白术内酯I调节HIF-1α/VEGF信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨白术内酯I(Atr-I)调节缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的影响。方法:大鼠分为对照组、AMI组、Atr-I组、阿司匹林组、BAY87-2243组、Atr-I+BAY87-2243组,每组18只。除对照组外,其他组大鼠均采用结扎冠脉左前降支根部的方式构建AMI模型,建模1h后,开始处理,给药1次/d,持续7d。超声心动图监测左室短轴缩短率(FS)、左室射血分数(LVEF)的变化;2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测大鼠心肌梗死面积百分数;HE染色检测左心室心肌组织病理学变化;TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;ELISA检测大鼠左心室心肌组织中肌红蛋白(Mb)、乳酸脱氢酶(LDH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β含量;Western blot检测大鼠心肌组织匀浆中HIF-1α、VEGF蛋白表达。结果:与对照组相比,AMI组大鼠心肌损伤明显,FS、LVEF及HIF-1α、VEGF蛋白表达降低,心肌梗死面积百分数、Mb、LDH、TNF-α、IL-1β含量升高(P<0.05);与AMI组相比,Atr-I组、阿司匹林组大鼠心肌损伤有所改善,FS、LVEF及HIF-1α、VEGF蛋白表达升高,心肌梗死面积百分数、Mb、LDH、TNF-α、IL-1β含量降低,BAY87-2243组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.05);与Atr-I组相比,Atr-I+BAY87-2243组大鼠心肌损伤加剧,FS、LVEF及HIF-1α、VEGF蛋白表达降低,心肌梗死面积百分数、Mb、LDH、TNF-α、IL-1β含量升高(P<0.05)。结论:Atr-I减轻AMI大鼠心肌损伤可能与激活HIF-1α/VEGF信号通路有关。

白术内酯I抑制胃癌MGC-803细胞增殖的机制

目的探讨白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞增殖的抑制作用及其机制。方法 MTT实验和集落形成实验检测白术内酯I对MGC-803细胞增殖的抑制作用;Western印迹检测白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达的影响;实时定量PCR分析白术内酯I对人胃癌MGC-803细胞中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA水平表达的影响。结果 MTT实验和集落形成实验表明,白术内酯I抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,并且呈时间、剂量依赖性(P<0.05);Western印迹实验表明白术内酯I抑制Notch信号通路中Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1蛋白表达水平;实时定量PCR结果显示白术内酯I抑制Notch1、Hey1、Jagged1和Hes1 mRNA表达水平(P<0.05)。结论白术内酯I通过抑制Notch信号通路从而抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,白术内酯I可能用于治疗胃癌的新型治疗策略。

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的白术内酯I在大鼠体内代谢产物的鉴定及代谢途径分析

目的采用超高效液相色谱-四级杆/静电场轨道阱高分辨质谱技术(UHPLC-Q-Orbitrap HRMS)鉴定白术内酯I在大鼠体内的代谢产物,并探讨其可能的代谢途径。方法SD大鼠单次灌胃给予白术内酯I后,收集大鼠血浆、尿液、粪便样品。以体积分数0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)为流动相,梯度洗脱。在电喷雾电离源(ESI源)正、负离子模式下分析大鼠生物样本。根据质谱提供的准分子离子峰、碎片离子及准确相对分子质量,鉴定白术内酯I体内代谢产物。结果共鉴定出大鼠体内代谢产物30个,其中血浆样品中5个,尿液样品中17个,粪便样品中16个。氧化、水合、脱饱和、硫酸化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸结合、半胱氨酸结合等是白术内酯I体内主要的代谢途径。结论首次阐明了白术内酯I在大鼠体内的代谢产物及代谢途径,为其进一步的药效学评价和开发利用提供参考,此外也为单体药物代谢产物鉴定提供了一种综合研究方法。

白术内酯IV的分离鉴定

从白术(Atractylodes macrocephala Koidz.)分离到9种化合物。其中,白术内酯 IV(atractylenolide Iv)为新化合物,甾醇和三萜酯首次从白术属(Atractylodes)植物分得。

不同产地不同炮制白术中白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ的提取及含量测定

文章对比了不同产地和炮制前后白术中，白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ的含量。在提取上采用超声辅助法提取，采用HPLC-DAD测定提取液中白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ的含量。以白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ的含量为指标，筛选后的最佳提取条件为70％甲醇提取较90％甲醇和纯甲醇提取效果佳：并测得汉口产白术的三种白术内酯含量分别最高，为0．0460％，0．0211％，0．0288％；湖南产白术最低，分别为0．0106％，0．0075％，0．0154％。炮制后的白术其内酯含量较未炮制的高。

高效液相色谱法测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量

本实验建立了高效液相色谱技术(HPLC)测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。采用Hypersil GOLD(250 mm×4.6 mm,5um),以乙腈为流动相A、以0.1%磷酸溶液为流动相B进行梯度洗脱,流速1.0 mL/min,白术内酯Ⅰ检测波长为276 nm,白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ检测波长为220 nm,柱温为35℃,进样体积为20μL。白术内酯Ⅰ在0.10~1.60μg范围内线性关系良好,平均回收率为99.29%(RSD=2.25%);白术内酯Ⅱ在0.10~1.60μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.07%(RSD=2.59%);白术内酯Ⅲ在0.10~1.60μg范围内线性关系良好,平均回收率为100.43%(RSD=2.20%)。结果表明该方法分离度好、准确度高、重现性好,可测定白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量。

反相高效液相色谱法测定白术茯苓颗粒白术内酯Ⅰ与白术内酯Ⅲ含量

目的建立同时测定白术茯苓颗粒中白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ含量的反相高效液相色谱法。方法ZOBAXC18柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相为甲醇：乙腈：0.2%磷酸溶液（48：5：47）,流速为0.8 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长222 nm。结果白术内酯Ⅰ和白术内酯Ⅲ分别在0.6～12.0 μg·mL^-11（r＝0.999 3）和1.3～26.0 μg·mL^-1（r＝0.999 6）浓度范围内有良好的线性关系,平均加样回收率分别为98.84%和98.38% ;RSD均＜2.0%。结论该方法简便、快速、准确,重复性好,可用于该制剂的质量控制。

白术内酯Ⅲ调控ASCT2介导的线粒体-溶酶体互作诱导肝星状细胞衰老的抗肝纤维化机制研究

目的探究白术内酯Ⅲ诱导肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)衰老抗肝纤维化作用及机制。方法ASCT2 siRNA及白术内酯Ⅲ(40μmol·L^(-1))分别作用于人源肝星状细胞LX2以抑制ASCT2,MTT评估细胞活力,EdU法检测细胞增殖,细胞衰老β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老;Western blot检测LX2细胞中LC3-Ⅱ/Ⅰ比值的变化,激光共聚焦检测LC3自噬流和错误蛋白堆积的变化,同时观察溶酶体标记物LAMP1的荧光情况,以检测溶酶体功能和数量;试剂盒检测LX2细胞内ROS、MDA水平及SOD活力,流式细胞术分析线粒体ROS水平及膜电位。构建CCl 4诱导的小鼠肝纤维化模型,白术内酯Ⅲ20、30、40 mg·kg^(-1)治疗性给药,HE、Masson和Sirius Red染色观察肝脏组织破坏以及胶原沉积情况,Western blot检测各组小鼠P21、P16表达水平,SA-β-Gal染色以及免疫组化分析衰老细胞的情况和来源。结果抑制ASCT2后,LX2细胞活力降低、衰老增加(P<0.01),同时细胞自噬功能增强、溶酶体数量增多但功能减弱,加入氯喹(Chloroquine,CQ)清除溶酶体后,细胞活力和自噬功能增加(P<0.01)。抑制ASCT2后,LX2细胞内MDA、ROS水平上升,SOD活力下降(P<0.01),其中线粒体ROS水平上升及膜电位下降(P<0.01),加入鱼藤酮后,细胞氧化还原稳态和溶酶体数量恢复(P<0.01)。体内实验结果表明,与模型组比较,白术内酯Ⅲ改善肝组织结构破坏以及胶原沉积,诱导肝纤维化小鼠肝组织中的HSC发生衰老,抑制HSC活化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,促进衰老指标P16、P21的表达(P<0.01)。结论白术内酯Ⅲ通过抑制ASCT2诱导线粒体ROS增多、膜电位下降,进一步促进HSC自噬功能增强、溶酶体数量增多和功能减弱,从而诱导活化型HSC发生衰老。

白术内酯Ⅲ减轻脑梗死模型大鼠神经功能损伤

目的探究白术内酯Ⅲ(AMLⅢ)对脑梗死大鼠神经功能损伤的影响。方法将大鼠随机分为假手术组(sham)、模型组(model,改良Longa线栓法制备大鼠脑梗死模型)、白术内酯Ⅲ低和高剂量组(AMLⅢ-L、AMLⅢ-H)、白术内酯Ⅲ高剂量+EX527(SIRT1抑制剂)组(AMLⅢ-H-EX527)。Zea-Longa评分法评估神经功能,ELISA检测血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-1β)水平;试剂盒检测脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)活性;HE染色观察海马组织病理,TTC染色法检测脑梗死面积,TUNEL染色法检测脑细胞凋亡率;Western blot检测脑组织B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)、SIRT1、Nrf2蛋白表达。结果白术内酯Ⅲ干预后可减轻大鼠海马神经组织损伤,降低神经功能评分、血清TNF-α、IL-6和IL-1β水平、凋亡率、脑梗死面积、MDA水平、Bax蛋白表达,提高SOD和CAT活性、SIRT1、Nrf2、Bcl-2蛋白表达水平(P<0.05);EX527可减轻白术内酯Ⅲ对脑梗死大鼠神经功能的保护作用。结论白术内酯Ⅲ可减轻脑梗死模型大鼠的神经功能损伤。

基于JAK2/STAT3/PDL1通路研究白术内酯Ⅱ对肺癌小鼠细胞凋亡的影响

通过观察白术内酯Ⅱ(atractylenolideⅡ,AT-Ⅱ)对Lewis肺癌小鼠JAK2/STAT3/PDL1通路的影响,探究其对小鼠肿瘤组织细胞凋亡的作用机制。建立肺癌小鼠模型,成瘤后,将小鼠随机分为4组,即模型组、白术内酯Ⅱ低、中、高剂量组,每组10只。白术内酯Ⅱ低、中、高剂量组灌胃0.2 mL白术内酯Ⅱ(剂量依次为25、50、100 mg/kg),1次/d,模型组灌胃等体积溶剂,1次/d。各组连续干预21 d,末次给药后24 h,处死小鼠,分离肿瘤组织、脾组织。观察各组肿瘤体积随时间变化,计算脾指数、肿瘤生长抑制率;采用TUNEL荧光染色法观察各组肿瘤组织细胞凋亡情况;采用Western blot法测定肿瘤组织JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、PDL1蛋白表达情况;免疫荧光法测定p-JAK2、p-STAT3、F4/80^(+)、CD206^(+)表达。于脾指数而言,给药组与模型组差异无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,白术内酯Ⅱ低、中、高剂量组的肿瘤体积、肿瘤质量显著减小(P<0.05);肿瘤生长抑制率明显提高;TUNEL法荧光染色显示:与模型组相比,白术内酯Ⅱ低剂量组细胞凋亡指数差异无统计学意义(P>0.05),白术内酯Ⅱ中剂量组细胞凋亡指数升高(P<0.05),白术内酯Ⅱ高剂量组细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);Western blot实验结果显示:给药组肿瘤组织中p-JAK2、p-STAT3、PDL1蛋白的表达较模型组显著降低;免疫荧光实验测定p-JAK2、p-STAT3、CD206^(+)给药组显著降低(P<0.01)、F4/80^(+)无显著差异(P>0.05)。以上实验结果表明AT-Ⅱ能够基于JAK2/STAT3通路调控PDL1表达,影响Lewis肺癌小鼠肿瘤组织细胞凋亡。

白术内酯Ⅰ在胃癌细胞中抑制输出蛋白T的作用和机制

目的探究白术内酯Ⅰ在胃癌细胞中抑制输出蛋白T(XPOT)的作用和机制。方法探究XPOT在胃癌组织中的表达情况。自安徽中医药大学第二附属医院脾胃科病例随访系统中随机调出具有完整临床病理及随访资料的胃癌病例105例,并获取对应的肿瘤组织和癌旁组织。应用免疫组化、qPCR和Western blot技术检测上述标本中XPOT表达情况。使用GSEA分析TCGA、GEO数据库中胃癌患者基因表达数据。通过多种细胞实验检测癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力。并检测XPOT、SKP2、CyclinA、P27的mRNA的蛋白表达水平。结果生物信息学结果及临床样本均证实,XPOT在胃癌组织中表达高,提示不良预后;体外研究发现:AT-1可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力;XPOT下调可抑制胃癌细胞的增殖、侵袭能力;AT-1可下调XPOT表达,继而对SKP2、P27、CyclinA进行调控,即通过调控XPOT途径,抑制胃癌细胞的增殖和侵袭。结论胃癌组织中XPOT过表达可提示患者预后不良。白术内酯Ⅰ可下调XPOT调控泛素化-蛋白酶体途径抑制胃癌细胞的增殖及侵袭。

白术内酯Ⅰ改善术后肠梗阻大鼠的肠功能、炎症反应、细菌移位及肠道屏障

背景白术内酯Ⅰ(atractylenolideⅠ,AT-1)具有抗炎、抗氧化、抑制肠损伤和改善肠屏障功能的作用,但其对术后肠梗阻(postoperative ileus,POI)的影响和机制并不清楚.目的探讨AT-1对POI大鼠的肠功能、炎症反应、细菌移位及肠道屏障的影响,并探讨初步机制.方法60只泼累格·多雷雄性大鼠,分为5组:对照组、模型组、及低、中、高剂量AT-1干预组,每组12只.用摩擦肠管法构建POI大鼠模型,低、中、高剂量AT-1干预组分别在造模前1 h和造模后1-3 d通过尾静脉注射20、40和80 mg/kg AT-1,每天1次.肠推进实验评估肠推进功能,异硫氰酸酯-葡聚糖法检测肠通透性;苏木精-伊红染色观察小肠组织病理形态;生化分析仪计数外周血白细胞和粒细胞含量,酶联免疫吸附试验法检测血清中白细胞介素(interleukin,IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)、内毒素、脂多糖和D-乳酸水平;免疫组化检测肠组织中溶霉菌(Lysozyme)、绒毛蛋白(Villin)、闭锁小带蛋白1(zonula occludens protein 1,ZO-1)和密封蛋白(Claudin)表达分布情况;蛋白质免疫印迹法检测肠组织中核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)相关蛋白表达.结果相比于对照组,模型组小肠绒毛断裂或脱落,隐窝丢失,肠推进功能降低,肠道通透性增加;相比于模型组,AT-1干预组小肠绒毛变长和隐窝增多,肠推进功能增高,肠道通透性降低.免疫组化结果显示,相比于对照组,模型组小肠组织中Lysozyme、Villin、ZO-1和Claudin表达降低,而AT-1干预组上述蛋白表达增高.生化检验结果显示,相比于对照组,模型组外周血中白细胞和中性粒细胞数增多,血清中IL-6、IL-1β、TNF-α、内毒素、脂多糖和D-乳酸水平增高;相比于模型组,AT-1干预组上述血液学指标均降低.蛋白质免疫印迹法检测结果显示,相比于对照组,模型组小肠组织中磷酸化(phospho,p)-P65/P65和磷酸化NF-κB抑制蛋白(phospho-inhibitor of NF-κB,p-IκB)/IκB的表达水平均升高;相比于模型组,AT-1干预组p-P65/P65和p-IκB/IκB的表达水平均降低.且以上结果均具有剂量效应.结论AT-1可有效抑制POI大鼠肠道损伤、炎症反应和NF-κB信号活性,同时维持肠屏障功能的完整性并阻止细菌移位.

白术内酯Ⅲ调节Hippo/YAP信号通路对非酒精性脂肪肝大鼠肝纤维化的影响

目的探讨白术内酯Ⅲ(ATLⅢ)调节河马(Hippo)/yes-相关蛋白(YAP)信号通路对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝纤维化的影响。方法SPF级SD大鼠36只按照随机数字表法分为control组、NAFLD组、ATLⅢ低、中、高剂量组、阳性对照组(复方鳖甲软肝片),每组6只,除control组外采用高脂饮食构建NAFLD大鼠,灌胃或尾静脉注射相应药物,1次/d,连续4周,检测大鼠血脂及肝功能指标天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT);酶联免疫吸附(ELISA)检测血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)纤维化指标;HE染色观察肝脏组织病理改变并进行NAFLD活动度评分(NAS);Masson染色观察大鼠肝脏组织纤维化情况;免疫组化法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;Western blot检测肝组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)及Hippo-YAP信号通路蛋白表达。结果与control组比较,NAFLD组大鼠TC、TG、LDL-C水平、HA、LN、AST、ALT、NAS评分及α-SMA、TGF-β1、TAZ表达水平显著升高,HDL-C水平、p-LATS1/LATS1、p-YAP/YAP表达显著降低(P<0.05);与NAFLD组比较,ATLⅢ低、中、高剂量组及阳性对照组大鼠TC、TG、LDL-C、HA、LN、AST、ALT、NAS评分及α-SMA、TGF-β1、TAZ表达水平显著降低,HDL-C水平、p-L ATS1/LATS1、p-YAP/YAP表达显著升高(P<0.05)。结论ATLⅢ可能通过抑制Hippo/YAP信号通路的激活,改善NAFLD大鼠肝纤维化。

白术内酯Ⅰ对IL-1β诱导的关节软骨细胞炎性损伤的影响

目的探讨白术内酯I(Atractylenolide I,AT-I)对白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的关节软骨细胞炎性损伤的影响。方法人关节软骨细胞来自武汉普诺赛生命科技有限公司。实验分6组:对照组(未处理)、模型组(10 ng/mL IL-1β)、AT-I-L组(25μmol/L)、AT-I-M组(50μmol/L)、AT-I-H组(100μmol/L)、AT-I-H+740 Y-P组[100μmol/L AT-I与50μg/mL 740 Y-P磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)激活剂]。CCK-8法和流式细胞术分别测定增殖及凋亡;ELISA法测定上清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;Western blot检测PI3K/蛋白激酶B(AKT)/核因子-κB(NF-κB)相关蛋白表达。结果与对照组相比,模型组OD450值(24、48 h)降低(P<0.05),TNF-α、IL-6表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB蛋白表达均升高(P<0.05)。与模型组对比,AT-I-L组OD450值(24、48 h)、TNF-α、IL-6表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达差异不显著(P>0.05),AT-I-M组、AT-I-H组OD450值(24 h、48 h)升高(P<0.05),TNF-α、IL-6表达、细胞凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达均降低(P<0.05)。与AT-I-H组对比,AT-I-H+740 Y-P组OD450值(24、48 h)降低(P<0.05),TNF-α、IL-6表达、凋亡率、PI3K/AKT/NF-κB通路蛋白表达均升高(P<0.05)。结论白术内酯Ⅰ改善IL-1β诱导的关节软骨细胞炎性损伤,其可能机制是促进软骨细胞增殖并抑制炎症反应、细胞凋亡和PI3K/AKT/NF-κB通路实现。

白术内酯Ⅰ调节IL-6/STAT3信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨白术内酯Ⅰ调节白细胞介素-6(IL-6)/信号传导及转录激活蛋白3(STAT3)信号通路对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法用不同浓度白术内酯Ⅰ(0、25、50、75、100、150μmol/L)处理子宫内膜RL-952细胞,MTT法检测细胞存活率;将RL-952细胞分为对照组(无处理)、白术内酯Ⅰ(50μmol/L)组、IL-6组(10 ng/mL)、白术内酯Ⅰ(50μmol/L)+IL-6组(10 ng/mL),MTT法、Edu染色检测细胞增殖;qRT-PCR法检测细胞中IL-6、STAT3表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;western blot检测MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3、STAT3蛋白表达水平。结果与0μmol/L比较,25μmol/L、50μmol/L、75μmol/L、100μmol/L、150μmol/L白术内酯Ⅰ干预的RL-952细胞存活率显著下降,呈浓度依赖性(P<0.05);与对照组比较,白术内酯Ⅰ组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性降低(P<0.05),细胞凋亡率显著性升高(P<0.05),IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05),细胞凋亡率显著性降低(P<0.05);与白术内酯Ⅰ组比较,白术内酯Ⅰ+IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性升高(P<0.05),细胞凋亡率显著性降低(P<0.05);与IL-6组比较,白术内酯Ⅰ+IL-6组RL-952细胞活力、增殖率、迁移和侵袭个数、IL-6和STAT3 mRNA表达、MMP-2、Ki-67、IL-6、p-STAT3/STAT3蛋白表达水平显著性降低(P<0.05),细胞凋亡率显著性升高(P<0.05)。结论白术内酯Ⅰ可能通过抑制IL-6/STAT3信号通路来抑制子宫内膜癌RL-952细胞增殖、迁移和侵袭。

白术内酯Ⅰ调节PI3K/Akt/mTOR信号通路对肺脾气虚反复呼吸道感染模型大鼠肺损伤的影响

目的探讨白术内酯Ⅰ调节磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路对肺脾气虚反复呼吸道感染(RRTI)模型大鼠肺损伤的影响。方法将84只大鼠随机分为对照组、模型组、白术内酯Ⅰ低剂量组、白术内酯Ⅰ高剂量组、阳性药物组、胰岛素样生长因子1(IGF-1)组、白术内酯Ⅰ高剂量+IGF-1组,每组12只。除对照组外,其他组大鼠均采用疲劳结合饮食失节联合刨花加烟叶烟熏的方法构建肺脾气虚反复呼吸道感染大鼠模型,模型复制成功后,进行给药处理,给药每天1次,持续6周。动物肺功能仪检测大鼠呼气峰流速(PEF)、1秒用力呼气容积(FEV_(1))、用力肺活量(FVC)的变化;检测大鼠肺湿干质量比值变化;HE染色检测各组大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测大鼠肺组织中白细胞介素(IL)-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、丙二醛(MDA)水平及超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western Blot法检测大鼠肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠PEF、FEV_(1)、FVC降低(P<0.01),肺湿干质量比值升高(P<0.01);肺组织肺泡间隔变大,肺间质水肿且存在大量炎性细胞浸润;肺组织中IL-6、TNF-α、MDA水平升高(P<0.01),SOD活性降低(P<0.01);肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.01)。与模型组比较,白术内酯Ⅰ低剂量组、白术内酯Ⅰ高剂量组、阳性药物组大鼠PEF、FEV_(1)、FVC升高,肺湿干质量比值降低(P<0.01);肺组织病理损伤减轻;肺组织中IL-6、TNF-α、MDA水平降低,SOD活性升高(P<0.01);肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达降低(P<0.01),IGF-1组对应指标变化趋势与上述相反(P<0.01)。与白术内酯Ⅰ高剂量组比较,白术内酯Ⅰ高剂量+IGF-1组大鼠PEF、FEV_(1)、FVC降低,肺湿干质量比值升高(P<0.01);肺组织病理损伤加剧;肺组织中IL-6、TNF-α、MDA水平升高,SOD活性降低(P<0.01);肺组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01)。结论白术内酯Ⅰ可能通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路改善肺脾气虚反复呼吸道感染大鼠肺损伤。

白术内酯Ⅲ介导的肌动蛋白相关蛋白2/3抑制肠上皮间质转化以缓解溃疡性结肠炎的研究

目的:探寻白术内酯Ⅲ(AT-Ⅲ)的关键靶点,探究肌动蛋白相关蛋白2/3(Arp2/3)抑制溃疡性结肠炎(UC)的作用机制。方法:采用有限酶切-质谱法(lip-SMap)筛选大鼠小肠隐窝上皮细胞(IEC-6)特征蛋白,进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,确定AT-Ⅲ的关键靶点。脂多糖(LPS)与IEC-6共孵育模拟UC模型,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;划痕实验测定IEC-6迁移速率;蛋白质印迹法测定上皮钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Arp2/3含量;分子对接评估AT-Ⅲ与关键靶点的结合能力。结果:基于lip-SMap获得的特征蛋白参与调控磷脂酰肌醇3激酶-丝苏氨酸激酶(PI3K-AKT)信号通路和紧密连接(TJ)信号通路;与对照组比较,LPS组中IL-6和TNF-α释放量升高(均P<0.05),迁移速率变快(P<0.05),E-cadherin和Vimentin的表达都有不同程度的影响(均P<0.05);与LPS组比较,LPS+CK666+AT-Ⅲ组显著降低IL-6和TNF-α含量(均P<0.01),有效逆转LPS诱导的细胞迁移变化及E-cadherin和Vimentin表达(均P<0.05);分子对接显示,Arp2/3与AT-Ⅲ有较好的结合活性。结论:Arp2/3作为AT-Ⅲ的关键靶点,可通过上皮细胞-间充质转化(EMT)缓解LPS诱导的UC。

基于白术内酯及总多糖结合外观性状评价白术饮片等级质量

目的通过对不同等级白术饮片进行研究,完善白术质量评价方法,为传统白术饮片等级划分提供理论依据。方法根据传统分级依据,将白术饮片分为3个等级。采用HPLC及UV法,测定36批白术饮片不同等级中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及总多糖的含量,结合2020版《中国药典》,将白术不同等级饮片的外观性状与内在质控指标进行相关性分析。结果根据外观性状及多个质控指标的含量测定,通过主成分分析、聚类分析等,白术一级饮片质量明显优于二级、三级饮片(P<0.05),且二级、三级饮片之间无显著性差异(P>0.05),表明白术饮片可分为2个等级,不同等级饮片与白术内酯及总多糖含量高低呈正相关。结论基于多个质控指标结合外观性状的白术饮片等级划分,可为该饮片质量控制与等级研究提供一定科学依据。

HPLC波长切换法同时测定白术及其不同麸制品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ

目的建立高效液相色谱波长切换，同时测定白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ的方法，比较生、制品中自术内酯含有量变化情况。方法以DiamonsilC，s（5μm，150mm×4．6mm）为分析色谱柱，甲醇-水（60：40）为流动相，体积流量为1mL／min，柱温为30℃，检测波长前25min为220nm，25min后为276nm。结果白术内酯I、白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ在L述色谱条件下分离良好，其线性范围依次为0．256～3．840μg、0．102～1．530μg、0．216～3．240μg；平均加样回收率（n=6）依次为100．5％、100．1％、99．4％；RSD分别为2．0％、1．5％、1．9％；白术经麸炒后，白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ的量较牛品及清炒品均有所增加。结论波长切换色谱法可同时测定白术及其不同麸制品中白术内酯I、Ⅱ、Ⅲ的量，具有快捷、简便的特点。

炮制对白术中白术内酯Ⅰ含量的影响

采用HPLC法对白术及其4种炮制品中白术内酯Ⅰ的含量进行了测定,结果表明,炮制品中白术内酯Ⅰ含量明显高于白术生品,且以麸炒黄品含量最高。