主要的恩镰孢菌素(enniatins,ENNs)的分类、毒性和分析方法,尤其是前处理方式和各方法定量限的研究进展。综述了西班牙、摩洛哥、意大利、日本等部分国家食品中BEA和4种ENNs的污染状况以及这5种毒素与其他主要真菌毒素的协同污染情况。提出了建立针对复杂食品基质中BEA和ENNs测定的高效液相色谱-串联质谱法。

重要产毒镰刀菌合成白僵菌素和恩镰孢菌素研究进展

白僵菌素(beauvericin,BEA)和恩镰孢菌素(enniatins,ENNs)是由镰刀菌属的多种真菌产生的六酯肽类真菌毒素,该类毒素对上皮细胞、免疫细胞、卵巢细胞等具有很强的毒性作用。本文主要针对能产生BEA和ENNs的重要产毒镰刀菌的形态学特征、分子遗传学特征以及影响BEA和ENNs产生的环境条件如温度、底物等因素进行概述。重点阐述了产毒镰刀菌在两类毒素合成酶的基因水平和氨基酸水平的差异及影响产毒等主要因素,为BEA和ENNs及其产毒镰刀菌的预防和控制提供理论依据。

玉米及其制品和小麦及其制品中白僵菌素和恩镰孢菌素的高效液相色谱-串联质谱检测方法的建立

目的建立了玉米及其制品和小麦及其制品中白僵菌素(beauvericin,BEA)、恩镰孢菌素A(enniatin A,ENA)、恩镰孢菌素A_1(enniatin A_1,ENA_1)、恩镰孢菌素B(enniatin B,ENB)和恩镰孢菌素B_1(enniatin B_1,ENB_1)的高效液相色谱-串联质谱检测方法。方法样品经乙腈-水(85∶15,V/V)提取、室温静置、固相萃取柱净化后,以2 mmol/L乙酸铵水-乙腈作为流动相,采用电喷雾电离正离子多反应监测模式进行检测。结果该方法对玉米及其制品和小麦及其制品中BEA和4种恩镰孢菌素(ENNs)的检出限范围分别为0.01~0.12和0.02~0.21μg/kg,定量限范围分别为0.02~0.44和0.05~0.68μg/kg,平均加标回收率范围分别为91.6%~149.7%和100.5%~128.2%,基质抑制或增强效应分别为88.0%~101.5%和55.8%~106.5%,且BEA和4种ENNs在所测基质中线性关系和精密度良好,相关系数均>0.99,相对标准偏差均<15%。结论所建立的方法操作简便、灵敏度高、准确性好,可用于玉米及其制品和小麦及其制品中BEA和4种ENNs的测定。