壳聚糖/甘油磷酸钠/海藻酸钠/益母草碱水凝胶的抗炎与促成骨作用

背景:益母草碱具有改善微循环、抗氧化、抗细胞凋亡、清除自由基、抗炎、抗纤维化等多种生物活性作用,并且可促进骨髓间充质干细胞的成骨分化,具有应用于牙周炎治疗的潜能。目的:探讨益母草碱负载于壳聚糖/甘油磷酸钠/海藻酸钠水凝胶的抗炎与促成骨作用。方法:①分别制备壳聚糖/甘油磷酸钠/海藻酸钠水凝胶(空白水凝胶)与壳聚糖/甘油磷酸钠/海藻酸钠/益母草碱水凝胶(载药水凝胶),将两种水凝胶分别培养RAW 264.7细胞、MC3T3-E1细胞,利用CCK-8实验与活/死细胞染色检测水凝胶的细胞毒性。②将RAW 264.7细胞分5组培养:空白组常规培养24 h,脂多糖组加入脂多糖,单独水凝胶组加入脂多糖与空白水凝胶,载药水凝胶组加入脂多糖与载药水凝胶,抑制剂组加入脂多糖、载药水凝胶与PI3K抑制剂LY294002,处理24 h后,利用qRT-PCR法检测炎症相关因子mRNA表达,Western Blotting检测炎症相关因子与PI3K/AKT信号通路的蛋白表达。③将MC3T3-E1细胞分4组培养:空白组不加入任何材料,单独水凝胶组加入空白水凝胶,载药水凝胶组加入载药水凝胶,抑制剂组加入载药水凝胶与PI3K抑制剂LY294002,处理7 d后,进行碱性磷酸酶染色,利用qRT-PCR检测成骨相关因子mRNA表达水平,Western Blotting检测PI3K/AKT信号通路的蛋白表达。结果与结论:①CCK-8实验与活/死细胞染色结果显示,两种水凝胶无细胞毒性作用,具有良好的细胞相容性;②与空白组相比,脂多糖组白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的mRNA与蛋白表达升高(P<0.05),p-AKT、p-PI3K、p-p65、p-IκBα的蛋白表达升高(P<0.05);与脂多糖组比较,载药水凝胶组上述指标的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05);与载药水凝胶组相比,抑制剂组上述指标的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05);③载药水凝胶组碱性磷酸酶活性高于空白组、单独水凝胶组、抑制剂组(P<0.05);与空白组相比,单独水凝胶组碱性磷酸酶、Runx2、骨钙素与Ⅰ型胶原的mRNA表达升高(P<0.05),p-AKT、p-PI3K的蛋白表达升高(P<0.05);与单独水凝胶组相比,载药水凝胶组上述指标的mRNA与蛋白表达均升高(P<0.05);与载药水凝胶组相比,抑制剂组上述指标的mRNA与蛋白表达均降低(P<0.05);④结果表明,壳聚糖/甘油磷酸钠/海藻酸钠/益母草碱水凝胶具有抗炎与促成骨作用,该作用可能与调控PI3K/AKT信号通路相关。

益母草碱调节RhoA/ROCK信号通路对冠心病大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响

目的:研究益母草碱(Leo)通过调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对冠心病(CHD)大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响及机制。方法:将造模成功的75只CHD大鼠随机分为模型组(CHD组)、Leo低、中、高剂量组(Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组)和Leo高剂量组+RhoA激活剂LPA组(Leo-H+LPA组),每组15只。Leo-L、Leo-M、Leo-H组分别灌胃15、30、60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,Leo-H+LPA组灌胃60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,另需腹腔注射1mg·kg^(-1)·d^(-1)的LPA,Control组和CHD组以相同方式给予等量生理盐水,均连续干预4周。超声心动图测定心功能指标;全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、内皮细胞特异性分子-1(EMS1)、血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉内皮损伤;流式细胞仪检测主动脉内皮细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测RhoA/ROCK信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,CHD组主动脉壁增厚且染色不均匀,细胞膨大,排列紊乱,内皮粗糙;左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达显著升高(P<0.05),左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、HDL-C、NO水平显著降低(P<0.05)。与CHD组相比,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组主动脉染色均匀,动脉壁结构清晰,细胞排列紧密且形态较正常,内膜较平滑;LVEDD、LVESD、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达逐渐降低(P<0.05),LVEF、FS、HDL-C、NO水平逐渐升高(P<0.05)。Leo-H+LPA组逆转了Leo对CHD大鼠的保护作用(P<0.05)。结论:Leo可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善CHD大鼠心功能,降低血脂,抑制炎症,进而减轻CHD大鼠主动脉内皮细胞损伤。

益母草碱改善三氯化铝所诱导阿尔茨海默病小鼠学习记忆能力的作用机制

目的 探讨益母草碱对灌胃三氯化铝(AlCl_(3))诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)小鼠的学习认知水平的影响作用并研究其机制。方法 60只C57小鼠随机分为6组即空白对照组、AlCl3模型组、吡拉西坦阳性对照组、益母草碱高、中、低剂量给药组。小鼠灌胃AlCl3建立AD模型,阳性对照组与益母草碱治疗组每天接受药物灌胃进行干预。50 d后,利用水迷宫实验检测小鼠学习记忆能力,之后检测小鼠脑组织MDA、SOD、T-AOC及GSH-Px含量变化;测定脑组织中TNF-α、IL-6及IL-1β表达水平;脑组织切片进行HE染色,观察益母草碱性对阿尔茨海默病小鼠病理损伤的影响。结果 益母草碱明显减少了小鼠逃避潜伏期(P<0.05)和穿越次数(P<0.05);能显著降低神经元的损伤和抑制神经元的丢失;同时可抑制脑组织MDA生成(P<0.01),提高SOD、GSH-Px及T-AOC等活力表达(P<0.01);有效降低脑组织中TNF-α、IL-6及IL-1β等抗炎因子含量(P<0.01)。此外,益母草碱还能提高小鼠脑内Nrf2与HO-1蛋白表达水平且呈剂量依赖性。结论 益母草碱能有效改善AD小鼠认知功能障碍,其主要作用机制可能与促进Nrf2/HO-1通路活化提高小鼠脑组织抗氧化应激水平等有关。

益母草碱对急性酒精性肝损伤的保护作用

目的探究益母草碱对急性酒精性肝损伤的保护作用。方法将C57BL/6J小鼠随机分为对照组、模型组、益母草碱低剂量组、益母草碱高剂量组和联苯双酯组,每组8只。按确定药物与剂量给予益母草碱组和联苯双酯组灌胃,1次/日,连续10 d,对照组与模型组给予等体积注射用氯化钠溶液。末次给药12 h后,除对照组外,其余4组小鼠给予乙醇含量为56%的北京二锅头灌胃,连续3 d,每次间隔12 h。末次给予北京二锅头后,禁食4 h后处死小鼠,取肝脏称重,计算肝脏系数。检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、丙二醛(MDA)含量。苏木素-伊红染色观察肝脏病理学变化,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白。结果模型组小鼠ALT、AST、TG、MDA水平及肝脏指数显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);益母草碱低剂量组和高剂量组小鼠ALT、AST、TG、MDA水平及肝脏指数低于模型组(P<0.05)。肝脏组织病理检查及油红O染色揭示,益母草碱减轻乙醇对小鼠肝脏组织的损伤(P<0.05)。结论益母草碱对急性酒精性肝损伤具有保护作用。

益母草碱对ox-LDL诱导的THP-1源性巨噬细胞焦亡的保护作用

目的探讨益母草碱(LEO)对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的THP-1源性巨噬细胞焦亡的保护作用。方法采用MTT法检测不同浓度LEO对THP-1巨噬细胞/THP-1源性泡沫细胞活力;采用油红O染色评估细胞内脂质蓄积的情况,并检测细胞内总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)的含量以及细胞上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)和乳酸脱氢酶(LDH)含量;采用Western blot检测细胞焦亡相关蛋白的表达水平;采用流式细胞术测定活性氧(ROS)水平。结果随着LEO浓度的增加,细胞活性与LEO的浓度呈正相关。LEO干预后,细胞内TC和TG的含量降低,细胞内脂质积累减少,且LEO可下调细胞焦亡相关蛋白NLRP3、N-GSDMD、Cleaved Caspase-1的表达,同时经LEO处理可逆转ox-LDL诱导的ROS生成增加。结论LEO可以减缓由ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞内脂质积累,并且可以抑制ox-LDL诱导的THP-1巨噬细胞焦亡的发生。

益母草碱对骨关节炎大鼠细胞自噬的机制研究

目的探讨益母草碱对骨关节炎(OA)大鼠软骨细胞自噬和凋亡的影响以及PTEN诱导假定激酶1(PINK1)/帕金森病蛋白(Parkin)信号通路发挥作用。方法采用标准前交叉韧带横断术(ACLT)构建OA大鼠模型,将建模成功的大鼠分为OA组、益母草碱-L组、益母草碱-M组、益母草碱-H组,每组12只,另取12只为假手术组;HE染色检测各组大鼠软骨细胞形态变化;透射电镜观察各组大鼠软骨细胞超微结构;TUNEL法检测各组大鼠软骨细胞凋亡;RT-qPCR检测各组大鼠软骨组织PINK1、Parkin、P62、LC3B mRNA表达水平;Western blot检测各组大鼠软骨组织PINK1、Parkin、P62、LC3B蛋白表达水平。结果与假手术组相比,OA组大鼠软骨形态异常、结构模糊、表面出现裂缝、软骨细胞线粒体数量减少、少量自噬体存在,软骨细胞凋亡率、软骨组织P62 mRNA和蛋白水平显著升高,软骨组织PINK1、Parkin、LC3B mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05)。与OA组比较,益母草碱-L、M、H组大鼠软骨形态逐渐恢复、结构逐渐清晰、表面裂缝减少、软骨细胞数量恢复、线粒体增多、自噬体数量增加,软骨细胞凋亡率、软骨组织P62 mRNA和蛋白水平显著降低,软骨组织PINK1、Parkin、LC3B mRNA和蛋白水平显著升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。结论益母草碱可能通过激活PINK1/Parkin信号通路促进OA大鼠软骨细胞自噬,抑制软骨细胞凋亡。

益母草碱调节Fas/FasL信号通路对乳腺癌细胞恶性生物行为的影响

目的探讨益母草碱(Leonurine,Leo)对乳腺癌细胞的增殖、迁移、凋亡、细胞周期进展以及上皮间质转化的影响及作用机制。方法体外培养4T1乳腺癌细胞,将细胞分为对照组(Control组)、益母草碱低、中、高浓度组(Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组)、益母草碱高浓度+转染短发夹RNA慢病毒阴性对照组(Leo-H+sh-NC组),益母草碱高浓度+转染Fas短发夹RNA慢病毒组(Leo-H+sh-Fas组)。使用不同浓度的益母草碱(10~160 mmol/L)处理细胞,CCK-8法检测细胞的存活率,筛选最佳实验浓度;通过Transwell小室法评价细胞的迁移能力;流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期进展;Western blot检测N-cadherin、Vimentin、Fas、FasL表达,建立荷瘤小鼠模型评价益母草碱对乳腺癌移植瘤生长的影响。结果使用浓度为10~160 mmol/L的益母草碱处理细胞12 h,4T1细胞存活率显著降低(P<0.05),半数抑制浓度(IC50值)为(53.61±1.729)mmol/L,选择10、20、30 mmol/L为后续实验浓度;与Control组相比,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组4T1细胞的增殖活力、迁移率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、N-cadherin、Vimentin表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Fas、FasL表达显著升高(P<0.05);与Leo-H+sh-NC组相比,Leo-H+sh-Fas组4T1细胞的增殖活力、迁移率、G2/M期细胞比例及S期细胞比例、N-cadherin、Vimentin表达显著升高(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期细胞比例、Fas、FasL表达显著降低(P<0.05);益母草碱可以抑制乳腺癌移植瘤的生长(P<0.05)。结论益母草碱可以抑制乳腺癌细胞恶性生物行为,其作用机制可能与激活Fas/FasL信号通路有关。

益母草碱调节IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路对急性呼吸窘迫综合征大鼠炎症反应的影响

目的探究益母草碱调节IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)大鼠炎症反应的影响。方法将大鼠随机分为空白组、模型组、益母草碱低剂量组、益母草碱高剂量组、联用HY-N2485组(高剂量益母草碱+NLRP3激活剂)。检测大鼠肺功能;血气分析仪检测氧分压(PaO_(2))和二氧化碳分压(PaCO_(2));ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;检测肺组织干湿比;检测肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;HE染色观察大鼠肺组织病理形态;Western blotting检测肺组织中IRE1α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-3蛋白表达。结果与空白组相比,模型组肺组织形态有明显损伤,PEF、FVC和FEV0.3/FVC水平、PaO_(2)、OI水平、肺泡灌洗液IL-10水平、肺组织CAT和SOD活性降低,PaCO_(2)水平、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、肺组织病理评分、肺组织MDA含量、IRE1α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,益母草碱低、高剂量组大鼠肺组织损伤明显减轻,PEF、FVC和FEV0.3/FVC水平、PaO_(2)、OI水平、肺泡灌洗液IL-10水平、肺组织CAT和SOD活性升高,PaCO_(2)水平、肺泡灌洗液IL-1β、IL-6、TNF-α水平、肺组织病理学评分、肺组织MDA含量、IRE1α、TXNIP、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平降低(P<0.05);HY-N2485可减弱益母草碱对ARDS大鼠的改善作用(P<0.05)。结论益母草碱可降低ARDS大鼠炎症和氧化应激,减轻肺组织损伤,改善肺功能,可能与抑制IRE1α/TXNIP/NLRP3信号通路有关。

益母草碱脂质体制备工艺的研究

研究旨在优化益母草碱脂质体制备工艺,以制备包封率较高、粒径较小的益母草碱脂质体。试验以益母草碱包封率、粒径、多分散性指数(PDI)为评价指标,筛选最适合的益母草碱脂质体制备方法;之后以包封率为评价指标比较药脂比、胆磷比、PBS溶液体积、超声时间、表面活性剂浓度对益母草碱脂质体包封率的影响,筛选影响更显著的因素进行响应面试验,并以得到的最佳条件进行验证试验。结果显示,薄膜分散法结合pH值梯度法制备益母草碱脂质体的最佳药脂比为1∶15.84,胆磷比为1∶13.4,PBS体积为9.92 mL,该条件下制备的益母草碱脂质体包封率为92.18%,平均粒径为56.01 nm,PDI为0.095。研究表明,薄膜分散法结合pH值梯度法制备益母草碱脂质体包封率高,符合试验要求。

益母草碱在炎症相关性疾病中作用的研究进展

益母草碱(leonurine,SCM-198)是中药益母草(Herba Leonuri,HL)活性成分之一,现已能人工合成。最新研究证实其在多种炎症相关性疾病动物模型中具有抗炎作用。其核心机制为下调核转录因子-κB(nuclear transcription factor-κB,NF-κB)活性,进而抑制PI3K/Akt、MAPK、ERK、JNK等通路磷酸化,或上调Nrf2通路活性,最终下调肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、诱导型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)、趋化因子、黏附分子等炎症相关细胞因子表达等。由于益母草碱展现出广泛作用于全身多器官系统、给药方便、安全有效等特点,因而具有广阔的临床应用前景。本文主要综述了益母草碱在全身多个器官系统炎症相关性疾病的基础研究进展,以期为炎症相关疾病的研究和临床转化提供新思路。

益母草碱通过调节HMGB1/RAGE信号通路对重症急性胰腺炎大鼠的改善作用

目的 研究益母草碱对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠胰腺损伤的影响,并基于高迁移率族蛋白1(HMGB1)/晚期糖基化终产物受体(RAGE)信号通路探讨其作用机制。方法 采用胰胆管注射5%牛磺胆酸钠构建SAP大鼠模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、低剂量益母草碱组(8 mg/kg)、高剂量益母草碱组(16 mg/kg)、HMGB1过表达组(8μg/kg)、高剂量益母草碱+HMGB1过表达组(16 mg/kg益母草碱+8μg/kg HMGB1),每组14只;另取14只大鼠作为假手术组。各组大鼠腹腔或尾静脉注射相应药物或生理盐水,每日1次,连续5 d。末次给药后,检测大鼠血清中淀粉酶(AMS)、脂肪酶(LPS)水平;观察其胰腺组织病理损伤;检测其胰腺组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平以及HMGB1、RAGE mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,低、高剂量益母草碱组大鼠胰腺组织结构逐渐恢复、炎症细胞浸润逐渐减少,病理损伤评分和AMS、LPS、TNF-α、IL-6、MDA水平以及HMGB1、RAGE mRNA和蛋白表达水平均显著降低,SOD水平均显著升高(P<0.05),且高剂量益母草碱组改善效果更明显(P<0.05);HMGB1过表达组大鼠胰腺组织病理损伤加重,除SOD水平显著降低外,其余各指标均显著升高(P<0.05)。HMGB1过表达可减弱高剂量益母草碱对SAP大鼠上述指标的改善效果(P<0.05)。结论 益母草碱可能通过抑制HMGB1/RAGE信号通路激活来减轻SAP大鼠的胰腺损伤和胰腺组织的炎症反应、氧化应激。

益母草碱调节MCP-1/CCR2信号轴对LPS诱导的肺泡上皮细胞炎性损伤的影响

目的探讨益母草碱(Leo)调节单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)/趋化因子受体-2(CCR2)信号轴对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞炎性损伤的影响。方法体外培养人肺泡上皮细胞(AEC);将细胞分为对照组、模型组(LPS组,10μg/mL LPS)、低浓度Leo组(Leo-L组,10μmol/L Leo)、中浓度Leo组(Leo-M组,20μmol/L Leo)、高浓度Leo组(Leo-H组,30μmol/L Leo)、MCP-1激活剂SLIGKV组(SLIGKV组,50μmol/L SLIGKV)、高浓度Leo+MCP-1激活剂SLIGKV组(Leo-H+SLIGKV组,30μmol/L Leo-H+50μmol/L SLIGKV);CCK-8实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测细胞上清中白细胞介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blot分别检测细胞中MCP-1/CCR2信号通路及凋亡相关因子表达水平。结果与对照组比较,LPS组AEC细胞凋亡率、MCP-1、CCR2、IL-2、TNF-α及Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达显著升高,OD 450值和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)表达显著降低(P<0.05);与LPS组比较,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组AEC细胞凋亡率、MCP-1、CCR2、IL-2、TNF-α及Bax表达显著降低,OD 450值和Bcl-2表达显著升高,且呈现剂量依赖性(P<0.05);SLIGKV组上述指标趋势相反;SLIGKV减弱了高剂量Leo对LPS诱导的肺泡上皮细胞炎性损伤的改善作用。结论Leo可能通过抑制MCP-1/CCR2信号轴改善LPS诱导的肺泡上皮细胞炎性损伤。

益母草碱对LPS诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用研究

【目的】探究益母草碱对脂多糖(LPS)诱导小鼠子宫内膜炎的抗炎作用。【方法】将60只6~8周龄雌性C57小鼠随机分为6组:空白对照组,模型组,益母草碱低、中、高剂量组及地塞米松阳性对照组,每组10只。空白对照组经阴道灌注50μL PBS缓冲液,其余组经阴道灌注50μL LPS(1 mg/mL)建立小鼠子宫内膜炎疾病模型。造模后,益母草碱低、中、高剂量组分别腹腔注射7.5、15.0、30.0 mg/kg益母草碱,阳性对照组腹腔注射5.0 mg/kg地塞米松,每6 h 1次,连续3次。造模24 h后处死小鼠,测定各组小鼠子宫指数;通过HE染色观察子宫组织病理变化;采用ELISA法检测子宫组织白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)等相关炎症因子含量及髓过氧化物酶(MPO)活性。【结果】与空白对照组相比,模型组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性均极显著升高(P<0.01);与模型组相比,不同剂量益母草碱能不同程度降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠的子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性(P<0.01),并呈剂量依赖性;与模型组相比,阳性对照组小鼠子宫指数、子宫组织中炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6含量与MPO活性极显著降低(P<0.01)。【结论】益母草碱可降低LPS诱导子宫内膜炎小鼠子宫指数、TNF-α、IL-1β、IL-6炎性因子含量及MPO活性,减轻炎症症状,显示出良好的抗炎效果。

基于网络药理学及分子对接探究益母草碱治疗肠道炎症的分子机制

【目的】运用网络药理学、分子对接和动力学模拟技术研究益母草碱治疗肠道炎症的分子机制。【方法】采用Pubchem、PharmMapper和SwissTargetPrediction数据库收集益母草碱与肠道炎症的潜在靶点,利用Venny 2.1在线作图工具平台系统获取益母草碱治疗肠道炎症的交集靶点;通过STRING与DAVID数据库获取蛋白-蛋白相互作用(PPI)关系并绘制交集靶点的PPI网络图,对交集靶点进行GO功能与KEGG通路富集分析,运用Cytoscape 3.8.2软件筛选得到核心靶点蛋白,应用分子对接技术与分子动力学模拟对核心靶点进行验证。【结果】共收集到379个与益母草碱相关的潜在靶点蛋白,15464个与肠道炎症相关的潜在靶点,获得170个益母草碱治疗肠道炎症的潜在交集靶点,筛选出丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)、抑癌基因TP 53、前列腺素氧化环化酶2(PTGS2)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、多聚ADP核糖聚合酶1(PARP1)等16个核心靶点。GO功能及KEGG通路富集分析结果显示,益母草碱通过调控蛋白质磷酸化、细胞增殖、凋亡过程负调控、蛋白水解、炎症反应等144个生物过程和Fc epsilon RI信号通路、Fcγ-R介导的吞噬作用、MAPK信号通路、mTOR信号通路等55条信号通路治疗肠道炎症。分子对接结果表明,益母草碱与核心靶点中PTGS2、mTOR、PARP1对接结果良好,有较强的结合活性,分子动力学模拟发现益母草碱与3个蛋白之间主要以氢键和疏水键相结合。【结论】益母草碱通过mTOR、PARP1、PTGS2等多个靶点,多个信号通路、多途径发挥其对肠道炎症的治疗效果。本研究结果为益母草碱在临床中的应用奠定基础。

益母草碱、黄精多糖、脱氧野尻霉素联合用药抗血栓和降血糖疗效的评价

目的通过建立和应用斑马鱼Ⅱ型糖尿病合并血栓模型,对益母草碱、黄精多糖、脱氧野尻霉素的联合用药在降血糖和抗血栓方面进行疗效评价。方法在链脲佐菌素建立斑马鱼Ⅱ型糖尿病模型的基础上,分别采用苯肼、花生四烯酸和普纳替尼建立血栓模型,设置对照组、模型组、二甲双胍+阿司匹林组、联合药高中低浓度组,进行药物干预后,观察尾静脉血栓形成情况;采用试剂盒测定各组幼鱼的组织糖含量;采用邻联茴香胺染色法对心脏红细胞进行定量分析,计算抑制血栓率;使用实时荧光定量聚合酶链反应检测相关血栓基因mRNA的表达。结果与模型组相比,联合用药能显著增加斑马鱼心脏红细胞染色强度、抑制血栓形成、下调血栓相关基因表达和降低组织糖含量。结论3种药物的联合使用可有效降低组织糖含量并具有抗血栓效果,在治疗Ⅱ型糖尿病和血栓药物开发方面具有巨大潜力。

益母草碱抑制ERK/NF-κB信号通路对心力衰竭大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察益母草碱抑制细胞外调节蛋白激酶(ERK)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路对心力衰竭(HF)大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法:将大鼠随机分为Control组、HF组,低剂量益母草碱(L-益母草碱)组、高剂量益母草碱(H-益母草碱)组及ERK抑制剂组。采用腹腔注射阿霉素法建立HF模型,HF模型建立成功后根据分组进行给药干预,连续14 d。利用彩色多普勒动物超声仪测量心功能指标[左室射血分数(LVEF)、左室收缩末期内径(LVESD)、左室舒张末期内径(LVEDD)、左室短轴缩短率(LVFS)]变化;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况;免疫组化法检测心肌组织凋亡相关蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织ERK/NF-κB信号通路相关蛋白表达情况。结果:与Control组比较,HF组LVEF、LVFS及心肌组织Bcl-2蛋白表达均减少,LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及心肌组织Bax蛋白表达均增加(P<0.05);与HF组比较,L-益母草碱组、H-益母草碱组、ERK抑制剂组LVEF、LVFS及心肌组织Bcl-2蛋白表达均增加,LVESD、LVEDD、心肌细胞凋亡率及心肌组织Bax蛋白表达均减少(P<0.05)。与Control组比较,HF组心肌组织磷酸化ERK(p-ERK)、磷酸化NF-κB抑制蛋白(p-IκBα)、细胞核NF-κB p65蛋白均增加(P<0.05);与HF组比较,H-益母草碱组、ERK抑制剂组心肌组织p-ERK、p-IκBα、细胞核NF-κB p65蛋白水平均减少(P<0.05)。结论:益母草碱可抑制HF大鼠心肌细胞凋亡,改善心功能,可能通过抑制ERK/NF-κB信号通路激活而实现。

益母草碱对绵羊精液低温保存效果的影响

【目的】探究益母草碱对绵羊精液低温保存效果的影响,为实际生产中制备适宜的绵羊精液低温保存稀释液提供理论依据。【方法】采用假阴道法采集3只多浪羊公羊精液,在精液低温保存稀释液中分别添加0(对照)、20、40、60、80和100μmol/mL益母草碱,检测精液低温保存过程中精子活率、顶体完整率和质膜完整率等精液品质指标以及总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性及丙二醛(MDA)含量等抗氧化指标,筛选精液保存过程中最适益母草碱浓度;添加最适浓度益母草碱后,利用实时荧光定量PCR法检测精液低温保存过程中TNF受体超家族成员6(Fas)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2关联X蛋白(Bax)等相关凋亡基因表达量;采用子宫颈口内输精方式完成两次输精,统计母羊受胎率。【结果】与对照组相比,低温保存48 h,40μmol/mL益母草碱组精子活率、质膜完整率、顶体完整率及T-AOC水平、SOD、GSH-Px、CAT活性均显著提高(P<0.05),MDA含量显著降低(P<0.05);低温保存144 h,40μmol/mL益母草碱组各项指标与其他益母草碱添加组相比差异显著(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,40μmol/mL益母草碱组Fas、Caspase-3和Bax基因表达量显著降低(P<0.05),Bcl-2基因表达量显著升高(P<0.05)。添加40μmol/mL益母草碱的低温保存精液输精后,母羊受胎率为75%,达到鲜精阴道输精的平均水平。【结论】低温保存精液稀释液中添加40μmol/mL益母草碱后可明显改善低温保存多浪羊精液品质,提升其抗氧化能力,同时起到抗凋亡作用;含40μmol/mL益母草碱低温保存72 h的精液输精后母羊受胎率为75%,达到了鲜精阴道输精平均水平。

益母草碱对SD大鼠抗凝血因子的影响

为了研究不同剂量益母草碱对大鼠的抗凝血作用,筛选出抗凝血效果最佳的剂量,为进一步治疗血瘀引起的相关动物疾病提供理论依据,试验将50只SD大鼠[雌雄不限,体重(200±20)g]随机分为空白对照组、益母草碱低剂量组(15 mg/kg)、益母草碱中剂量组(30 mg/kg)、益母草碱高剂量组(60 mg/kg)和阳性对照组(丹参滴丸),每组10只,灌胃给药7 d,第8天腹主动脉采血,测定大鼠的凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)、凝血酶时间(TT)及纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体、凝血酶抗凝血酶复合物(TAT)和血栓调节蛋白(TM)含量等指标。结果表明:与空白对照组相比,益母草碱低剂量组的PT显著延长(P<0.05),D-二聚体含量显著降低(P<0.05),血浆TM含量显著升高(P<0.05);益母草碱中剂量组的PT、APTT、TT显著延长(P<0.05),FIB含量显著下降(P<0.05),D-二聚体的含量极显著降低(P<0.01)。益母草碱高剂量组的PT极显著延长(P<0.01),TT显著延长(P<0.05),FIB含量显著降低(P<0.05),血浆中D-二聚体的含量极显著降低(P<0.01)。与阳性对照组相比,益母草碱低剂量组的PT显著延长(P<0.05),FIB含量显著升高(P<0.05),血浆TAT含量显著升高(P<0.05),血浆TM含量极显著升高(P<0.01);益母草碱中剂量组的PT、APTT、TT显著延长(P<0.05),血浆TAT和TM含量显著升高(P<0.05);益母草碱高剂量组的PT极显著延长(P<0.01),TT显著延长(P<0.05),血浆D-二聚体含量显著降低(P<0.05),TAT和TM含量显著升高(P<0.05)。说明益母草碱在浓度为30 mg/kg和60 mg/kg时对大鼠有良好的抗凝血作用。

益母草碱调节Akt/MDM2/p53信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的观察益母草碱调节蛋白激酶B(Akt)/双微体同源基因2(MDM2)/p53信号通路对脑胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法2022年3—9月于湖北省十堰市太和医院实验室进行实验。采用CCK-8法测定不同浓度(0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mmol/L)益母草碱处理的小鼠脑胶质瘤细胞GL261存活率并筛选出其最佳作用浓度。体外培养GL261细胞并随机分为对照组、益母草碱组、益母草碱+SC79(Akt激活剂)组,以益母草碱1.6 mmol/L和5μmol/L的SC79分组处理后,采用蛋白免疫印记法检测各组细胞Akt/MDM2/p53通路相关蛋白表达;采用CCK-8法、流式细胞术、细胞划痕实验和Transwell实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭情况。构建颅内胶质瘤小鼠模型30只并随机分为对照组、益母草碱低剂量组、益母草碱中剂量组、益母草碱高剂量组及益母草碱高剂量+SC79组,分组处理后以TUNEL染色检测各组小鼠颅内胶质瘤细胞凋亡情况;以免疫印记法检测各组胶质瘤组织Akt/MDM2/p53通路相关蛋白表达。结果(1)细胞实验:与对照组比较,益母草碱组细胞凋亡率、p53蛋白表达显著升高(P<0.05),存活率、迁移率、侵袭数、p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2降低(P<0.05);与益母草碱组比较,益母草碱+SC79组细胞凋亡率、p53蛋白表达降低(P<0.05),存活率、迁移率、侵袭数、p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2升高(P<0.05)。(2)动物实验:与对照组比较,益母草碱组胶质瘤组织细胞凋亡率、p53蛋白表达升高(t/P=20.076/<0.001、7.486/<0.001),p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2降低(t/P=11.769/<0.001、7.579/<0.001);与益母草碱组比较,益母草碱+SC79组胶质瘤组织细胞凋亡率、p53蛋白表达降低(t/P=18.328/<0.001、7.359/<0.001),p-Akt/Akt与p-MDM2/MDM2升高(t/P=9.640/<0.001、5.529/<0.001)。结论益母草碱可通过抑制Akt/MDM2/p53信号而抑制脑胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭及在小鼠体内生长,并诱导其凋亡,最终抑制其恶性进展。

添加益母草碱对绵羊精液常温保存效果的影响

为研究益母草碱对多浪羊精液常温保存效果的影响,本研究在多浪羊精液常温保存稀释液中分别添加20、40、60、80、100μmol/mL益母草碱,在多浪羊精液常温保存过程中检测精子的活率、顶体完整率、质膜完整率、总抗氧化能力(T-AOC)水平、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明:与0μmol/mL组相比,在常温保存稀释液中添加益母草碱能显著提高多浪羊常温保存精液的活率、顶体完整率、质膜完整率(P<0.05),并显著提升精液SOD、GSH-Px、CAT活性以及T-AOC水平,降低MDA含量(P<0.05);其中益母草碱在添加浓度为60μmol/mL时保存效果最佳(P<0.05)。本研究证实在精液稀释液中添加浓度为60μmol/mL的益母草碱后可改善多浪羊常温保存精液品质,同时提升其抗氧化能力。