UPLC-MS/MS测定心悦胶囊中6个皂苷类成分的含量

目的:采用超高效液相色谱-质谱法(UPLC-MS/MS)建立心悦胶囊中主要成分人参皂苷Rg_(1)、人参皂苷Re、人参皂苷Rb_(1)、拟人参皂苷F_(11)、人参皂苷Rd和20(S)-人参皂苷F1的含量测定方法。方法:使用Waters ACQUITY BEH C_(18)色谱柱(100 mm×2.1 mm,1.7μm),以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速为0.5 mL·min^(–1),柱温为40℃,电喷雾电离源,多反应离子监测扫描方式进行检测。结果:6个成分分别在质量浓度为9.638~963.800、9.839~983.900、9.951~995.100、5.270~1054.000、9.608~960.800、4.905~981.000 ng·mL^(–1)时与峰面积线性关系良好(r>0.998),平均加样回收率(RSD)分别为96.9%(2.2%)、100.1%(1.5%)、97.2%(1.8%)、98.5%(2.3%)、96.6%(2.8%)、100.2%(3.5%)。结论:所建立的方法快速、准确、灵敏度高,可用于心悦胶囊中西洋参茎叶总皂苷的质量控制。

三七总皂苷调控破骨细胞外泌体中差异miRNA表达抑制成骨细胞铁死亡

背景:激素性股骨头坏死多是由于长期大量使用激素所致,但具体的发病机制尚未明确,有待于进一步研究。目的:筛选出三七总皂苷干预破骨细胞来源外泌体中的差异miRNA,在此基础上构建成骨相关铁死亡调控网络,以探索激素性股骨头坏死发生的潜在机制及研究方向。方法:MTT实验检测不同浓度地塞米松和不同质量浓度三七总皂苷对Raw264.7细胞系的毒性作用;抗酒石酸酸性磷酸酶染色和TUNEL染色检测三七总皂苷对破骨细胞抑制和凋亡的影响;从三七总皂苷干预的破骨细胞中提取外泌体,对外泌体进行测序找出差异表达miRNA,通过CytoScape 3.9.1构建并可视化差异表达的miRNA与mRNA间的调控网络;通过GO分析和KEGG分析筛选候选mRNA;最后筛选出铁死亡相关的差异基因,构建铁死亡相关基因的调控网络。结果与结论:①通过MTT实验确定了适合干预Raw264.7细胞的地塞米松浓度(0.1μmol/L)和三七总皂苷质量浓度(1736.85μg/mL);②三七总皂苷对破骨细胞有抑制作用并能促进其凋亡;③从破骨细胞来源外泌体样本中鉴定出20个差异miRNA,通过靶标mRNA预测出11种成骨相关的差异miRNA,并构建了4个上调的差异表达miRNA对应于155个下调的候选mRNA以及7个下调的差异表达miRNA对应于238个上调的候选mRNA的调控网络;④在差异基因中筛选出与铁死亡相关的基因24个,最终构建了12个网络(miR-98-5p/PTGS2,miR-23b-3p/PTGS2,miR-425-5p/TFRC,miR-133a-3p/TFRC,miR-185-5p/TFRC,miR-23b-3p/NFE2L2,miR-23b-3p/LAMP2,miR-98-5p/LAMP2,miR-182-5p/LAMP2,miR-182-5p/TLR4,miR-23b-3p/ZFP36,miR-182-5p/ZFP36)。这些结果表明三七总皂苷可能通过调控破骨细胞外泌体来源miRNA的表达来调节成骨细胞铁死亡,为激素性股骨头坏死的机制研究提供新的思路。

三七总皂苷中活性单体的检测及体内代谢研究进展

现代药理学研究证实三七总皂苷具有抗自由基、抗血小板聚集、扩张血管、改善微循环及抗炎等作用,其有效成分三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)中主要含有三七皂苷R1(notoginsenoside R1,R1)、人参皂苷Rg1(ginsenoside Rg1,Rg1)、人参皂苷Rb1(ginsenoside Rb1,Rb1)、人参皂苷Rd(ginsenoside Rd,Rd)、人参皂苷Re(ginsenoside Re,Re)等单体皂苷。PNS口服难以被直接吸收,必须经过体内代谢才能发挥生物活性。然而迄今国内尚未检索到PNS体内代谢过程比较系统的研究报道。故该文对PNS的检测方法及5种活性单体在生物样品中的吸收分布及代谢等药动学研究进展进行了分析和综述。

HPLC法同时测定人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2

目的:建立高效液相色谱法同时测定人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2的方法。方法:采用ODSC_(18)(4.6mm×150mm)色谱柱,流动相乙腈0.05%磷酸水,梯度洗脱,流速1mL/min,检测波长203nm,柱温35℃。结果:人参皂苷Rb_1、Rc、Rd、Rg_3、CK和Rh_2分离效果良好,线性关系良好,相对标准偏差和回收率符合2010年版中华人民共和国药典要求。结论:本方法简便、准确、稳定、重现性好,可用于上述人参皂苷的含量测定。

HPLC-ELSD法测定血塞通注射液中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rd

目的采用HPLC-ELSD法同时测定血塞通注射液(三七)中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd。方法采用Venusil XBP C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温30℃,雾化管温度36℃,漂移管温度70℃,载气压力25 psi(1 psi=6.895 kPa)。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd分别在2.78～27.8μg/mL,9.24～92.4μg/mL,0.384～3.84μg/mL,5.55～55.5μg/mL,1.904～19.04μg/mL呈良好线性关系;血塞通注射液中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd平均回收率(n=6)分别为97.60%、100.71%、98.14%、100.94%、99.69%。结论该方法简便、准确、分离好,灵敏度高,重复性好,无干扰,可用于血塞通注射液的质量评价及三七制剂的质量控制。

三七及其主要皂苷组分在心血管疾病中的作用研究进展

血瘀是心血管疾病发生的主要病理因素。三七为活血化瘀代表药之一,其活性部位三七总皂苷的有效成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及三七皂苷R1等对心血管疾病均有较好干预作用,为近年研究热点。本文综述三七及其主要皂苷组分在心血管疾病领域的研究进展,为临床防治、药物研发提供思路。

HPLC-ELSD法同时测定心脑舒口服液中7种皂苷类成分

目的建立同时测定心脑舒口服液（人参、黄芪、五味子、党参、麦冬）中人参皂苷Rg；人参皂苷Re；人参皂苷Rf；人参皂苷Rb1；人参皂苷Rb2；人参皂苷Rb3；黄芪甲苷的方法。方法采用HPLC—ELSD法；Kromasi]C，s色谱柱；乙腈一水为流动相；体积流量为1mL／min。结果根据回归方程，7种成分人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rf、人参皂苷Rb，、人参皂苷Rb2、人参皂苷Rb3、黄芪甲苷分别在0．2028～2．028μg（r=1．00），0．3788～3．788μg（r=1．00），1．6862～16．862μg（r=1．00），0．8434—8．434μg（r=1．00），0．2048—2．048μg（r=1．00），0．1816。1．816txg（r=1．00）和0．1166—1．166μg（r=1．00）范围内呈良好的线性关系，平均回收率分别为98．1％（RSD为1．1％），98．1％（RSD为0．87％），98．5％（RSD为0．58％），98．2％（RSD为0．58％），98．6％（RSD为0．49％），98．7％（RSD为1．1％），98．5％（RSD为0．42％）。结论该方法多种成分同时测定，操作简便、准确、重复性好，可用于心脑舒口服液的质量控制。

三七总皂苷滴鼻液的制备与质量控制

目的制备三七总皂苷滴鼻液并建立其质量控制方法。方法以三七总皂苷为主药制备三七总皂苷滴鼻液;采用高效液相色谱法测定三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1的含量,色谱柱为Symmetry-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为水和乙腈梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温25℃,检测波长203 nm。结果所制备的三七总皂苷滴鼻液外观澄清;三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1分别在23.36～116.80,85.82～429.10,11.62～58.10,88.24～441.20μg.mL-1范围内具备良好的线性关系,方法重复性及回收率均符合要求。结论该制剂处方及制备方法简单,质量控制方法准确、可靠,便于质量控制。

高效液相色谱法测定云南红药胶囊中的三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量

目的建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定云南红药胶囊中三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ的含量,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。方法采用Diamonsil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈(A)-水(B)为流动相,进行梯度洗脱(0~12 min,18.0%A;12~19 min,18.0%A→25.0%A;19~27 min,25.0%A→45.0%A;27~34 min,45.0%A→55.0%A;34~40 min,55.0%A→18.0%A),检测波长为203 nm。流速0.9 m L·min^(-1),柱温30℃,进样量为10μL。结果三七皂苷R_1、重楼皂苷Ⅶ、重楼皂苷Ⅵ、重楼皂苷Ⅱ和重楼皂苷Ⅰ5个成分分别在7.32~146.40、4.70~94.00、3.85~77.00、6.97~139.40、11.09~221.80 mg·L^(-1)内与色谱峰峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率均在97.12%~99.86%,RSD≤1.37%(n=6)。结论该研究建立的HPLC法同时测定云南红药胶囊中的5个成分,样品处理方法简便,方法专属性强,测定结果准确,重复性好,为云南红药胶囊质量的全面评价提供了科学依据。

HPLC法同时测定参附注射液中五种人参皂苷的含量

目的:建立同时测定参附注射液中人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rc、Rd 5种主要皂苷成分含量测定高效液相色谱法。方法:采用Agilent ZORBAX SB-C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈(B)-水(A)二元梯度洗脱;在203 nm波长下进行含量测定。结果:表明人参皂苷Rg_1、Re、Rb_1、Rc、Rd分别在31.72~158.60、11.43~57.15、129.87~649.35、117.30~586.50、18.71~93.55μg·mL^(-1)线性范围内线性关系良好(相关系数均大于0.995),平均加样回收率分别为98.28%、98.14%、99.40%、96.80%、98.63%。结论:同时测定参附注射液中上述5种成分,方法简便、准确、分离度好、重现性好,可用于参附注射液的质量控制;采用此种多成分、多指标评价中药注射剂的方法,更能体现产品的活性成分群及功能主治,控制产品有效性。

RP-HPLC同时测定西洋参总皂苷转化产物中人参皂苷Rg_1、Rh_1、Rd、Rg_3和C-K的含量

目的：建立RP-HPLC法同时测定西洋参总皂苷转化产物中人参皂苷Rg1、Rd、Rh1、Rg3和C-K的含量。方法：采用WelchromC18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）;流动相为乙腈（A）-水（B）,梯度洗脱;流速为1.0mL/min;柱温为30℃;检测波长为203nm。结果：人参皂苷Rg1,Rh1,Rd,Rg3和C-K的线性范围分别为0.740~7.400μg（r=0.9999）;0.536~5.360μg（r=0.9999）;1.128~11.280μg（r=0.9999）;0.3080~3.080μg（r=0.9999）;0.376~3.7600μg（r=0.9999）。平均加样回收率分别为97.12%（RSD=1.22%）,98.50%（RSD=0.87%）,98.00%（RSD=1.06%）,98.12%（RSD=1.66%）和96.65%（RSD=1.48%）。结论：该法操作简便,结果可靠,适用于西洋参转化产物的含量测定。

UPLC-MSMS法在西洋参、人参、红参中3种人参皂苷的含量研究与应用

目的:建立一种可以同时测定西洋参、人参、红参中3种人参皂苷的UPLC-MSMS法。方法:采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),0.3 mL/min的流速,以0.1%甲酸水溶液和四氢呋喃-乙腈溶液(5∶95)为流动相进行梯度洗脱,使用电喷雾离子源(ESI),多反应监测(MRM)的模式。结果:拟人参皂苷F11、人参皂苷Rf、Re分别在0.005μg/mL~0.20μg/mL、0.01μg/mL~0.40μg/mL、0.01μg/mL~0.40μg/mL的浓度范围内,呈良好的线性关系;3种人参皂苷的平均回收率分别为93.9%(RSD=1.9%)、91.9%(RSD=2.3%)和101.3%(RSD=4.1%),检出限分别为0.0005μg/mL、0.001μg/mL、0.003μg/mL,定量限分别为0.0017μg/mL、0.003μg/mL、0.010μg/mL。结论:该法具有准确,快速,灵敏,简便的特点,适用于西洋参、人参、红参3种人参皂苷化合物含量测定。

HPLC测定不同厂家复方丹参片中三七皂苷R_1和人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1含量

目的：建立复方丹参片（丹参，三七，冰片）中三七有效成分的高效液相色谱测定方法。方法：采用Kromasil C18（5μm，250mm×4．60mm）色谱柱；流动相：乙腈-0．05％磷酸水溶液梯度洗脱（0～12min：乙腈浓度为22％；12～20min：乙腈的浓度由22％递升至28％；20～60min：乙腈的浓度由28％递升至43％）；流速为1mL／min，检测波长为203nm。结果：三七皂苷R1和人参皂苷Rg1、Re、Rb1的线性范围分别为0．326～3．260μg（r=0．9997），0．890～8．900μg（r=0．9998），0．144～1．440μg（r=0．9996），0．940～9．400μg（r=0．9998）；平均加样回收率（n=6）分别为99．08％，98．36％，97．54％，96．07％，RSD分别为4．41％，1．64％，2．77％，1．12％。结论：本测定方法简便可行、重复性好，可用于本制剂中三七多种有效成分的含量测定。

人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响

目的探究人参皂苷Rg3通过调控E2F1对人胃癌SGC-7901细胞生物行为学的影响。方法MTT测定不同浓度人参皂苷Rg3(0、80、160、320μmol·L^(-1))对细胞增殖影响;流式细胞术测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞凋亡的影响;划痕愈合实验和Transwell实验测定不同浓度人参皂苷Rg3对细胞迁移及侵袭的影响;Western blot测定不同浓度人参皂苷Rg3对E2F1、MMP-2、MMP-9、BCL-2、Bax表达的影响。结果80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞存活率与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞凋亡率与空白对照组比较明显增加,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞迁移数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞侵袭数目与空白对照组比较明显降低,且呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组E2F1 mRNA与E2F1蛋白表达量相较空白对照组明显减少且,呈浓度依赖性(P<0.05)。80、160、320μmol·L^(-1)人参皂苷Rg3组细胞中MMP-2、MMP-9、BCL-2蛋白表达量与空白对照组比较明显降低,BCL-2与空白对照组比较明显升高,且呈浓度依赖性(P<0.05)。结论人参皂苷Rg3能降低胃癌SGC-7901细胞增殖能力,抑制细胞迁移及侵袭能力,同时还促进SGC-7901细胞凋亡,且具有浓度依赖性,其作用机制可能通过E2F1因子下调MMP-2、MMP-9、BCL-2表达,上调Bax表达有关。

氮磷钾配方施肥提高林下七叶一枝花产量和重楼皂苷含量

【目的】研究氮、磷、钾不同组合用量对林下栽培七叶一枝花产量及重楼皂苷含量的影响,为七叶一枝花人工栽培合理施肥提供参考。【方法】采用“3414”试验设计,利用福建南平杉竹混交林下4年生七叶一枝花(Paris polyphylla Smith var.chinensis (Franch.) Hara)进行田间试验,将氮、磷、钾肥当地适宜水平定为“2”,分别为N 270 kg/hm^(2)、P_(2)O_(5) 375 kg/hm^(2)、K_(2)O 300 kg/hm^(2),不足“1”和过量“3”水平分别为适宜水平的0.5、1.5倍。在七叶一枝花收获时期,测定其植株形态、根茎产量、4种重楼皂苷含量等指标,并计算生产效益。【结果】氮、磷、钾肥用量均显著影响七叶一枝花的植株形态、根茎产量和重楼皂苷含量,对七叶一枝花根茎产量的提升率分别为59.75%、27.54%、63.15%,以钾肥的贡献率最高,其次为氮肥,磷肥较低。N1水平下,增加磷、钾水平显著降低七叶一枝花的株高、茎粗和叶长,N3水平七叶一枝花的株高、叶长均达到最高,但茎粗低于N1和N2水平,表明适宜氮肥用量对七叶一枝花的生长至关重要。七叶一枝花的根茎产量和总重楼皂苷含量还受肥料交互效应的影响。当N、P_(2)O_(5)、K_(2)O用量分别为270、375、450 kg/hm^(2) (N_(2)P_(2)K_3)和270、375、300 kg/hm^(2)(N_(2)P_(2)K_(2))时,根茎产量达到最高,分别为2804、2648 kg/hm^(2)。N_(2)P_(2)K_3的总重楼皂苷含量也最大,达到1.62%,显著高于其他处理。施氮磷钾肥净增收效益在N_(2)P_(2)K_3处理下最高,N_(2)P_(2)K_(2)处理次之。【结论】适量的氮、磷肥配合较高的钾肥可显著提升七叶一枝花根茎产量和总重楼皂苷含量,提高七叶一枝花的经济效益。因此,在供试地区,推荐N、P_(2)O_(5)、K_(2)O用量分别为270、375、450 kg/hm^(2)。

HPLC测定复方丹参方中三七皂苷类成分的含量

目的 建立复方丹参方中三七皂苷类成分的含量测定方法,并初步考察复方丹参方溶液的稳定性。方法采用高效液相色谱法,分别以乙腈-0.05％磷酸(19:81)为流动相,于203 nm处检测三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re;以乙腈-水(33:67)为流动相,于203 nm处检测人参皂苷Rb1。结果 三七皂苷R1进样量在0.24～3.6μg范围时,相关系数r=0.9997;人参皂苷Rg1进样量在1.2～18μg范围时,相关系数r=0.9994;人参皂苷Re进样量在0.08～1.2μg范围时,相关系数r=0.9997;人参皂苷Rb1进样量在0.25～3.72μg范围时,相关系数r=0.9998。复方丹参方溶液于4℃放置4个月后三七皂苷类成分的含量无明显变化。结论 本法简便,快速,准确,重现性好,可作为复方丹参方的质量控制标准。复方丹参方中三七皂苷类成分的稳定性良好。

反相高效液相色谱法测定桔梗中3种三萜皂苷类化合物的含量

目的建立RP-HPLC法同时测定桔梗中去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E和桔梗皂苷D3的含量。方法以Hypersil-ODS（4.6 mm×250 mm,5μm）为色谱柱,流动相为乙腈（A）-水（B）,梯度洗脱,流速为0.8 mL.min-1,检测波长210 nm,温度为室温。结果去芹糖桔梗皂苷E、桔梗皂苷E和桔梗皂苷D3分别在4.16083.2、10.75215.0、4.08081.6μg.mL-1与峰面积线性关系良好,平均回收率分别为96.5%、97.0%和97.3%,RSD分别为1.2%、1.0%和1.3%。结论该方法快速稳定且分离度好,为桔梗的质量控制提供可借鉴的分析方法。