液相色谱-串联质谱法测定饲料中的血根碱和白屈菜红碱

研究旨在建立液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS)检测饲料中血根碱和白屈菜红碱含量的分析方法。饲料样品用15 mL、0.2%盐酸乙腈溶液超声提取2次,每次20 min,提取液使用HLB固相萃取柱净化、微孔滤膜过滤后进行液相色谱-串联质谱法测定,用外标法定量,对检测方法进行验证。结果显示:在质量浓度为1~100 ng/mL范围内其线性相关系数≥0.999,定量限为0.005 mg/kg,回收率为91.9%~101.0%,相对标准偏差为2.00%~7.96%。表明所建立的液相色谱-串联质谱法结果准确、重复性好,适用于饲料中血根碱和白屈菜红碱的测定。

白屈菜红碱对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响

目的:探讨白屈菜红碱(CHE)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的抑制作用,阐明其相关作用机制。方法:体外培养SKOV3细胞,分为对照组和2.5、5.0、10.0、20.0及40.0μmol·L^(-1)CHE组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率。体外培养SKOV3细胞,分为对照组、转移生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组,采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数,Westren blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平,免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin荧光强度。结果:MTT法,与对照组比较,5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L^(-1)CHE组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞迁移率明显升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞迁移率明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。Westren blotting法,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光染色,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin荧光强度明显降低,N-cadherin荧光强度明显升高;与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin荧光强度明显升高,N-cadherin荧光强度明显降低。结论:CHE能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

白屈菜红碱抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌作用机制研究

本研究旨在阐明白屈菜红碱(chelerythrine,CHE)抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)活性及探究其抗菌机制。通过测定最小抑菌浓度及最小杀菌浓度分析CHE对MRSA的抗菌活性;检测CHE对MRSA细胞壁及细胞膜的完整性、通透性,结合电镜观察MRSA细胞形态和超微结构,从而对CHE抗菌机制进行初步分析;检测CHE对MRSA菌株活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平与ROS相关因子造成的影响,并结合荧光定量及转录组学技术进一步验证CHE抗菌机制。结果表明,CHE对MRSA的最小抑菌浓度为6.25μg·mL^(-1),最小杀菌浓度为12.5μg·mL^(-1)。CHE可通过破坏MRSA菌株细胞细胞壁及细胞膜,发挥抗菌作用。且CHE处理后可抑制MRSA呼吸链SdhABC等基因表达,从而阻断呼吸链电子传递,使ROS水平升高从而发挥抗菌作用。综上,本研究对CHE抗MRSA的抗菌机制进行探究,为临床防治MRSA感染提供新参考。

基于HPLC检测市售博落回注射液中血根碱和白屈菜红碱的成分含量

试验旨在评估博落回注射剂产品的质量。试验采用高效液相色谱法,建立了博落回注射剂产品中血根碱和白屈菜红碱的同步测定方法。采用Agilent色谱柱,流动相为乙腈-0.1%磷酸,进行梯度洗脱,流速为1.0 mL/min,柱温30℃,检测波长为270 nm,进样量5μL。结果显示,博落回注射液中血根碱和白屈菜红碱的HPLC测定方法专属性高,线性范围良好,重复性较好。血根碱和白屈菜红碱精密度RSD分别为0.45%、0.09%,稳定性的RSD分别为0.60%和0.39%,回收率范围分别为99.83%~101.79%、103.47%~105.56%。研究表明,该方法稳定可靠,具有较高的精密度和准确性,可用于评价市售博落回注射液的质量。

RP-HPLC法同时测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量

目的 :测定小果博落回中血根碱和白屈菜红碱的含量。方法 :反相高效液相色谱法。色谱柱 :KromasilC18柱 ,流动相 :乙腈 0 .1%磷酸水溶液 ( 2 5∶75 ) ,检测波长 :2 70nm ,流速 1.0ml·min-1。结果 :白屈菜红碱、血根碱的回收率分别为90 .2 % ,92 .8% ;RSD分别为 1.5 % ,2 .4 %。结论 :为测定小果博落回中生物碱含量提供了准确、灵敏、可靠的分析方法。

RP—HPLC法同时测定白屈菜药材中血根碱、小檗碱和白屈菜红碱的含量

目的:建立白屈菜药材的质量标准。方法:采用高效液相色谱法,用 Diamonsil C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-1%三乙胺水溶液(25:75,三乙胺水溶液用磷酸调 pH 3)为流动相,流速:1 mL·min^(-1),检测波长263 nm,柱温:30℃。结果:血根碱在60～1200μg范围内线性良好,r=0.9996,平均加样回收率(n=3)为96.6%～99.9%,RSD 为0.6%～2.0%;小檗碱在30～600μg范围内线性良好,r=0.9999,平均加样回收率(n=3)为99.0%～104.1%,RSD 为0.8%～1.3%;白屈菜红碱在100～2000μg范围内线性良好,r=0.9998,平均加样回收率(n=3)为97.3%～100.8%,RSD 为0.7%～1 4%。结论:本试验同时测定白屈菜药材中血根碱、小檗碱、白屈菜红碱的含量,方法准确,灵敏,可靠。

白屈菜中白屈菜红碱的提取及抑菌活性

对白屈菜中白屈菜红碱的含量和提取工艺进行研究,通过单因素试验和正交试验确定超声波法辅助提取最佳工艺:以60%乙醇作为溶剂,料液比1:20(g/ml),在超声波功率为700W的条件下超声波辅助提取35min。白屈菜红碱提取物对甜瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、茄子黄萎病菌、黄瓜枯萎病菌、辣椒炭疽病菌、葡萄炭疽病菌、草莓灰霉病菌、番茄灰霉病菌和西葫芦菌核病菌等植物病原真菌菌丝的生长均具一定抑制作用。

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸含量的影响

目的观察白屈菜红碱对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠肝脏病理学和肝脏羟脯氨酸(Hpy)含量的变化。方法采用四氯化碳联合营养控制和饮用10%酒精复合法制备SD大鼠肝纤维化模型,在实验第4周末,肝纤维化模型建立(2期)成功,然后应用不同剂量的白屈菜红碱和INF-γ处理。在给药8周后,处死所有大鼠,并取肝脏组织,采用HE、VG及Massion染色观察肝脏组织病理学形态的变化,同时采用改进的氯胺-T测定法检测肝脏Hyp含量。结果各剂量白屈菜红碱组肝纤维化半定量计分和肝脏的Hpy含量明显低于病理模型组(P<0.01);大中剂量白屈菜红碱组与小剂量组比,大鼠肝脏组织纤维化半定量计分及肝组织Hyp含量有明显下降,差异显著(P<0.01)。结论白屈菜红碱可以改善肝纤维化大鼠肝组织纤维化程度,降低肝组织Hyp含量,具有抗化学性肝纤维化作用。

白屈菜红碱对变形链球菌表面疏水性及黏附作用的影响

目的:测定白屈菜红碱对变形链球菌表面疏水性及黏附作用的影响,研究其对变形链球菌黏附的作用机制。方法:将白屈菜红碱对倍稀释为不同浓度的溶液,浓度范围为24.4～781.3μg/ml。采用微生物黏着碳氢化合物法(MATH)测定白屈菜红碱对变形链球菌的细胞表面疏水性,并测定不同浓度的白屈菜红碱溶液对变形链球菌在玻璃表面黏附作用的影响。使用SPSS13.0统计软件包对结果进行处理,各浓度组总体均数之间比较采用单因素方差分析。结果:变形链球菌表面疏水性随白屈菜红碱溶液浓度的升高而逐渐下降,各浓度实验组与对照组均数之间均具有高度显著性差异(P<0.01),24.4～195.3μg/ml4个浓度组之间均无显著性差异(P>0.05);变形链球菌对玻璃表面的黏附抑制率随白屈菜红碱浓度的升高逐渐增高,195.3μg/ml和390.6μg/ml2个浓度组与对照组和其余浓度组之间均有高度显著性差异(P<0.01)。结论:白屈菜红碱对变形链球菌细胞表面疏水性和黏附具有抑制作用,提示其具有良好的防龋应用前景。

白屈菜红碱对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的影响

目的:研究白屈菜红碱对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖合成的影响。方法:采用二倍稀释法,用含2%蔗糖的脑心浸萃液肉汤琼脂(BHI)液体培养基,将白屈菜红碱稀释为从390.6μg/ml到24.4μg/ml共计5个浓度的溶液,以BHI液体培养基作为阴性对照组。加入变形链球菌菌液,厌氧培养24h后,将培养物离心,收集上清液,分为2份。一份提取葡糖基转移酶,采用考马斯亮蓝法和Somogyi法分别测定总蛋白和还原糖含量,计算酶活性和比活力大小;另一份上清液采用蒽酮法测定水不溶性多糖的含量。实验结果采用SPSS13.0软件包进行数据处理,总体均数之间的比较采用单因素方差分析,采用Pearson相关检验进行两组样本之间的相关分析。结果:随着白屈菜红碱溶液浓度的升高,葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量逐渐降低,各组总体均数间均具有高度显著性差异(P<0.01),葡糖基转移酶各实验组与对照组酶活性及比活力之间均有高度显著性差异(P<0.01);除24.4μg/ml浓度组外,各实验组与对照组水不溶性多糖含量也均有高度显著性差异(P<0.01)。葡糖基转移酶活性和水不溶性多糖含量之间呈正相关关系(r=0.883,P<0.01)。结论:白屈菜红碱对变形链球菌葡糖基转移酶和细胞外水不溶性多糖的合成具有显著抑制作用。

白屈菜红碱逆转人乳腺癌多药耐药的机制

目的研究蛋白激酶Cα(PKCα)抑制剂白屈菜红碱(CH)逆转人乳腺癌细胞多药耐药的机制。方法应用RT-PCR和Western blot方法,检测CH和佛波醇酯(PMA)作用于乳腺癌耐药细胞系MCF-7Taxol后,细胞中多药耐药相关基因ABCG2、ABCC1、MDR1和P糖蛋白表达的变化。采用MTT方法,分析给予低剂量CH和PMA(<IC20)后,MCF-7Taxol细胞对紫杉醇以及阿霉素耐药性的变化。结果 RT-PCR和Western blot结果表明:CH可以下调MDR1转录水平(P<0.05),降低P糖蛋白的表达(P<0.05);PMA在提高MDR1转录水平(P<0.05)同时增加P糖蛋白的含量(P<0.05)。MTT分析发现:0.1μmol/L的CH预处理的MCF-7Taxol对紫杉醇和阿霉素耐药性分别降低为加药前的0.17和0.27倍(P<0.01);而使用0.1μmol/L的PMA预处理后,MCF-7Taxol对紫杉醇和阿霉素耐药性分别增加了3.37和2.92倍(P<0.01)。使用CH和PMA处理对MCF-7的作用却不显著(P>0.05)。结论 CH可以逆转人乳腺癌细胞的多药耐药性,其机制可能与抑制PKCα活性,下调MDR1基因转录水平,降低其表达产物P-gp的水平有关。

白屈菜红碱对肝纤维化小鼠TGF-β/Smads信号通路的影响

目的:探讨白屈菜红碱对四氯化碳(CCl_4)诱导的肝纤维化损伤小鼠的保护作用及对转化生长因子β(TGF-β)/Smads信号通路的影响。方法:50只C57BL/6N小鼠随机分成正常对照组、模型组及白屈菜红碱低剂量(10 mg·kg^(-1)·d^(-1))、中剂量(20 mg·kg^(-1)·d^(-1))和高剂量(40 mg·kg^(-1)·d^(-1))3个剂量组,每组10只。采用腹腔注射CCl_4和橄榄油混合液8周诱导小鼠肝纤维化模型,白屈菜红碱组于第5周开始灌胃给药。第14周后处死小鼠,观察白屈菜红碱各剂量组干预后小鼠的肝指数,苏木精-伊红染色和苦味酸-酸性品红染色法观察小鼠肝组织的病理改变及肝纤维化的程度;采用分光光度计和酶标仪测定血清中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、透明质酸(HA)和肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量;RT-q PCR检测TGF-β1、Smad3、Smad4和Smad7的mRNA表达;Western blot检测TGF-β1、Smad4和Smad7的蛋白表达。结果:与正常对照组比较,模型组肝纤维化的病理改变明显,肝指数、AST、ALT、HA和Hyp均显著升高(P<0.05);TGF-β1、Smad3和Smad4的mRNA表达显著上调,Smad7的mRNA表达显著下调(P<0.05);TGF-β1和Smad4的蛋白表达显著上调,Smad7的蛋白表达显著下调(P<0.05);与模型组比较,白屈菜红碱不同剂量给药组均抑制上述指标的改变(P<0.05)。结论:白屈菜红碱能够抑制CCl_4诱导的小鼠肝纤维化,其机制可能与TGF-β/Smads信号通路有关。

白屈菜红碱对铜绿微囊藻生长和光合系统的影响

为了阐明白屈菜红碱(Chelerythrine)对铜绿微囊藻(Microcystis aeruginosa)生长及光合系统的影响,研究了白屈菜红碱胁迫下铜绿微囊藻M.aeruginosa NIES-843生长、细胞色素含量及叶绿素光诱导荧光动力学变化。结果显示,当白屈菜红碱浓度≥10μg/L时,M.aeruginosa NIES-843的生长受到显著抑制。通过线性回归分析,白屈菜红碱对M.aeruginosa NIES-843生长50%抑制浓度(EC50)为(30.62±1.32)μg/L。当白屈菜红碱浓度为160μg/L时,M.aeruginosa NIES-843单位细胞内叶绿素a(Chl.a)和类胡萝卜素含量均显著低于对照。Chl.a光诱导荧光动力学分析结果显示,白屈菜红碱胁迫下单位反应中心吸收的光能(ABS/RC)、单位反应中心捕获的用于还原QA的能量(TR0/RC)及单位反应中心捕获的用于电子传递的能量(ET0/RC)均受到显著抑制。光合系统Ⅱ(PSⅡ)能量分配比率参数分析结果显示,白屈菜红碱能显著抑制光合系统反应中心电子供体侧电子传递。

基于网络药理学和分子对接技术分析白屈菜红碱抗乳腺癌的作用机制

目的利用网络药理学和分子对接技术研究白屈菜红碱抗乳腺癌的作用机制。方法通过Swiss Target Pretion数据库预测白屈菜红碱作用的靶点集,Mala Cards数据库收集乳腺癌的相关靶点集,取疾病与药物的靶点交集作为白屈菜红碱抗乳腺癌的潜在作用靶点;应用STRING数据库构建靶点蛋白相互作用网络(PPI),并进行拓扑网络分析得到白屈菜红碱抗乳腺癌的核心靶基因;通过Metascape数据库进行基因本体论功能(GO)和京都基因与基因组百科全书通路(KEGG)富集分析;使用Kaplan-Meier Plotter数据库分析核心靶基因的表达与乳腺癌生存期的相关性;借助AutoDock Vina将核心靶基因与白屈菜红碱进行分子对接。结果通过靶点交集获得白屈菜红碱抗乳腺癌的靶点37个,随后经过拓扑分析得到关键靶点8个;GO富集涉及317个条目;KEGG通路富集分析得到80个条目,主要涉及PI3K/AKT信号通路、VEGF信号通路、ErbB信号通路等;生存期分析结果显示,CHEK1、PIK3CA、mTOR和PTGS2基因的表达量与乳腺癌患者的生存期具有相关性;分子对接结果显示,白屈菜红碱与关键靶点具有较好的结合活性。结论白屈菜红碱可能通过PI3K/AKT信号通路发挥抗乳腺癌的作用,并具有发展成为乳腺癌临床用药的潜力。

血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷离子对化合物体外抗菌活性和急性毒性研究

目的对血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷2个离子对化合物进行体外抗菌、急性毒性研究。方法采用试管稀释法和琼脂平板扩散法测定血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷2个离子对化合物的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并进行急性毒性试验。结果血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷2个离子对化合物的MIC和MBC与黄芩苷、血根碱和白屈菜红碱相比降低,2个离子对化合物都无明显毒性。结论血根碱-黄芩苷、白屈菜红碱-黄芩苷离子对化合物体外抗菌活性增强,毒性减小,为新型抗菌药物的筛选奠定了基础。

白屈菜红碱抗肿瘤机制研究进展

白屈菜红碱是传统天然药用植物白屈菜的主要有效成分之一,具有显著的抗肿瘤活性。通过总结相关研究文献,对近年来白屈菜红碱抗肿瘤活性作用机制的研究成果做一综述,为白屈菜红碱抗肿瘤活性在临床上的开发利用提供科学的理论依据。

血根碱、白屈菜红碱衍生物的合成与体外抗HBV活性研究

目的合成季铵类苯并菲啶生物碱血根碱(1)和白屈菜红碱(2)的衍生物,评价其体外抗HBV活性,初步探讨抗HBV活性。方法以血根碱和白屈菜红碱为原料,通过结构修饰获得衍生物,采用Hep G2.2.15细胞模型评价衍生物对HBsAg和HBeAg分泌抑制活性和HBV DNA复制的抑制活性。结果血根碱和白屈菜红碱对HBsAg、HBeAg和HBV DNA复制具有较高的抑制活性,但细胞毒性较高。氧化白屈菜红碱(6)对HBV DNA的复制具有一定的抑制作用(IC50=0.75 mmol·L-1),细胞毒性较白屈菜红碱明显降低(CC50>3.0 mmol·L-1)。6-乙氧基二氢血根碱(7)和6-乙氧基二氢白屈菜红碱(8)对HBsAg和HBeAg和HBV DNA复制具有一定的抑制活性。结论季铵类苯并菲啶生物碱具有显著的体外抗HBV活性,烯胺正离子结构单元对化合物的抗HBV活性产生重要的影响。

白屈菜红碱对肝纤维化大鼠肝脏TGF-β1和α-SMA表达的影响

目的:探讨白屈菜红碱对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝脏组织转化生长因β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响.方法:用四氯化碳皮下注射,同时联合营养控制和饮用100mL/L乙醇复合法制备SD大鼠肝纤维化模型,在实验第4周末,肝纤维化模型建立(2期肝纤维化形成),然后用低、中、高剂量白屈菜红碱(0.2、0.6、2.0g/L)治疗,同时实验设立病理模型组、空白对照和阳性对照(INF-γ)组.给药8wk后,采用免疫组织化学检测各组大鼠肝脏组织TGF-β1和α-SMA的表达.结果:各剂量白屈菜红碱组肝脏TGF-β1和α-SMA表达明显低于病理模型组(TGF-β1:6.08±2.35,4.31±2.10,4.7±1.70 vs 9.33±3.08;α-SMA:3.75±1.76,3.23±1.42,3.20±1.17 vs 6.67±2.29,均P<0.01),而与INF-γ组比较无明显差异(4.23±2.24,3.38±1.39,均P>0.05).结论:白屈菜红碱能降低四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型肝脏组织TGF-β1和α-SMA.

白屈菜红碱对人胃癌BGC823细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用

目的观察白屈菜红碱(che lerythrine)对人胃癌BGC 823细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。方法通过M TT实验检测白屈菜红碱对细胞生长的抑制率,AO/EB的荧光核染色观察细胞形态,DNA琼脂糖凝胶电泳及流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。结果M TT实验显示白屈菜红碱抑制BGC 823细胞的生长呈时间、浓度依赖的方式,显微镜下观察到AO/EB的荧光核染后凋亡的细胞,琼脂糖凝胶电泳出现DNA的片段化,在白屈菜红碱质量浓度为1.5、2.0、2.5μg/mL且培养24 h时,流式细胞仪可以检测到凋亡峰,且细胞被阻滞在S和G2/M期。结论白屈菜红碱能有效地诱导BGC 823细胞凋亡,而且其诱导的凋亡具有周期依赖性。

白屈菜红碱对变链菌产酸抑制作用的实验研究

目的:观察白屈菜红碱对变链菌产酸的影响,为龋病预防提供实验基础。方法:采用二倍稀释法用BHI液体培养基将白屈菜红碱稀释为从390.6μg/ml到24.4μg/ml5个不同浓度的溶液,以不含白屈菜红碱溶液的BHI液体培养基作为对照组,将pH值均调定为7.4,按菌液与白屈菜红碱溶液1∶10的体积比接种变链菌,测定在不同培养时间段各浓度白屈菜红碱溶液实验前后pH值的变化值(⊿pH)。实验结果采用SPSS11.0统计软件进行数据处理,总体均数之间的比较采用单因素方差分析。结果:随着白屈菜红碱浓度的升高,各浓度组⊿pH呈逐渐减少的趋势。除24.4μg/ml浓度组外,各个浓度组与对照组的⊿pH均有显著性差异(P<0.05),除3h的各组及24h和48h的24.4μg/ml和48.8μg/ml组以外,各浓度组在各个时间段与对照组之间均有显著性差异(P<0.05),随着细菌培养时间的延长,实验前后各溶液△pH呈逐渐增高的趋势。与对照组相比,不同浓度的白屈菜红碱溶液产生最大⊿pH差值的时间不同,浓度越高则达到最大⊿pH差值的时间越长。结论:白屈菜红碱对变链菌代谢产酸具有显著抑制作用。