电子烟烟气捕集液对CHO细胞相对增殖率的影响

参照加拿大Labstat的电子烟抽吸模式,抽吸100口电子烟,用细胞培养基捕集电子烟烟气,通过MTT法研究电子烟烟气对CHO细胞相对增殖率的影响。结果表明:在该抽吸模式下,抽吸100口电子烟产生的烟气捕集液与CHO细胞相对增殖率之间存在浓度梯度效应;抽吸一支3R4F产生的烟气捕集液对CHO细胞相对增殖率的影响明显高于抽吸100口电子烟所产生烟气的影响,在100%烟气浓度下,电子烟烟气捕集液对CHO细胞的相对增殖率是3R4F的10倍以上。

药用辅料羟丙基甲基纤维素的细胞毒性研究

目的采用MTT比色法进行羟丙基甲基纤维素(HPMC)体外细胞毒性试验,以评价HPMC作为药用辅料的生物安全性。方法将L929细胞分为空白对照组(只加细胞培养液)、HPMC组(K4M、K100M两种规格,浓度分别为10.0、5.0、1.0、0.5、0.1 mg/ml)。置于培养箱中培养24、48 h,用MTT方法测定490 nm处的吸光度值,计算细胞毒性试验中细胞相对增殖率(RGR)。结果不同规格(K4M、K100M)、不同浓度(10.0、5.0、1.0、0.5、0.1 mg/ml)HPMC的平均细胞RGR>85%,属于无细胞毒性。结论研究结果证实HPMC对L929细胞无细胞毒性,这说明HPMC的细胞毒性达到国家标准对生物材料细胞毒性所限定的要求,为安全的药用辅料。

4种自粘接树脂水门汀对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的比较4种自粘接树脂水门汀对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)增殖的影响。方法将4种自粘接树脂水门汀试件(RelyX Unicem、SAC、Duo-Link和PermaCem)分别浸泡1、3、5、7 d,取浸提液培养HPDLFs 48 h,采用CCK-8法测定培养液的光密度(OD),计算细胞相对增殖率(RGR),并结合镜下细胞形态学分析。比较分析在4种自粘接树脂水门汀浸提液的作用下HPDLFs的RGR差异。结果4种自粘接树脂水门汀1 d的浸提液对HPDLFs增殖均无抑制作用,毒性分级为0级。浸提3 d时,Unicem组、SAC组和Duo-Link组抑制细胞增殖,表现为轻中度细胞毒性,其中Unicem组毒性分级为3级、SAC组和Duo-Link组毒性分级为2级。浸提5 d时,除了SAC组为毒性2级,其余3组对细胞均无毒性。光镜下观察细胞形态未见明显异常。随浸泡时间的延长,毒性分级逐渐降低,浸提7 d的树脂水门汀均无细胞毒性。PermaCem组浸泡1、3、5、7 d均对细胞无毒性。结论4种自粘接树脂水门汀浸提液对HPDLFs增殖的抑制作用均表现为3 d达到最强,7 d趋于无细胞毒性、细胞增殖恢复正常。4种水门汀均是良好的可供选择的粘接剂,而PermaCem的生物相容性更好些。

枣多糖对小鼠脾脏B淋巴细胞体外增殖的影响

本试验旨在探究不同乙醇浓度提取的枣多糖(JP)协同脂多糖(LPS)对小鼠脾脏B淋巴细胞体外增殖的影响。本试验采用水提醇沉法和分步醇沉法获取4种JP;采用机械法无菌分离出小鼠脾脏B淋巴细胞,调节细胞浓度为5×104个/mL,将细胞随机分为18组,每组4个重复,每个重复85μL细胞。试验采用4×4双因子试验设计,乙醇浓度和JP浓度为2个主效应,乙醇浓度分别为60%、70%、80%和90%,JP浓度分别为25、50、100和150μg/mL,另外设置1个空白对照组(不添加JP和LPS),1个LPS对照组(不添加JP,只添加LPS),用四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测各组脾脏B淋巴细胞的增殖情况,并计算其相对增殖率。结果表明:1)B淋巴细胞的相对增殖率随着乙醇浓度的增加而增加,乙醇浓度为90%组的相对增殖率显著高于60%、70%和80%组(P<0.05),70%和80%组的相对增殖率显著高于60%组(P<0.05),且70%和80%组间没有显著差异(P>0.05)。2)随着JP浓度的增加,相对增殖率先增加后降低,各试验组均显著高于LPS对照组和空白对照组(P<0.05),且各试验组间差异显著(P<0.05),当JP浓度为100μg/mL时相对增殖率最大。3)乙醇浓度和JP浓度两者互作对小鼠脾脏B淋巴细胞相对增殖率具有显著影响(P<0.05),LPS对照组和各试验组的相对增殖率均显著高于空白对照组(P<0.05),除乙醇浓度60%、JP浓度25μg/mL组的相对增殖率显著低于LPS对照组(P<0.05),其他各组均显著高于LPS对照组(P<0.05)。在体外培养条件下,小鼠脾脏B淋巴细胞的相对增殖率随乙醇浓度的增加而增加,随JP浓度的增加呈“钟罩型”变化,饱和浓度为100μg/mL;JP浓度和乙醇浓度互作可显著促进小鼠脾脏B淋巴细胞增殖,且乙醇浓度为80%、JP浓度为100μg/mL时效果最好。

臭氧水对人牙龈成纤维细胞的细胞毒性

目的:探讨不同浓度臭氧水(OW)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)的细胞毒性。方法:体外培养HGFs,按干预臭氧水浓度分为5组:1、2、4、6 mg/L和空白对照组,在作用的不同时点(1、5、10、20 min)采用倒置相差显微镜观察各组细胞的形态变化,MTT法测定细胞的相对增殖率,采用SPSS软件进行统计分析。结果:浓度为1和2 mg/L的OW在20 min内对HGFs的细胞毒性为1级,4 mg/L作用1 min,细胞毒性为1级,作用5~20 min,细胞毒性为2级;6 mg/L作用1~20 min,细胞毒性为2~3级。结论:臭氧水的细胞毒性与其浓度和作用时间有关,低浓度臭氧水(≤2 mg/L)可应用于临床治疗和消毒中,在保证作用效果的情况下,应尽量减小臭氧水的作用时间和浓度。

文蛤免疫活性肽酶解条件的优化及其活性研究

目的:采用酶解法制备文蛤中的免疫活性肽(MLIP),优化酶解条件,并对其免疫活性进行研究。方法:选用5种常用蛋白酶对文蛤进行酶解,以酶解液对RAW264.7细胞的增殖效果为评价依据,筛选最适蛋白酶。然后进行单因素实验,并选择影响较显著的3个因素,通过响应面法对酶解条件进行优化,用优化的工艺参数制备MLIP。最后,探究不同质量浓度MLIP对RAW264.7细胞相对增殖率、细胞形态及一氧化氮(NO)释放量的影响。结果:复合蛋白酶为最适用酶,优化得到的最佳酶解工艺参数为:pH 6.8、料液比1∶6.2、酶添加量3493 U/g,45℃酶解3 h,预测得到的酶解产物对RAW264.7细胞的相对增殖率为71.40%,验证试验得到结果与之相近。当MLIP质量浓度为0.4 mg/mL时,细胞相对增殖率最高,不同质量浓度的MLIP会引起细胞不同程度的分化且对NO的释放有一定促进作用。结论:以文蛤为原料制备的多肽具有较好的免疫活性。本研究可为文蛤免疫活性肽的制备及其进一步研究提供参考。

纳米Ag-SiO_2聚氨酯的体外细胞毒性评价

背景:为改善聚氨酯材料的抗菌性能,前期研究中合成了纳米Ag-SiO2聚氨酯材料。目的:比较7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料的体外细胞毒性。方法:将纳米Ag-SiO2与聚氨酯以熔融共混方式制备成含纳米Ag-SiO2,质量分数分别为0,0.5%,1.0%,1.5%,2.0%,2.5%,5.0%的聚氨酯材料。以上述7种聚氨酯材料浸提液、高密度聚乙烯浸提液(阴性对照)、0.1%苯酚液浸提液(阳性对照)分别培养L929细胞24,48,72h后,并设置试剂对照(含体积分数10%胎牛血清的RPMI1640液体培养基)和空白对照(不加细胞,只加含体积分数10%胎牛血清的RPMI1640液体培养基)。采用MTT比色法定量检测各组细胞相对增殖率,并进行毒性反应分级;同时在显微镜下观察细胞形态。结果与结论:7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料组、试剂对照组、阴性对照组细胞贴壁良好,形态正常,胞体丰满,胞质、核质分布均匀,细胞相对增殖率均大于80%,毒性反应分级均为1级,且随着纳米Ag-SiO2质量分数的降低,体外细胞毒性渐小、生物相容性更好。随培养时间延长,阳性对照组细胞相对增殖率逐渐降低,72h后细胞相对增殖率降至8.7%,与其他组比较差异有显著性意义(P<0.05),细胞萎缩、变圆、漂浮、片状脱落。表明7种含不同质量分数纳米Ag-SiO2聚氨酯材料均具有良好的体外细胞相容性,毒性反应分级均为1级,符合医用材料体外实验要求。

不同含锶量的掺锶羟磷灰石陶瓷细胞毒性评价

目的 研究不同含锶量的掺锶羟磷灰石陶瓷的细胞毒性。方法 通过溶液反应方法制备含不同浓度锶元素的羟磷灰石陶瓷 ,采用细胞相对增殖率法和细胞形态直接观察法测定细胞与材料作用后的生长情况。结果 不同含锶量的陶瓷材料其细胞相对增殖率均在 94 %～ 10 2 %之间 ,细胞毒性级为 0级或 1级 ;随着材料中掺锶量的增加其细胞毒性存在略微增大的趋势。

羊脱细胞真皮基质的体内外毒性实验

目的：利用溶血反应、热原反应和细胞毒性反应实验了解羊脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）在动物体内外的毒性反应强度.方法：溶血反应：分别制作交联型和非交联型羊ADM的浸提液,为交联组和非交联组;并设置阳性对照组10mL灭菌注射用水,阴性对照组10 mL 0.9％氯化钠溶液.将新鲜抗凝稀释兔血加入实验组和对照组试管中,离心后取上清液测量吸光度值,计算溶血度.热原实验：按照条件入选16只新西兰兔,分为初试A,B两组各3只和复试C,D两组各5只.分别将交联与未交联的两种ADM浸提液注射人两组新西兰兔体内,注射后每隔0.5 h测量一次体温,共测量6次,以6次中最高一次减去正常体温即为该兔的体温升高度数.据此判断是否符合生物制品热原实验的评价标准.MTT实验：收集对数期的小鼠成纤维细胞细胞,种植于含有不同浓度羊ADM浸提液的培养基,测量吸光度值进行细胞活力测定.结果：实验A,B组溶血度均小于5％,热原反应测得新西兰兔体温升高之和低于1.8℃.MTT实验显示10％～90％羊ADM浸提液培养基对体外细胞的毒性为1级,100％的羊浸提液对体外细胞的毒性为2级,交联型与非交联型组的浸提液对体外细胞的毒性的无显著性差异（P＞0.05）.均对体外细胞的增殖影响轻微.结论：羊DM植入新西兰兔体内引起的溶血反应和热原反应在评价标准之内,在体外对细胞的增殖和活力影响不明显.

牙种植高分子材料聚甲基丙烯酸甲酯的生物相容性

背景:钛作为牙种植材料,术后的出血率、发生感染和牙龈增生的概率较高,使得钛的应用受到了一定的限制;有研究表明,甲基丙烯酸甲酯已经应用于人造关节、人造骨,但用于牙种植材料的报道还很少。目的:通过探究纯钛和聚甲基丙烯酸甲酯分子材料作为牙种植材料对于人成骨细胞的细胞毒性、细胞贴壁率、相对增殖率以及种植后所引起的炎性反应等生物相容性指标,为临床上聚甲基丙烯酸甲酯作为牙种植体的广泛应用提供一定的参考依据。方法:体外培养人成骨细胞的细胞,实验分为3组:空白对照组细胞正常培养;纯钛组培养液中加入纯钛浸提液培养细胞;聚甲基丙烯酸甲酯组培养液中加入聚甲基丙烯酸甲酯浸提液培养细胞。结果与结论:与空白对照组相比,加入纯钛和聚甲基丙烯酸甲酯提取液培养细胞2,4,8,16 h后,细胞贴壁率均明显降低(P<0.05),聚甲基丙烯酸甲酯组的细胞贴壁率高于纯钛组(P<0.05);与空白对照组相比,加入纯钛和聚甲基丙烯酸甲酯提取液培养细胞2 d后,细胞稀疏,生长速度缓慢,其中聚甲基丙烯酸甲酯组细胞生长较快,呈梭形,拉丝现象不明显;与空白对照组相比,加入纯钛和聚甲基丙烯酸甲酯提取液培养细胞2 d后,细胞相对增殖率均明显降低(P<0.05),聚甲基丙烯酸甲酯组的细胞增殖率高于纯钛组(P<0.05);种植纯钛和聚甲基丙烯酸甲酯材料7 d后,大鼠血清中炎性因子表达明显增加(P<0.05),种植聚甲基丙烯酸甲酯组的炎性因子表达较纯钛组少(P<0.05);聚甲基丙烯酸甲酯组仅有1只大鼠发生过敏反应,无热原反应和死亡,而纯钛组有3只大鼠发生过敏反应,1只发生热原反应,无死亡。结果证实,聚甲基丙烯酸甲酯作为牙种植材料,在细胞毒性、种植后引发的炎症反应以及生物相容性方面均优于纯钛。

灌注法构建小肠黏膜全层去细胞外基质

背景:对于解剖层次复杂的细胞外基质,单纯浸泡法则很难达到理想的去细胞效果。目的:观察灌注法去细胞技术制备小肠黏膜全层去细胞外基质的效果。方法:采用灌注法去细胞技术,经成年雄性新西兰大白兔小肠黏膜上动脉灌注去离子剂后处理获得小肠黏膜全层去细胞外基质。采用MTT法检测小肠黏膜全层去细胞外基质浸提液(实验组)或含体积分数20%小牛血清的DMEM(对照组)与1月龄新西兰大白兔骨髓间充质干细胞共培养后的细胞相对增殖率。结果与结论:①大体观察:小肠黏膜上动脉经灌注30min后变得苍白透明,经2h灌注后肠段变得苍白剔透,清楚可见脉管纹理。②组织学与扫描电镜观察:灌注法构建的小肠黏膜全层去细胞外基质的去细胞程度均匀,胶原纤维未受损,孔隙多,孔隙率为(86.72±2.98)%。③MTT检测实验:培养2,4,7d,实验组细胞A值明显高于对照组细胞A值(P<0.05),且实验组细胞相对增殖率均>1。表明采用灌注法构建小肠黏膜全层去细胞外基质可操作性强,安全性好,且小肠黏膜全层去细胞外基质对骨髓间充质干细胞无毒性,并有一定的促生长作用。

3D打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球复合材料:构建及细胞毒性评价

背景:3D打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球复合材料,对细胞尤其是成骨细胞生长和增殖的影响及影响程度尚缺乏可靠的生物医学证据。目的:构建3D打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球材料,检测其细胞毒性。方法:利用3D打印技术制备出20个孔径400μm的多孔β-磷酸三钙材料,随机抽取其中10个负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球,作为载药支架,其余10个作为非载药支架。将以上两种支架浸提液与成骨细胞共同培养72h,通过倒置相差显微镜观察细胞形态,采用CCK-8法测得成骨细胞A值,计算细胞相对增殖率,评价支架材料的细胞毒性。结果与结论:载药支架大小适度,结构规则,孔隙均匀。培养72 h内,载药支架浸提液中的成骨细胞呈长条形或长梭形,可见少量细胞核固缩,表现出轻微中毒表现,细胞毒性分级为1级,无明显细胞毒性。结果表明3D打印多孔β-磷酸三钙负载聚乳酸-羟基乙酸共聚物抗结核药物缓释微球无明显细胞毒性。

特异性溶瘤重组腺病毒KH901对荷瘤鼠肿瘤生长的抑制作用和表达GM-CSF的研究

目的探讨特异性溶瘤重组腺病毒KH901的抗肿瘤效果及表达人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的水平。方法裸鼠皮下接种人肝细胞癌(Hep3B)细胞或人前列腺癌(LNcap)细胞,建立相应裸鼠移植瘤模型。KH901瘤体内注射给药,同时设阳性对照〔5-氟尿嘧啶(5-FU)或顺铂尾静脉注射〕和阴性对照〔生理盐水(NS)尾静脉注射〕,以相对肿瘤增殖率(T/C%)和抑瘤率观察抗肿瘤效果;建立人肺癌(A549)裸鼠移植瘤模型,瘤体内注射KH901,分别于首次给药后第2、7、11、14、18、36d各取3只动物眶静脉采血并摘取肿瘤,以ELISA法测定血清和肿瘤匀浆液上清中GM-CSF含量。结果1在Hep3B裸鼠抑瘤实验中,KH901高剂量(3×1010VP/鼠)组的T/C%和抑瘤率分别为7.31%、93.61%,与KH901低剂量(3×108VP/鼠)组(40.27%、68.76%)和5-FU组(37.33%、61.49%)相比显示出较强的抑瘤效果(P<0.05)。2在LNcap裸鼠抑瘤实验中,KH901多次给药(3×1010VP/鼠×3)组的T/C%和抑瘤率分别为5.47%、95.29%,其抑瘤效果强于顺铂组(25.47%、71.93%),但与KH901单次给药(3×1010VP/鼠×1)组(12.94%、87.94%)相比差异无统计学意义。3在A549裸鼠移植瘤模型中,肿瘤和血清中的GM-CSF分别在第7d〔(47.72±9.21)ng/mg〕和第11d〔(92.45±18.64)ng/mL〕出现高峰,随后,GM-CSF表达量逐渐降低。结论KH901有明显的抗肿瘤作用,在体内肿瘤中表达高水平的GM-CSF,并渗入血管到循环系统,形成血液GM-CSF的高峰。

杭白菊水提物对猫肾细胞(F81)的影响

研究菊花水提物对猫肾细胞(F81)的影响。制备杭白菊水提物,采用MTT法检测菊花水提物对F81的形态和增值的影响,用不同浓度的菊花水提物(分别为0 mg/mL,3.910×10^-3 mg/mL,7.810×10^-3 mg/mL,1.563×10^-2 mg/mL,3.125×10^-2 mg/mL,6.250×10^-2 mg/mL)于6孔板中处理对数生长期F81细胞,后使用流式细胞仪检测细胞周期、凋亡率。结果发现,菊花水提液组和对照组相比,细胞外观无明显改变,两者的细胞相对增值率基本一致,并且二者细胞周期、凋亡率的测试结果在统计学上无差异。说明菊花水提物对F81细胞的增殖无抑制作用,对细胞的形态无影响,并且对细胞的周期、凋亡率也无影响,菊花水提物在合理的剂量范围对F81细胞无影响,是安全的。

四种输血袋簿膜的体外细胞毒性

输血袋是日前主要的血液保存容器,一般为高分子材料组成。而近年来,由于高分子材料在医学上的应用日益发展,其安全问题已受到毒理学家的普遍关注。因此,不少国家已制定了医用材料和装置的生物学性能评价实施标准,但基于目前对材料与人体各组织间的相互作用机理尚了解不多,体外实验或动物模拟结果与人群应用效应间的相关性关系不清等问题,因此,本实验以人淋巴细胞体外培养方法来研究直接接触血液的四种输血袋薄膜材料的细胞毒性,以测试其安全使用的可靠性。

紫芸解毒止痛酊中红花的质量控制及其促骨髓间充质干细胞增殖的作用

目的对紫芸解毒止痛酊(ZYD)中的关键药材红花进行DNA条形码和HPLC化学质量控制,并探究羟基红花黄色素A(HSYA)在促骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞增殖中的作用。方法采用ITS2 DNA条形码技术鉴定中药材红花并分析其与近缘物种的序列差异;HPLC法测定5个批次的ZYD中HSYA的含量;CCK-8法测定BMSCs的细胞相对增殖率。结果 ZYD中红花的ITS2序列与NCBI数据库结果一致,系统进化树构建后发现其与近缘物种各自聚类成分支;5个批次的HSYA含量分别为23. 72±0. 44、24. 49±0. 15、25. 23±0. 51、23. 52±0. 21、23. 44±0. 42μg·m L^-1(n=6),RSD分别为1. 87%、0. 65%、2. 06%、0. 89%、1. 82%;与对照组比较,CCK-8法检测到ZYD、HSYA、红花提取液(HH)组分处理BMSCs 48 h后细胞的相对增殖率均大于100%,有显著促进细胞增殖的作用。结论 ITS2 DNA条形码和HSYA可作为ZYD中关键药材红花质量控制的重要指标,ZYD、HH的促BMSCs细胞增殖作用与HSYA的成分功效有关。

疏风解毒胶囊治疗EB病毒感染致裸鼠肿瘤模型的药效学探讨

目的:通过观察疏风解毒胶囊对EB病毒转染的人鼻咽癌细胞株CNE-2Z移植感染Balb/C裸小鼠致肿瘤模型的影响,评价疏风解毒胶囊体内抗EB病毒作用。方法:在Balb/C裸鼠右腋皮下接种鼻咽癌CNE-2Z细胞悬液,接种1周后,将移植瘤模型成功的裸鼠随机分为6组,分别为模型组、阿昔洛韦组、连花清瘟胶囊组、疏风解毒胶囊高、中、低剂量组(2.2,1.1,0.55 g·kg^(-1)·d^(-1)),每组7只,分组当天开始给药,每日1次,连续给药3周。给药当天测定裸鼠的体重,肿瘤体积,隔日测定1次,3周后称体重处死裸小鼠,取出肿瘤组织、脾脏和胸腺称质量,计算每组肿瘤体积、相对肿瘤体积、相对肿瘤增殖率、脾脏指数、胸腺指数。结果:与模型组比较,疏风解毒胶囊高、中、低剂量组均可在一定程度上降低Balb/C裸小鼠脾脏指数,升高其胸腺指数;疏风解毒胶囊高剂量组可显著降低给药8~20 d后裸鼠肿瘤体积(P<0.05,P<0.01);中剂量组可显著降低给药8~14,18 d后肿瘤体积(P<0.05,P<0.01),低剂量组可显著降低给药8,12 d后肿瘤体积(P<0.05)。在相对肿瘤增值率方面疏风解毒胶囊表现出一定的抑制肿瘤增长的趋势。结论:疏风解毒胶囊对EB病毒转染的CNE-2Z细胞移植裸小鼠肿瘤模型具有抑制作用。

TLN-58和hLYZ基因融合表达载体的构建及其细胞毒性研究

为了评价融合表达抗菌肽TLN-58和人溶菌酶hLYZ双基因重组表达质粒的安全性,试验采用基因重组法将TLN-58和hLYZ基因片段克隆至pEGFP-N1载体,利用转染试剂GeneTwin^(TW)将构建好的重组质粒转染HEK293细胞,RT-PCR验证重组真核质粒在细胞中表达情况;通过DAPI染色、AO/EB染色、CCK-8检测法和流式细胞术测定并分析hLYZ和TLN-58融合基因表达产物的细胞毒性。结果表明:成功构建重组真核质粒pEGFP-N1-hLYZ-TLN-58,当重组质粒DNA用量为1μg且GeneTwin^(TW)转染试剂用量为3μL时,转染HEK293细胞24 h,为最佳转染条件,重组质粒可成功表达目的基因;DAPI染色和AO/EB染色显示,转染pEGFP-N1-hLYZ-TLN-58质粒组细胞凋亡与对照组相比,无显著性差异;CCK-8试验测定细胞相对增殖率(RGR)为50%~74%,显示重组质粒的细胞毒性较小;流式细胞术检测发现重组质粒转染细胞与对照组细胞在G1、G2和S期所占的比例均差异不显著。结果表明,重组质粒的细胞毒性较小且对细胞周期无显著影响,为抗菌肽TLN-58和hLYZ的安全性及抗菌应用奠定了研究基础。