白血病抑制因子在肿瘤发生发展中的作用与靶向治疗策略

白血病抑制因子(LIF)属IL-6家族,是一种多效性细胞因子,因最早被发现能够抑制小鼠髓系M1白血病细胞增殖并诱导其终末分化而得名。LIF广泛参与器官、神经发育与再生和免疫调节等反应,对于肿瘤的发展同样具有重要的作用。与抑制白血病细胞生长的作用相反,LIF通常促进多种类型实体瘤的发展,高表达的LIF能够促进肿瘤的发生发展、转移、耐药和肿瘤免疫逃逸等,与患者的不良预后相关。聚焦LIF生理和病理的功能作用及其所调控信号通路的整体性,寻找新的靶向药物,对于LIF通路靶向治疗策略的开发具有重要意义。

白血病抑制因子对牛卵母细胞体外发育能力的影响

[目的]探究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)对牛卵母细胞和早期胚胎发育能力及多潜能基因表达的影响。[方法]将牛卵丘-卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes, COCs)分为4组,对照组:在卵母细胞体外成熟(in vitro maturation, IVM)和胚胎体外培养(in vitro culture, IVC)过程中均不添加LIF溶液;处理组1(T1组):IVM过程添加25 ng/mL LIF,IVC过程不添加LIF;处理组2(T2组):IVM过程不添加LIF,IVC过程添加25 ng/mL LIF;处理组3(T3组):IVM和IVC全过程均添加25 ng/mL LIF。用Fluo-3荧光指示剂检测卵母细胞胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度;挑选有第一极体排出的卵母细胞进行孤雌激活,统计各组卵母细胞卵裂率和囊胚率;利用实时荧光定量PCR检测囊胚中多潜能基因的相对表达量。[结果]与对照组相比,培养8 h后,T1组牛卵母细胞胞内[Ca2+]i浓度极显著下降(P<0.01);培养24 h后,T1组牛卵母细胞胞内[Ca2+]i浓度极显著升高(P<0.01)。T1和T3组孤雌激活后卵裂率和囊胚率均显著高于对照组,且T3组囊胚率显著高于T1和T2组(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,T3组囊胚中POU结构域5类转录因子1(POU5F1)和同源框蛋白(NANOG)基因表达量均显著高于对照组,尾型同源盒转录因子2(CDX2)基因表达量显著低于对照组(P<0.05)。[结论]在IVM过程中添加LIF可提高卵母细胞的发育能力,在IVM+IVC全过程添加LIF对早期胚胎发育和多潜能基因的表达有积极作用。

白血病抑制因子对牙本质发育的影响

目的:探究白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor, LIF)对牙本质发育的影响。方法:免疫组织化学染色观察LIF在出生后2天(post-natal 2,PN2)小鼠成牙本质细胞中的表达。建立小鼠切牙机械损伤模型,统计切牙生长速率;通过微计算机断层扫描技术(micro computed tomography, Micro-CT)、显微硬度计、电子探针测量Lif-/-小鼠及其对照切牙的牙本质密度、硬度及钙磷比(Ca/P);碱性磷酸酶(ALP)染色和茜素红染色观察LIF对成牙本质细胞矿化的影响;免疫荧光染色观察成牙本质细胞Ⅰ型胶原α1(Col1α1)、牙本质基质蛋白1(DMP1)表达情况。结果:LIF随着成牙本质细胞分化程度增加表达含量升高。Lif-/-小鼠切牙新生速率减慢。Lif-/-小鼠切牙近釉牙本质界侧牙本质密度、硬度及Ca/P均降低。ALP及茜素红染色结果显示Lif敲低的成牙本质细胞ALP水平降低、矿化结节数量减少,而加入LIF外源性刺激后可以逆转这一现象。免疫荧光结果显示Lif-/-小鼠成牙本质细胞Col1α1、DMP1表达含量降低。结论:LIF缺失抑制小鼠牙齿牙本质形成与矿化。

白血病抑制因子通过调控CD44的表达增强结直肠癌细胞干性特征

目的:探讨白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)通过调控肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)分子标志物CD44的表达增强结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞干性特征的分子机制。方法:利用TCGA公共数据库和RNAscope原位杂交方法分析LIF基因在CRC组织中的表达情况;应用慢病毒感染系统构建稳定敲减LIF的CRC细胞系(HCT116和Caco2细胞);实验分CRC细胞对照组、CRC细胞添加LIF组、CRC细胞敲减LIF对照组和CRC细胞敲减LIF组;应用干细胞成球实验、MTT、RTCA、平板集落及迁移实验检测LIF对CRC细胞的影响;应用RT-qPCR和Western blot检测LIF对CRC肿瘤球细胞干性相关标志物CD44和转录因子ELF3表达的影响;应用RT-qPCR检测敲减LIF后CD44剪接变异体的表达变化。结果:CRC组织中LIF的表达水平高于癌旁组织(P<0.01),且LIF高表达的CRC患者无病生存期缩短(P<0.05),外源性LIF可增强CRC细胞的成球、增殖和迁移能力(P<0.05),敲减LIF可抑制CRC细胞的增殖和迁移(P<0.05)。外源性LIF可上调CRC肿瘤球细胞CD44的表达(P<0.05),而敲减LIF可抑制CD44的表达(P<0.01),同时CD44剪接变异体的转录水平降低。外源性添加LIF和敲减LIF可分别增强和降低转录因子ELF3的表达水平(P<0.05)。结论:LIF通过上调转录因子ELF3,增强CRC细胞CD44的表达,进而增强CRC细胞的干性特征,促进CRC细胞的恶性进展。

白血病抑制因子在女性输卵管的表达

白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）是60年代末发现的一种多功能的细胞因子，因能抑制小鼠M1型髓样白血病细胞增殖并诱导其向正常Mφ样细胞分化而得名。研究显示，LIF在女性卵巢及卵泡液、子宫内膜及蜕膜、滋养细胞与输卯管等组织细胞均有表达，在排卵、胚泡的形成、早期发育及胚泡着床中起调节作用，人类输卵管妊娠及部分不孕症的发生可能与组织局部LIF的表达异常有关。

白血病抑制因子及其受体在早孕蜕膜和绒毛组织中表达的研究

目的 探讨正常早孕蜕膜和绒毛组织白血病抑制因子 (LIF)及其受体 (LIFR)的表达。 方法 采用原位杂交和免疫组织化学染色技术对 18例正常早孕妇女蜕膜和绒毛组织LIF -mRNA、LIF和LIFR蛋白的表达进行研究。 结果 全部早孕蜕膜组织和绒毛滋养细胞中有LIF -mRNA、LIF和LIFR蛋白表达 ,同一组织和细胞LIF和LIFR基因表达强弱基本一致 ,LIFR在绒毛滋养细胞的表达强于蜕膜。 结论 人类蜕膜和绒毛滋养细胞LIF和LIFR基因表达可能与胚泡着床、维持胎盘功能和促进胚胎发育有关。

白血病抑制因子及其受体在月经周期猕猴输卵管内的表达

应用免疫细胞化学方法对白血病抑制因子(LIF)、白血病抑制因子受体(LIFR)和gp130在月经周期猕猴输卵管内的表达进行了研究。结果表明,LIF、LIFR和gp130主要在输卵管上皮细胞内表达,而在固有层、肌层及浆膜内的表达量较少。LIF、LIFR和gp130在猕猴输卵管内的表达量随月经周期的不同而变化,在增殖中期到分泌中期的输卵管内表达量较高,而在增殖早期及分泌晚期输卵管内表达量较低。LIF及其受体在猕猴输卵管内的表达可能由卵巢分泌的类固醇激素所调控,LIF可能在猕猴排卵及早期胚胎发育过程中起重要的调节作用。

血清雌孕激素及输卵管组织白血病抑制因子及其受体表达与输卵管妊娠的关系

目的探讨白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)和血清雌孕激素[雌二醇(E2)、孕酮(P)]与输卵管异位妊娠的关系。方法采用免疫组化技术检测11例非孕组、12例宫内妊娠组和36例输卵管异位妊娠组输卵管组织中LIF和LIFR的表达水平,半定量分析其在各组间的表达差异。电化学发光法检测32例正常宫内孕组、40例异位妊娠组血清E2和P。结果 LIF在非孕组、宫内妊娠组和异位妊娠组间的表达无明显差别;在输卵管腺上皮中,异位妊娠组LIFR的表达高于其他两组(P<0.05),而非孕组和宫内妊娠组上皮间表达无明显差异(P>0.05);但是在间质中,LIFR的表达在输卵管妊娠组明显低于其他两组(P<0.01),而非孕组和宫内妊娠组上皮间其表达无明显差异(P>0.05)。异位妊娠组血清E2、P水平明显均低于正常宫内妊娠组(P<0.05,P<0.01)。相关性分析显示输卵管妊娠时输卵管腺上皮LIFR和患者血清E2正相关,间质LIFR和E2负相关。结论 LIFR的异常表达可能与输卵管异位妊娠的发生密切相关。输卵管异位妊娠组血清E2、P均明显低于正常宫内妊娠组。E2能上调输卵管腺上皮的LIFR表达,下调输卵管间质LIFR的表达。

白血病抑制因子及其受体与妊娠

白血病抑制因子 ( LIF)是一种多生物学活性的细胞因子。近年来的研究表明 ,LIF存在于子宫内膜、妊娠期蜕膜及胎盘上。它通过与其受体 ( LIFR)结合 ,从而调节胚胎的着床及妊娠的维持。LIF不仅与其他细胞因子之间相互调节 ,且它还受到激素内分泌的严格调控。进一步研究还发现 ,原因不明不孕症妇女子宫内膜 LIF的表达较正常妇女减弱甚至缺失 ,这提示 LIF的异常表达可能是原因不明不孕症患者着床失败的原因之一 。

白血病抑制因子受体在宫颈癌肺转移过程中的作用及其机制

目的探讨白血病抑制因子受体(LIFR)在宫颈癌肺转移中的作用以及Hippo-YAP信号通路在其中的作用。方法 (1)采用实时荧光定量PCR法检测50例宫颈癌肺转移患者原发灶癌组织、癌旁组织及转移灶癌组织LIFR mRNA表达。(2)用包含LIFR的重组慢病毒质粒及其阴性对照空载体质粒vector转染人宫颈癌Si Ha细胞,2.0μg/mL嘌呤霉素筛选,得到稳定过表达LIFR的宫颈癌细胞(观察组)和对照细胞(对照组)。采用Western blotting法检测两组LIFR及Hippo-YAP信号通路相关蛋白YAP、P-YAP、TAZ、p-TAZ。将两组细胞经尾静脉注射到BALB/c裸鼠体内,4周后处死裸鼠,取出肺组织,HE染色,镜下计数肺组织中所有转移灶个数。结果 (1)LIFR mRNA相对表达量:原发灶癌组织高于癌旁组织,转移灶癌组织低于原发灶癌组织和癌旁组织(P均<0.05)。(2)观察组过表达LIFR的Si Ha细胞LIFR、p-YAP、p-TAZ蛋白相对表达量高于对照组(P均<0.05),YAP、TAZ蛋白表达量与对照组比较P均>0.05。注射过表达LIFR的Si Ha细胞及对照细胞的裸鼠肺转移灶个数分别为(9±2)、(60±5)个,P<0.05。结论过表达LIFR可促进Hippo-YAP信号通路蛋白YAP、TAZ磷酸化,进而抑制宫颈癌肺转移灶的形成。

白血病抑制因子受体gp190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系

目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。 方法 :用基因重组技术将 gp130的细胞内区换成 gp190的细胞内区 ,用 PCR技术扩增合成 gp190细胞内区 C末端的一个多肽 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190 CT片段 ,并分别在 HL - 6 0细胞表达。用免疫组化和 Western印迹方法 ,分析在 L IF的诱导下 ,细胞生长和形态与 Cdc2 5 B表达的关系。 结果 :转染 pc DNA 3.0 130 /190的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量降低 ,细胞数量减少 ,细胞体积增大 ;转染 pc DNA3.0 190末端的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量增高 ,细胞表现为增殖 ,细胞体积普遍减小。 结论 :Cdc2 5 B表达量降低与 L IF诱导引发的白血病细胞 HL - 6 0增殖抑制有关 ,上述效应是由 gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190 C末端片段可干扰 L

白血病抑制因子及其受体在早孕蜕膜和绒毛组织中表达的研究

目的：探讨正常早孕蜕膜和绒毛组织白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)的表达。方法：采用原位杂交和免疫组织化学染色技术对18例正常早孕妇女蜕膜和绒毛组织LIF-mRNA、LIF和LIFR蛋白的表达进行研究。结果：全部早孕蜕膜组织和绒毛滋养细胞中有LIF-mRNA、LIF和LIFR蛋白表达，同一组织和细胞LIF和LIFR基因表达强弱基本一致，LIFR在绒毛滋养细胞的表达强于蜕膜。结论：人类蜕膜和绒毛滋养细胞LIF和LIFR基因表达可能与胚泡着床、维持胎盘功能和促进胚胎发育有关。

二至天癸颗粒对体外受精-胚胎移植周期人卵泡液白血病抑制因子和卵细胞质量的影响

目的探讨二至天癸颗粒对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期人卵泡液中白血病抑制因子(LIF)和卵细胞质量的影响。方法入选患者随机分为两组,分别用二至天癸颗粒合西药(治疗组,42例)和单用西药(对照组,38例)治疗,观察患者取卵日肾虚证候较垂体降调节后的改善情况,比较两组获卵数、优质卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率、妊娠率和卵泡液LIF水平的差异;对卵泡液LIF水平与优质卵率、优质胚胎率的关系分别进行相关性检验。结果与对照组比较,治疗组肾虚证候改善程度、优质卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率及临床妊娠率均显著提高;卵泡液LIF水平明显高于对照组;卵泡液中LIF水平与优质卵率、优质胚胎率及妊娠结局均呈正相关。结论二至天癸颗粒能显著提高卵细胞数、胚胎质量和IVF-ET成功率,其机理与增加卵泡液LIF水平、激活卵泡微环境LIF活性充分表达有关。

原因不明性习惯性流产患者子宫蜕膜白血病抑制因子基因表达研究

为了探讨白血病抑制因子 (LIF)基因在习惯性流产患者子宫蜕膜的表达与其病因的关系 ,本文利用半定量逆转录聚合酶链反应 (RT -PCR)技术 ,对 32例原因不明性习惯性流产患者 (病例组 )和 36例正常妊娠妇女 (对照组 )子宫蜕膜LIFmRNA进行了研究。结果发现对照组LIFmRNA表达水平为 1.314± 0 .45 7,病例组表达水平为 0 .5 12± 0 .2 19,两组相比较 ,差异有极显著性 (P <0 .0 1)。病例组中有 3例患者完全缺乏LIF基因表达。这些研究结果提示LIF基因表达缺失或减弱 ,可能是导致原因不明习惯性流产的原因之一 ,妊娠早期子宫蜕膜LIF基因表达检测可作为诊断原因不明习惯性流产病因的指标之一。

不同用药方案对小鼠种植窗期子宫内膜白血病抑制因子及胞饮突表达的影响

目的:探讨不同用药方案对小鼠种植窗期子宫内膜白血病抑制因子(LIF)和胞饮突表达的影响。方法:将12只去势雌鼠及36只雌性未孕动情期小鼠分为激素替代治疗(HRT)组、超排卵组、控制性超排卵(COH)组和对照组。采用免疫组化SP法检测小鼠种植窗期子宫内膜LIF蛋白的表达;RT-PCR法检测小鼠种植窗期子宫内膜LIF mRNA的表达;扫描电镜观察胞饮突表达的变化。结果:4组小鼠种植窗期子宫内膜LIF mRNA及蛋白的表达差异均有统计学意义(F分别为5.978,4.788,P均<0.05)。与对照组相比,HRT组、COH组和超排卵组LIF蛋白及mRNA表达均降低(P<0.01);HRT组高于COH组和超排卵组(P<0.01);COH组高于超排卵组(P<0.01)。HRT组小鼠种植窗期子宫内膜胞饮突的发育在形态上与对照组类似,时相上较对照组发育略延后;COH组胞饮突的发育形态上较对照组受到抑制,时相上延迟于对照组;超排卵组胞饮突的发育明显受到抑制,时相上远远滞后于对照组。结论:3种用药方案均可使子宫内膜LIF和胞饮突的表达受到影响,使内膜容受性受到损害;在对小鼠子宫内膜容受性的改善方面,HRT优于COH和超排卵,COH优于超排卵。

过表达白血病抑制因子增强子宫内膜癌细胞对化疗药物的耐受

目的探讨在体外环境中,子宫内膜癌细胞高表达白血病抑制因子(LIF)后,对顺铂及紫杉醇的敏感性变化。方法利用慢病毒在子宫内膜癌细胞(HEC-1B和RL95-2)中建立稳定过表达LIF的细胞模型,以空载体慢病毒感染细胞作为对照组,用逆转录荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验验证LIF的表达。利用CCK-8观察LIF过表达对癌细胞活性的影响,利用Annexin V-FITC/PI法和JC-1法观察LIF过表达后,顺铂及紫杉醇诱导癌细胞凋亡及线粒体膜电位下降的情况。利用免疫印迹观察LIF过表达后,癌细胞中Bcl-2家族及STAT3通路蛋白的表达。利用荧光素酶报告基因活性检测观察LIF过表达后,癌细胞STAT3转录活性的变化。在过表达LIF的两子宫内膜癌细胞中沉默STAT3,以无义小干扰RNA序列转染细胞为对照组,观察顺铂及紫杉醇对细胞的杀伤作用。结果过表达组的子宫内膜癌细胞(HEC-1B和RL95-2)较对照组表达更高水平的HLF mRNA及分泌更多的HLF蛋白(P<0.05)。LIF的过表达不影响两子宫内膜癌细胞的体外增殖活性(P>0.05),但能增加癌细胞在顺铂及紫杉醇作用下的存活率和线粒体膜电位(P<0.05)。过表达LIF能增加两子宫内膜癌细胞中Bcl-2、Bcl-xL和p-STAT3的水平,降低Bax和Bad的水平,而不影响STAT3的水平;同时STAT3的转录活性增强(P<0.05)。在稳定表达LIF的两子宫内膜癌细胞中,沉默STAT3能显著增加顺铂及紫杉醇对细胞的杀伤作用(P<0.05)。结论在体外环境中,稳定高表达LIF能增强宫内膜癌细胞对顺铂及紫杉醇的抵抗。

白介素-1α及与白介素-11、白血病抑制因子和胶质细胞源性神经生长因子联合诱导人神经干细胞向多巴胺神经元的分化

目的探讨细胞因子白介素-1α(IL-1α)及与白介素-11(IL-11)、白血病抑制因子(LIF)和胶质细胞源性神经生长因子(GDNF)联合应用对体外诱导人神经干细胞定向分化为多巴胺神经元的影响。方法采用无血清培养技术和单细胞克隆技术、免疫荧光双标技术。结果对照组仅有极少量的神经干细胞分化为不成熟的多巴胺神经元;IL-1α组分化的多巴胺神经元较多,但细胞形态欠成熟;联合因子组分化的多巴胺神经元最多,细胞较为成熟。结论IL-1α具有诱导人神经干细胞向多巴胺神经元分化的作用,联合应用IL-1α、IL-11、LIF和GDNF对人神经干细胞向成熟的多巴胺神经元分化具有协同作用。

种植窗期子宫内膜类型和白血病抑制因子的关系

目的：研究种植窗期子宫内膜类型和白血病抑制因子（LIF）的关系。方法：对94例不孕患者于排卵后7~9天行B超测量子宫内膜的厚度、宫腔镜观察子宫内膜血管网及腺体的形态分布、酶连免疫吸附实验测定宫腔冲洗液中LIF浓度。结果：Ⅰ组（腺体开口小或内膜血管呈点状或片状分布）不孕患者的平均年龄高于Ⅱ组（腺体开口大、极度扩张呈指环状，且内膜血管呈网状分布）（P〈0.01），不孕年限无差异（P〉0.05）；原发不孕和继发不孕患者子宫内膜类型无差异（P〉0.05）；Ⅰ组和Ⅱ组患者的子宫内膜厚度无差异（P〉0.05）；Ⅰ组宫腔冲洗液中LIF浓度为（15.367±16.285）pg/ml，Ⅱ组中LIF浓度为（71.583±54.233）pg/ml，高于Ⅰ组（P〈0.01）。结论：种植窗期子宫内膜类型与不孕患者的年龄及宫腔液中LIF含量有关，推测可能内膜发育差的不孕患者子宫内膜上LIF基因表达发生变异，不能分泌正常量的LIF蛋白，导致子宫内膜腺体和血管网发育不良，胚胎到达宫腔内无法着床或早期流产，这可能是影响种植窗期子宫内膜发育的分子生物学基础之一。

输卵管积水术后可改善种植窗期子宫内膜白血病抑制因子和整合素αvβ3的表达

【目的】探讨输卵管积水手术治疗对改善子宫内膜白血病抑制因子(LIF)和整合素αvβ3表达的意义。【方法】选择输卵管积水患者60例,输卵管阻塞患者30例,应用免疫组化方法测定输卵管积水患者手术治疗前后及阻塞组患者种植窗期子宫内膜LIF和整合素αvβ3的表达情况。【结果】LIF和整合素αvβ3在输卵管积水患者手术前种植窗期子宫内膜的表达水平明显低于阻塞组(P<0.05),经手术治疗后,子宫内膜种植窗期的LIF和整合素αvβ3表达水平与阻塞组无明显差异(P>0.05),手术治疗前后子宫内膜种植窗期的LIF和整合素αvβ3的表达水平有统计学差异(P<0.05)。【结论】输卵管积水降低了种植窗期子宫内膜LIF和整合素αvβ3的表达水平,LIF和整合素αvβ3可能是影响输卵管积水患者子宫内膜容受性的重要因子,手术治疗可改善种植窗期子宫内膜LIF和整合素αvβ3的表达。

白血病抑制因子对胚胎着床影响的研究进展

随着辅助生殖技术在女性不育治疗中的广泛应用,胚胎在子宫内膜着床与否已成为能否获得最终妊娠的关键。白血病抑制因子是一类具有多种生物学功能的细胞因子,与女性的生殖能力密切相关,其参与卵泡及胚胎发育、滋养细胞侵袭及胚胎着床,在输卵管性不孕、不明原因不育等中的作用已得到证实,本文对这些问题进行综述。