观赏鱼中真鲷虹彩病毒检测方法比较研究

为了解不同方法对观赏鱼中真鲷虹彩病毒(RSIVD)感染诊断的效果,探索有效的真鲷虹彩病毒检测方法,保证检测结果准确,提高实验室检测能力。本文以观赏鱼为材料,通过扩增曲线和Ct值,对SYBR Green法和荧光探针法进行比较分析;进一步对PCR产物进行毛细管电泳分析和构建发育树。结果表明,SYBR Green法和荧光探针法的扩增曲线均与标准对照曲线重合,Ct值也在阳性判定结果范围内;NCBI数据库blast比对,得到与标准对照品相似的片段。四种方法均能准确检测出观赏鱼中真鲷虹彩病毒病,为观赏鱼中真鲷虹彩病毒检测方法的选择应用提供了参考。

石油污染对真鲷幼体中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶的毒理效应

研究了在实验生态条件下，不同浓度可溶性０＃柴油的暴露对真鲷幼鱼内脏组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）和过氧化氢酶（Ｃａｔ）活性的影响．实验结果表明：ＳＯＤ酶活性对于油污染胁迫呈现出明显的剂量－诱导效应关系．在同一剂量溶度作用下，延长暴油时间，能诱导鱼体内ＳＯＤ酶活性，抑制Ｃａｔ酶活性．当污染胁迫解除后。

真鲷自然群体和人工繁殖群体的遗传多样性

采用RAPD技术对真鲷野生群体及人工繁殖群体各 2 3个个体进行了DNA多态性检测。实验选取OPK组 16个 10bp随机引物用于两群体的遗传多样性分析。在野生群体和人工繁殖群体中分别获得 131和 12 3条扩增片段 ,两群体的多态片段比例分别为 6 2 .6 0 %和 54.4 7% ,平均杂合度分别为 0 .4 786和 0 .36 33,可见真鲷野生群体及人工繁殖群体的遗传多样性较为丰富 ,在选择育种和遗传改良方面具有较大的潜力。人工繁殖群体的多态片段比例和平均杂合度都低于野生群体 ,意味着在生产过程中要采取行之有效的管理保护措施以避免或减少遗传多样性水平的降低 ,确保真鲷增养殖业的可持续发展。

延迟投饵对真鲷、牙鲆仔鱼早期阶段摄食、存活及生长的影响

试验结果表明：（１）２日龄真鲷、牙鲆仔鱼初次摄食，在６～７日龄和５～６日龄，不能建立外源性营养的仔鱼分别进入ＰＮＲ期，而卵黄囊均在此前１～２天已耗尽。混合营养期分别为３～４天和１～２天。（２）真鲷和牙鲆仔鱼在不同饥饿阶段初次摄食率的变化式型是：开始较低，此后逐步上升，高峰期出现在卵黄囊接近耗尽时，此后开始下降。记录到的最高初次摄食率分别为８６．７％和３５％。（３）牙鲆仔鱼体长的增长率随延迟投饵天数的增加而降低，牙鲆仔鱼的存活率与延迟投饵天数的关系也是如此。延迟２天投饵对真鲷仔鱼的存活率影响不大。

利用AFLP指纹技术研究中国沿海真鲷群体的遗传变异和趋异

用AFLP指纹技术对中国沿海真鲷群体进行遗传变异和趋异分析 ,使用了 6对引物 :E -ACC/M -CAT、E -AGG/M -CTG、E -AGG/M -CTT、E -AAC/M -CTA、E -ACA/M -CTG、E -AAC/M -CAA ,在威海、厦门和北部湾海区三个野生群体共 42个体中检出了 6 46个扩增位点 (片段大小 5 0～ 40 0bp) ,其中 70 %位点在群体内或群体间呈现多态。三个群体的多态位点比例变化在 5 8.4%～ 6 4.0 % ,遗传相似系数变化在 0 .842 5～0 .82 0 0 ,以威海群体的遗传变异量最大 ,北部湾群体的最小。三群体间遗传距离和UPGMA谱系图显示 ,厦门海区与北部湾的真鲷差异较小 ,可以认为是同一个亚种群的不同群体 ,黄海真鲷与前二个群体差异比较大 ,属于另一个不同的亚种群。

真鲷精子诱导牙鲆减数分裂雌核发育

采用真鲷精子激活牙鲆卵子,经(0±0.5)℃冷休克处理,诱导了牙鲆减数分裂雌核发育。灭活真鲷精子,紫外线照射剂量3.4mJ/cm2时孵化率最低;随着照射剂量的增加,孵化率恢复,照射剂量73mJ/cm2时,孵化率最高,呈现典型的Hertwig效应。用流式细胞仪检测倍性,未经冷休克处理的胚胎全部为单倍体,经冷休克处理的均为二倍体,表明精子灭活有效。冷休克实验结果表明,冷休克起始时间2～5min均有效,以3min为最好;冷休克持续时间30～90min均有效,以45min为最好。综合两项因素,授精3min后,休克时间持续45min组的授精率和孵化率均为最高,与其他处理组差异显著(P<0.05)。RAPD分析结果显示,异源精子的遗传信息未在雌核发育二倍体的电泳图中出现,表明其遗传信息没有传递给子代。

饥饿对真鲷生长及生化组成的影响

在 2 0℃条件下 ,对真鲷进行了不同时间的饥饿处理后再投饵的恢复生长实验。饥饿 1 5d的真鲷体重下降7.0 5 % ,鱼体水分含量略有上升 ,蛋白质含量和比能值略有下降 ,脂肪含量和灰分含量没有明显改变。这表明真鲷在饥饿过程中主要消耗蛋白质作为身体的能量来源。分别给饥饿处理 0 (对照 )、3、6、9、1 2和 1 5d的真鲷投饵 ,在饱足摄食的条件下生长 2周。各饥饿处理组的鱼体生化组成及比能值均接近 ,并恢复到对照组水平。饥饿 3、6d处理组在恢复生长中的特殊生长率、摄食率显著高于对照组 ,而食物转化率与对照组无显著差异 ;饥饿9、1 2和 1 5d处理组的特殊生长率和食物转化率均显著高于对照组 ,而摄食率与对照组无显著差异。结果表明真鲷幼鱼具有超补偿生长能力 ,短期饥饿的真鲷在恢复生长中通过显著提高摄食水平来达到补偿生长 ;

平鲷♀与真鲷♂的杂交研究

研究了不同盐度、温度、p H对平鲷 Rhabdosargus sarba(Forskal)♀和真鲷 Pagrosomus major (Temminck et Schlegel)♂精子活力的影响 ,确立了人工授精与孵化的条件参数。平鲷♀与真鲷♂杂交的受精率达 95 %以上 ,胚胎发育与其亲本的相似。经过超低温保存的真鲷精子的激活率、活力与鲜精的接近 ,其杂交的受精率也可达 95 %以上。实验获得了杂交仔鱼 ,但杂交的孵化率比对照组低。

真鲷耗氧率的初步研究

应用测定流水中溶氧量的方法 ,对真鲷耗氧率进行研究 .结果表明 :真鲷耗氧率随水温的升高而升高 ,鱼平均体重 1 2 0 .6～ 1 3 2 .4g,水温 1 9℃时 ,按鱼体重计 (下同 ) ,耗氧率为 2 .677μg/(g·min) ;2 9℃时 ,耗氧率达 5 .841 μg/(g·min) .真鲷的耗氧量随个体的增大而增大 ,耗氧率则随个体的增大而降低 .在水源 pH7.4、盐度 2 1、水温 1 9℃条件下 ,鱼平均体重 1 2 9.5 g ,耗氧率存在昼夜变化 ,1 7∶0 0耗氧率最高 ,为 (3 .877±0 .2 5 7) μg/(g·min) ,0 7∶0 0耗氧率最低 ,为 (1 .0 3 1 ± 0 .2 5 5 ) μg/(g·min) .真鲷白天的平均耗氧率为 2 .1 62 μg/(g·min) ,夜间的平均耗氧率为 2 .2 71 μg/(g·min) ,其代谢水平的昼夜变化不明显 .

真鲷消化道的组织学和形态学研究

采用扫描电镜和光镜技术对真鲷的消化道进行了组织学和形态学研究。具发达颌齿的口咽腔之后，真鲷消化道由分化明显的食道、胃、小肠和直肠构成。口咽胶粘膜表面为复层上皮，其中含有林状细胞和味营，表层细胞具徽褶（脊）；食道粘膜也衬着复层上皮，由表层具微褶（脊）的扁平细胞、中层的杯状细胞及底部的基底细胞组成，食道粘膜部分区域衬着单层柱状上皮；胃V形，粘膜表层为单层住状上皮，贲门部和盲囊部上皮下有一厚层胃腺组织；肠道短，相对长度为0．6左右，小肠上皮为具微绒毛的单层柱状上皮，直肠上皮为假复层上皮，两者上皮中均散布较多的杯状细胞。讨论了真鲷消化道组织学特征与消化、吸收的关系，认为真鲷消化道具典型动物食性消化道特征。

真鲷仔稚鱼微粒饲料中DHA与EPA最佳比例的研究

制备4种n-3HUFA含量相同 ,DHA和EPA含量比(m(DHA)∶m(EPA))分别为1.70∶1 ,2.00∶1,2.30∶1和2.60∶1的微粒饲料 ,探讨DHA与EPA的配比对真鲷 (Pagrusmajor)仔稚鱼生长、存活和体内相关成分的影响。30d的养殖试验结果表明 ,m(DHA)∶m(EPA)≥2.30∶1的2种微粒饲料与m(DHA)∶m(EPA)≤2.00∶1的2种微粒饲料相比 ,真鲷仔稚鱼的生长速度和成活率 ,前者明显优于后者。该比例即m(DHA)∶m(EPA)≥2.30∶1应是真鲷微粒饲料中DHA与EPA的最佳配比。养殖试验结束后 ,对仔稚鱼体内相关成分的分析结果表明 ,仔稚鱼体内DHA的含量随微粒饲料中DHA含量的增加而增大。

真鲷野生群体和人工繁殖群体的同工酶遗传差异

采用水平淀粉凝胶电泳技术对采集于黄海海州湾海域的真鲷野生群体和经过 2代人工繁育的养殖群体进行了同工酶遗传变异研究。分析检测了 2个群体各 50个样本肌肉和肝脏组织的 1 3种同工酶共 2 0个基因位点 ,其中MDH_a、GPI、PGM等 1 0个位点为多态位点 ,ME和EST_b为变异程度比较高的位点。野生群体和人工繁殖群体的多态位点比例分别为 45%和 2 5% (P0 .95) ;群体平均观察杂合度分别为 0 .1 41± 0 .0 4 4和 0 .0 95± 0 .0 4 3。结果表明 ,真鲷的野生群体和养殖群体拥有较高程度的遗传变异水平 ,但是养殖群体的遗传变异水平比野生群体有一定程度的降低。养殖群体遗传变异水平的降低在一定程度上是由于亲鱼数量少所致。比较了同工酶分析和RAPD分析的结果。将此两种技术相结合在鱼类群体遗传多样性分析中具有比较实际的意义。

光照对真鲷仔、稚、幼鱼摄食的影响

光照对真鲷（Pagrosomusmojor）仔、稚、幼鱼的摄食有重要影响。摄食的适宜光照度范围为100～102lx，最适光照度范围为101～102lx。103lx强光对仔鱼摄食的影响大于稚、幼鱼；100lx弱光对9d以前的仔鱼和稚、幼鱼的摄食影响较小，对9d以后的仔鱼影响较大。此结果和鱼的感觉器官发育及鱼所摄食的饵料种类有关。

真鲷精子的超低温冻存及DNA损伤的检测

因名贵经济鱼类育种或种质资源保存的需要,精子超低温冻存及冻精质量评价的研究已越来越引起研究者的重视。在海产鱼类中,已见对大黄鱼（Pseudosciaena crocea）、

中国沿海真鲷种群鉴别研究

对1990—1998年期间取样于中国沿海5个不同海区的真鲷(PagrosomusmajorTemmincketSchlegel)样品的23项形态性状进行测量,并应用差异系数、均数差异显著性、方差分析和判别函数分析等数理统计学方法对性状特征的差异进行比较,结合产卵场、分布洄游习性以及海洋环境条件进行综合分析,在此基础上对上述海区的真鲷种群分群问题进行了探讨。结果表明,中国沿海真鲷可分为4个不同地方种群,即黄渤海地方种群、东海地方种群、闽南 南海地方种群和北部湾地方种群。文中还讨论了真鲷种质资源保护问题。

真鲷脂蛋白脂肪酶基因顺式元件PPRE及在肝脏活体调控作用

从血液提取总DNA并构建基因组文库,克隆海水鱼真鲷(Pagrosomusmajor)脂蛋白脂肪酶(LPL)基因5′侧翼区序列,再通过竞争性聚合酶链式反应(PCR)方法,定量研究饲料中添加不同饱和度脂肪酸对其肝脏LPL基因mRNA表达水平的影响。结果表明,真鲷LPL基因5′侧翼区序列中存在顺式元件过氧化物酶体增殖物反应元件,其序列为TGAAGA TGACAT,与TATA(CATAA)盒序列相隔211bp;与喂饲料对照组比较,添加10%油酸可增加真鲷肝脏LPL基因表达水平,但差异并不显著(p>0.05)。用亚油酸或n 3高不饱和脂肪酸混合物取代添加油酸的一半(占饲料添加量的5%)后,导致真鲷肝脏LPL基因表达水平升高并出现显著性变化(p<0.05)。对真鲷肝脏LPL基因诱导表达随饲料中的脂肪酸不饱和度增加而增加,表明在活体条件下脂肪酸对真鲷肝脏LPL基因表达的诱导作用可能与脂肪酸的氧化代谢有关。n 3高不饱和脂肪酸通过过氧化物酶体增殖物激活受体诱导真鲷肝脏LPL基因表达,使真鲷食物脂质供应水平与其肝脏脂肪酸氧化代谢强度调控偶联起来,可能是真鲷对高脂食物(特别是富含n 3高不饱和脂肪酸食物)的一种适应。

真鲷幼体的摄食与营养

真鲷幼体摄食与营养研究结果表明：真鲷幼体的日摄食具有明显的昼夜节律性。白天的摄食强度大于夜间，早晨及傍晚分别出现日摄食的两个高峰。葡萄糖为真鲷幼体生长的重要能源物质之一，主要贮存于幼体的肌肉和肝脏中。氨基酸是幼体生长的重要物质，真鲷幼体体内必需氨基酸的可能种类有１１种。

大亚湾真鲷标志放流技术的研究

1997年在大亚湾开展了真鲷 Pagrosomus major 的标志放流研究，以探讨人工放流增殖大亚湾真鲷资源的可行性。标志放流的真鲷共2 000尾，体长为 57──71mm（平均体长为 61mm）。标志放流效果明显，共回捕标志真鲷324尾，回捕率达16．2％，初步了解了标志真鲷在大亚湾内的分布移动趋势及生长等情况。

真鲷(Pagrosomus major)苗种生产技术的开发研究

１９９１－１９９３年在中国青岛市对真鲷苗种生产技术进行了连续三年的开发研究，通过改善亲鱼培育及采卵技术、提高轮虫连续培养及稳定供应技术、提高仔鱼开鳔率、加强饵料的营养强化、设置环流及水面集污器等技术措施、改进和完善了真鲷苗种生产工艺。利用 １７５ｍ３培育水体，三年中共育出真鲷苗种 ２９１． ６万尾，各年度的苗种生产量分别为 ５１．８万尾、１１６．４万尾、１２３．４万尾；培苗成活率分别为２５．６％、３２．８％、６２．５％；平均单位水体出苗量分别为２９６０尾／ｍ３、６６５１尾／ｍ３、９８７２尾／ｍ３。在国内首次实现苗种生产三年连续成功，并连续突破百万尾大关。同时试验证明利用对虾育苗池进行真纲苗种生产是可行的。

真鲷(Pagrus major)脂蛋白脂肪酶基因表达与内脏脂肪蓄积营养调控定量研究

采用竞争性PCR方法 ,进行 4种营养状况对真鲷脂蛋白脂肪酶 (LPL)基因mRNA表达水平与内脏脂肪蓄积影响的定量研究。结果表明 ,真鲷LPL基因在肝脏存在营养诱导性表达 ,饥饿、高脂食物均是其表达诱导因子 ;在腹腔肠系膜脂肪组织存在组成性表达 ,其表达水平受摄食状态的影响 ,但饲料脂肪水平却不起作用。当真鲷喂食高脂食物时 ,诱导产生的大量肝脏LPL将为肝脏提供更多的来源于食物的游离脂肪酸 ,使肝脏有可能出现营养诱导性脂肪蓄积 ,但真鲷腹腔肠系膜脂肪组织LPL基因表达水平未出现适应性变化 ,其腹腔肠系膜脂肪组织将不可能作为营养诱导性蓄脂器官。由于上述营养状况对真鲷体重、腹脂指数、肝指数均没有产生显著性影响 ,说明真鲷具有在不同营养状况下与哺乳类相似的维持其内脏脂肪蓄积稳定的代谢机制 ,推测真鲷应存在某种在功能上与哺乳类相似的肥胖基因。