中药复方WCAP及拆方对人胰腺癌皮下移植瘤裸小鼠模型及IL⁃6/STAT3信号通路的影响

目的观察中药复方WCAP及其拆方对人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤生长及对白介素-6/信号转导和转录激活因子3(IL-6/STAT3)信号通路的影响。方法建立人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤模型,将30只SPF级裸小鼠随机分为6组,即空白对照组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、复方组、健脾组、清热解毒组和软坚散结组,每组5只,观察各组裸小鼠皮下移植瘤瘤质量及抑瘤率,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)和Western blot法分别检测瘤组织中IL-6/STAT3通路及其下游靶基因c-myc癌基因(c-myc)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的mRNA和蛋白表达水平。结果①与空白对照组比较,各干预组瘤质量均轻于空白对照组,5-FU组、复方组及各拆方组均可抑制裸小鼠皮下移植瘤的生长(P<0.05),复方组抑瘤率高于各拆方组(P<0.05)。②与空白对照组比较,5-FU组、复方组和软坚散结组IL-6/STAT3通路及其下游靶基因c-myc、cyclin D1、VEGF、MMP-2的mRNA表达均降低(P<0.05)。③与空白对照组比较,5-FU组、复方组IL-6/STAT3通路及其下游靶基因涉及的c-myc、cyclin D1、VEGF、MMP-2蛋白表达均降低(P<0.05),软坚散结组c-myc、MMP-2和IL-6蛋白表达均降低(P<0.05)。结论WCAP复方可抑制人胰腺癌BxPC-3细胞裸小鼠皮下移植瘤的生长,其机制与抑制IL-6/STAT3通路并调节其下游靶基因c-myc、cyclin D1、VEGF、MMP-2的表达水平有关;与各拆方相比,WCAP复方在抑瘤率、小鼠体质量及IL-6/STAT3通路及其下游靶基因调控方面作用更好。

菌群移植对氟尿嘧啶抗鼠源结肠肿瘤的协同作用

目的:观察菌群移植对氟尿嘧啶抑制结肠癌MC38荷瘤小鼠移植瘤生长的协同作用效果。方法:选取雌性C57BL/6N小鼠21只作为研究对象,分为空白组、对照组、实验组。培养MC38小鼠结肠癌细胞接种于小鼠右前肢背部皮下构建结肠癌荷瘤模型。空白组无任何处理,取其粪便制作干预菌液,实验组和对照组自分组后每两天1次给予0.1 mL菌液/生理盐水灌胃至实验结束。成瘤后第6天,按照65 mg/kg剂量连续5天腹腔注射氟尿嘧啶,3天后处死实验动物,计算肿瘤体积和抑瘤率。采用HE染色观察结直肠组织情况。采用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子Alpha(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)血清水平,通过16S测序进行肠道菌群检测和分析。结果:与空白组相比,实验组和对照组模型小鼠体重均明显降低(P<0.05),但对照组和实验组体重变化未见明显差异(P>0.05)。对照组荷瘤平均体积大于实验组荷瘤平均体积(P<0.05)。与对照组相比,实验组结直肠组织病理镜下可见更多的隐窝细胞,绒毛更完整。实验组IL-6血清水平高于对照组和空白组(P<0.05);实验组和对照组TNF-α血清水平与空白组相比升高明显(P<0.05),但实验组和对照组差异无统计学意义(P>0.05)。16S测序结果提示自体菌群移植干预后,实验组肠道菌群更接近空白组,对照组菌群丰富度最低,但三组未见明显区别(P>0.05)。进一步分析三组菌群差异,发现在属(Genus)水平上,与空白组相比,实验组的Mar-Odoribacter和Tan-Parabacteroide富集增多,对照组Ent-Escherichia-Shigella富集增多。结论:菌群移植后上调Mar-Odoribacter和Tan-Parabacteroide菌,下调Ent-Escherichia-Shigella菌,可保护肠道黏膜,改善机体代谢,激活机体免疫系统,促进了IL-6和TNF-α细胞因子表达,提高抗肿瘤免疫能力,对氟尿嘧啶抑制MC38荷瘤小鼠移植瘤增殖起到了协同作用。

小鼠结肠癌移植瘤模型的建立及其多鼠MRI研究

目的建立小鼠结肠癌CT-26皮下移植瘤模型,探讨用高场强MR对其行多鼠MR研究的价值。方法于小鼠腋部皮下注射CT-26细胞悬液,3周后行多鼠MR检查(一次4只荷瘤小鼠),观察肿瘤的大小及特征,并取肿瘤标本做病理切片检查。结果建立了小鼠结肠癌皮下移植瘤模型,并成功尝试了采用1.5TMR行多鼠MR检查,获得的MR图像可较为清晰的显示肿瘤的位置、大小、形态、内部信号及其向周围生长情况等。MR测量所得的肿瘤体积与病理测量结果密切相关(r=0.993,P<0.01),较大体测量与病理所测结果间的相关性更高(r=0.928,P<0.01)。结论1.5TMR行多鼠MR检查能无创性、清晰地显示小鼠结肠癌移植瘤模型皮下瘤灶的生长情况。

雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究

目的研究天然活性化合物雷公藤红素(celastrol)对裸鼠移植肿瘤的抑制作用。方法建立人源肝癌HepG2细胞的裸鼠皮下移植肿瘤模型。20只裸鼠随机分为4组,即空白对照组和雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组,每组分别按4.0 mg/kg、2.0 mg/kg、1.0 mg/kg雷公藤红素腹腔给药,每日一次,每周5 d,共给药30 d,实验中每5 d测量一次肿瘤体积的变化。结果雷公藤红素高剂量组、中剂量组和低剂量组的体积抑瘤率分别是89.52%、65.60%和12.21%,与空白对照组相比,高剂量组、中剂量组的差异具有统计学意义(P<0.05)。高剂量雷公藤红素给药后对裸鼠肝脏和肾脏等产生严重的毒性反应。结论雷公藤红素对裸鼠肝癌皮下移植瘤具有良好的体内抗肿瘤效果,应进一步开展药物新剂型及分子结构优化方面的研究,减少其毒副反应。

CYB5D2对乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠肿瘤生长的影响

[目的]研究CYB5D2对乳腺癌皮下移植瘤模型大鼠肿瘤生长的影响。[方法]通过乳腺癌MCF-7细胞系建立乳腺癌裸鼠皮下移植瘤动物模型。将含有CYB5D2表达的质粒稳定转染MCF-7细胞,多点注射,将稳定转染的细胞注入裸鼠皮下,作为观察组,同时设置shRNA-CYB5D2阴性质粒为阴性对照组,PBS为空白对照组。测量各组大鼠肿瘤体积及质量;裸鼠转移瘤模型建立成功后处死小鼠,qRT-CPR法检测肿瘤组织内CYB5D2 mRNA表达水平;Western Blot法检测各组裸鼠转移瘤组织内上皮细胞间质转化(EMT)标志表白表达情况,酶联免疫吸附法检测裸鼠转移瘤细胞上清液中MMP-2及MMP-9水平。[结果]观察组转移瘤平均体积及质量显著低于阴性组与空白组(P<0.05),阴性组与空白组裸鼠转移瘤体积及质量无明显差异(P>0.05)。提取试验小鼠肿瘤组织总RNA,qRT-CPR法检测提示观察组肿瘤组织内CYB5D2 mRNA表达量显著高于阴性组及空白对照组(P<0.05),而阴性组与空白组间差异无显著性差异(P>0.05);Western Blot法检测结果显示,观察组转移瘤组织内E-cadherin、β-catenin蛋白表达水平显著高于与阴性组及空白组(P<0.05),而N-cadherin及Snail蛋白表达显著低于与阴性组及空白组(P<0.05)。阴性组与空白组转移瘤组织内E-cadherin、β-catenin、N-cadherin及Snail蛋白表达无显著性差异(P>0.05);观察组裸鼠转移瘤细胞上清液中MMP-2及MMP-9水平显著低于与阴性组及空白组(P<0.05),而阴性组与对照组MMP-2及MMP-9水平无显著性差异(P>0.05)。[结论]上调CYB5D2基因可有效抑制乳腺癌皮下移植模型大鼠瘤体生长,推测上调CYB5D2基因可能通过下调N-cadherin、Snail、MMP2及MMP9,上调E-cadherin、β-catenin,逆转EMT,发挥抗肿瘤功效。

黄芪多糖对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤Wnt基因转导通路的影响

目的观察黄芪多糖对人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤Wnt基因转导通路中相关因子β-连环蛋白(β-catenin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达的影响。方法将30只SPF级雌性裸小鼠(BALB/c)随机分为对照组、模型组、黄芪多糖组,每组10只。模型组和黄芪多糖组均经右侧肩胛背部皮下注射人子宫内膜癌细胞系Ishikawa肿瘤细胞悬液制作人子宫内膜癌裸鼠皮下移植瘤模型。造模4周后,黄芪多糖组给予黄芪多糖肌肉注射,对照组、模型组注射等量生理盐水,均连续14 d。实验结束后处死各组小鼠,摘取瘤体,计算抑瘤率;采用免疫组化法检测子宫内膜癌组织中β-catenin、E-cadherin蛋白表达情况,RT-PCR法检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达情况。结果黄芪多糖组瘤体积、瘤质量均明显低于模型组(P均<0.05),抑瘤率明显高于模型组(P<0.05);模型组β-catenin蛋白和β-catenin mRNA表达水平均明显高于正常组(P均<0.05),黄芪多糖组均明显低于模型组(P均<0.05);模型组Ecadherin蛋白和E-cadherin mRNA表达水平均明显低于对照组(P均<0.05),黄芪多糖组均明显高于模型组(P均<0.05)。结论黄芪多糖可促进E-cadherin蛋白和基因表达,抑制β-catenin蛋白和基因表达,通过调控Wnt基因转导通路而发挥抗肿瘤作用。

聚合人脐带血红蛋白氧载体增强乳腺癌裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的初步研究

目的探讨聚合人脐带血红蛋白氧载体(PolyCHb)对人乳腺癌MCF-7细胞裸鼠皮下移植瘤化疗敏感性的影响及其机制。方法收集处于指数生长期的MCF-7细胞,制成密^度为5×10^(7)个/mL的悬浮细胞,按0.2 mL/只接种于18只BALB/c-nu裸鼠右肢皮下,建立裸鼠移植瘤模型,待肿瘤体积达到100 mm^(3)左右时,随机均分为化疗组:多柔比星(DOX)5 mg·kg^(-1),1次/周;化疗+PolyCHb治疗组:除给药(DOX)(同化疗组)外,PolyCHb 600 mg·kg^(-1),3次/周;对照组:生理盐水90 mg·kg^(-1),1次/周;均为经尾静脉连续注射4周。自注射当天(d0)起,每3 d 1次测量各组裸鼠肿瘤体积,据此绘制其各自(组)肿瘤生长曲线。38 d结束肿瘤生长观察,剥瘤并称取瘤重,计算抑瘤率;HE染色观察肿瘤组织病理变化,免疫组化检测肿瘤组织中HIF-1α表达,采用TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡情况,荧光染色测定各组肿瘤组织活性氧(ROS)的含量。结果化疗+PolyCHb组、化疗组和对照组至d38时的肿瘤体积(mm^(3))分别为:196.35±103.45 vs 316.29±62.88 vs 519.42±177.33(P<0.05);化疗+PolyCHb组与化疗组抑瘤率(%)分别为62.20 vs 39.11;HE染色和TUNEL检测:化疗+PolyCHb组肿瘤组织生长区域细胞坏死和凋亡增多;免疫组化:化疗+PolyCHb组HIF-1α表达水平降低;荧光染色:化疗+PolyCHb组[活性氧(ROS)]含量增多。结论PolyCHb增加了乳腺癌裸鼠皮下移植瘤化疗的敏感性,其作用机制可能与其提高肿瘤组织内ROS含量,促进肿瘤细胞的凋亡有关。

夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼抑制肺癌皮下移植瘤增殖的作用机制

目的:探讨夏枯草消瘤合剂通过改变巨噬细胞M2转化途径增强安罗替尼对非小细胞肺癌(NSCLC)皮下移植瘤模型小鼠抑瘤的作用与机制。方法:24只SPF级雄性BALB/cNude裸小鼠随机分为生理盐水组、安罗替尼组、夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼组,每组8只,皮下注射NCI-H1975细胞建立皮下移植瘤模型,造模成功后,各组灌胃给予相应药物。测量瘤体大小,采用转录组测序寻找差异基因,RT-qPCR法检测验证差异基因相关的巨噬细胞炎症因子mRNA表达水平。结果:与生理盐水组比较,夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼组能显著抑制瘤体体积增长(P<0.05),且疗效优于安罗替尼组(P<0.05)。夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼组及安罗替尼组治疗的抑瘤率分别为58.6%、43.4%。与安罗替尼组比较,夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼组瘤体中检测到589个显著差异的基因,其中287个基因上调,302个基因下调,使用TIMER2.0利用IRIS数据库从RNA-seq数据中提取的免疫细胞表达特征,发现夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼组与安罗替尼组主要差异免疫细胞为巨噬细胞比例增高。RT-qPCR验证显示,与生理盐水组、安罗替尼组比较,夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼组能显著提高M1巨噬细胞相关CCL2、CCL3、IL-12、IL-1b促炎因子mRNA表达,下调M2相关抗炎细胞因子IL-10mRNA的表达(P<0.01)。结论:夏枯草消瘤合剂联合安罗替尼治疗能增强抑制NSCLC细胞皮下移植瘤增殖,其机制可能与促进M1表型巨噬细胞极化,M2表型巨噬细胞去极化有关。

BALB/c裸鼠皮下接种人胃癌MGC-803细胞成瘤实验方法比较

目的 通过不同的接种方法,筛选出建立胃癌皮下移植瘤模型的最优方法,并以此为瘤源建立胃癌皮下移植瘤模型。方法 (1)体外培养人胃癌MGC-803细胞,PBS调节细胞浓度至1×10^(7)个/mL,按0.2mL/只接种于BALB/c裸鼠左侧腋下;(2)BALB/c裸鼠接种人胃癌MGC-803细胞成瘤后,生理盐水按比例加入瘤块组织进行研磨,按0.2mL/只将研磨液接种于BALB/c裸鼠左侧腋下;(3)将成瘤裸鼠的移植瘤剥离出,在载玻片上切成约2mm×2mm×2mm大小的瘤组织块,进行瘤转瘤接种。结果 成功筛选出建立胃癌皮下移植瘤模型的最优方法,将细胞成瘤裸鼠的瘤块进行瘤转瘤,直接植入皮下。结论本实验利用人胃癌MGC-803细胞,成功建立了BALB/c裸鼠腋下接种人胃癌MGC-803细胞成瘤实验方法,该模型为胃癌的进一步治疗及相关指标的检测提供了一个良好的技术平台。

构建慢病毒介导缺氧诱导因子HIF-1α在宫颈癌细胞中的表达及其对裸鼠移植瘤的作用

目的 探讨使用慢病毒载体介导的HIF-1α对裸鼠宫颈癌移植瘤生长、增殖和转移的影响,并寻找宫颈癌新的基因治疗靶点。方法 采用慢病毒介导技术,分别在SiHa和C33a细胞中提高C33a细胞的HIF-1α表达,同时敲减SiHa细胞的HIF-1α表达。通过qRT-PCR和Western blot技术验证慢病毒转染后HIF-1α表达的效率,并构建裸鼠移植瘤模型。从而验证HIF-1α表达改变对裸鼠体内肿瘤形成、增殖速度、肿瘤体积和肿瘤重量的影响及HIF-1α表达改变对肿瘤发展过程的影响。结果 敲减和过表达HIF-1α的SiHa和C33a细胞分别注射于裸鼠左侧腋窝皮下,1周后形成肿瘤,4周后测量移植瘤体积。干扰HIF-1α的裸鼠移植瘤体积较对照组较小,两者差异具有统计学意义(P<0.05),即干扰HIF-1α对裸鼠瘤体的生长具有抑制作用;而HIF-1α过表达后,裸鼠移植瘤体积较对照组较大,两者差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 HIF-1α的表达改变与宫颈癌细胞的增殖和恶化存在一定相关性,HIF-1α表达的改变可以调控肿瘤增殖过程。

人胶质母细胞瘤细胞系Y1203的构建及应用

目的构建一株具备干细胞表型的胶质母细胞瘤细胞系Y1203,用于研究肿瘤细胞干性维持以及治疗耐药的潜在机制。方法Y1203细胞来源于一位49岁女性胶质母细胞瘤患者复发再手术切除的肿瘤组织。使用Y1203细胞构建人源胶质母细胞瘤原位及皮下移植(patient derived tumor xenograft,PDX)模型。采用流式细胞术检测不同代数Y1203细胞的细胞周期。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测Y1203细胞的干细胞标志物转录因子SOX-2(transcription factor SOX-2,SOX2)和细胞黏附分子分化抗原簇-44(cluster of differentiation-44,CD44)表达。基于转录组测序技术(RNA sequencing,RNA-Seq)比较Y1203细胞和U87细胞表达谱差异。结果短串联重复序列(short tandem repeats,STR)鉴定确认Y1203细胞与患者肿瘤组织同源,且其与ExPASy数据库中涵盖的常见细胞系完全不同。基因检测结果提示异柠檬酸脱氢酶1(isocitrate dehydrogenase 1,IDH1)无突变,端粒酶反转录酶(telomerase reverse transcriptase,TERT)启动子突变,原癌基因(B-Raf proto-oncogene,BRAF V600E)、抑癌基因(tumor protein p53,TP53)和转录调控因子(ATRX chromatin remodeler,ATRX)基因突变。人胶质母细胞瘤细胞系Y1203可实现在体外无限增殖并用于建立PDX模型。与其他胶质瘤细胞系相比,Y1203细胞中高表达的肿瘤干细胞标志物为SOX2和CD44,并显著富集胶质瘤干细胞相关通路。结论人胶质母细胞瘤细胞系Y1203分化低,恶性程度较高,对放射性治疗和化学治疗抵抗性强,具有胶质母细胞瘤干细胞特性。该细胞系的建立为胶质母细胞瘤临床前研究提供了实验基础。

利用α-氰基丙烯酸烷基酯医用胶建立人肝癌裸鼠皮下-肝原位移植瘤模型的实验研究

目的使用α-氰基丙烯酸烷基酯建立人肝癌-裸鼠皮下肝原位移植瘤模型。方法将BEL-7402人肝癌细胞接种于裸鼠皮下,建立皮下模型。形成皮下移植瘤后再移植于裸鼠肝内,利用α-氰基丙烯酸烷基酯建立肝原位移植瘤模型(间接肝原位移植瘤模型)。结果成功地利用α-氰基丙烯酸烷基酯建立了间接肝原位移植瘤模型。移植瘤存活率达95.8%。结论与传统的肝原位移植瘤模型比较,利用α-氰基丙烯酸烷基酯建立间接肝原位移植瘤模型方法简便,成功率高,便于推广使用。

转染BRMS1基因对人类胰腺癌细胞在裸鼠体内肿瘤转移能力影响的研究

目的建立人类胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,研究BRMS1基因对人类胰腺癌细胞在裸鼠体内肿瘤转移能力的影响,寻找胰腺癌基因治疗的有效模式。方法利用脂质体转染技术将构建的p EGFP-C1-BRMS1重组载体、p EGFP-C1空载体稳定转染入人类胰腺癌细胞株PANC-1中,接种三组(转染组、空载体组、未转染组)细胞于裸鼠背部皮下,5周后处死裸鼠,取肿瘤、淋巴结及肺组织进行组织病理学检查。结果将p EGFP-C1-BRMS1重组载体、p EGFP-C1空载体转染入人类胰腺癌细胞株PANC-1,并建立了人类胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型,三组裸鼠肿瘤大小无明显差异,但转染组裸鼠淋巴结转移率明显低于空载体组和未转染组。结论 BRMS1基因不影响人类胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,但可以抑制人类胰腺癌细胞裸鼠皮下移植瘤的局部淋巴转移。

遗传印记基因PEG10转基因小鼠的建立及其皮下移植瘤生长和转移的变化

目的 建立PEG10转基因小鼠模型，研究PEG10对小鼠皮下移植瘤的生长和转移的影响。方法PCR阳性转基因鼠经RT—PCR、Westernblot鉴定后，皮下注射H22细胞，连续测量肿瘤体积。12d后取肿瘤和肝脏组织进行HE染色，肝脏组织进行SP染色，检测PEG10蛋白的表达。计量资料采用独立样本的f检验。结果阳性首建鼠的肝脏中检测到目的基因和蛋白的表达。转基因小鼠皮下瘤的体积（4．08、4．23cm3）及质量（6．89、6．48g）均显著高于野生型小鼠（1．61cm。及1．63g，P〈0．05），均向周围组织侵袭并出现肝转移，肝脏中检测到PEG10蛋白；野生型小鼠的肿瘤组织有包膜，未出现肝转移。结论构建的PEG10转基因小鼠模型可促进皮下移植瘤的生长、侵袭和转移。

解毒颗粒对H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用的研究

目的：观察解毒颗粒对小鼠H22皮下移植瘤的抑制作用。方法：建立H22皮下瘤小鼠模型,随机分为解毒颗粒低剂量组（JL）、解毒颗粒高剂量组（JH）、索拉非尼组（SF）、生理盐水组（NS）,造模1天后开始给药,连续14天,第15天每组处死6只小鼠,观察小鼠实体瘤、肝脏、肾脏组织病理形态的变化,记录给药后第21天各组小鼠的生存率。结果：与生理盐水组相比,3种治疗方案均有一定的抑瘤作用,其中解毒颗粒低剂量组和高剂量组抑瘤效果较好,并在第21天的生存率较高。解毒颗粒高剂量组和索拉非尼组均出现了肿瘤坏死程度上升,肿瘤细胞密度下降,肿瘤细胞异型性下降,核分裂像计数下降的现象（P〈0.01）,且在肿瘤细胞密度评分和肿瘤细胞异型性方面,解毒颗粒高剂量组效果优于低剂量组（P〈0.05）。结论：解毒颗粒在肝癌小鼠移植瘤模型体内具有一定抗肿瘤效果,本研究为今后解毒颗粒的临床推广提供了一定的实验基础。

体内阿霉素干预富集肝癌干细胞的初步研究

目的建立肝癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,以癌干细胞的耐药特性为建立富集肝癌干细胞的切入点,在机体环境下进行构建体内肝癌干细胞的富集模式。方法将BEL-7404人肝癌细胞株的细胞悬液注射裸鼠两侧腋窝皮下,建立皮下移植瘤模型,经阿霉素干预后原代取材,分别以单个细胞克隆形成实验、平板克隆形成实验和悬浮球形成实验,对亲本细胞及经阿霉素干预后的BEL-7404肝癌细胞进行癌干细胞相关细胞学特性的检测。结果每一代裸鼠皮下移植瘤模型成瘤率为100%,亲本细胞与经体内阿霉素干预后的第一代BEL-7404肝癌细胞的单细胞克隆形成率比较没有明显差异(P>0.05),而体内干预第二代细胞的单细胞克隆形成率均明显高于亲本细胞和经干预后的第一代细胞(P<0.05),体内干预第一代细胞平板克隆形成率均明显低于亲本细胞和第二代细胞(P<0.05)。亲本细胞及经体内阿霉素干预后的BEL-7404肝癌细胞在干细胞培养基中培养均未见有细胞悬浮球形成。结论经低剂量阿霉素体内干预可作为富集肝癌干细胞的手段之一。

八月札乙醇提取物通过PI3K/Akt通路抑制H22细胞增殖并诱导其凋亡

目的研究八月札乙醇提取物体内对H22肝癌细胞增殖、促进凋亡及对PI3K/Akt信号通路的影响。方法构建小鼠H22肝癌皮下移植瘤模型,随机分为模型组、5-氟脲嘧啶(5-Fu)组、八月札乙醇提取物高、中、低剂量组,每组12只,模型组灌胃给予等体积的生理盐水,八月札乙醇提取物高、中、低剂量组分别灌胃给予40、20、10生药g/kg,5-Fu组腹腔注射5-Fu 0.02 g/kg,1次/d,连续给药10 d。每天观察并记录荷瘤小鼠基本情况;末次给药后分离瘤块,测量瘤体体积、称瘤体质量及计算抑瘤率;分别采用免疫组织化学法和Western blot法检测八月札乙醇提取物对瘤组织中PI3K、Akt、Bcl-xL和Bad及Caspase-9蛋白表达的影响。结果八月札乙醇提取物各给药组小鼠的基本情况均优于模型组;与模型组比,5-Fu组和八月札乙醇提取物高、中、低剂量组瘤体体积和体质量均明显减少(P<0.05或P<0.01);八月札乙醇提取物高、中、低剂量组对H22小鼠肝癌皮下移植瘤模型具有明显的抑瘤作用,抑瘤率分别为62.3%、58.5%和55.7%;并能显著下调肿瘤组织中PI3K和Bcl-xL蛋白表达,显著上调Bad和Caspase-9的蛋白表达(P<0.01),Akt在各组瘤组织中表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论八月札乙醇提取物具有体内抑制H22细胞增殖、促进H22细胞凋亡的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt信号通路活化有关。

蟾毒灵对人肠癌细胞HCT116瘤体生长的抑制作用

目的研究蟾毒灵对人肠癌HCT116瘤体生长产生的抑制作用。方法将25只人肠癌移植瘤模型裸鼠以随机区组法分为空白组(生理盐水)、对照组(5-Fu,5 mg·kg-1·d^(-1))和3个剂量(蟾毒灵,0.5,1.0,1.5 mg·kg-1·d^(-1))实验组,均为每只0.2 m L,每周3次,共3周。以CCK-8法测定细胞增殖作用并记录瘤体生长情况;用免疫组化法测量Ki67蛋白的表达。结果蟾毒灵对HCT116细胞的增殖有明显的抑制作用,呈剂量和时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为80 nmol·L^(-1),差异有统计学意义(P<0.01)。各组瘤体生长情况:与空白组(170±104.74)mg相比,低中高3个剂量实验组瘤重分别为(118.75±54.62),(107.5±41.31),(103.75±70.29)mg,差异均有统计学意义(均P<0.05);与对照组的(112.5±65.85)mg比较,差异也有统计学意义(均P<0.05)。免疫组化结果表明,蟾毒灵可以下调Ki67蛋白的表达水平。结论蟾毒灵可抑制人肠癌HCT116瘤体生长,可能与降低Ki67的表达有关。

MMI-166对人胰腺癌SW1990细胞凋亡及其相关蛋白表达的影响

目的观察MMI-166对人胰腺癌SWl990细胞及其移植瘤组织凋亡相关蛋白表达的影响，探讨其可能机制。方法应用人胰腺癌细胞株SWl990建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型，按完全随机法将荷瘤裸鼠分为对照组和MMI-166组，分别给予口服生理盐水和MMI-166（200mg·kg^-1·d^-1），持续28d。采用TUNEL法和蛋白质印迹法检测移植瘤组织的细胞凋亡指数（AI）及p53、c-Myc、Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase-1、Fas蛋白的表达。应用不同浓度（0、50、100μg／m1）MMI-166作用于人胰腺癌SWl990细胞24h，蛋白质印迹法检测c-Myc、Survivin的表达。结果MMI-166组移植瘤组织的AI为81．1±7．9，显著高于对照组的21．3±2．2（P：0．000）；c-Myc、Survivin的表达量分别为7715±2229、4594±1240，显著低于对照组的16870±2446、15208±1903（P值均为0．000）；p53、Bax、Bcl-2、Caspase-1、Fas的表达与对照组比较无显著变化。50、100μg/ml的MMI-166处理后，人胰腺癌SWl990细胞的c-Myc表达量显著下调（0．098±0．003、0．073±0．008tLo．169±0．007，F=189．361，P〈0．05）：Survivin的表达量无明显变化。结论MMI-166可能通过下调c-Myc的表达诱导人胰腺癌SWl990细胞凋亡。