酒精联合凡士林纱布包敷用于全厚层自体皮肤移植修复四肢皮肤缺损的效果

目的 探讨酒精联合凡士林纱布包敷在全厚层自体皮肤移植修复四肢皮肤缺损中的应用效果。方法 选取行全厚层自体皮肤移植治疗的四肢皮肤缺损患者103例,按术中植皮区创面加压敷料的不同,分为普通凡士林纱布包敷组(普通组,n=47)和酒精联合凡士林纱布包敷组(联合组,n=56)。比较2组患者术前和术后体温和疼痛评分([数字评分量表(NRS)评分],术后植皮成活率及植皮区创面愈合时间。结果 与普通组相比,联合组患者术后体温和疼痛评分更低,术后植皮成活率更高(均P<0.05)。2组术后植皮区创面愈合时间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 在全厚层自体皮肤移植术患者中应用酒精联合凡士林纱布加压包敷能够有效地降低患者体温,减轻患者疼痛并提高植皮成活率。

脂肪间充质干细胞对巴马小型猪自体皮肤移植愈合过程的影响

拟应用脂肪间充质干细胞(adipose derived mesenchymal stem cells,ADSCs)干预小型猪自体皮肤移植实验动物模型,观察其对自体皮肤移植愈合过程中的作用效果。对9头小型猪建立自体皮肤移植动物模型,将小型猪随机分为3组:模型组(Model)、磷酸盐缓冲液组(PBS)、脂肪间充质干细胞组(ADSCs)。各组分别于术前,术后7、14、21和28 d,采集血液和皮肤组织样本,并观察、拍照、记录移植皮片和周围组织临床变化情况。通过对移植皮片表观检查、病理组织学检测,血常规以及血清生化检测,移植皮片组织氧化应激、炎症、再生相关指标检测及血流恢复情况,综合评价ADSCs对小型猪自体皮肤移植创口愈合的影响。临床观察发现,术后ADSCs组皮片恢复速度优于其他两组,在术后28 d,ADSCs组基本恢复正常皮肤状态。在氧化应激方面,ADSCs组SOD、GSH含量显著升高(0.01<P<0.05),MDA显著下降(0.01<P<0.05)。在炎症方面,ADSCs组显著降低TNF-α、IL-1β含量,IL-10在术后7、14 d极显著升高(P<0.01)。在皮肤组织再生方面,ADSCs组VEGF、bFGF、TGFβ3和CD31的表达量显著上升(0.01<P<0.05)。在血流恢复方面,ADSCs在愈合过程中血流灌注百分比显著高于其他两组(0.01<P<0.05)。综上表明,在小型猪自体皮肤移植动物模型中,ADSCs能够加速皮肤组织病理损伤的恢复,降低氧化应激反应及炎症反应,促进皮肤组织再生,血管新生。表明ADSCs具有抗氧化、抗炎和促进组织再生的功能对小型猪自体皮肤移植具有良好的治疗效果,本试验为干细胞在自体皮肤移植和异体皮肤移植的临床应用提供了实验支撑和科学依据。

皮肤移植物及皮肤组织库的发展现状

烧（创）伤或先天性发育异常造成的皮肤组织缺损或畸形需要大量的皮肤组织移植修复重建,改善其结构与功能。对于治疗大面积烧伤患者而言,由于健康皮肤较少,很难实现自体皮肤移植,异体皮肤移植成为治疗首选方案。

体外皮肤移植和TUNEL实验评价猕猴间充质干细胞输注对细胞免疫的影响

目的:通过给猕猴单次无预处理输注猕猴白细胞抗原(RhLA)不相合供者的骨髓来源的间充质干细胞(MSCs),观察能否抑制供受者之间的免疫反应。方法:无菌抽取MSCs供者猕猴骨髓,分离单个核细胞,用2%FCS的DMEM/F12培养液培养骨髓MSCs,用流式细胞术检测其表型,不同培养条件诱导MSCs多向分化以鉴定;单次无预处理输注MSCs给RhLA不相合受者,分别于MSCs输注前及输注后20、40、60 d取受者外周血淋巴细胞分别与供者及非供者皮肤体外共培养72 h,观察培养皮肤病理损伤情况,同时TUNEL法检测培养皮肤石蜡切片中凋亡细胞的比率。结果:输注MSCs后20 d,受者淋巴细胞与供者皮肤呈现减低的免疫反应,皮肤病理损伤程度较输注前减轻,凋亡细胞比例由(23.0±4.9)%下降到(12.2±1.9)%;MSCs受者与非供者之间体外皮肤病理片中凋亡细胞比例也由输注前的(22.0±2.0)%下降至(11.8±1.4)%,具有显著差异(P<0.05);输注后40 d和60 d,受者淋巴细胞无论对供者还是非供者的皮肤均产生较强的免疫反应,凋亡细胞比例增至(22.0±3.2)%(、22.0±2.5)%(供者)及(23.2±2.4)%(、24.0±2.6)%(非供者)。结论:猕猴输注同种异基因MSCs后,通过体外实验可以检测到供受者之间降低的免疫反应,但是这种免疫抑制作用是短期的、可逆的。

异体皮加自体微粒皮肤移植在大面积烧伤早期的应用

大面积深度烧伤患者的创面修复,临床上常因供皮区有限而需要反复行植皮手术,增加了病人的痛苦和经济负担。烧伤早期一次性大面积切痂植皮的开展,使大面积烧伤病人的成活率得到了很大提高。我科自2001年建立异体皮库以来,应用同种异体皮加自体微粒皮肤移植修复大面积烧伤创面,明显改善了自体皮源不足的问题,取得了良好效果,现报告如下。

小鼠异种皮肤移植模型的建立及对免疫抑制药物的药效评价

目的建立小鼠异种皮肤移植模型,以期为免疫抑制药物提供研究模型。方法将C57BL/6小鼠耳部皮肤移植到BALB/c小鼠背部,同时设立同种移植对照(BALB/c小鼠耳部皮肤移植到BALB/c小鼠背部)。选用环孢素A作为抑制异种移植引起的免疫排斥反应的免疫抑制剂,利用该模型评价环孢素A免疫抑制效果。在移植和给药后,对移植排斥评分和移植皮肤的存活率进行统计。移植手术4 d和9 d后,ELISA法对血清中IL-4、IL-12和IFN-γ的水平进行测定。12 d后,计算胸腺和脾脏系数,对脾脏T细胞中CD4^+和CD8^+的比例进行分析,同时将移植皮肤进行病理观察。结果皮肤移植后,排斥评分逐渐增加,移植皮肤的存活率逐渐下降,有明显的水肿、炎症细胞浸润等炎症反应。环孢素A可明显降低移植排斥评分,提高移植皮肤的存活率,使小鼠胸腺和脾脏系数明显降低,高剂量可明显降低脾脏T细胞中CD4^+和CD8^+细胞的比例。同时,环孢素A处理可明显降低移植皮肤的炎症反应。结论小鼠经异种皮肤移植后会出现急性移植排斥反应,环孢素A可有效抑制移植排斥反应,并呈现出明显的剂量依赖性。

吸水性聚氨酯泡沫敷料促进皮肤移植供皮区愈合的疗效观察

目的评价一种吸水性聚氨酯泡沫敷料促进皮肤移植(植皮术)供皮区愈合的效果。方法选取120例接受植皮术的烧伤患者作为研究对象,患者随机分为Medifoam组(刃厚皮供皮区和中厚皮供皮区创面各30例)和油纱组(刃厚皮供皮区和中厚皮供皮区创面各30例)。Medifoam组供皮区创面直接以吸水性聚氨酯泡沫敷料(Medifoam敷料)贴敷,油纱组供皮区创面则采用凡士林油纱外敷。观察各组供皮区创面的愈合时间、疼痛程度、感染情况和愈合效果,直至创面完全干燥且上皮化。结果Medifoam组与油纱组创面感染发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。与油纱组比较,Medifoam组供皮区创面的愈合时间提前(P<0.01),换药疼痛轻微(P<0.01),创面愈合后无明显色素沉着和瘢痕形成。结论以吸水性聚氨酯泡沫敷料贴敷植皮术供皮区创面,能够明显减轻供皮区创面疼痛,创面上皮化快且愈合质量高。

CTLA4Ig基因表达对鼠皮肤移植免疫抑制作用的研究

目的 探讨静脉注射CTLA4Ig腺病毒后在大鼠体内的表达和对同种异体移植皮肤存活的影响 ,以及该载体应用的安全性 ,为该基因治疗方法在抑制器官移植排斥反应的临床应用奠定基础。方法 供体SD大鼠皮肤移植前 1周 ,用腺病毒作载体将CTLA4Ig导入Wistar大鼠体内 ,用蛋白质斑点印迹实验检测血清中CTLA4Ig的表达 ,用腺病毒荧光抗体检测腺病毒在脏器的分布。同时还观测了各脏器的病理改变及移植物生存时间。结果 CTLA4Ig腺病毒在肝、脾、心、肺、肾均有明显分布 ,但实质细胞均未见严重损伤性改变。CTLA4Ig基因能在血清中的表达高峰时间一般在 7d左右 ,移植皮肤的生存显著长于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 从静脉注射导入的CTLA4Ig基因能在大鼠体内表达并对同种移植的排斥反应有明显的抑制作用。

软聚硅酮敷料联合藻酸钙敷料用于烧伤后皮肤移植供皮区的疗效观察

目的观察软聚硅酮敷料联合藻酸钙敷料应用于烧伤后皮肤移植供皮区的疗效。方法将80例烧伤患者随机分为试验组(n=39)和对照组(n=41)。试验组供皮区内层覆盖藻酸钙敷料(德湿康敷料),外层覆盖软聚硅酮敷料(美皮康);对照组供皮区内层覆盖洗必泰油纱,外层覆盖多层无菌纱布。评价两组患者供皮区的创面愈合、疼痛改善及瘢痕形成情况。结果术后第7、10、12天试验组创面愈合率[(51.31±7.09)%、(78.77±8.80)%、(96.44±3.24)%]均高于对照组[(45.85±5.54)]%、(73.63±7.73)%、(93.12±4.08)%],差异有统计学意义(P<0.01)。试验组创面愈合时间短于对照组[(10.95±1.41)d vs(11.93±1.44)d,P<0.01]。术后第1、3、7、10天试验组视觉模拟评分(VAS)为5.36±1.21、4.29±1.25、4.00±0.46、1.00±0.45,均低于对照组(7.34±1.34、5.89±1.39、4.50±0.74、1.35±0.52),差异有统计学意义(P<0.01)。创面愈合后第1、3、6、12个月试验组温哥华瘢痕评价(VSS)评分(3.82±1.47、6.00±1.61、3.77±2.28、2.59±1.39)均低于对照组(5.80±1.68、7.80±1.65、5.24±1.67、4.05±1.41),差异有统计学意义(P<0.01)。结论软聚硅酮敷料与藻酸钙敷料联合应用可以显著提高供皮区创面愈合率、缩短创面愈合时间、缓解换药疼痛、改善愈合质量,有望成为有效的保护供皮区的临床治疗手段之一。

调节性树突细胞对皮肤移植小鼠IL-10＋调节性B细胞的影响

目的探讨吞噬了供者凋亡淋巴细胞的未成熟树突细胞(imDC)对皮肤移植受体小鼠外周血IL-10+CD19+调节性B细胞(Breg)比例及移植物存活时间的影响。方法以C57BL/6小鼠作为受者,BALB/c小鼠为供者,建立小鼠皮肤移植模型。分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,经小鼠重组白细胞介素4(IL-4)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)共同诱导,制备并培养imDC。分离BALB/c小鼠脾淋巴细胞(SP),经光化学照射方法(PUVA)处理,得到供者小鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)。在体外将PUVA-SP与C57BL/6小鼠骨髓来源的imDC共同培养,得到PUVA-SP DCs。根据受体小鼠术前接受的静脉输注成分将其随机分为4组(n=14):PUVA-SP DC组、imDC组、成熟树突细胞(maDC)组和PBS对照组。于手术前7d分别从尾静脉注入1×l06个(0.2ml)PUVA-SP DC、imDC、maDC或0.2ml PBS。于移植术后观察受体小鼠的移植物存活时间、外周血IL-10+CD19+Breg比例及IL-10的表达情况。结果移植术后,受体小鼠外周血IL-10+CD19+Breg细胞占CD19+B细胞的比例在PUVA-SP DC组为7.48%,明显高于imDC组(4.12%)、maDC组(3.01%)和PBS对照组(2.37%)。PUVA-SP DC组小鼠血清中IL-10表达水平为58.2±0.9ng/ml,与maDC组(20.1±1.6ng/ml)、imDC组(26.2±1.3ng/ml)及PBS对照组(19.0±0.6ng/ml)比较显著升高(P<0.01)。PUVA-SP DC组移植物存活时间为62.3±2.6d,显著长于maDC组(20.7±1.9d)、imDC组(12.1±1.0d)和PBS对照组(11.0±1.3d,P<0.01)。结论移植术前输注PUVA-SP DCs可显著延长移植物存活时间,增加受者体内IL-10的表达水平,诱导产生较多分泌IL-10的调节性B细胞。

中、小面积深度烧伤符合功能与美学要求的皮肤移植术

目的:探讨非面颈部中、小面积深度烧伤更加符合人体皮肤功能与美学要求的皮肤移植技术.方法:受皮区创面采用浅切痂、削痂法,尽可能多保留创面正常皮下组织,严密止血.以低浓度肾上腺素生理盐水皮下注射肿胀供皮区,鼓式取皮机、电动切皮机或滚轴取皮刀切取厚0.2～0.6mm大张中厚断层皮;游离皮片长轴垂直于受区纵轴不开洞移植.皮片与创缘、皮片与皮片3-0丝线严密缝合,妥善包扎、制动.结果:接受改进的皮肤移植术的患者共592例,受区面积为1%～30%[平均(11.2±2.7)%]TBSA.全部病例移植皮片成活率>95%,移植皮片100%成活者91.9%(544/592),随访1a以上评价,受区皮肤组织丰满,质地柔软、光滑,无明显增生性瘢痕,肢体关节活动自如,轻度色素沉着,供皮区表面较正常皮肤略粗糙,色素沉着不明显.结论:加强创面处理,改进和熟练掌握取皮技术,选择合适供区,中、小面积深度烧伤采用大张中厚和薄中厚断层皮不开洞移植,供皮区和修复部位均获得较理想的功能与美容效果.

混合皮肤移植中IL-10在自体角朊细胞诱导局部免疫耐受中的作用

目的探讨IL10在混合皮肤移植中角朊细胞诱导的局部免疫耐受中的作用。方法利用已经建立的MELC体外模拟系统,检测在引入和未引入自体角朊细胞的实验系统上清中IL2、IL4、IL10和IFNγ的浓度,并用IL10基因敲除小鼠实验观察IL10在诱导抑制中的作用。结果在未引入自体角朊细胞的MELC体系中,表现的是典型的Th1相关的细胞因子动力学曲线,在加入自体角朊细胞后,则出现了细胞因子由Th1和Th2转换的动力学曲线,且IL10起着关键的作用,在以IL10基因knockout小鼠的角朊细胞去替代实验体系中的正常小鼠角朊细胞时,对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制率虽有所下降,但无显著差异,而以IL10基因knockout小鼠的淋巴细胞替代实验体系中的正常小鼠的淋巴细胞时,对自体淋巴细胞的同种异体增殖反应的抑制作用被显著缓解,表明对抑制起关键调节作用的是自体淋巴细胞来源的IL10,而非自体角朊细胞分泌的IL10。结论在混合皮肤移植中,自体角朊细胞是通过激活Th2细胞,后者分泌大量的IL10和IL4等细胞因子来抑制Th1细胞增殖,从而抑制Th1亚群所介导的细胞免疫及移植物排斥来诱导局部免疫耐受的。

黄连素对环孢素抗皮肤移植排斥反应的增强作用

目的 :阐明盐酸黄连素 (Ber)及其与环孢素 (CsA)合用对小鼠皮肤移植排斥反应的影响。方法 :BALB/C小鼠作为供皮鼠 ,灌胃给药 7d后将其皮肤移植于C5 7BL/ 6小鼠 ,受鼠给药 12d ,观察各组的皮片排异时间。结果 :与阴性对照组比较 ,2 0 0mg·kg-1Ber组、2 0mg·kg-1CsA组、2 0 0mg·kg-1Ber+2 0mg·kg-1CsA组的皮片存活时间明显延长 (P <0 .0 1) ,而且 ,与CsA组相比 ,Ber+CsA组的皮片存活时间亦明显延长 (P <0 .0 1)。结论 :Ber可显著抑制小鼠皮肤移植排斥反应 ,且可增强CsA的抗排异作用。

复方冬虫夏草制剂对人-猪异种皮肤移植免疫排斥反应的影响

目的:通过复方虫草制剂(CS)在人-猪间异种皮肤移植中孵化皮片和局部外用,观察其对皮片存活时间的影响并探讨其作用机制。方法:①以环孢素A(CsA)和生理盐水(NS)作对照,孵化人皮片后移植于贵州香猪并局部用药;②术前术后行外周血和皮肤的相关免疫指标检测。结果:①CS能延长皮片移植后存活时间(21.20 d±3.19 d),与NS组(10.17 d±1.94 d)相比P<0.05,与CsA组相比P>0.05;②CS及CsA组移植局部炎性细胞浸润少而NS组有大量炎性细胞浸润;③术后CS组CD4、CD8、IL-2、IgG表达明显低于而IL-10表达明显高于NS组,但与CsA组相比P>0.05。结论:局部应用CS可明显延长皮片存活时间,其机制与CS抑制细胞免疫及体液免疫有关。

雷公藤内酯醇抑制同种异体皮肤移植物排异反应

目的：观察雷公藤二萜类化合物主要成分之一的雷公藤内酯醇（又称雷公藤甲素）对同种异体皮肤移植物存活时间的影响。方法：以环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）为阳性对照。结果：雷公藤内酯醇可以明显地延长同种异体皮肤移植物的存活时间，其药理作用与该药的剂量和给药时间密切相关。作者还首次观察到小剂量雷公藤内酯醇和ＣｓＡ联合使用能非常明显地延长皮肤移植物的存活时间。结论：雷公藤内酯醇在移植的抗排异反应治疗中有非常好的应用前景。

重组人白细胞介素10抗家兔同种异体皮肤移植排斥模型的建立

背景:研究表明,白细胞介素10在移植排斥反应的预防和治疗中具有一定的应用前景,有望成为一种新的临床用免疫抑制剂。动物移植模型是研究免疫抑制剂常用的实验平台,最常用的皮肤移植模型动物是小鼠,但小鼠属于小动物模型,移植技术要求较高。目的:建立家兔同种异体皮肤移植模型,观察重组人白细胞介素10抗家兔皮肤移植排斥反应的效果。方法:取家兔背部皮肤修剪成含真皮层的全厚皮片、中厚皮片和不含真皮层的薄层皮片进行家兔自体皮肤移植,随机分为固定组和非固定组,固定组用自制脖套对家兔头颈部活动进行一定限制;药物抗家兔同种异体移植排斥设重组人白细胞介素10组、环孢素A阳性对照组和生理盐水阴性对照组。采用混合淋巴细胞反应法观察家兔混合淋巴细胞反应增殖指数。在30d内连续观察移植皮肤出现排斥的时间和移植皮片平均存活时间。结果与结论:供、受体混合淋巴细胞培养呈增殖反应,表明家兔同种异体主要组织相容性复合体不同,相互皮肤移植可发生排斥反应。移植皮片厚度以含真皮的中厚皮片为最佳;自制脖套固定可有效限制家兔脖头颈部活动,有利于移植创面的保护。实验成功建立了重组人白细胞介素10抗家兔同种异体皮肤移植排斥模型,重组人白细胞介素10具有抗移植排斥的作用。

成年小鼠皮肤移植耐受诱导的实验研究

静脉注射ＢａＩｂ／ｃ小鼠（Ｈ－２￣ｄ）脾细胞和骨髓细胞，４８小时后，腹腔注射环磷酰胺和抗胸腺细胞血清，可诱导Ｂ６小鼠（Ｈ－２￣ｂ）对ＢａＩｂ／ｃ小鼠皮肤移植的长期耐受（＞８０天）．耐受Ｂ６小鼠可正常排斥无关品系ＣＢＡ／Ｊ小鼠（Ｈ－２￣ｋ）的皮肤，显示了耐受的特异性。上述诱导方案可导致受体小鼠脾细胞对ＣｏｎＡ、ＬＰＳ诱导的增植反应的抑制，但这种全身性免疫抑制可在短期内恢复，而供体特异性的同种异型反应，如ＭＬＲ和ＤＴＨ则不能恢复。

游离全厚皮肤移植重建甲床完全缺损的临床研究

目的:探讨一种重建各种原因导致甲床完全缺损的手术方法,并分析游离全厚皮肤移植修复甲床缺损的效果。方法:对2010年4月至2012年3月,北京积水潭医院手外科采用游离全厚皮肤移植重建甲床完全缺损7例患者进行回顾性分析。男性2例,女性5例,年龄7～70岁,平均51.9岁。术前诊断为感染1例,鳞状细胞癌1例,甲下色素沉着2例,交界痣1例,恶性黑色素瘤2例;拇指2例,中指3例,示指2例。甲床缺损范围在1.5 cm×2cm至2.5 cm×3.5 cm,移植皮肤取自上臂内侧3例,腹股沟部3例,前臂肘窝部1例。结果:所有患者均得到了随访,平均随访时间为10个月,所有游离移植皮肤全部成活,但初期颜色呈淡紫色,并伴有表浅水泡形成。成活后的皮肤平整,与末节指骨骨面贴敷紧密,无表皮包涵囊肿及残留指甲形成,皮肤供区无并发症出现。所有患者均对手指外形及功能满意,没有意愿要求再造指甲。结论:采用游离全厚皮肤移植重建甲床完全缺损,方法简单、安全、有效,手指外形及功能满意,且供区无明显并发症,尤其适用于中老年患者。