虎黄烧伤搽剂中白藜芦醇苷对皮肤癌大鼠放疗后细胞凋亡、免疫功能和JNK信号通路的影响

目的探究虎黄烧伤搽剂中白藜芦醇苷对皮肤癌大鼠放疗后细胞凋亡、免疫功能和JNK信号通路的影响。方法将80只SD大鼠分为对照组和模型组,对照组20只,模型组60只;模型组进行大鼠皮肤癌模型建立,并使用60Gy剂量射线照射癌变部位,之后分别用10、20、30 mg/kg的虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷对模型组大鼠进行灌胃处理,分为10 mg/kg组、20 mg/kg组、30 mg/kg组。流式细胞术检测细胞凋亡情况;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测大鼠免疫功能;蛋白质印迹(Western blot)检测应激活化蛋白酶(c-Jun N-terminal protein kainse,JNK)、磷酸化的JNK(phosphorized JNK,p-JNK)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bcl-2 associated protein,Bax)表达情况。结果与对照组相比,模型组细胞凋亡率显著降低(P<0.05);Bcl-2蛋白表达显著增加(P<0.05);Bax蛋白表达显著降低(P<0.05)。与模型组相比,10、20、30 mg/kg虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷显著增加了细胞凋亡率(P<0.05);显著降低了Bcl-2蛋白表达(P<0.05);显著增加了Bax蛋白表达(P<0.05)。与对照组相比,模型组血清白细胞介素-β(Interleukin-β,IL-β)、白细胞介素-6(Interleukiin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)炎症因子水平显著升高(P<0.05);丙二醛(Malonaldehyde,MDA)、肌酸激酶(Creatine Kinase,CK)、肌钙蛋白I(TroponinI,TnI)活性显著升高(P<0.05);SOD活性显著降低(P<0.05)。与模型组相比,10、20、30 mg/kg虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷显著降低了血清IL-β、IL-6、TNF-α炎症因子水平(P<0.05);MDA、CK、TnI活性显著降低(P<0.05);超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)活性显著升高(P<0.05)。与对照组相比,模型组JNK蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05);p-JNK蛋白水平显著升高(P<0.05)。与模型组相比,10、20、30 mg/kg虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷对JNK蛋白水平没有显著影响(P>0.05);但显著降低了p-JNK蛋白水平。结论虎黄烧伤搽剂白藜芦醇苷对放疗后皮肤癌大鼠细胞有抑制作用,提高了凋亡水平,增强了机体免疫力,且机制与JNK信号通路有关。

酶解法提取虎杖中白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素

用纤维素酶对虎杖进行了酶解,提高了虎杖中白藜芦醇的提取率,同时提取出白藜芦醇苷和大黄素。通过单因素实验考察了酶解温度、pH、酶解时间、酶用量对目标物提取率的影响,得出较佳的酶解工艺条件为:酶用量2mg/g虎杖,pH=3.0,在40℃酶解1h。酶解后用m(虎杖):m[φ(乙醇)=60%]=1:20,50℃提取2h。w(白藜芦醇)=1.50%,w(白藜芦醇苷)=0.38%,w(大黄素)=0.78%。酶解法较直接提取法更有利于虎杖中有效成分白藜芦醇、大黄素的提取。

汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及苷元含量的测定

目的 测定汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及苷元的含量。方法 采用 HPL C法直接测定 ,色谱柱为 EclipseXDB C8柱 ,流动相为乙腈 -水 ,流速为 1m L / min,检测波长为 30 3nm。结果 虎杖中白藜芦醇苷的含量为 2 .5 % ,白藜芦醇的含量为 0 .4 3%。结论 汉中地区虎杖中白藜芦醇的含量为首次报道 ,白藜芦醇苷的含量高于文献报道的结果。

白藜芦醇苷对羟自由基所致大鼠脑线粒体氧化损伤的保护作用

目的 研究白藜芦醇苷对氧自由基所致大鼠脑线粒体损伤的保护作用 ,探讨白藜芦醇苷治疗心脑血管疾病的机制。方法 利用Fe2 + +VitC系统产生·OH ,诱导大鼠脑线粒体损伤 ;测定线粒体肿胀度、膜流动性、膜磷脂含量以显示线粒体膜功能 ,测定ATPase ,细胞色素C氧化酶活性以显示线粒体能量代谢能力 ,测定超氧化物歧化酶 (SOD)、丙二醛(MDA)以显示线粒体抗氧化能力。结果 ·OH造成线粒体显著损伤 ,白藜芦醇苷 (终浓度 10 0、2 0 0、4 0 0mg·L-1)明显抑制膜磷脂降解、线粒体肿胀 ,增加膜流动性 ,改善线粒体能量代谢状态 ,增强抗氧化能力。结论 白藜芦醇苷对氧自由基所致大鼠脑线粒体损伤有明显保护作用 ,其机制与清除自由基。

虎杖商品药材中白藜芦醇苷的含量测定

目的 :改善虎杖药材中白藜芦醇苷含量测定的方法 ,并对不同来源商品药材进行测定。方法 :高效液相色谱法 ,C18柱为固定相 ,乙腈 水 (2 0∶80 )作为流动相 ,检测波长为 30 3nm ,流速 1mL·min-1。结果 :白藜芦醇苷在 0 .0 0 6 6～ 0 .0 792 μg·μL-1浓度范围内呈现良好的线性关系 ,相关系数r =0 .9999(n =5 ) ;平均回收率为98.5 % ,RSD为 2 .5 % (n =9)。结论 :该方法简单、准确 ,重现性好。不同来源商品药材测定结果表明 ,白藜芦醇苷含量最高达到 3.6 3% ,最低为 1.2 0 % ,平均含量为 2 .2 3% ,差异并不十分悬殊。

炮制对虎杖中白藜芦醇苷和大黄素的影响

目的 探讨炮制对虎杖及其炮制品中有效成分的影响。方法 采用薄层色谱法对炮制品中白藜芦醇苷和大黄素进行定性分析 ,并采用薄层扫谱法和HPLC法对大黄素进行定量分析。结果 酒炙品、醋炙品、盐炙品中大黄素含量与生品相比有不同程度的增加。结论 不同炮制方法、辅料对虎杖中大黄素含量有一定的影响。

RP-HPLC法同时测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的含量

建立了国内首次用RP HPLC同时测定虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的方法 ,并详细考察了 2个指标成分的稳定性。对不同产地的虎杖药材、不同采收期的虎杖根及根茎以及虎杖的不同部位共 2 5个样品中的白藜芦醇和白藜芦醇苷进行了含量测定 ,考察了两种活性成分的含量与产地、采收期及部位的关系 ,为虎杖资源的合理采收利用及进一步的研究提供了理论依据。

白藜芦醇苷通过MAPK和Nrf2/HO-1通路减轻LPS引起的炎症反应

目的探讨白藜芦醇苷(piceid,PD)通过MAPK和Nrf2/HO-1通路减轻脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)引起的炎症反应的相关机制。方法采用MTT法测定PD在RAW264.7细胞中的细胞毒性,流式细胞术与蛋白印迹检测结果PD减少LPS引起的炎症反应与促炎细胞因子的表达,明显抑制p-JNK1/2、p-ERK1/2和p-p38MAPK的蛋白水平,明显抑制活性氧的生产和降低线粒体膜电位,提高细胞核中Nrf2蛋白水平,明显减弱LPS诱导的TLR4的表达。结论PD通过MAPK和Nrf2/HO-1通路对RAW264.7细胞表现出抗炎和抗氧化作用。

大孔吸附树脂法分离纯化虎杖白藜芦醇苷的研究

目的 研究大孔吸附树脂分离纯化虎杖中白藜芦醇苷的工艺条件及参数。方法 以白藜芦醇苷的吸附量和解吸率为考察指标 ,从中筛选树脂 ,并研究大孔吸附树脂分离纯化白藜芦醇苷的吸附性能和洗脱参数。结果 AB 8树脂对白藜芦醇苷有较好的吸附分离性能 ,适合于虎杖中白藜芦醇苷的提纯 ,经该树脂吸附解吸 ,饱和吸附量可达 2 5 8mg·g-1,解吸率达83 2 %。结论 大孔树脂分离纯化白藜芦醇苷的纯度可达 31 5 % ,而上柱前粗提物中白藜芦醇苷纯度为 5 71% 。

微波辅助提取虎杖中白藜芦醇苷

用高效液相色谱法（HPLC）测定白藜芦醇苷的含量,并以白藜芦醇苷的提取率为参考指标,通过单因素实验及正交实验方法对微波辅助提取法（MAE）提取虎杖中白藜芦醇苷的最佳工艺进行研究。HPLC法的色谱分析条件为：ODS-C18色谱柱（长度×直径为200 mm×4.6 mm）,以40%（体积分数）的甲醇水溶液为流动相,流速为1 mL/min;检测波长为303 nm。研究结果表明,微波辅助提取白藜芦醇苷的最佳工艺条件为：10.000 g虎杖粗粉（2-3 mm）浸泡2 h,用70%（体积分数）乙醇水溶液提取2次,料液比为1-8,在功率650 W下微波辐射100 s,白藜芦醇苷的提取率达到91%。

白藜芦醇苷对慢性常压低氧性肺动脉高压模型中磷脂酶A_2、一氧化氮和内皮素水平的影响

目的:观察白藜芦醇苷(PD)对慢性常压低氧性肺动脉高压大鼠血浆及肺匀浆中磷脂酶A2(PLA2)、一氧化氮(NO)和内皮素1(ET-1)水平的影响,并探讨可能的机制。方法:29只健康SD大鼠随机分为正常对照组、单纯低氧组和低氧加PD组。右心导管法检测大鼠肺动脉平均压力(mPAP),观察右室/左室+室间隔重量比值(R/L+S)、血浆及肺匀浆中PLA2活性、NO和ET-1含量的变化。结果:低氧21 d后大鼠mPAP、R/L+S、血浆及肺匀浆中PLA2活性和ET-1含量显著高于对照组,NO含量显著低于对照组。PD预处理组上述变化可受抑制或减轻。结论:PD可有效防治慢性常压低氧性大鼠肺动脉压力的升高,其机理与抑制PLA2活性及ET-1释放,促进NO产生有关。

液相色谱-串联质谱法同时测定血浆中白藜芦醇苷及其代谢产物

建立同时测定大鼠血浆中白藜芦醇苷及其代谢产物白藜芦醇的液相色谱-串联质谱方法。以Lichrospher C18色谱柱为分析柱，乙腈-水为流动相，采用电喷雾离子源（ESI），以多反应监测（MRM）模式检测，内标法定量，用于定量分析的离子反应分别为m／z389／227（白藜芦醇苷）和m／z227／143（白藜芦醇）。血浆中的白藜芦醇苷及白藜芦醇用乙酸乙酯提取，N2吹干乙酸乙酯，残留物用甲醇溶解，注入LC／MS／MS系统进行检测。在选定的样品预处理、色谱及质谱条件下，白藜芦醇苷、白藜芦醇及内标物能够达到基线分离而且离子化效果好。用LC／MS／MS法检测大鼠血浆中的白藜芦醇苷及其代谢产物白藜芦醇，线性范围0．4～200μg／L，日内、日间精密度（RSD）均小于15％；检测血浆低、中、高3个浓度（1、20、100μg／L）白藜芦醇苷的回收率分别为106．2％、97．8％和91．6％；检测血浆低、中、高3个浓度（1、20、100μg／L）白藜芦醇的回收率分别为113．2％、103．6％和93．4％。本方法具有灵敏、准确、快速的特点，可用于白藜芦醇苷的药代动力学研究。

转化白藜芦醇苷虎杖内生真菌的分离和鉴定

为提高虎杖中白藜芦醇得率,采用虎杖内生真菌直接发酵虎杖转化白藜芦醇苷为白藜芦醇,通过从虎杖根、茎中初筛得到6株内生真菌,复筛以虎杖煮提液为底物发酵,采用高效液相色谱法定量检测发酵液中白藜芦醇苷和白藜芦醇含量。结果表明:6株内生真菌均具有转化白藜芦醇苷为白藜芦醇能力,其中分离于茎内的J1转化率最高为25.6%。J1经形态学观察及ITS-5.8S rDNA序列分析,鉴定为草酸青霉Penicillium oxalicum,Genbank登录号为HQ732137。

白藜芦醇苷对体外缺血再灌注脑损伤中NF-κB的保护作用

目的探讨体外缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I-R)脑损伤中NF-κB的表达及白藜芦醇苷(polydatin,PD)的保护作用。方法将体外培养7 d的大鼠大脑皮层神经元分为3组:对照组、模型组和PD组。AO/EB及DAPI染色观察细胞凋亡的形态学变化,同时测定再灌注0、6、12、24、48 h细胞凋亡率、Bcl-2/Bax、NF-κB p65的动态变化。结果模型组可见凋亡细胞的特征性变化;与对照组相比,模型组细胞凋亡率、NF-κB p65的表达量随再灌注时间的延长而明显增加(P<0.05),24 h达高峰,随后渐降低,Bcl-2/Bax的高峰点位于6 h,之后降低(P<0.05);PD组细胞凋亡率及NF-κBp65的表达量较模型组均明显降低(P<0.05),Bcl-2/Bax值则明显升高(P<0.05)。结论NF-κB p65的活化参与了体外I-R脑损伤的病理过程,PD可能通过抑制NF-κB p65的表达,上调Bcl-2/Bax值,阻止神经元凋亡,从而减轻I-R脑损伤。

白藜芦醇苷对大鼠局灶性脑缺血的保护作用

目的 研究白藜芦醇苷 (PD)对大鼠局灶性脑缺血的保护机制。方法 采用改良的线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞模型 (MCAO)。将健康成年大鼠随机分为 3组 :假手术组、缺血模型组、缺血前PD处理组。测定脑组织含水量、丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)、过氧化氢酶 (CAT)及一氧化氮合酶 (NOS)活性 ,并进行病理组织学检查。结果 PD能明显提高缺血脑组织中SOD、GSH -Px、CAT活性 ,降低MDA含量 ,减轻脑水肿 ,并有降低缺血脑组织中NOS活性的趋势 ,病理组织学检查显示 ,PD能改善脑缺血造成的大鼠脑组织损伤。结论 PD对大鼠局灶性脑缺血有明显的保护作用 ,其机制可能是通过有效的拮抗自由基损伤 ,提高脑组织抗氧化能力来实现的。

虎杖中白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取及含量测定

目的:建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷含量的高效液相色谱法,优化虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的提取工艺.方法:采用梯度法建立同时测定白藜芦醇和白藜芦醇苷的高效液相色谱方法,以白藜芦醇和白藜芦醇苷总量为考察指标,设计以乙醇浓度、溶剂倍数及醇提温度等为影响因素的4因素3水平的正交实验,确定虎杖中上述有效成分的最佳提取工艺.结果:在选定的色谱条件下,虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷可以达到基线分离.检测白藜芦醇及其苷的线性回归方程分别为Y=0.0006X-0.183(r=0.9996),Y=0.0011X-0.478(r=0.9993);线性范围分别为0.48～38.4mg/L和0.47～38.2mg/L.日内、日间精密度都小于5%,回收率在90%～105%之间,样品分析时间小于7min.虎杖中有效成分白藜芦醇和白藜芦醇苷的最佳提取工艺为乙醇浓度80%,溶剂倍数15,醇提温度70℃,提取时间2h.结论:建立了准确可靠、分析速度快可同时检测虎杖提取物中白藜芦醇和白藜芦醇苷的分析方法,优化了质量可控的提取工艺.

白藜芦醇苷对缺氧复氧HK2细胞损伤保护作用的研究

目的探讨白藜芦醇苷(polydatin,PD)对缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)肾小管上皮细胞损伤的保护作用。方法在缺氧仓中充入95%N2、5%CO2混合气体模拟缺氧环境,将人近曲肾小管上皮细胞(human kidney proxi-mal tubular epithelial cell,HK2)根据不同处理分为4组:正常对照组、H/R组、PDTC组和PD处理组,除对照组外每组均予以先缺氧24h后复氧6h处理;MTT法检测细胞成活数,免疫组化法检测NF-κBp65蛋白表达情况,RT-PCR检测ICAM-1 mRNA转录,ELISA法检测ICAM-1蛋白表达情况。结果PD处理组各对应时间点HK2细胞数量明显增多于H/R组,统计学差异显著(P<0.05)。PD处理组NF-κBp65蛋白阳性表达,ICAM-1 mRNA转录及ICAM-1蛋白表达均明显低于对照组,有统计学差异(P<0.05)。PD处理组与PDTC组各对应时间点的各项检测指标比较均无显著统计学差异(P>0.05)。结论PD对H/R诱导的HK2细胞损伤具有一定的保护作用。

毛细管电泳法测定虎杖药材中白藜芦醇苷、大黄素和大黄素甲醚的含量

目的:建立毛细管电泳法测定虎杖药材中活性成分白藜芦醇苷、大黄素和大黄素甲醚的含量。方法:采用 Agilent^(3D)CE高效毛细管电泳仪,未涂渍熔融石英毛细管(75μm×48.5cm,有效长度40.0cm),压力进样5.25Pa×3s,运行缓冲液为10mmol·L^(-1)硼酸钠溶液-甲醇(1:1),检测波长为220nm,运行电压30kV,温度25℃,内标为厚朴酚。结果:白藜芦醇苷、大黄素和大黄素甲醚浓度分别在20.5～410.8μg·mL^(-1)(r=0.9990),9.78～156.4μg·mL^(-1)(r=0.9998),12.13～121.3μg·mL^(-1)(r=0.9992)的范围内呈良好线性相关;平均回收率分别为98.9%,99.0%,96.9%,RSD 分别小于1.8%,2.1%,1.6%。结论:该方法简便快速、准确、重复性好,可用于虎杖中自藜芦醇苷、大黄素和大黄素甲醚的含量测定。

白藜芦醇苷通过上调SIRT1抑制氧化低密度脂蛋白诱导的THP-1巨噬细胞增殖和炎性因子表达

目的观察白藜芦醇苷对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导THP-1巨噬细胞(MDM)炎性增殖与细胞因子表达的影响及机制。方法培养THP-1巨噬细胞,分为对照组(仅加入普通培养基)、ox-LDL组(80μmol/L ox-LDL处理细胞24 h)、白藜芦醇苷处理组(100μmol/L白藜芦醇苷预处理2 h后,再加入80μmol/L ox-LDL处理24 h)、EX-527组(10μmol/L EX-527预处理细胞2 h)。CCK-8法检测各组细胞增殖率,分光光度计检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)以及丙二醛(MDA)含量,2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)负载法检测活性氧(ROS)的含量;实时定量PCR法检测白藜芦醇苷对组蛋白去乙酰化酶沉默信息调节因子1(SIRT1)、单核细胞趋化因子1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)mRNA水平的影响,Western blot法检测SIRT1、MCP-1、TNF-α、IL-6的蛋白水平。结果 ox-LDL促进THP-1巨噬细胞增殖。100μmol/L白藜芦醇苷组明显抑制ox-LDL诱导的细胞增殖,同时明显增加SOD含量,降低胞内MDA与ROS含量。ox-LDL抑制THP-1巨噬细胞中SIRT1 mRNA与蛋白表达,促进MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达。白藜芦醇苷显著增加ox-LDL诱导后SIRT1 mRNA与蛋白表达,抑制MCP-1、TNF-α、IL-6 mRNA与蛋白表达,EX-527能抑制白藜芦醇苷上述保护作用。结论白藜芦醇苷可通过上调SIRT1表达提高抗巨噬细胞增殖的能力,减少ox-LDL诱导细胞内活性氧生成、抑制炎性因子表达。

基于微流控芯片的高糖对模式生物线虫寿命影响及白藜芦醇苷保护性作用考察

线虫是一种经典的模式生物,在分子和基因水平上与人类具有高度同源性,目前已被广泛应用于生命科学领域。本文以微流控芯片为平台,以模式生物秀丽隐杆线虫为研究对象,在单个线虫操作的水平上探讨高糖对线虫寿命和氧化应激的影响,同时考察了白藜芦醇苷对高糖引起的线虫寿命及应激响应变化的保护性作用。结果表明,高糖会缩短线虫寿命并增强线虫的氧化应激蛋白GST-4表达;而白藜芦醇苷会显著减弱高糖诱导的线虫应激反应并延长线虫寿命,表明白藜芦醇苷对高糖诱发的线虫应激反应具有保护性作用。本文所建立的单个线虫操控的微流控芯片可以为动物水平上治疗糖尿病的相关药物评价提供一种新的潜在平台。