百里醌对烟曲霉菌角膜炎的抗炎作用及其机制

目的 探讨百里醌(TQ)在体内、体外真菌性角膜炎模型中的抗炎作用及其机制。方法 采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和小鼠体内Draize试验筛选出TQ的安全抗炎浓度。建立小鼠真菌性角膜炎模型,给予小鼠角膜3.75 mg/L TQ(TQ组)或体积分数0.001二甲基亚砜(DMSO组)结膜下注射。显微镜下观察两组小鼠角膜炎症情况并进行临床炎症评分;采用苏木精-伊红(HE)染色法和髓过氧化物酶(MPO)实验观察TQ对小鼠角膜中性粒细胞募集的影响;应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)和酶联免疫吸附试验(ELISA),检测各组人角膜上皮细胞(HCECs)环氧化酶2(COX-2)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)蛋白和mRNA的表达水平。结果 当TQ浓度低于3.75 mg/L时,HCECs存活率≥95%,健康小鼠角膜未见荧光素钠染色,HCECs和小鼠角膜均不受TQ影响。与DMSO组相比,TQ组小鼠角膜炎症减轻,临床评分降低(F3 d=2.01,P<0.01;F5 d=3.00,P<0.01),中性粒细胞的募集和活性降低(t=6.55,P<0.001)。PCR和ELISA检测结果显示,与DMSO组相比较,TQ组HCECs中COX-2、IL-1β及IL-6 mRNA和蛋白的表达均明显降低(t=6.12~15.06,P<0.001)。结论 TQ可以通过减少中性粒细胞的聚集、降低炎症因子的表达,在真菌性角膜炎中发挥抗炎作用。

百里醌通过诱导铁死亡调控人肺腺癌A549/DDP细胞顺铂的耐药性

目的:研究百里醌对A549/DDP(人肺腺癌顺铂耐药细胞)细胞顺铂耐药性的影响,并探讨其作用机制。方法:不同浓度百里醌或者顺铂处理A549/DDP细胞,采用CCK8和平板克隆实验检测细胞增殖能力;流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测不同分组中细胞ROS水平;Western blot检测SLC7A11、GPX4、ACSL4等铁死亡相关蛋白的表达。结果:百里醌对A549/DDP细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量和时间依赖性。顺铂联合百里醌与单纯应用顺铂组相比,A549/DDP细胞增殖能力减弱,凋亡率升高。此外,与顺铂单独处理组相比,顺铂联合使用百里醌后,细胞中ROS水平明显升高,ACSL4水平升高,SLC7A11和GPX4蛋白水平明显降低。在加入铁死亡抑制剂Ferrostatin-1后可逆转A549/DDP细胞中ROS水平以及ACSL4、SLC7A11和GPX4等相关蛋白的变化,差异具有统计学意义。结论:百里醌通过诱导铁死亡调控人肺腺癌A549/DDP细胞顺铂的耐药性。

百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用

为探究百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的抑制作用及可能的抑制机理,检测了百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC)及对其生长动力学模型的影响,并测定百里醌处理后阪崎肠杆菌胞内ATP浓度、胞内pH值、膜电位、细胞膜完整性的变化,最后利用场发射扫描电子显微镜观察细胞形态的改变。结果表明:百里醌对阪崎克罗诺肠杆菌的MIC为0.3~0.6 mg/m L;百里醌使阪崎克罗诺肠杆菌的生长迟滞期延长,最大生长速率减小;百里醌影响了阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜的通透性,表现为:质量浓度为MIC和2×MIC的百里醌使细胞内ATP浓度由6.52μmol/L分别降低为0.27μmol/L和0.17μmol/L,胞内pH值分别由5.69降低为5.22和4.99,细胞膜完整菌体比例分别降低至80%和22%,引起细胞膜膜电位超极化;场发射扫描电子显微镜观测表明百里醌使阪崎克罗诺肠杆菌细胞膜褶皱,菌体干瘪。综上所述,百里醌是通过影响细胞膜通透性和改变细胞形态抑制阪崎克罗诺肠杆菌。这些结果表明百里醌有潜力作为控制阪崎克罗诺肠杆菌的天然抑菌剂应用于食品中。

百里醌联合5-氟尿嘧啶对胃癌HGC-27细胞增殖和凋亡的影响

目的观察百里醌(TQ)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)诱导对胃癌HGC-27细胞发生增殖和凋亡的影响。方法于2015年9月—2017年8月在武汉大学中心实验室进行实验,以TQ 50μmol/L(TQ组)、5-Fu 75μg/ml(5-Fu组)及TQ 50μmol/L+5-Fu 75μg/ml(联合组)刺激胃癌HGC-27细胞24 h后,CCK-8检测其对增殖的影响,Hoechst染色、流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法分析凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达。结果 CCK-8结果显示,百里醌可抑制胃癌HGC-27细胞的增殖,联合组对细胞的抑制率高于5-Fu组及TQ组(F=767.05,P<0.01)。Hoechst结果显示,联合组的凋亡率明显高于5-Fu组。流式细胞仪检测显示,对照组的凋亡率为(2.26±0.17)%,TQ组、5-Fu组及联合组的凋亡率分别为(3.76±0.44)%、(6.24±0.19)%及(9.76±0.25)%,联合组的凋亡率高于TQ组和5-Fu组(F=449.58,P<0.01)。蛋白质印迹法结果显示,联合组的促凋亡蛋白Bax表达量均较(TQ组或5-Fu组)升高(F=58.803,P<0.01),且抑凋亡蛋白Bcl-2较TQ组或5-Fu组降低(F=67.203,P<0.01)。结论百里醌联合5-氟尿嘧啶可抑制胃癌HGC-27细胞增殖并促进其凋亡,百里醌可增加胃癌HGC-27细胞对5-氟尿嘧啶的敏感性。

百里醌抑制乳腺癌血管生长的实验研究

目的：探讨百里醌对乳腺癌血管生长的作用于及其机制。方法：不同浓度百里醌作用于人脐静脉内皮细胞（HUVECs）及人乳腺癌细胞株MCF-7后,应用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,小管形成实验检测内皮细胞体外小管形成能力,Western blot法检测内皮细胞中cleaved caspase-3、p-ERK及p-AKT的蛋白水平;建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型,完全随机法分成对照组和百里醌组,免疫组织化学法检测乳腺肿瘤组织中CD31的表达,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡。结果：百里醌（20~80 nmol/L）对MCF-7细胞生长无明显抑制作用,20 nmol/L、40 nmol/L和80 nmol/L百里醌作用于内皮细胞24 h后,细胞存活率分别为（74.3±5.9）%、（68.7±5.6）%和（47.9±4.3）%;20 nmol/L、40 nmol/L和80 nmol/L百里醌作用于MCF-7细胞24 h后,细胞凋亡率分别为（2.6±0.3）%、（2.4±0.3）%和（4.6±0.4）%,而相应的内皮细胞凋亡率分别为（21.5±3.7）%、（23.8±2.9）%和（27.8±3.1）%,内皮细胞较乳腺癌细胞对百里醌反应更敏感（P〈0.05）;20 nmol/L、40 nmol/L和80nmol/L百里醌作用于内皮细胞1 h后,内皮细胞小管形成长度分别为（0.88±0.12）mm、（0.76±0.10）mm和（0.54±0.08）mm,与对照组相比,差异有统计学意义（P〈0.05）;80 nmol/L百里醌作用于内皮细胞24 h后,内皮细胞中cleaved caspase-3的水平上调,AKT和ERK磷酸化被抑制,与对照组比较差异有统计学意义（P〈0.05）;免疫组化检测移植瘤组织中CD31结果显示,百里醌组IA值明显少于对照组（P〈0.05）;TUNEL检测结果显示,百里醌组IA值明显增大（P〈0.05）。结论：百里醌可抑制体内外乳腺癌血管生长,降低p-ERK及p-AKT的水平可能是其作用机制之一。

百里醌预处理对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响

目的探讨百里醌对大鼠肾缺血再灌注损伤的影响及机制。方法随机将60只雄性SD大鼠分成假手术组(Sham组)、肾缺血再灌注损伤组(IRI组)和百里醌不同浓度预处理组(Thy组)。IRI组和Thy组用无创血管夹夹闭左侧肾蒂复制IRI模型,Sham组操作同上,但不夹闭左侧肾蒂。Thy组在缺血前45 min给予百里醌5、10、20和40 mg/kg腹腔注射。Sham组和IRI组在同一时间给予等体积生理盐水腹腔注射。再灌注24 h后处死小鼠,收集血清和肾脏标本。PAS染色检测肾脏病理改变,ELISA检测尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)的表达、白细胞介素8(IL-8)、干扰素(IFN-γ)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达,Western blot检测JAK2、STAT3、P-JAK2、P-STAT3、P53和P21蛋白表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-8、IFN-γ和TNF-α的信使RNA水平(m RNA)。结果缺血再灌注损伤增加BUN、Cr、P-JAK2、P-STAT3、P53、P21、MDA、IL-8、IFN-γ和TNF-α的表达以及肾组织病理改变,同时减少CAT、GPX与SOD表达。而百里醌治疗,可减少BUN、Cr、P-JAK2、P-STAT3、P53、P21、MDA、IL-8、IFN-γ和TNF-α表达以及肾组织病理改变,增加CAT、GPX与SOD表达,3组之间JAK2和STAT3表达无差异。结论百里醌预处理可减轻肾缺血再灌注损伤,其作用机制部分是通过抑制JAK2/STAT3/P53信号通路介导的炎症和氧化应激。

百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制

目的探索关节腔内注射百里醌对兔骨关节炎模型关节软骨的保护作用及机制。方法选用新西兰大白兔构建动物模型,分为百里醌组、骨关节炎组和假手术组各20只,观察并记录实验大白兔6min内步行距离。术后9周处死动物取左膝关节标本进行大体组织学Gross评分,切片行苏木精-伊红(HE)染色、番红染色后进行组织病理学Mankin评分,采用RT-PCR检测3组大白兔关节软骨中基底金属蛋白酶-13(MMP-13)、基底金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)和2型胶原(CollagenⅡ)等靶基因表达水平。结果百里醌组大白兔的行走距离明显大于骨关节炎组(P<0.05);而Gross评分、Mankin评分均低于骨关节炎组(均P<0.05)。与骨关节炎组比较,百里醌组MMP-13m RNA表达水平明显下降(P<0.05),TIMP-1、Aggrecan和Colla g e nⅡm RNA表达水平明显上升(均P<0.05)。结论百里醌对兔骨关节炎模型的关节软骨具有保护作用,可以减少疼痛,延缓骨关节炎的进展。百里醌可能通过下调MMP-13m RNA表达,上调TIMP-1、Aggrecan和CollagenⅡm RNA表达的分子机制实现保护作用。

百里醌对大肠癌生长和转移的抑制作用

目的探讨百里醌对大肠癌生长及转移的影响及其机制。方法百里醌作用大肠癌细胞株SW480后,cell count-ing kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖;荧光显微镜下观察细胞形态;划痕试验和Transwell小室实验分别测定大肠癌细胞体外迁移和侵袭能力;用Western blotting检测大肠癌细胞中Mucin-4、HER-2和FAK蛋白表达;建立起裸鼠大肠癌皮下移植模型,观察百里醌对裸鼠大肠癌移植瘤生长的影响;免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4阳性表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外大肠癌SW480细胞生长、迁移和侵袭,并明显诱导细胞凋亡;百里醌可呈显著下调大肠癌细胞中Mucin-4和HER-2的表达,并抑制FAK磷酸化;百里醌可显著抑制裸鼠大肠癌皮下移植瘤生长;百里醌可明显降低大肠癌肿瘤组织中Ki-67和Mucin-4的阳性表达。结论百里醌可显著抑制大肠癌生长和转移,该作用可能通过抑制Mucin-4蛋白表达而实现。

百里醌对肾缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制

目的探讨百里醌对肾缺血再灌注损伤大鼠的抗氧化及线粒体保护作用。方法检测百里醌对大鼠血清尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)、肾脏病理形态、肾组织匀浆中丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)、超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸(LD)、一氧化氮(NO)的水平以及肾组织线粒体膜电位和线粒体组分中的MDA、GPx、GSH、SOD含量和ATP酶活性变化的影响。结果百里醌可明显减少BUN、Cr、LD、NO、线粒体膜电位、肾组织和线粒体组分中MDA表达以及肾组织病理形态改变,但可明显增加ATP酶活性以及肾组织和线粒体组分中CAT、GPx与SOD的表达。结论百里醌预处理减轻肾缺血再灌注损伤可能与其抗氧化应激和保护线粒体的作用相关。

百里醌对内皮祖细胞的抑制作用

目的探讨百里醌对人脐血来源的内皮祖细胞血管生成的抑制作用及其可能机制。方法采用贴壁选择法培养人脐血内皮祖细胞(EPCs),DiI-ac-LDL吞噬试验及VEGFR-2、Ⅷ因子和CD34细胞免疫组化证实细胞属性;百里醌作用EPCs后,CCK-8法检测细胞增殖;Transwell小室实验测定EPCs体外侵袭能力;小管形成实验检测EPCs体外小管形成能力;Western blotting检测EPCs中MMP-2和MMP-9蛋白表达。结果体外成功培养出人脐血内皮祖细胞,百里醌可显著抑制体外EPCs增殖,IC50=51.2nmol/L;百里醌可抑制体外EPCs侵袭和小管形成,呈浓度依赖性;百里醌可显著下调EPCs中MMP-2和MMP-9的表达。结论百里醌可能通过抑制EPCs中MMP-2和MMP-9的表达从而抑制EPCs参与的血管生长,从而有望作为有效的血管生成抑制药物。

百里醌对肝缺血-再灌注损伤的作用研究

目的探讨百里醌对肝缺血-再灌注损伤（IRI）的作用及其机制。方法 30只C57小鼠随机均分为假手术（Sham）组、IRI组和百里醌（Thy）组（每组各10只）。术前1 h,Thy组给予百里醌（40 ml/kg）腹腔注射,Sham组和IRI组给予无水乙醇（40 ml/kg）腹腔注射。IRI组和Thy组建立小鼠肝IRI模型。再灌注4 h后收集血清和肝脏标本。光学显微镜下观察肝组织病理学改变,并予病理损伤评分;采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测肝组织肿瘤坏死因子（TNF）-α、单核细胞趋化蛋白（MCP）-1和白细胞介素（IL）-6的信使核糖核酸（mRNA）表达水平;采用酶链免疫吸附试验（ELISA）检测血清中TNF-α、MCP-1和IL-6的蛋白表达水平;采用硫代巴比妥酸（TBA）法检测肝组织丙二醛（MDA）的含量;采用ELISA法测定肝组织过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、超氧化物歧化酶（SOD）活性;采用肝组织免疫印迹法（Western blot）检测Wnt、β-catenin、p53的蛋白表达水平。结果与Sham组比较,IRI组肝组织损伤严重,损伤评分明显增加（P〈0.05）,肝组织和血清中的TNF-α、MCP-1、IL-6和肝组织MDA、Wnt、β-catenin、p53的表达均明显增多（P〈0.05~0.001）,而肝组织CAT、GPx与SOD活性均明显降低（均为P〈0.001）。与IRI组比较,Thy组肝组织损伤较轻,损伤评分明显减少（P〈0.05）,肝组织和血清中的TNF-α、MCP-1、IL-6和肝组织MDA、Wnt、β-catenin、p53的表达均明显减少（均为P〈0.05）,而肝组织CAT、GPx与SOD活性均明显增高（均为P〈0.05）。结论百里醌通过减轻炎症反应和氧化应激而减轻肝IRI,其作用机制与抑制Wnt/β-catenin/p53信号通路激活有关。

百里醌对人卵巢癌细胞株OVCAR-3增殖和凋亡的影响

目的:探讨百里醌对人卵巢癌细胞株OVCAR-3的作用及相关机制。方法:采用不同浓度(0、10μmol/L、20μmol/L和40μmol/L)百里醌处理OVCAR-3细胞。MTT法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞凋亡。RT-PCR和ELISA检测炎症因子白介素-6(IL-6)、白介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。Western blot法检测JAK2、STAT3、p-JAK2、p-STAT3、p-p65和p65表达。结果:百里醌呈浓度依赖性抑制OVCAR-3细胞的增殖和诱导OVCAR-3凋亡,降低IL-6、IL-1β、TNF-α、p-JAK2、p-STAT3和p-p65表达,而对JAK2、STAT3和p65表达无影响。结论:百里醌可抑制OVCAR-3细胞的增殖和诱导凋亡,其作用机制与抑制JAK2/STAT3/p65介导的炎症相关。

百里醌诱导膀胱癌细胞凋亡作用机制的研究

目的探讨百里醌对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的影响及对其诱导凋亡的潜在作用机制。方法应用CCK8法检测细胞增殖活性,Hoechst33258染色法检测细胞凋亡,荧光定量PCR检测基因Bcl-2、Bax、caspase-3、c-myc mRNA的表达水平,Wsetern blot法检测不同浓度百里醌作用后Bcl-2、Bax、c-myc蛋白表达水平的变化。结果细胞增殖抑制曲线结果显示百里醌能明显抑制BIU-87细胞增殖,其24、48、72h半数抑制浓度(IC50)分别是38.75±0.58、34.33±1.01和32.43±0.71μmol/L。百里醌能以剂量依赖性方式诱导膀胱癌细胞凋亡。百里醌作用于BIU-87细胞后,Bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-myc蛋白的表达量呈浓度依赖性降低,而caspase-3、Bax mRNA及caspase-3、Bax蛋白表达水平呈浓度依赖性递增。结论百里醌能抑制BIU-87细胞的增殖,且能诱导BIU-87细胞的凋亡,其诱导凋亡机制可能与Bcl-2、c-myc表达水平降低及caspase-3、Bax表达水平上调有关。

百里醌抑制膀胱癌细胞生长的实验研究

目的探讨百里醌对体外膀胱癌细胞株BIU-87生长的影响及其机制。方法百里醌单独作用人膀胱癌细胞株BIU-87及预处理NF-κB激活剂TPA后百里醌再作用BIU-87细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blotting检测膀胱癌细胞质中IκBα蛋白表达。结果与对照组相比较,百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞株BIU-87生长,并明显诱导细胞凋亡;预处理TPA可显著削弱百里醌对BIU-87细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用;百里醌干预后膀胱癌细胞质中IκBα的表达明显上调。结论百里醌可显著抑制体外膀胱癌细胞生长,并诱导细胞凋亡,该作用可能通过促进其胞质中IκBα的表达而实现。

百里醌对体内外乳腺癌细胞生长和凋亡的作用

目的研究百里醌在体内外对人乳腺癌细胞株MCF-7生长和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;AnnexinⅤ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;Western blot检测survivin以及半胱天冬酶(pro-caspase 3、pro-caspase 8、pro-caspase 9)蛋白的表达,并利用活力检测试剂盒检测caspase 3、caspase 8、caspase 9的活力;建立裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织细胞的凋亡情况;采用免疫组化方法检测肿瘤组织中ki-67、survivin和caspase 3的表达。结果百里醌对体外MCF-7细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用;百里醌可下调MCF-7细胞中survivin、pro-caspase 3和pro-caspase 8的表达,但对pro-caspase 9的表达无明显影响;活力测定结果进一步显示,百里醌作用MCF-7细胞后,caspase 3和caspase 8被激活,而对caspase 9无明显影响;在体内试验中,百里醌可抑制裸鼠皮下移植瘤生长,同时诱导体内乳腺癌细胞凋亡,另外百里醌还可分别下调和上调肿瘤组织细胞中survivin和caspase 3的表达。结论百里醌对体内外乳腺癌细胞有凋亡诱导作用,死亡配体途径可能是百里醌诱导乳腺癌细胞凋亡的主要机制之一。

百里醌对大鼠蛛网膜下腔出血后脑细胞凋亡的影响

目的研究百里醌对大鼠蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)后脑细胞凋亡的作用及其机制。方法采用血管内穿刺法建立SAH模型,将48只成年雄性SD大鼠采用数字表法随机分为假手术组(Sham组)、SAH组、媒介组和百里醌组,SAH造模24h后检测神经功能损伤、脑组织含水率和脑组织内依文蓝(EB)含量;Tunel法检测脑细胞凋亡;ELISA法检测脑组织中IL-13的表达;Western blot法检测脑组织中IL-13Rα2、p-PI_3K、p-AKT和m TOR的表达。结果 SAH组大鼠Garcia神经功能评分、脑组织含水率和EB含量较Sham组均明显升高,脑组织中IL-13的表达上调;SAH组大鼠脑出血后细胞凋亡率显著上升,IL-13Rα2、p-PI_3K、p-AKT和m TOR的表达升高;与媒介组相比较,百里醌组大鼠Garcia神经功能评分、脑组织含水率和EB含量均明显降低,IL-13在脑组织中的表达下调,细胞凋亡率显著下降,IL-13Rα2、p-PI_3K、p-AKT和m TOR的表达下调。结论百里醌可减轻大鼠SAH后脑损伤和脑细胞凋亡,其机制可能通过IL-13Rα2/PI_3K/AKT/m TOR通路实现。

百里醌对体内外人乳腺癌细胞MCF-7生长和凋亡的影响

目的探讨百里醌对人乳腺癌细胞株MCF-7的影响。方法应用CCK-8法检测百里醌对MCF-7人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制作用;流式细胞术检测MCF-7细胞凋亡情况。建立裸鼠乳腺癌皮下移植瘤模型,原位末端标记(TUNEL)法检测肿瘤组织细胞的凋亡情况;采用免疫组化方法检测肿瘤组织中ki-67、survivin的表达。结果百里醌可显著抑制体外人乳腺癌细胞株MCF-7生长,并明显诱导细胞凋亡;百里醌可显著抑制裸鼠乳腺癌皮下移植瘤生长,且明显降低乳腺癌肿瘤组织中Ki-67和survivin的阳性表达。结论百里醌可显著抑制人乳腺癌生长,该作用可能通过抑制Ki-67和survivin表达而实现。

百里醌通过磷酸化p38MAPK途径介导NSCLC细胞毒性作用的机制研究

目的探讨百里醌(TQ)对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞毒性作用的分子机制。方法 NSCLC鳞癌细胞SK-MES-1接种于96孔板,予20、40、60、80、100μmol/L TQ培养24 h,观察浓度依赖性,计算TQ的IC50值;予接近IC50浓度TQ培养SK-MES-1,观察时间依赖性;予ERK抑制剂U0126和p38抑制剂SB203580分别作用于SK-MES-1、95-D,观察细胞存活率;Western blot检测U0126预处理1 h,加TQ孵育SK-MES-1 30 min后测p-p38、p38,p-ERK1/2、ERK1/2,p-JNK、JNK蛋白表达。结果 (1)TQ呈浓度和时间依赖性降低NSCLC细胞存活率;(2)30μmol/L TQ和10μmol/L U0126+30μmol/L TQ比较其细胞存活率有显著差异(P=0.000),但与10μmol/L SB203580+30μmol/L TQ比较无显著差异(P=1.00),10μmol/L SB203580+30μmol/L TQ与10μmol/L U0126+30μmol/L TQ组比较有显著差异(P=0.000);60μmol/L TQ、10μmol/L U0126+60μmol/L TQ、10μmol/L SB203580+60μmol/L TQ两两比较均无显著差异(P>0.05);随TQ浓度增加,SB203580对95-D细胞的保护作用逐渐减弱,10μmol/L SB203580+40μmol/L TQ组与40μmol/L TQ组比较细胞存活率仍有显著差异(P=0.033);(3)Western blot结果表明U0126显著抑制ERK1/2磷酸化,p38随TQ浓度增加而磷酸化增加,但ERK1/2磷酸化减少,JNK磷酸化无明显改变。结论 TQ透过磷酸化p38途径介导NSCLC毒性作用,而不是ERK1/2途径。

百里醌对95-D细胞的毒性作用

目的探讨百里醌(TQ)对95-D细胞毒性分子机制。方法95-D肺鳞癌细胞接种于96孔板,予20、40、60、80、100μmol/L TQ培养24 h,观察浓度依赖性,计算TQ IC_(50)值;予20和40μmol/L TQ作用于95-D,实验组分别加入JNK(SP600125 5μmol/L)、ERK(U0126 10μmol/L)和p38(SB203580 10μmol/L)抑制剂1 h,再加入含上述浓度抑制剂配制的TQ培养24 h,MTT测细胞活力,Western blot测目标蛋白,观察抑制剂阻断TQ的效果及其分子机制。结果(1)TQ呈浓度依赖性毒杀95-D细胞,降低95-D细胞活率,TQ IC_(50)≈37μmol/L;(2)SP600125和U0126预处理联合20和40μmol/L TQ均可显著降低95-D细胞活力(P<0.05),而SB203580预处理加20μmol/L TQ对95-D有保护作用(P>0.05),当TQ浓度超过IC_(50)时SB203580对95-D保护作用显著下降(P<0.05);(3)TQ呈浓度依赖性磷酸化p38和ERK1/2,TQ发挥细胞毒杀作用不依赖于p53,TQ透过活化caspase9途径诱导95-D细胞凋亡,SB203580可通过减少caspase9磷酸化发挥抗凋亡作用;(4)SB203580预处理1 h后,再加入含SB203580对应浓度的TQ培养24 h,SB203580并不能完全阻断细胞毒杀。结论TQ透过磷酸化p38-caspase9途径介导95-D细胞毒杀作用,而不是ERK1/2和JNK途径。

百里醌联合吉非替尼治疗不增加EGFR-L858R/T790M突变H1975细胞系细胞毒性作用

目的探讨百里醌(TQ)是否增强吉非替尼对EGFR-L858R/T790M突变的H1975细胞的毒性作用。方法人类非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系95-D、A549、SK-MES-1、H1299、H1975,正常肝脏细胞系HL7702和正常气道上皮细胞系BEAS-2B,按1×10~4/孔,接种于96孔板,予20μmol/L、40μmol/L、60μmol/L、80μmol/L、100μmol/L TQ培养24 h,MTT测细胞存活率,筛选对TQ敏感的细胞系。筛选细胞后比较TQ、顺铂、吉非替尼三种药物72 h的细胞存活率,评价TQ联合顺铂,或者TQ联合吉非替尼对筛选细胞系的毒性增敏作用。结果 TQ对95-D和H1975细胞系比较敏感;培养72 h后,TQ对95-D细胞的毒性作用不优于顺铂和吉非替尼,但在H1975细胞中TQ毒性优于顺铂,但劣于吉非替尼,TQ组和TQ+吉非替尼组的细胞存活率比较差异无统计学意义(P>0.05);Chou-Talalay公式计算表明TQ和吉非替尼既无相加也无协同作用。结论 TQ联合吉非替尼治疗不增加EGFR-L858R/T790M突变H1975细胞系的细胞毒性作用。