白鲜皮免疫调节机制的网络药理学分析及验证

本试验旨在探究白鲜皮的免疫调节能力及其机制。通过TCMSP数据库筛选出11个白鲜皮活性成分,利用GeneCard数据库和OMIM数据库预测到318个相关联的靶点基因,通过对药物靶点的筛选,获得63个疾病与药物共同的靶点。通过Cytoscape软件构建药物-活性成分-靶点网络。使用Perl计算机程序语言对GO功能富集结果进行筛选和KEGG通路富集分析。通过腹腔注射环磷酰胺建立免疫抑制小鼠模型,用1.3、2.6、5.2 g/kg BW(按生药量计)的白鲜皮提取物灌胃免疫抑制小鼠2周后检测小鼠体重、免疫器官指数、血清细胞因子含量、血常规指标。结果显示:白鲜皮中的黄芩素、β-谷甾醇、木犀草素、白鲜明碱、前茵芋碱、槲皮素等化合物通过调节AKT1、IL6、IL1B、JUN、PTGS2、VEGFA等重要靶点,参与调节白细胞介素-17信号通路、肿瘤坏死因子信号通路,进而起到免疫调节的效果。小鼠免疫抑制试验发现,相比模型组,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物对小鼠的体重没有产生显著影响(P>0.05),但极显著增加了小鼠的肝脏指数和脾脏指数(P<0.01);此外,5.2 g/kg BW白鲜皮提取物极显著提高了小鼠血清白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)、免疫球蛋白A(IgA)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量(P<0.01)。本研究展现了白鲜皮免疫调节多成分、多靶点作用的特点,可为白鲜皮在畜禽健康养殖中的应用提供科学依据。

基于网络药理学和体内实验探究白鲜皮致急性肝损伤的机制

目的通过网络药理学与动物体内实验,探究白鲜皮致急性肝损伤的机制。方法通过TCMSP、TCMIP和SwissTargetPrediction数据库得到白鲜皮的化学成分和作用靶点,GeneCards和CTD数据库获取肝损伤疾病的相关靶点。利用STRING数据库对交集靶点进行蛋白质互作网络分析并筛选出核心靶点,利用DAVID数据库完成GO功能和KEGG通路富集分析,使用Cytoscape软件构建“药物-成分-靶点”多层次关联网络图。动物实验中,通过灌胃给予小鼠92.7 g/(kg·d)白鲜皮,7 d后取材。采用苏木精-伊红(HE)、Masson、油红O染色观察肝脏病理学变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β的表达情况;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肝脏组织蛋白激酶B1(AKT1)、IL-6、TNF-α、肿瘤蛋白p53(TP53)、胱天蛋白酶3(CASP3)、IL-1β的m RNA表达。应用分子对接验证潜在毒性成分与靶点的结合情况。结果通过筛选共得到白鲜皮化学成分14个,预测靶点244个;与肝损伤的交集靶点202个。GO生物过程分析主要涉及基因表达正向调控、凋亡过程的负向调控等。KEGG通路富集分析主要包括癌症途径、磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶、TNF、IL-17等信号通路等。病理片结果显示,给予白鲜皮后,HE染色小鼠肝组织中可见重度出血,较大量的肝细胞坏死,核碎裂或溶解;Masson染色显示肝组织出现明显纤维化;油红O染色结果有大量脂滴生成。ELISA结果显示与空白组相比,给药组小鼠血清AST、ALT、ALP、LDH及肝脏MDA、TNF-α、IL-1β水平显著上升(P<0.05),肝脏SOD水平显著降低(P<0.05)。qRT-PCR结果显示给药组小鼠肝脏组织相关m RNA表达量均显著升高(P<0.05)。分子对接显示黄柏酮、白鲜碱、梣酮3个白鲜皮的潜在毒性成分与AKT1、IL-6、TNF-α、TP53、CASP3、IL-1β靶点结合性、亲和力良好。结论黄柏酮、白鲜碱、梣酮、柠檬苦素可能是白鲜皮致小鼠急性肝损伤潜在毒性成分,白鲜皮可能是通过改变AKT1、IL6、TNF-α、TP53、CASP3、IL-1β等蛋白的表达,影响能量代谢、细胞分化、炎症、氧化应激及免疫等多种途径来作用于肝脏,导致肝损伤。

复方白鲜皮湿疹膏质量标准研究

目的:参照2020版《中华人民共和国药典》复方制剂质量规范,建立复方白鲜皮湿疹膏的质量标准。方法:采用薄层色谱法(thin-layer chromatography,TLC)定性鉴别膏剂中的白鲜皮、蛇床子、黄柏、马齿苋,采用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定膏剂中指标性成分绿原酸、盐酸小檗碱、白鲜碱的含量。结果:白鲜皮、蛇床子、黄柏、马齿苋的定性鉴别方法专属性强,且阴性对照无干扰;绿原酸在0.011 04~0.176 64 mg/mL(R=0.9998)、盐酸小檗碱在0.003 204~0.051 264 mg/mL(R=0.9996)、白鲜碱在0.003 018~0.048 288 mg/mL(R=0.9992)范围内线性关系均良好;其平均回收率分别为99.09%、98.30%、97.35%,RSD分别为1.77%、1.48%、1.04%。结论:该质量标准操作简便、准确、稳定且无干扰,可用于该制剂的质量控制。

白鲜皮化学成分、药理作用及毒性研究进展

白鲜皮是芸香科植物白鲜的根皮,是主要的入药部位,为“诸黄风痹之要药”,具有清热解毒、祛风燥湿、止痒的功效。白鲜皮中主要含有生物碱、倍半萜类、柠檬苦素、脂肪酸、挥发油、黄酮及甾体类等228个化学成分。其体内外药理活性包括抗菌活性、抗炎活性、护肝活性、保护心血管活性、杀虫活性、抗癌活性、抗过敏活性、改善胃肠活动等。有相关文献报道白鲜皮还具有潜在的肝毒性,其中白鲜碱、梣酮、柠檬苦素类化合物为潜在肝毒性成分。本文通过查阅国内外文献,从化学成分、药理作用及毒性方面对白鲜皮进行综述,以期为白鲜皮临床合理应用及相关产品开发提供理论依据。

仝小林应用桑白皮、地骨皮、白鲜皮治疗老年皮肤瘙痒症经验

仝小林院士认为老年皮肤瘙痒症发病往往由于老年阴分不足,郁生内热,煎灼上焦发为肺热,并生温燥扰动皮毛。临床常在滋阴润燥的基础上,加用桑白皮、地骨皮、白鲜皮组成的三皮止痒方清热养阴止痒。方中桑白皮清泻肺热,善治浮风燥痒;地骨皮常与桑白皮同用,滋阴降火解决老年患者阴虚体态,且平肺气、除郁热,使肺热宣泄而皮毛开;白鲜皮清热燥湿、祛风解毒,为治皮肤瘙痒之靶药。三者配伍,态靶结合,既合老年皮肤瘙痒症的病机特点,又能针对性减轻患者瘙痒症状,临床常用剂量均为15~30 g。

重构本草——白鲜皮

通过古籍文献调研、中药现代研究进展及其研究成果的梳理,结合中医临床及中药学等学科领域内专家学者的认识及应用经验,经讨论认为:白鲜皮的功效主要为清热燥湿,祛风解毒。症靶为瘙痒。现代药理发现,白鲜皮及其有效成分具有抗过敏、抗真菌、抗炎、抗氧化、抗肿瘤、止血、神经保护等作用。本品内服有肝损伤可能,注意合理用药。临床煎服剂量多为5~30 g,外用剂量为15~100 g,勿大剂量久服。

伊春地区白鲜皮药用成分及多种元素检测分析

采用HPLC法测定白鲜皮中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的含量,并采用原子吸收等法同时对其含有的几种无机元素及重金属进行含量检测。不同产地白鲜皮药材中白鲜碱、黄柏酮和梣酮的含量分别为:伊美区样品白鲜碱0.845 mg/g、黄柏酮0.674%、梣酮0.185%。嘉荫县样品白鲜碱0.467 mg/g、黄柏酮0.324%、梣酮0.064%。汤旺县白鲜碱0.576 mg/g、黄柏酮0.431%、梣酮0.108%。无机元素含量由高到低排列为Ca钙、K钾、Mg镁、Na钠、Fe铁、Mn锰、Zn锌。重金属含量由高到低排列为Cu铜、Pb铅、As砷、Cd镉、Hg。

白鲜皮饮片的质量评价

目的:对市场上生产、经营和使用的白鲜皮饮片进行抽样、检验、质量分析评价,指导市场监管。方法:抽取全国各地市场流通的33批次白鲜皮样品,以《中国药典》2020年版一部白鲜皮项下方法对其性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定等进行研究。结果:33批次白鲜皮饮片的性状、鉴别、检查、浸出物、含量测定结果均符合限度规定;水分测定值总体趋势偏小,浸出物和含量测定值总体趋势偏大。结论:通过对33批次白鲜皮饮片的质量分析与评价,得出市场上的白鲜皮饮片质量良好。

白鲜皮中白鲜碱的提取工艺优化研究

通过单因素、正交实验设计优化白鲜皮中白鲜碱的提取工艺,白鲜碱作为对照品,制作标准曲线,采用高效液相色谱仪测定白鲜碱的含量。结果显示以乙醇作为溶剂时,白鲜碱的最佳提取工艺是乙醇浓度为90%,提取时间为1.5 h,料液比为1∶4,温度为70℃,在最佳提取工艺下,白鲜皮醇提取液中白鲜碱的含量为0.94 mg/g。标准曲线回归方程为y=215315x+740.97,R^(2)=0.999,在0.0005~0.02 mg/mL范围内呈良好线性关系。本工艺方法操作简便,易实现,为下一步提取白鲜碱进一步活性研究提供依据。

复方白鲜皮洗剂治疗肛门湿疹临床观察

目的:观察复方白鲜皮洗剂治疗肛门湿疹的临床疗效。方法:60例随机数字表法分为白鲜皮组和曲咪新乳膏组各30例,曲咪新乳膏组用曲咪新乳膏治疗,白鲜皮组用复方白鲜皮洗剂治疗。结果:总有效率白鲜皮组高于曲咪新组(P<0.05)。用药4周后,白鲜皮组临床症状各项评分、C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)水平均低于曲咪新组(P<0.05),用药1周、2周、3周、4周后湿疹面积评分均低于曲咪新组(P<0.05)。结论:复方白鲜皮洗剂治疗肛门湿疹疗效较好,且安全。

白鲜皮不同溶剂提取物的抗菌活性评价

目的:评价白鲜皮不同极性溶剂提取物的抗菌活性。方法:用乙醇、乙酸乙酯、石油醚三种溶剂制备白鲜皮提取物。观察三种提取物对金黄色葡萄球菌抗菌效果,选出抗菌效果最好的提取物,采用二倍稀释法测最小抑菌浓度,用鉴别试剂去鉴别该提取物可能含有的化学成分。结果:三种提取物中抑菌率强弱顺序为石油醚提取物、乙酸乙酯、乙醇提取物,其中乙醇提取物几乎没有抗菌效果。石油醚提取物的最小抑菌浓度为0.125g/mL。初步判定,石油醚提取物中可能含有生物碱、黄酮、油脂、甾体或三萜类化合物。结论:白鲜皮石油醚提取物对金黄色葡萄球菌有较好的抗菌效果,为进一步从脂溶性成分提取分离抗菌有效成分,提供了理论参考。

白鲜皮及汉黄芩素治疗银屑病的网络药理学研究及细胞验证

【目的】通过网络药理学探讨中药白鲜皮及其主要活性成分汉黄芩素治疗银屑病靶点和机制,并进行细胞验证。【方法】通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、中医百科全书数据库检索白鲜皮化学成分,以口服生物利用度(OB)和类药性(DL)筛选其主要活性成分及作用靶点,在GeneCard数据库检索银屑病疾病靶点,对二者取交集得到白鲜皮潜在调控靶点。对这部分靶点进行基因富集分析,并使用STRING数据库、Cytoscape软件制作蛋白互作图,再进一步使用CytoHubba插件进行关键基因的筛选。选取调控关键基因最多的主要活性成分汉黄芩素进行细胞实验:制作HaCaT细胞银屑病样模型,确定汉黄芩素的半抑制浓度(IC50),以10%IC50干预银屑病样细胞模型,对关键基因进行实时定量聚合酶链反应(qPCR)检测。【结果】白鲜皮共筛选出11种有效单体成分,共计对应106个有效靶点,银屑病包含4055个可供调控的靶点,取交集发现其中63个可能是白鲜皮治疗银屑病的潜在调控靶点。基因富集分析结果显示白鲜皮主要有效成分调控银屑病主要通过免疫与炎症相关通路。CytoHubba插件筛选出10个关键基因,主要受槲皮素、木犀草素、汉黄芩素调控。汉黄芩素进一步被作为研究对象,处理以1μg/mL脂多糖(LPS)诱导细胞4 h构建的HaCaT细胞银屑病样模型,汉黄芩素对HaCaT细胞的IC50为415μmol/L。以汉黄芩素10%IC50干预模型细胞,结果显示其可以显著提高PPARG mRNA表达,降低ESR1、HSP90AA1、IL-6、NF-κB、PTGS2、TNF-α、TP53 mRNA表达(P<0.005)。【结论】白鲜皮主要有效成分汉黄芩素可能通过调控TNF-α、IL-6、NF-κB、TP53、HSP90AA1、ESR1、PTGS2、PPARG mRNA表达,降低炎性水平,从而治疗银屑病。

白鲜皮主要药效成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮的抗皮炎作用比较及机制研究

目的:比较中药白鲜皮的3种主要活性成分白鲜碱、黄柏酮、梣酮在特应性皮炎(atopic dermatitis,AD)治疗中的作用并探讨其机制。方法:利用2,4⁃二硝基氟苯(2,4⁃dinitrofluorobenzene,DNFB)构建小鼠皮炎模型,观察白鲜皮醇提物、白鲜碱、黄柏酮、梣酮、地塞米松对AD小鼠引起的慢性瘙痒的作用;采用皮损评分评估小鼠皮损严重程度。苏木精⁃伊红(hematoxy⁃lin⁃eosin,HE)和甲苯胺蓝染色评估小鼠表皮厚度和肥大细胞数目。酶联免疫吸附试验(enzyme⁃linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠皮损组织中白介素(interleukin,IL)⁃4、IL⁃31、IL⁃10水平;Western blot检测Janus激酶(janus kinase,JAK)1、p⁃JAK1、信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)3、p⁃STAT3、STAT6、p⁃STAT6的蛋白水平。结果:AD小鼠引起的慢性瘙痒能明显被白鲜皮醇提物抑制。与模型组相比,白鲜皮的3种主要活性成分中:白鲜碱和梣酮能明显抑制AD小鼠引起的慢性瘙痒,改善皮损症状和炎症细胞浸润,下调IL⁃4、IL⁃31水平,上调IL⁃10水平,并抑制JAK1⁃STAT3/STAT6信号通路,但黄柏酮组与模型组比较差异无统计学意义。结论:白鲜碱和梣酮可能是白鲜皮发挥抗皮炎作用的主要活性成分。

白鲜皮“异病同治”皮炎、湿疹和银屑病的作用机制预测

目的通过网络药理学和分子对接技术分析白鲜皮“异病同治”皮炎、湿疹、银屑病的分子靶点及其相关作用机理。方法运用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)检索并筛选白鲜皮的主要活性成分,并运用STP数据库预测有效成分的作用靶点。借助TTD、OMIM、DrugBank、GeneCards、DisGeNET数据库获取治疗皮炎、湿疹、银屑病的有关靶点,借助Venny软件获取皮炎、湿疹、银屑病的相同靶点以及与白鲜皮有效成分作用靶点的交集靶点。利用Cytoscape绘制网络图,STRING数据库构建白鲜皮治疗皮炎、湿疹、银屑病的相同靶基因的蛋白互作网络图。运用Metascape数据库进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,并运用R语言进行可视化处理。通过Discovery Studio 2019 Client、AutoDock Tools、PyMOL进行分子对接和可视化。结果经筛选白鲜皮有效成分15个,与皮炎、湿疹、银屑病相同靶点的交集靶点共64个。白鲜皮活性成分治疗皮炎、湿疹、银屑病的核心靶点依次为肿瘤坏死因子(TNF)、Toll样受体4(TLR4)、血管内皮生长因子A(VEGFA)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、信号转导和转录激活因子1(STAT1)等。核心通路为高级糖基化终末产物-受体(AGE-RAGE)、白细胞介素17(IL-17)、酪氨酸激酶-信号传导及转录活化因子(JAK-STAT)信号通路等。结论白鲜皮可能通过IL-17、JAK-STAT、AGE-RAGE等多个通路作用于TNF、TLR4、VEGFA等多个靶点,从而在皮炎、湿疹、银屑病中起到抗炎止痒的作用。

中药白鲜皮的本草考证

[目的]研究本草中记载的中药白鲜皮的基源植物,为深入研究中药白鲜皮提供文献依据。[方法]查阅历代本草书籍,从名称、基源、产地变迁、药用部位、采收时期、功效等进行考证。[结果]历代本草中记载的白鲜可确定为芸香科植物白鲜,但《本草图经》中“江宁府白鲜”附图花序更为密集,《植物名实图考》中“白鲜皮”为一种木本植物;古代本草中对白鲜采收期有所分歧,现代本草认为应“春秋二季采挖,南方于立夏后采挖”。[结论]《本草图经》中“江宁府白鲜”与豆科植物刺果甘草极为相似,应为误用品或误传;《植物名实图考》中“白鲜皮”依据其描述和附图,与五加科植物楤木极为相似,应为误用品或代用品;其产地古时多在河北、四川、山东等地,而今多产于东北地区。

白鲜皮提取物的体外生物学活性研究

本次研究以白鲜皮为原料,比较不同提取环境下的提取效果,并重点考察了白鲜皮提取物的体外生物学活性。通过高效液相色谱分析,超声波提取工艺具有最优的提取效果。体外生物学活性研究显示,白鲜皮提取物具有较强的清除DPPH自由基、ABTS自由基和-OH自由基的能力,并且对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、霉菌、酵母菌有较强的抑制作用,同时还具有使透明质酸酶活性降低的能力。白鲜皮提取物具有抗氧化、抑菌、抗炎的功效,具备一定的市场开发价值。

相恶药对对白鲜皮主要成分含量的影响

目的:建立HPLC法测定白鲜皮相恶药对中白鲜碱、黄柏酮、梣酮的含量,考察不同配比对其含量的影响。方法:采用水煎法提取,将白鲜皮四组相恶药对(白鲜皮-桑螵蛸;白鲜皮-茯苓;白鲜皮-桔梗;白鲜皮-萆薢)按照不同比例配伍,以甲醇∶水(55∶45)为流动相,流速为1.0 mL/min;柱温为40℃;进样量为10μL;检测波长为236 nm,观察白鲜皮主要成分的含量变化。结果:白鲜皮-茯苓或桔梗配伍后白鲜碱、黄柏酮、梣酮含量均比白鲜皮单煎液高,存在“增效”现象;白鲜碱和黄柏酮的含量随着茯苓比例的增加而增大,随着与桔梗配伍比例的增大而减少。当白鲜皮与萆薢配伍时,3种成分含量随萆薢比例增加呈减少的趋势;白鲜皮与桑螵蛸配伍对成分含量影响较小,且这两组药对含量均比白鲜皮单煎液低,存在“减效”现象。结论:掌握不同配伍比例白鲜皮相恶药对含量的变化规律,可为白鲜皮药对配伍提供科学依据。

白鲜皮水提液与苯扎溴铵的协同杀菌效果观察

目的:考察白鲜皮水提液与苯扎溴铵的协同杀菌作用。方法:通过悬液定量杀菌试验,以协同系数T/E值为指标研究白鲜皮水提液与苯扎溴铵的协同杀菌效果。结果:白鲜皮水提液与苯扎溴铵混合溶液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌作用1 min,T/E值分别为1.75、1.70和2.41。结论:白鲜皮水提液与苯扎溴铵具有显著协同杀菌效果。

复方白鲜皮汤治疗风热型荨麻疹的临床体会研究

复方白鲜皮汤[白鲜皮30 g,地肤子30 g,苦参9 g,金银花15 g,连翘12 g,黄芩9 g,生地黄15 g,牡丹皮15 g,赤芍15 g,丹参15 g,当归9 g,生甘草9 g]是山东省中医院皮肤科宋业强教授经验方,通过跟师2年余,观察其临床疗效,效果显著,尤其是对偏于风热型荨麻疹,临床后经常以此方加减用于治疗荨麻疹患者,其对于很多西药都不好控制的慢性荨麻疹效果甚佳,以风热型荨麻疹2例典型病例给予展示分享,并于门诊中搜集60例患者,随机分为治疗组和对照组各30例,治疗组以中药复方白鲜皮汤加减口服,对照组以盐酸左西替利嗪片口服,7天为一个疗程,连服2个疗程,进行疗效对比观察,治疗组痊愈率为63.3%,显效率为86.7%,对照组痊愈率为36.7%,显效率为56.7%,两组痊愈率比较χ^(2)=4.267,P=0.039;显效率比较χ^(2)=6.648,P=0.010,差异均有统计学意义(P<0.05)。不良反应观察方面,治疗组30例患者中,3例服药后出现胃部不适感,1例出现腹泻,停药后恢复。后期随访,治疗组治愈的19例中在停药3个月内有1例复发。可见该方加减效果显著,不良反应少,值得参考推荐。

复方白鲜皮散的抗溃疡作用

采用多种急、慢性胃溃疡模型观察了复方白鲜皮散的抗溃疡作用．结果，复方白鲜皮散对醋酸型、消炎痛型、酒精型、幽门结扎型溃疡有明显的对抗作用，复方白鲜皮散４ｇ／ｋｇ能明显的抑制胃蛋白酶活性和增加胃壁粘液分泌量，而对胃液量及胃酸度则无明显影响．