真核起始因子2α的磷酸化促进多柔比星介导的肝癌细胞凋亡

目的:研究真核起始因子2α(eukaryotic initiation factor 2 alpha,eIF2α)的磷酸化对多柔比星诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法:在采用eIF2α磷酸酶抑制剂salubrinal(抑制S51去磷酸化)和eIF2α突变载体eIF2αS51A(不能发生S51磷酸化)改变eIF2α磷酸化的基础上,利用流式细胞和免疫印迹技术分析eIF2α磷酸化对多柔比星诱导肝癌细胞LM3凋亡的影响。结果 :eIF2α突变载体eIF2αS51A抑制多柔比星介导的肝癌细胞LM3凋亡,而eIF2α磷酸酶抑制剂salubrinal则促进多柔比星介导的肝癌细胞LM3凋亡。结论:eIF2α的磷酸化在多柔比星介导的肝癌细胞凋亡中起重要作用。

真核翻译起始因子4γ2调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1 mRNA对胃癌细胞恶性表型的影响

目的探讨真核翻译起始因子4γ2(EIF4G2)通过调控N-乙酰氨基半乳糖转移酶1(GALNT1)mRNA对胃癌进展的影响。方法通过生物信息数据库分析GALNT1、EIF4G2在胃癌细胞和胃癌组织中的表达及与胃癌患者预后的关系,并分析胃癌组织中EIF4G2、GALNT1表达的相关性。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测GALNT1 mRNA、EIF4G2 mRNA在人胃黏膜上皮细胞GES-1和人胃癌细胞(AGS细胞等)中的表达水平,并采用蛋白质印迹法(Western blot)检测GALNT1、EIF4G2蛋白表达水平。建立干扰GALNT1和过表达EIF4G2的AGS细胞株,采用CCK-8法和克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用TUNEL实验检测细胞凋亡能力,采用划痕实验和Transwell实验分别检测细胞迁移和侵袭能力,采用Western blot检测凋亡和转移相关蛋白表达水平,采用RIP实验和RNA下拉实验检测GALNT1 mRNA与EIF4G2的结合关系。结果胃癌组织和胃癌细胞中的GALNT1、EIF4G2水平分别高于正常组织和人胃黏膜上皮细胞,差异有统计学意义(P<0.001),且与胃癌患者预后差相关;胃癌组织中,EIF4G2表达与GALNT1表达呈正相关。敲低GALNT1后,AGS细胞活力降低,克隆形成数、迁移和侵袭细胞数减少,凋亡细胞数增加,Bcl-2、MMP2、MMP9蛋白表达降低,Bax、cleaved-caspase3、cleaved-caspase9蛋白表达增加,差异有统计学意义(P<0.001)。EIF4G2可与GALNT1 mRNA结合,促进GALNT1 mRNA、GALNT1蛋白表达及GALNT1 mRNA稳定性,差异有统计学意义(P<0.001)。共转染sh-GALNT1-1与oe-EIF4G2可逆转sh-GALNT1-1对AGS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01或P<0.001)。结论EIF4G2可通过稳定GALNT1 mRNA促进胃癌细胞增殖、迁移、侵袭并抑制细胞凋亡,其或可成为胃癌临床诊疗的新靶点。

内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶/真核起始因子2α/转录激活因子6通路与大鼠肝癌细胞增殖及迁移的关系

目的探讨内质网应激蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)/真核起始因子2 α(eIF-2αα/转录激活因子6(ATF6)通路与大鼠肝癌细胞增殖与迁移的关系.方法采用二乙基亚硝胺(DEN)间断给药法建立大鼠肝癌模型,苏木精-伊红(HE)染色观察大鼠肝脏的形态学变化.采用免疫组织化学法检测大鼠肝癌组织中PERK和eIF-2α蛋白的表达;用无水乙醇诱导正常肝细胞(LO2)和高分化肝癌细胞株(CBRH-7919)构建内质网应激细胞模型;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖;采用划痕实验检测细胞的迁移和侵袭能力;采用蛋白质印迹法(Western blot)检测肝癌组织中PERK、eIF-2a、ATF6、B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)蛋白的表达,应用SPSS 22.0统计软件分析,肝癌组织相关分析结果采用单因素方差分析和t检验.结果无水乙醇诱导LO2和CBRH-7919细胞发生内质网应激后,LO2和CBRH-7919细胞细胞迁移能力显著降低,差异有统计学意义(tLO2细胞=8.910,P<0.01;tCBRH-7919细胞=30.010,P<0.01).LO2和CBRH-7919细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(tLO2细胞=11.840,P<0.01;tCBRH-7919细胞=19.080,P<0.01).实验组肝癌组织内PERK、eIF-2a、ATF6、Caspase-3蛋白表达显著升高,bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK=8.070,P<0.01;teIF-2a=11.790,P<0.01;tATF6 =7.750,P<0.01;tbcl-2=8.670,P<0.01;tCaspase-3=7.720,P<0.01).无水乙醇诱导LO2细胞发生内质网应激后,LO2细胞内PERK、eIF-2a、ATF6、bcl-2和Caspase-3蛋白表达量显著升高,bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK=12.910,P<0.01;teIF-2a=15.810,P<0.01;tATF6=7.690,P<0.01;tbcl-2=23.260,P<0.01;tCaspase-3=22.280,P<0.01).无水乙醇诱导CBRH-7919细胞发生内质网应激后,CBRH-7919细胞内PERK、eIF-2a、ATF6、bcl-2和Caspase-3蛋白表达显著升高,bcl-2蛋白表达显著降低(tPERK=9.560,P<0.01;teIF-2a=12.400,P<0.01;tATF6=6.880,P<0.01;tbcl-2=13.840,P<0.01;tCaspase-3=9.950,P<0.01).结论内质网应激PERK/eIF-2a/ATF4通路的激活,明显抑制大鼠肝癌细胞的增殖与迁移.

小干扰RNA抑制真核翻译起始因子5A2对MKN28胃癌细胞恶性生物学行为的影响

目的研究真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在胃癌细胞增殖及迁移侵袭调控中的作用及其可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法检测EIF5A2在MKN28、HGC27细胞及正常胃黏膜上皮细胞(GES-1)内的表达,评估小干扰RNA(siRNA)对EIF5A2的抑制效果。检测EIF5A2蛋白在2例人胃癌及匹配的非癌胃黏膜组织的表达。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移及侵袭力,Western blot法检测CyclinD1、CyclinD3、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、E-cadherin、Vimintin、C-myc及转移相关蛋白1(MTA1)的表达水平。结果 EIF5A2在MKN28细胞及人胃癌组织内呈高表达。EIF5A2 siRNA#1可明显抑制MKN28细胞内EIF5A2 mRNA及蛋白的表达。抑制EIF5A2后可明显抑制MKN28细胞增殖(P均<0.01)、迁移(P<0.001)及侵袭能力(P<0.001)。抑制EIF5A2后,Vimentin表达下调,E-cadherin表达上调,CyclinD1、CyclinD3、MTA1及C-myc表达明显受抑制。结论siRNA下调EIF5A2可能通过抑制CyclinD1、CyclinD3抑制MKN28细胞增殖,并通过抑制MTA1、C-myc及上皮间质转化抑制MKN28细胞迁移及侵袭能力。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠磷酸化真核翻译起始因子2α和激活转录因子4表达的变化

目的:了解新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)后磷酸化真核翻译起始因子2α[eIF2α(p)]、激活转录因子4(ATF4)表达的变化。方法:7日龄新生SD大鼠80只,随机分为2组:假手术组和HIBD组,每组各40只。HIBD组采用Rice方法建立新生大鼠HIBD模型,分别于缺氧缺血(HI)后6、12、24和72 h取其脑组织切片,采用免疫组织化学方法检测病变侧大脑皮质eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。假手术组不行缺氧缺血处理,采用同样方法检测其eIF2α(p)、ATF4蛋白的表达。结果:假手术组eIF2α(p)、ATF4蛋白少量表达,各时间点无明显变化(P>0.05);HIBD组6 h可以观察到较多eIF2α(p)、ATF4蛋白,12 h达到高峰,72 h明显减少,但仍高于假手术组。HIBD组与假手术组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。HIBD组各时间点比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:eIF2α(p)、ATF4参与了新生大鼠HIBD病理生理过程。HIBD可能诱发了内质网应激反应,启动了PKR样内质网激酶(PERK)介导的未折叠蛋白应答(UPR)通路。

真核起始因子2α的磷酸化抑制顺铂介导的肝癌细胞凋亡

目的探讨真核起始因子2α（eW2α）的磷酸化对顺铂诱导肝癌细胞凋亡的影响。方法将肝癌细胞随机分为对照组和实验组，在用突变载体eIF2αS51A转染和小分子抑制剂salubrinal改变实验组细胞在顺铂作用条件下eIF2cL磷酸化的基础上，用流式细胞和Westerm blot分别检测细胞凋亡的百分率和细胞凋亡的分子标志物。多组间比较采用方差分析，两组间比较采用t检验。结果顺铂诱导肝癌细胞eIF2α发生51位丝氨酸磷酸化。在突变载体转染条件下，顺铂（10ug／ml）诱导对照组和实验组SMMC-7721细胞在24h凋亡的平均百分率分别为21．7％±1．5％和50．7％±2．1％（t=19．454，P〈0．05）；顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在24h凋亡的百分率分别为21．0％±1．0％和57．3％±2．1％（t=27．250，P〈0．05）。在抑制剂作用条件下，顺铂（15μg／ml）诱导对照组和实验组SMMC～7721细胞在36h凋亡的百分率分别为50．3％±2．5％和16．3％±2．1％（t=18．031，P〈0．05）；顺铂诱导对照组和实验组HepG2细胞在36h凋亡的百分率分别为42．0%±2．6%和12．0%±2．％（t=15．667，P〈0．05）。同时，Westem blot检测显示eIF2α的磷酸化抑制顺铂诱导的凋亡蛋白抗多聚ADP-核糖聚合酶的剪切。结论eIF2α的磷酸化在肝癌细胞抵抗顺铂介导的凋亡中起重要作用。

真核翻译起始因子-5A2在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨真核翻译起始因子-5A2在乳腺癌组织中的表达的临床意义。方法收集我院2008年1月至2010年12月有完整存档蜡块资料的50例乳腺癌蜡块并对其进行免疫组织化学染色,检测EIF-5A2在乳腺癌中的表达,并且对EIF-5A2的表达情况与疾病的病理生物学特点进行分析,以判断其对预后的意义。结果 EIF-5A2阳性表达86%,EIF-5A2在肿瘤中的表达与肿瘤临床分期、淋巴结转移、与雌激素受体(ER)状态呈负相关。结论 EIF-5A2在乳腺癌中有高表达,与临床分期密切相关。

真核翻译起始因子-5A2 在肝内胆管癌中的表达及意义

目的研究真核翻译起始因子-5A2(eukaryotic translation initiation factor 5A2,eIF5A2)在肝内胆管癌中的表达及与神经侵犯和周围脂肪组织浸润的相关性。方法收集昆明医科大学第二附属医院肝胆胰外科2013年10月至2020年10月156例肝内胆管癌患者术后石蜡切块,收集同期30例肝血管瘤患者部分肝切除的正常肝组织作为对照组,采用免疫组化的方法检测eIF5A2的表达水平,并收集病理资料,分析eIF5A2与神经侵犯和周围脂肪组织浸润的相关性。结果156例肝内胆管癌组织切片中eIF5A2高表达95例(60.9%),其在正常肝组织胆管上皮高表达率为13.3%,eIF5A2的表达与神经侵犯和周围脂肪组织浸润显著相关(P<0.05)。结论eIF5A2在肝内胆管癌中高表达,与神经侵犯和周围脂肪组织浸润显著相关。

非酒精性脂肪性肝病中蛋白激酶R样内质网激酶/真核翻译起始因子-2α通路的变化及意义

目的:又见察蛋白激酶R样内质网激酶/真核翻译起始因子-2α(protein kinase R-like endoplasmic reticulum kinase/eukaryotic translation initator factor-2α,PERK/eIF-2α)信号通路在大鼠实验性非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)中的变化并探讨该信号通路在NAFLD中可能的作用.方法:健康Wistar大鼠30只,雌雄不限,按照随机数字表法分为正常对照组和NAFLD组,每组各15只.NAFLD组大鼠采用高脂高糖饮食诱导NAFLD的发生,而正常对照组大鼠则给予普通饲料喂养,时间总计为16 wk.检测血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三醋(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(highdensity lipoprotein,HDL)和低密度脂蛋白(lowdensity lipoprotein,LDL)的含量;实时荧光定量PCR技术检测肝脏中PERK,eIF-2α、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)及葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein 78,GRP78)等指标在mRNA水平的表达改变;蛋白质免疫印迹(Western blot)技术检测肝脏中磷酸化PERK(pPERK),磷酸化eIF-2α(p-eIF-2α),CHOP及GRP78等指标在蛋白水平的改变;同时采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果:NAFLD组大鼠血清中TC、TG、LDL含量较正常对照组明显增高(P<0.05),而HDL则明显低于正常对照组大鼠(P<0.05);PCR结果发现,NAFLD组大鼠肝组织中PERK,eIF-2α、CHOP及GRP78的mRNA表达水平均较正常对照组大鼠显著升高(P<0.05或P<0.01):同时Western blot结果显示NAFLD大鼠肝脏中p-PERK,p-eIF-2α,CHOP及GRP78等指标的蛋白水平表达较正常对照组大鼠明显增多(P<0.05);此外,流式细胞仪检测发现NAFLD大鼠肝细胞凋亡较正常对照组大鼠显著升高.结论:NAFLD的发生发展过程中可能有内质网应激诱导细胞凋亡通路PERK/eIF-2α的参与.

真核翻译起始因子2α激酶在肾脏疾病中的作用研究进展

肾脏疾病的防治一直是医学研究的重点。真核翻译起始因子2α激酶(eIF2α)是哺乳动物细胞中代谢应激反应的关键因子,可诱导整体蛋白质翻译抑制,并在不同的细胞代谢应激下控制细胞存活。eIF2α激酶在维持机体的正常生理功能方面及肿瘤、免疫和代谢相关疾病等的发生发展过程中发挥重要作用。研究提示eIF2α激酶可能参与多种肾脏疾病的病理过程,因此,本文对eIF2α激酶家族及其在肾脏疾病中的可能作用等方面的研究进展进行归纳总结,以期为肾脏疾病的防治提供新的参考和理论依据。

真核翻译起始因子2α在动脉粥样硬化等增殖性疾病中的研究进展

真核翻译起始因子2α(e IF2α)是真核翻译起始因子2的一种调节亚基,是催化蛋白质合成起始的关键蛋白。以往研究证实,磷酸化的e IF2α对蛋白质的合成能够起到负反馈调控的作用;最近研究发现,磷酸化的e IF2α还能特异性激活某些mRNA的翻译以合成特定蛋白质来调节靶基因的表达,进而促进疾病的发生发展。研究发现,e IF2α在动脉粥样硬化、肺动脉高压、肿瘤等增殖性疾病中差异表达,这些证据提示e IF2α可能在人类心血管病和肿瘤等增殖性疾病中发挥重要的作用。因此,进一步探讨e IF2α在增殖性疾病中的作用及机制,对于人类心血管病和肿瘤等增殖性疾病的防治具有重要意义。

瘢痕疙瘩miR-557和eIF2a的表达及靶向关系研究

目的检测瘢痕疙瘩中微小RNA-557(miR-557)和真核细胞翻译起始因子2a(eIF2a)在病变组织和细胞株中的表达特征,明确两者的靶向关系。方法选择首都医科大学附属北京朝阳医院诊治患者术后的瘢痕疙瘩(n=98)、增生性瘢痕组织(n=49)和正常皮肤组织(n=49)。应用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-557的表达,应用免疫组化检测eIF2a和Ki-67的表达。分离培养瘢痕疙瘩组织中的成纤维细胞,应用双荧光素酶报告基因实验观察miR-57与eIF2a的靶向关系。结果瘢痕疙瘩中miR-557的表达量明显低于增生性瘢痕组织和正常皮肤组织(P<0.05),瘢痕疙瘩中eIF2a表达的阳性率明显高于增生性瘢痕组织和正常皮肤组织(P<0.05),miR-557和eIF2a在不同病变最大径、不同增殖指数和有无伴随症状中的比较差异有统计学意义(P<0.05)。瘢痕疙瘩中miR-557与eIF2a呈负相关性(r=-0.69,P=0.016)。双荧光素酶报告基因实验显示miR-557与eIF2a具有靶向关系。结论miR-557在瘢痕疙瘩中的表达下降,eIF2a的表达升高,均与临床及组织病理特征有关,miR-557与eIF2a具有靶向负调控关系。

肝细胞肝癌组织中WDR4和EIF2A的表达及临床预后价值

目的探讨肝细胞肝癌(HCC)组织中WD重复结构域4(WDR4)、真核翻译起始因子2A(EIF2A)的表达情况及临床预后意义。方法收集2019年1月—2020年1月南京大学医学院附属金陵医院收治的90例HCC患者的临床资料。利用R语言(4.2.1版本)分析癌症基因组图谱(TCGA)数据库下载的327对HCC癌组织和癌旁组织中WDR4 mRNA、EIF2A mRNA表达的转录组测序数据。免疫组织化学检测HCC癌组织、癌旁组织中WDR4、EIF2A表达。分析HCC癌组织WDR4、EIF2A表达与临床病理特征的关系。Kaplan-Meier法分析WDR4、EIF2A表达对HCC患者预后的影响。Cox回归模型分析HCC预后的影响因素。结果HCC癌组织WDR4 mR-NA、EIF2A mRNA表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。HCC癌组织中WDR4、EIF2A表达阳性率高于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。HCC癌组织WDR4 mRNA与EIF2A mRNA表达呈正相关(r=0.404,P<0.001)。HCC癌组织中WDR4蛋白与EIF2A蛋白表达呈正相关(r=0.667,P<0.05)。肿瘤最大径>5 cm、TNM分期Ⅲ期及浸润型HCC癌组织中WDR4、EIF2A阳性率分别高于肿瘤最大径≤5 cm、TNM分期Ⅰ-Ⅱ期及非浸润型癌组织,差异有统计学意义(P均<0.05)。WDR4阳性组3年累积生存率明显低于WDR4阴性组,差异有统计学意义(P=0.016)。EIF2A阳性组3年累积生存率明显低于EIF2A阴性组,差异有统计学意义(P=0.022)。肿瘤TNM分期Ⅲ期、肿瘤最大径>5 cm、WDR4阳性、EIF2A阳性是HCC患者不良预后的独立危险因素。结论HCC组织中WDR4、EIF2A表达升高,两者与HCC不良临床病理特征有关,是评估HCC预后的肿瘤标志物。

乳腺癌组织中eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)和5A2(eIF5A2)、Krüppel样因子4(KLF4)、Yes相关蛋白1(YAP1)的表达水平及临床意义。方法 :将接受手术治疗的乳腺癌组织50例作为观察组,同时选取50例癌旁正常组织作为对照组,检测两组eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平,分析其与乳腺癌病理特征的临床意义。结果 :观察组eIF4E、eIF5A2、YAP1阳性表达率均高于对照组(P <0.05),KLF4低于对照组(P <0.05);在临床分期Ⅰ~Ⅱ期及发生淋巴结转移的患者中,eIF4E、eIF5A2、YAP1高表达患者占比高于低表达(P <0.05),KLF4高表达患者占比低于低表达(P <0.05)。结论 :乳腺癌组织中,eIF4E、eIF5A2、YAP1水平呈高表达,KLF4水平呈低表达,是评估疾病进展的重要指标。

低浓度氟化钠对人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化的影响

目的探讨低浓度氟化钠对人牙髓细胞(human dental pulp cells,hDPCs)成骨/成牙本质分化的影响。方法本研究已通过单位伦理委员会审查批准。原代培养hDPCs,采用MTT法检测不同浓度氟化钠对hDPCs增殖的影响;选取合适浓度的氟化钠加入成骨/成牙本质分化诱导培养液中,对hDPCs进行体外诱导,通过茜素红染色检测hDPCs成骨/成牙本质分化能力的变化,RT⁃qPCR检测分化相关基因的mRNA表达;同时通过RT⁃qPCR和Western blot检测hDPCs成骨/成牙本质分化过程中内质网应激相关基因的表达。结果低浓度氟化钠(0.1 mmol/L)在体外可刺激hDPCs增殖,高浓度氟化钠(5~10 mmol/L)可抑制hDPCs增殖(P<0.05)。选取0.1 mmol/L氟化钠体外混合成骨/成牙本质分化诱导培养后hDPCs的茜素红染色增加,成骨/成牙本质分化相关基因牙本质涎磷蛋白(dentin sialophosphoprotein,DSPP)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)和骨钙蛋白(osteocalcin,OCN)mRNA表达水平升高(P<0.05)。同时在此过程中RT⁃qPCR检测出mRNA水平hDPCs内质网应激相关基因:剪切x盒结合蛋白1(splicing x⁃box binding protein⁃1,sXBP1)、葡萄糖调节蛋白78(glucose⁃regulated protein 78,GRP78)以及活化转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达升高(P<0.05);Western blot检测出氟化钠混合成骨/成牙本质分化培养后细胞磷酸化真核起始因子⁃2α(phosphorylated eukary⁃otic initiation factor⁃2α,p⁃eIF2α)、磷酸化蛋白激酶样内质网激酶(phosphorylated the RNA⁃activated protein kinase⁃like ER⁃resident kinase,p⁃PERK)和ATF4蛋白表达增加(P<0.05)。结论低剂量氟化钠促进人牙髓细胞的成骨/成牙本质分化并伴有内质网应激水平的升高。

耐力训练对心肌PERK/eIF2α/ATF4信号通路激活的影响

探讨内质网应激机制在耐力训练对心肌功能影响过程中的作用。方法:通过建立不同运动方式、运动训练状态和不同恢复阶段的动物模型,测定心肌中与内质网应激相关的信号通路PERK/eIF2α/ATF4激活水平的变化。结果:无论是急性运动,还是4或10周的递增负荷耐力训练,都没有显著激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路,但是以延长运动时间为特征的耐力训练能够激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路。结论:以递增运动时间为特征的耐力训练能够激活PERK/eIF2α/ATF4信号通路,该通路的激活对运动心肌的结构和功能变化可能产生影响。

TRIM59,EIF5A2在非小细胞肺癌组织中的表达及对转移分化的预估价值

目的探讨三结构域蛋白59(TRIM59)、真核翻译起始因子5A2(EIF5A2)在非小细胞肺癌组织中的表达及对转移分化的预估价值。方法选取非小细胞肺癌组织80例、正常肺组织80例,qRT-PCR法、免疫组化法检测2种组织中TRIM59、EIF5A2 mRNA与蛋白表达情况。收集肺癌患者临床资料,根据其是否出现转移分化进行分组:转移分化组、未转移分化组,分析其出现转移分化的影响因素。绘制ROC曲线分析TRIM59、EIF5A2表达对肺癌患者转移分化的预估价值。结果NSCLC组织中TRIM59、EIF5A2 mRNA表达水平高于正常组织,TRIM59、EIF5A2蛋白高表达率高于正常组织(P<0.05)。转移分化组与未转移分化组患者之间的TRIM59、EIF5A2蛋白表达情况、肿瘤分化程度差异有统计学意义(P<0.05),TRIM59、EIF5A2蛋白高表达和肿瘤低分化为NSCLC肿瘤转移分化的危险因素。NSCLC组织中TRIM59联合EIF5A2蛋白表达水平预估肿瘤转移分化的AUC以及特异度均明显高于单独检测。结论TRIM59、EIF5A2在非小细胞肺癌组织中的表达水平异常升高,是非小细胞肺癌转移分化的影响因素之一,且对其转移分化有一定预估价值。

骨肉瘤中eIF2α和VEGF的表达及其意义

目的:观察骨肉瘤组织中真核翻译起始因子2α(eIF2α)和血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA的表达,探讨其临床意义。方法:收集61例骨肉瘤患者作为研究组1,骨巨细胞瘤患者41例作为对照组1,因外伤切除正常骨组织的患者41例作为正常对照组,均留取术后石蜡包埋组织;收集21例骨肉瘤新鲜组织作为研究组2,21例骨巨细胞瘤新鲜组织作为对照组2。应用免疫组化方法检测研究组1、对照组1和正常对照组中eIF2α和VEGF蛋白的表达,应用蛋白质印迹法检测研究组2和对照组2中eIF2α和VEGF的半定量表达,应用荧光PCR技术检测研究组2和对照组2中eIF2α和VEGF mRNA的表达。结果:免疫组化结果显示,研究组1、对照组1和正常对照组中eIF2α和VEGF表达的阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。研究组1中eIF2α和VEGF蛋白的表达均与病变级别、周围组织累犯和肿瘤最大径有关(P<0.05),eIF2α蛋白的表达还与增殖指数有关(P<0.05),VEGF蛋白的表达还与转移有关(P<0.05)。蛋白质印迹法检测结果显示,研究组2和对照组2中eIF2α和VEGF的半定量表达差异有统计学意义(P<0.05)。荧光PCR结果显示,研究组2和对照组2中eIF2α和VEGF mRNA的表达差异有统计学意义(P<0.05)。研究组1中eIF2α蛋白与VEGF蛋白表达呈正相关(r=0.56,P=0.017 0),生存分析显示研究组1中eIF2α和VEGF蛋白的表达与生存时间相关(P<0.05)。结论:骨肉瘤组织中eIF2α和VEGF的蛋白及mRNA表达明显升高,二者呈正相关,共同促进病变的形成和进展。eIF2α和VEGF的表达与预后有关。

猪EIF2S3基因克隆测序及其组织表达谱分析

【目的】克隆猪EIF2S3基因mRNA全长,并进行生物信息学分析及检测其在猪各组织中的表达特征,为研究真核翻译起始因子2(eIF2)蛋白γ亚基的生物学功能打下基础。【方法】以荣昌猪胸腺mRNA为模板,采用RCAE-PCR克隆EIF2S3基因的m RNA全长序列,在线完成各种生物信息学分析后,利用实时荧光定量PCR分析猪EIF2S3基因的组织表达特征。【结果】猪EIF2S3基因mRNA全长1813 bp,其中蛋白质编码区(CDS)长1419 bp,5'UTR区、3'UTR区分别长14和380 bp,编码472个氨基酸。EIF2S3蛋白分子量51.1 kD,理论等电点(pI)8.62,包含58个带正电的氨基酸和52个带负电的氨基酸,其前体蛋白靠近N端区域有一个强疏水区;EIF2S3蛋白的空间结构由α-螺旋、β-折叠、延伸及无规则卷曲构成。EIF2S3蛋白氨基酸序列与狗和大白鼠的相似性最高(99.6%),其次是马、猫、牛、羊和人类(99.4%),与斑马鱼的相似性最低(96.6%)。EIF2S3基因在猪的心脏、胸腺和淋巴组织中表达量较高,在脾脏和肌肉中呈中度表达,在肾脏中的表达量较低,而在肝脏中基本不表达。【结论】猪EIF2S3基因全长1813 bp,在核酸和氨基酸水平上与其他物种的EIF2S3基因高度同源,尤其与狗和大白鼠的遗传距离最近;其在猪心脏、胸腺和淋巴组织中的表达量较高,在肝脏中基本不表达,据此推测EIF2S3参与合成的蛋白更多地参与心脏泵血和免疫相关功能,基本不发挥能量代谢功能。

抑制NSCLC细胞株H1299中EIF5A2表达对肿瘤生长及转移的影响

目的研究真核翻译起始因子5A2(eukaryotic translation initiation factor 5A2,EIF5A2)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞株H1299中的作用和潜在分子机制。方法采用EIF5A2干扰RNA,敲除NSCLC细胞株H1299中的EIF5A2后,评估细胞的增殖能力、细胞凋亡率、细胞迁移和侵袭能力;采用Western印迹法检测NSCLC细胞株H1299敲除EIF5A2后,肿瘤相关蛋白和E-cadherin的表达情况。结果 EIF5A2的表达在NSCLS细胞株H1299中上调。而在体外实验中,EIF5A2的沉默可以抑制肿瘤细胞生长并诱导凋亡,降低细胞的迁移和侵袭能力,上调c-Myc、Bcl-2、Rac1表达,下调E-cadherin的表达。结论 EIF5A2可以促进NSCLC细胞株H1299的增殖和转移,可能成为NSCLS药物作用新靶点。