白术内酯Ⅲ调控ASCT2介导的线粒体-溶酶体互作诱导肝星状细胞衰老的抗肝纤维化机制研究

目的探究白术内酯Ⅲ诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)衰老抗肝纤维化作用及机制。方法ASCT2 siRNA及白术内酯Ⅲ(40μmol·L^(-1))分别作用于人源肝星状细胞LX2以抑制ASCT2,MTT评估细胞活力,EdU法检测细胞增殖,细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老;Western blot检测LX2细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的变化,激光共聚焦检测LC3自噬流和错误蛋白堆积的变化,同时观察溶酶体标记物LAMP1的荧光情况,以检测溶酶体功能和数量;试剂盒检测LX2细胞内ROS、MDA水平及SOD活力,流式细胞术分析线粒体ROS水平及膜电位。构建CCl 4诱导的小鼠肝纤维化模型,白术内酯Ⅲ20、30、40 mg·kg^(-1)治疗性给药,HE、Masson和Sirius Red染色观察肝脏组织破坏以及胶原沉积情况,Western blot检测各组小鼠P21、P16表达水平,SA-β-Gal染色以及免疫组化分析衰老细胞的情况和来源。结果抑制ASCT2后,LX2细胞活力降低、衰老增加(P<0.01),同时细胞自噬功能增强、溶酶体数量增多但功能减弱,加入氯喹(Chloroquine,CQ)清除溶酶体后,细胞活力和自噬功能增加(P<0.01)。抑制ASCT2后,LX2细胞内MDA、ROS水平上升,SOD活力下降(P<0.01),其中线粒体ROS水平上升及膜电位下降(P<0.01),加入鱼藤酮后,细胞氧化还原稳态和溶酶体数量恢复(P<0.01)。体内实验结果表明,与模型组比较,白术内酯Ⅲ改善肝组织结构破坏以及胶原沉积,诱导肝纤维化小鼠肝组织中的HSC发生衰老,抑制HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,促进衰老指标P16、P21的表达(P<0.01)。结论白术内酯Ⅲ通过抑制ASCT2诱导线粒体ROS增多、膜电位下降,进一步促进HSC自噬功能增强、溶酶体数量增多和功能减弱,从而诱导活化型HSC发生衰老。

白术内酯Ⅲ减轻脑梗死模型大鼠神经功能损伤

目的探究白术内酯Ⅲ(AMLⅢ)对脑梗死大鼠神经功能损伤的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(model,改良Longa线栓法制备大鼠脑梗死模型)、白术内酯Ⅲ低和高剂量组(AMLⅢ-L、AMLⅢ-H)、白术内酯Ⅲ高剂量+EX527(SIRT1抑制剂)组(AMLⅢ-H-EX527)。Zea-Longa评分法评估神经功能,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-1β)水平;试剂盒检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;HE染色观察海马组织病理,TTC染色法检测脑梗死面积,TUNEL染色法检测脑细胞凋亡率;Western blot检测脑组织B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、SIRT1、Nrf2蛋白表达。结果白术内酯Ⅲ干预后可减轻大鼠海马神经组织损伤,降低神经功能评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平、凋亡率、脑梗死面积、MDA水平、Bax蛋白表达,提高SOD和CAT活性、SIRT1、Nrf2、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);EX527可减轻白术内酯Ⅲ对脑梗死大鼠神经功能的保护作用。结论白术内酯Ⅲ可减轻脑梗死模型大鼠的神经功能损伤。

白术内酯Ⅲ调节Hippo/YAP信号通路对非酒精性脂肪肝大鼠肝纤维化的影响

目的探讨白术内酯Ⅲ(ATLⅢ)调节河马(Hippo)/yes-相关蛋白(YAP)信号通路对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝纤维化的影响。方法SPF级SD大鼠36只按照随机数字表法分为control组、NAFLD组、ATLⅢ低、中、高剂量组、阳性对照组(复方鳖甲软肝片),每组6只,除control组外采用高脂饮食构建NAFLD大鼠,灌胃或尾静脉注射相应药物,1次/d,连续4周,检测大鼠血脂及肝功能指标天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT);酶联免疫吸附(ELISA)检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)纤维化指标;HE染色观察肝脏组织病理改变并进行NAFLD活动度评分(NAS);Masson染色观察大鼠肝脏组织纤维化情况;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;Western blot检测肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)及Hippo-YAP信号通路蛋白表达。结果与control组比较,NAFLD组大鼠TC、TG、LDL-C水平、HA、LN、AST、ALT、NAS评分及α-SMA、TGF-β1、TAZ表达水平显著升高,HDL-C水平、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表达显著降低(P<0.05);与NAFLD组比较,ATLⅢ低、中、高剂量组及阳性对照组大鼠TC、TG、LDL-C、HA、LN、AST、ALT、NAS评分及α-SMA、TGF-β1、TAZ表达水平显著降低,HDL-C水平、p-L ATS1/LATS1、p-YAP/YAP表达显著升高(P<0.05)。结论ATLⅢ可能通过抑制Hippo/YAP信号通路的激活,改善NAFLD大鼠肝纤维化。

白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究

目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。

白术内酯Ⅲ纳米粒改善免疫球蛋白A肾病大鼠肠道免疫屏障功能

目的探究白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)对免疫球蛋白A肾病(IgAN)大鼠肠道免疫屏障和肾脏的改善作用,并开发AT-Ⅲ纳米颗粒以期优化其保护作用。方法本研究采用沸石咪唑骨架(ZIF-8)负载AT-Ⅲ制备ZIF-8@AT-Ⅲ纳米粒,通过透射电子显微镜、X射线多晶衍射仪对制备的样品进行形态结构表征。将48只大鼠随机分为正常对照组、IgAN组、IgAN+AT-Ⅲ组、IgAN+ZIF-8@AT-Ⅲ组。使用AT-Ⅲ和ZIF-8@AT-Ⅲ分别处理IgAN大鼠,检测大鼠的肝肾功能、肾小球IgA沉淀以及肠道免疫屏障功能。结果成功制备了具有高载药量、稳定性、pH响应性的ZIF-8@AT-Ⅲ纳米粒。ZIF-8@AT-Ⅲ纳米粒平均粒径为(70.62±1.07)nm,Zeta电位为(-26.46±1.22)mV,载药量为(19.2±1.3)%,包封率为(64.0±0.6)%,且在pH 5.5的环境中快速释放,释放量显著高于pH 7.4环境。AT-Ⅲ和ZIF-8@AT-Ⅲ可缓解肠壁结构的破坏和炎症细胞的浸润,显著下调血清中的二胺氧化酶和D-乳酸含量,上调肠黏膜组织中紧密连接蛋白1和紧密连接蛋白5的表达,改善IgAN大鼠的免疫屏障功能以及肠道通透性,抑制肾小球IgA沉积并缓解肾脏损伤。且ZIF-8@AT-Ⅲ的治疗效果优于AT-Ⅲ。结论AT-Ⅲ通过改善大鼠肠道免疫屏障功能以及肠道通透性减轻IgAN。ZIF-8@AT-Ⅲ是提升AT-Ⅲ对IgAN治疗效果的良好载药系统。

白术内酯Ⅲ调节TGF-β/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的保护作用

目的 探讨白术内酯Ⅲ调节转化生长因子β(TGF-β)/Smad信号通路对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的保护作用。方法 气管内注射博来霉素构建肺纤维化小鼠模型,随机分为模型组、白术内酯Ⅲ低剂量(10mg/kg)组、白术内酯Ⅲ高剂量(20mg/kg)组、白术内酯Ⅲ高剂量(20mg/kg)+SRI-011381(TGF-β激活剂,10mg/kg)组,每组12只,另取12只小鼠气管内注射等剂量生理盐水,设为对照组,分组处理后检测动脉血气指标氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2))并计算氧合指数(OI);HE染色检测各组小鼠肺组织病理形态;天狼星红染色检测各组小鼠肺组织纤维化;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、TGF-β1水平及血清IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平;免疫印迹法检测各组小鼠肺组织胶原生成及TGF-β/Smad通路相关蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组小鼠肺组织发生肺泡间隔明显增厚及炎性细胞浸润等病理损伤,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3显著升高(P<0.05)。与模型组比较,白术内酯Ⅲ低剂量组、白术内酯Ⅲ高剂量组小鼠肺组织病理损伤均减轻,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3均降低(P<0.05);白术内酯Ⅲ高剂量组小鼠肺组织病理损伤相比白术内酯Ⅲ低剂量组进一步减轻,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3进一步降低(P<0.05)。与白术内酯Ⅲ高剂量组比较,白术内酯Ⅲ高剂量+SRI-011381组小鼠肺组织病理损伤加重,肺组织CVF及HYP水平、血清及肺组织IL-1β、TNF-α、TGF-β1水平、CollagenⅠ及CollagenⅢ、TGF-β1蛋白表达、p-Smad3/Smad3升高(P<0.05)。结论 白术内酯Ⅲ可通过抑制TGF-β/Smad信号激活而减轻博来霉素诱导的炎症,进而降低胶原蛋白表达,减轻肺纤维化。

白术内酯Ⅲ调节Shh/Ptch1信号通路对脑卒中大鼠神经功能的影响

目的:探究白术内酯Ⅲ(ATⅢ)调节音猬因子(Shh)/碎片蛋白1(Ptch1)信号通路对脑卒中大鼠神经功能损伤的影响。方法:将60只大鼠随机分为假手术组(sham组)、大脑中动脉闭塞(MCAO)组、ATⅢL组、ATⅢM组、ATⅢH组与ATⅢH+Cyclopamine组,每组10只。ATⅢL组、ATⅢM组、ATⅢH组分别灌胃0.5、1.0、2.0 mg/kg ATⅢ;ATⅢH+Cyclopamine组灌胃2 mg/kg ATⅢ,同时经尾静脉注射10 mg/kg的Shh信号特异性阻断剂环巴胺;sham组和MCAO组灌胃等量的生理盐水。各组大鼠给药每日1次,均连续给药4周。进行平衡木行走实验评分和神经功能缺损评分;检测脑组织含水量;苏木素-伊红(HE)染色和尼氏染色检测脑组织神经元损伤情况;蛋白质免疫印迹法检测脑组织中Shh、Patch1蛋白表达。结果:与MCAO组相比,ATⅢL组、ATⅢM组、ATⅢH组大鼠平衡木实验评分、神经功能缺损评分、脑组织含水量明显降低,尼氏小体及脑组织中Shh、Patch1蛋白表达增加(P<0.05);与ATⅢH组相比,ATⅢH+Cyclopamine组大鼠平衡木实验评分、神经功能缺损评分及脑组织含水量明显升高,尼氏小体数量及脑组织中Shh、Patch1蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:ATⅢ可改善缺血性脑卒中大鼠神经功能缺损,其作用机制和Shh/Ptch1信号通路激活有关。

微管液相色谱法同时测定白术中的白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ和苍术酮

采用微管液相色谱法同时测定白术中的白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ和苍术酮。采用美国Micro-tech Ultra plusⅡTM微管柱通用型二元梯度高效液相色谱仪和Microsil C18微管色谱柱(150mm×1.0mm),以甲醇-乙腈-水(A相体积比为90∶5∶5;B相体积比为55∶5∶40)为流动相,梯度洗脱,流速50μL/min,在220nm波长下检测。在上述色谱条件下,3种组分分离良好,在相应的进样质量范围内具有良好的线性关系。白术内酯Ⅲ、Ⅰ和苍术酮的加标回收率分别为96.86%,97.13%和98.06%;相对标准偏差分别为1.63%,1.31%和0.39%。该法简便、快捷,能够用于白术的质量控制。

炮制对白术中白术内酯Ⅲ含量的影响

应用高效液相色谱法对白术生品及４种炒制白术中白术内酯Ⅲ的含量进行了分析，结果表明麸炒白术中白术内酯Ⅲ含量高于白术生品，且以麸炒黄品含量最高。

白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响

目的通过研究白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响来探讨白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ是否是白术健脾的有效成分。方法采用红色染色淀粉法测定白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对酶活性的影响。结果白术内酯Ⅰ具有增强淀粉酶活性的作用。结论白术内酯Ⅰ可以作为白术健脾运脾的有效成分之一。

白术内酯Ⅲ调节AMPK/SIRT1/NF-κB信号通路对脓毒症大鼠肝损伤的影响

目的探究白术内酯Ⅲ(AtractylideneⅢ,Atr-Ⅲ)对脓毒症大鼠肝损伤的影响以及对腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)/去乙酰化酶1(SIRT1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节作用。方法将60只SPF级SD雄性大鼠分为假手术组、模型组、阳性组、Atr-Ⅲ低、高剂量组、Atr-Ⅲ高剂量+AMPK抑制剂组。检测大鼠血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察肝组织的病理变化;TUNEL染色检测肝细胞凋亡情况;ELISA检测血清白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;检测肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的活性;Western blot检测通路相关蛋白表达情况。结果与假手术组相比,模型组大鼠肝细胞损伤严重,AST、ALT、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、细胞凋亡率、p65 NF-κB磷酸化表达均升高,SOD、CAT活性、AMPK磷酸化、SIRT1蛋白表达均降低(P<0.05);与模型组相比,阳性组和Atr-Ⅲ组大鼠肝细胞形态恢复,AST、ALT、IL-1β、IL-6、TNF-α水平、细胞凋亡率、p65 NF-κB磷酸化表达均降低,SOD、CAT水平、AMPK磷酸化、SIRT1蛋白表达均升高(P<0.05)。AMPK抑制剂BML-275消除了高剂量ATL-Ⅲ对脓毒症大鼠肝损伤的缓解作用。结论Atr-Ⅲ可以激活AMPK/SIRT1信号通路,抑制p65 NF-κB活化,减轻脓毒症大鼠的肝损伤。

反相高效液相色谱法同时测定参苓白术颗粒中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量

目的建立一种同时测定白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的高效液相色谱检测方法，并分析中成药参苓白术颗粒中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量。方法样品采用液-液萃取，以乙腈-水（50∶50）为流动相，流速1.0 ml·min^-1，采用SH IMADZU ODS柱（150 mm×4.6 mm；5μm）色谱柱分离；检测波长220 nm。结果标准曲线线性范围为0.5-50.0μg·ml^-1，线性关系良好（r〉0.99），定量限为0.5μg/ml，回收率98%以上，方法的稳定性、重复性和精密度均较好（RSD〈3%）。结论该法操作简便、快速、灵敏、准确，已经成功地用于中成药参苓白术颗粒中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量测定。

白术内酯Ⅲ对痴呆大鼠学习记忆能力及海马Bcl-2表达的影响

采用大鼠双侧侧脑室注射Aβ1-42建立老年痴呆动物模型,通过Morris水迷宫行为实验、海马乙酰胆碱酯酶(AChE)活性生化测定及海马凋亡抑制基因Bcl-2表达Western Blot检测,研究了白术内酯Ⅲ(AtractylenolideⅢ,ATLⅢ)对痴呆大鼠学习记忆能力的影响.结果表明:与模型组相比,ATLⅢ中、高剂量组的逃避潜伏期显著缩短(P<0.01),在原平台象限的停留时间显著延长(P<0.01),海马AChE活性显著降低(P<0.05),Bcl-2表达显著增高(P<0.05,P<0.01).结果提示白术内酯Ⅲ可显著改善痴呆大鼠的学习记忆能力,其机制可能与抑制AChE活性及上调海马Bcl-2基因的表达有关.本研究对于神经保护作用药物的开发具有重要的临床意义.

HPLC法同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸

目的建立高效液相同时测定补益资生丸中白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸成分的分析方法。方法补益资生丸甲醇提取,分析采用Hypersil C18色谱柱;以乙腈-0.05%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱;体积流量1.2 m L/min;白术内酯Ⅲ和白术内酯Ⅰ的检测波长为220 nm,去氢土莫酸、猪苓酸C检测波长为241 nm,茯苓酸为210 nm。结果白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅰ、去氢土莫酸、猪苓酸C和茯苓酸质量浓度分别在4.12-82.40μg/m L（r=0.999 8）、6.55-131.00μg/m L（r=0.999 4）、4.30-86.00μg/m L（r=0.999 9）、5.35-107.00μg/m L（r=0.999 2）、4.40-88.00μg/m L（r=0.999 7）时与其峰面积线性关系良好;平均加样回收率（n=6）分别为99.0%、97.6%、99.1%、97.0%、97.9%,RSD分别为1.2%、1.6%、1.2%、0.91%、1.5%。结论暂定本品标准为每丸中含白术内酯Ⅲ不得低于0.26 mg,白术内酯Ⅰ不得低于0.15 mg,去氢土莫酸不得低于0.40 mg,猪苓酸C不得低于0.14 mg,茯苓酸不得低于0.20 mg。

白术内酯Ⅲ在大鼠体内的药代动力学和组织分布特性

目的:建立白术内酯Ⅲ的反相高效液相色谱分析方法,并对其在大鼠体内的药代动力学和组织分布特性进行分析研究。方法:生物样品采用液-液萃取法提取,用Hypersil C18ODS色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm),柱温25℃,甲醇-水(67∶33)为流动相,流速1.0 m l/m in,检测波长为220 nm。结果:方法的平均回收率为85.12%(RSD=5.57%),最低检测限为0.10μg/m l,测定血药浓度线性范围为0.2μg/m l^18.5μg/m l(r=0.9996)。日内、日间精密度(RSD)分别为0.98%~6.19%,12.95%~15.48%;SD大鼠一次性灌胃100μg/m l白术内酯Ⅲ后C-t曲线呈一级吸收二室模型,达峰时间为(0.85±0.01)h。给药1.5 h时,在主要效应器官的浓度分布特点是:C肺>C小脑>C心>C大脑;在主要消除器官的浓度分布特点:C脾>C肝>C肾。结论:本法准确、稳定、灵敏度较高,可用于白术内酯Ⅲ的体内过程研究。白术内酯Ⅲ在大鼠体内吸收较快,消除速度快,在肺部分布最多。

不同加工工艺对白术中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量的影响

目的比较不同加工工艺对白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ含量的影响。方法采用反相高效液相色谱法测定白术中白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ含量。色谱柱:Phenomenex C18(250mm×4.6mm);流动相:甲醇∶0.02%磷酸水(64∶36);检测波长:220nm;流速:1.0ml/min;柱温:30℃。结果不同加工工艺对白术中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量有一定影响。鲜白术在不同加工工艺条件下白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量由高到低依次为:鲜白术烘至一定程度切片>产地趁鲜直接切片>传统工艺切片。低温烘干与烘房烘干对白术内在质量无明显影响。结论结合饮片外观,鲜白术产地烘至一定程度直接切片,其质量较好。

气质联用法同时测定白术中白术内酯Ⅰ与白术内酯Ⅲ含量

目的建立使用气相．质谱联仪，采用选择监测离子法同时测定白术中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量的方法。方法石英毛细管色谱柱DB-5MS（30m×0．32mm，0．25μm），样品用二氧化碳超临界流体萃取，萃取液用乙酸乙酯溶解，采用选择离子监测法定量。结果白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ分别在5．0—200μg·mL^-1（r=0．9991）和5．0—200μg·mL^-1范围内线性良好（r=0．9986）；平均回收率分别为99．84％，100．31％，检测限分别为16和25pg。结论该方法简便、快速，灵敏度高，结果准确可靠。

白术内酯Ⅲ通过调节JAK2/STAT3信号通路减轻溃疡性结肠炎模型小鼠肠道损伤

目的:探究白术内酯Ⅲ调节Janus激酶2(Janus kinase 2,JAK2)/信号转导和转录激活因子3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)信号通路缓解溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型小鼠肠道损伤的机制。方法:C57BL/6小鼠分为正常组(正常饲养)、模型组(建立UC模型)、白术内酯Ⅲ(低、中、高)剂量组(建立UC模型同时分别给予5 mg/kg、10 mg/kg、15 mg/kg白术内酯Ⅲ)和白术内酯Ⅲ+JAK2激活剂组(建立UC模型同时给予15 mg/kg白术内酯Ⅲ和1 mg/kg香豆霉素A1),每组8只。连续自由饮用7 d 2.5%葡聚糖硫酸钠(dextran sulfact sodium,DSS)水溶液构建UC模型。观察大鼠一般情况,计算疾病活动指数(disease activity index,DAI)评分;测量结肠长度;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色检测结肠组织病理学变化;过碘酸雪夫(Periodic Acid-Schiff,PAS)染色检测结肠组织中杯状细胞;免疫组化法检测结肠组织中紧密连接蛋白闭锁小带蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)和闭合蛋白(occludin)表达;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测结肠组织中炎症因子白细胞介素(interleukin,IL)-1β、IL-4、IL-6及IL-10水平;Western blot法检测结肠组织中JAK2、pJAK2、STAT3及p-STAT3蛋白表达。结果:与正常组相比,模型组小鼠精神萎靡,结肠组织出现明显病理损伤,杯状细胞数量减少;体重以及结肠组织中ZO-1、occludin蛋白表达和IL-4、IL-10水平显著降低(P<0.05),DAI评分、组织病理学评分以及结肠组织中IL-1β、IL-6水平和JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达显著升高(P<0.05),结肠长度显著缩短(P<0.05)。与模型组相比,白术内酯Ⅲ(低、中、高)剂量组小鼠精神状态及结肠组织病理损伤有所改善,杯状细胞数量增多;体重以及结肠组织中ZO-1、occludin蛋白表达和IL-4、IL-10水平显著升高(P<0.05),DAI评分、组织病理学评分以及结肠组织中IL-1β、IL-6水平和JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达显著降低(P<0.05),结肠长度显著增加(P<0.05),且呈现剂量依赖性。此外,JAK2激活剂可激活JAK2/STAT3信号通路,同时减弱白术内酯Ⅲ对UC小鼠肠道损伤的治疗作用。结论:白术内酯Ⅲ能够减轻UC小鼠肠道损伤,且可能与抑制JAK2/STAT3信号通路激活,减轻局部炎症反应有关。

白术内酯Ⅲ对神经细胞损伤的影响

目的观察白术内酯Ⅲ对神经细胞损伤的影响。方法选用PC12细胞株,建立缺氧损伤,兴奋性氨基酸损伤,高钙损伤3种损伤模型,采用噻唑蓝(MTT)法观察白术内酯Ⅲ对PC12细胞存活力的影响。结果与各模型组比较,白术内酯Ⅲ在一定浓度范围内可显著升高PC12细胞A570值(P<0.05或P<0.01)。结论白术内酯Ⅲ对PC12细胞缺氧损伤、兴奋性氨基酸损伤、高钙损伤均有不同程度的保护作用。

丁沉透膈丸中和厚朴酚、厚朴酚、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ和儿茶素的测定

目的采用HPLC法测定丁沉透膈丸（厚朴、白术、丁香、沉香、木香、香附、砂仁、草豆蔻、陈皮、麦芽、广藿香、青皮、法半夏、云曲、茯苓、甘草）中和厚朴酚、厚朴酚、白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ和儿茶素的量。方法 Hypersil C18色谱柱（4.6 mm×200 mm,5μm）;体积流量0.7 mL/min。和厚朴酚与厚朴酚的测定以乙腈为流动相A,流动相B为2%冰醋酸溶液（V/V）,检测波长294 nm;白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ的测定以甲醇-乙腈（1∶1）为流动相A,流动相B为0.1%磷酸水溶液,检测波长220 nm;儿茶素的测定以甲醇-0.5%冰醋酸溶液（26∶74）为流动相,检测波长278 nm。结果和厚朴酚与厚朴酚分别在0.032 4～0.648 0μg（r=0.999 6）、0.021 8～0.436 0μg（r=0.999 8）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.17%、99.29%,RSD（n=9）分别为0.84%、1.04%;白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ分别在0.006 8～0.136 0μg（r=0.999 4）、0.010 2～0.204 0μg（r=0.999 3）范围内进样量与峰面积呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为99.02%、99.15%,RSD（n=9）分别为0.69%、0.75%;儿茶素在0.004 6～0.092 0μg（r=0.999 8）进样量与峰面积线性关系良好,平均加样回收率为99.30%,RSD（n=9）为0.69%。结论该测定方法结果准确、灵敏度高、重复性好。