基于网络药理学探讨益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的作用机制

目的:通过网络药理学技术探究益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的分子机制。方法:通过TCMSP数据库获取益气养阴化浊通络方相关药物靶点,GeneCard、OMIM及PharmGkb数据库获取糖尿病肾病相关靶点。Venny R软件获取益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的潜在靶点,Cytoscape 3.8.0软件构建药物-有效成分-靶点-疾病网络图。对潜在靶点进行PPI互作网络分析、GO功能及KEGG通路富集分析。结果:共获取益气养阴化浊通络方有效成分66个,有效靶点254个,糖尿病肾病相关靶点4755个,取交集后获取潜在靶点179个。PPI分析获取核心靶点MAPK3、TP53、MAPK1、HSP90AA1、JUN、AKT1、RELA、MAPK14等;GO功能富集分析体现在对氧化应激的反应、细胞对化学压力的反应、对外来刺激的反应、对活性氧的反应等;细胞组分多在膜筏、膜微域、转录调节因子、复合囊泡腔等;分子功能多在DNA结合转录因子结合、RNA聚合酶II特异性DNA结合转录因子结合、核受体活性、配体激活的转录因子活性等;KEGG通路富集分析多在糖尿病并发症中的脂质与动脉粥样硬化、年龄-RAGE信号通路在糖尿病并发症中的作用、前列腺癌、乙肝、人巨细胞病毒感染、化学致癌-受体激活及流体切应力与动脉粥样硬化等通路。结论:通过网络药理学技术探究益气养阴化浊通络方治疗糖尿病肾病的作用机制,为后续相关研究提供理论依据和数据支撑。

益气养阴化浊通络方对糖尿病肾病大鼠转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的观察益气养阴化浊通络方对糖尿病肾病(DN)大鼠转化生长因子(TGF)-β1/Smads信号通路的影响,探讨其对DN的作用机制及治疗效果。方法选择50只健康雄性SD大鼠,随机分为正常组10只,造模组40只。造模组大鼠接受单侧肾切除手术2 w后,给予高糖高脂饮食4 w,再加用小剂量链脲佐菌素(30 mg/kg)腹腔注射,造模组在DN模型成模后,随机分为模型组、中药组、西药组。中药组给予益气养阴化浊通络方煎剂,西药组给予贝那普利,治疗8 w后处死大鼠。测定血糖、24 h尿蛋白定量、血尿素氮及肌酐的变化,同时检测肾组织TGF-β1、p-Smad2/3、Smad7蛋白的表达。结果与模型组相比,中药组血糖、24 h尿蛋白量、血尿素氮及肌酐均显著降低(P<0.01),TGF-β1、p-Smad2/3蛋白表达下调,Smad7蛋白表达增强(P<0.05,P<0.01)。结论在DN大鼠模型中,益气养阴化浊通络方能够改善肾功能,保护肾组织,调节TGF-β1/Smad信号通路是其作用机制之一。

益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾脏疾病患者内皮细胞及血液流变学的影响

观察益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾脏疾病(DKD)患者内皮细胞及血液流变学的影响,以70例早期DKD患者随机分组,对照组(35例)采用DKD常规治疗,治疗组(33例)在常规治疗基础上加用益气养阴化浊通络方,疗程12周。采用酶联免疫吸附法检测治疗前后2组患者血浆血管性血友病因子(v WF)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平;血流变仪检测纤维蛋白原(PF)、全血高切黏度(HBV)、全血低切黏度(LBV)、血浆黏度(PV)、红细胞刚性指数(TK)等血液流变学指标;同时观察UP、SCr、UAER的变化。结果是两组治疗后UP、SCr、UAER、v WF、VEGF水平均较治疗前明显降低(P<0.05,P<0.01);且治疗组UP、SCr、UAER、VEGF水平降低更明显(P<0.05)。同时两组治疗后PF、LBV、PV、TK水平较治疗前明显降低(P<0.05,P<0.01);HBV、LBV、PV水平降低更明显(P<0.05)。说明益气养阴化浊通络方能够减轻内皮细胞的损伤,改善血流变,从而降低蛋白尿,改善肾功能。

益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾脏疾病患者氧化应激的影响

观察益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾脏疾病(DKD)患者血清总抗氧化能力(TAC)、过氧化物氧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)以及晚期糖基化终末产物(AGE)和尿蛋白排泄率(UAER)的影响。以70例早期DKD患者随机分组,对照组(35例)采用DKD常规治疗,治疗组(33例)在常规治疗基础上加用益气养阴化浊通络方,疗程12周。测定两组患者治疗前后血清AEG、GSH-Px、SOD活性和MDA含量,留取24 h尿测定尿蛋白后计算UAER。结果表明:两组治疗后UAER、AGE和MDA水平均较治疗前明显降低(P<0.05,P<0.01),GSH-Px、TAC和SOD显著增加(P<0.05,P<0.01)。同时治疗组治疗后UAER、AGE和MDA下降水平,以及GSH-Px、TAC和SOD增加水平优于对照组(P<0.05,P<0.01)。早期DKD患者UAER与AGE和MDA水平呈显著正相关性(P<0.05),与GSH-Px、TAC和SOD呈显著负相关,(P<0.01,P<0.05)。说明益气养阴化浊通络方能够增强抗氧化应激能力、减少蛋白尿、延缓DKD的进展。

益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病患者NF-κB、MCP-1及IL-6的影响

目的:观察益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)患者血清核因子-κB(NF-κB)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及白介素-6(IL-6)的影响。方法:选取2013年9月—2014年12月南阳理工学院附属医院、邓州市第二人民医院收治的DKD患者70例,按照随机数字表法分成对照组和治疗组,每组35例。治疗组因治疗上有变动等退出2例。对照组给予糖尿病饮食、运动、降血糖等常规对症治疗,治疗组在对照组治疗的基础上加服益气养阴化浊通络方治疗。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组患者治疗前后血清NF-κB、MCP-1和IL-6水平,同时观察CRP、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、24 h尿蛋白、尿微量白蛋白排泄率(UAER)的变化情况。结果:治疗组有效率93.94%,对照组有效率74.29%,治疗组优于对照组(P<0.05);两组治疗后Hb A1c、24 h尿蛋白、UAER、CRP、NF-κB、MCP-1和IL-6水平均较治疗前明显降低(P<0.05或P<0.01),且治疗组治疗后24 h尿蛋白、UAER、CRP、NF-κB、MCP-1和IL-6水平优于对照组(P<0.05或P<0.01);早期DKD患者NF-κB、MCP-1、IL-6、CRP水平与UAER呈正相关性(P<0.05或P<0.01)。结论:益气养阴化浊通络方能够减轻早期糖尿病肾病患者炎症反应,减少蛋白尿,延缓病情进展。

益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病患者TGF-β_1,MMP-9,TIMP-1表达的影响

目的:探讨益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病(DN)患者血清转化生长因子β1(TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、组织型金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)表达水平的影响。方法:63例早期DN患者随机分组,对照组(31例)采用DN常规治疗,治疗组(32例)在常规治疗基础上加用益气养阴化浊通络方,疗程3个月。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组患者治疗前后血清TGF-β1,MMP-9,TIMP-1水平,同时观察β2-微球蛋白(β2-MG)、尿微量白蛋白排泄率(UAER)的变化。结果:与治疗前比较,两组患者治疗后TGF-β1,TIMP-1水平下降(P<0.05,P<0.01),MMP-9水平、MMP/TIMP-1比值升高(P<0.05,P<0.01),β2-MG,UAER指标改善(P<0.05,P<0.01)。同时治疗组治疗后TGF-β1,MMP-9,TIMP-1及Ⅳ型胶原水平改善优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:益气养阴化浊通络方可能是通过改善血清TGF-β1,MMP-9,TIMP-1水平而影响细胞外基质(ECM)代谢调控系统,延缓DN的进展。

益气养阴化浊通络方对高糖诱导小鼠肾足细胞自噬ATG5、Beclin-1及BNIP3表达的影响

目的:观察益气养阴化浊通络方对高糖诱导的小鼠肾足细胞自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5,ATG5)、B细胞淋巴瘤-2蛋白相互作用中心卷曲螺旋蛋白1(B-cell lymphoma-2-interacting myosin-like coiled-coil protein 1,Beclin-1)及B淋巴细胞瘤-2基因/腺病毒E1B相互作用蛋白3(B-cell lymphoma-2/adenovirus E1 B interacting protein 3,BNIP3)表达的影响,探讨其对自噬的作用。方法:选取Wistar大鼠,分别灌胃20,40,80 g·kg^(-1)益气养阴化浊通络方及生理盐水,制备低、中、高浓度含药血清和空白血清。体外培养小鼠肾足细胞,分为正常对照组、高糖组、益气养阴化浊通络方低、中、高剂量组和雷帕霉素组。CCK-8法检测细胞增殖,细胞划痕检测细胞迁移能力,qRT-PCR和Western blot检测微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein 1 light chain 3 B,LC3B)、ATG5、Beclin-1及BNIP3 mRNA和蛋白表达。结果:与空白对照组相比,高糖组足细胞增殖减弱,迁移能力增强,LC3B、ATG5、Beclin-1及BNIP3 mRNA和蛋白表达显著减弱;与HG组相比,益气养阴化浊通络方低、中、高剂量含药血清组及雷帕霉素组均可促进足细胞增殖,抑制足细胞迁移,明显促进LC3B、ATG5、Beclin-1及BNIP3 mRNA和蛋白表达。结论:益气养阴化浊通络方能够促进高糖诱导的小鼠肾足细胞自噬,调节足细胞增殖及迁移。

益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病患者CTGF,Ⅳ型胶原及Cys C表达的影响

目的:探讨益气养阴化浊通络方对早期糖尿病肾病(DN)患者血清结缔组织生长因子(CTGF)、Ⅳ型胶原及胱抑素(Cys C)表达水平的影响。方法:63例早期DN患者随机分组,对照组(31例)采用DN常规治疗,治疗组(32例)在常规治疗基础上加用益气养阴化浊通络方,疗程2个月。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组患者治疗前后血清CTGF,Ⅳ型胶原蛋白含量,颗粒增强透射免疫比浊法(PETIA)测定Cys C水平,同时观察空腹血糖、尿微量白蛋白排泄率(UAER)的变化。结果:与治疗前比较,2组患者治疗后CTGF,IV型胶原水平下降(P<0.05,P<0.01),Cys C,UAER,空腹血糖指标改善(P<0.05,P<0.01)。同时治疗组治疗后CTGF,IV型胶原,Cys C水平改善优于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论:益气养阴化浊通络方可通过降低DN患者CTGF,Ⅳ型胶原水平而延缓DN的发展。