电子显微镜下观察眼镜王蛇毒对小白鼠心肝肾的影响

眼镜王蛇是当今排毒量最大,最毒的一种蛇类,是含神经毒素、血液毒素、细胞毒素,心脏毒素等多种混合毒类的毒蛇,使人致死率很高。关于眼镜王蛇毒致实质性器官组织超微变化的实验,国内至今仍未见有报道。本实验通过给小白鼠注射眼镜王蛇毒致死后,观察小白鼠实质性器官的组织微细结构的改变。

眼镜王蛇咬伤治疗方法的研究

有数量不多的研究报告描述了眼镜王蛇毒中毒致死的机理,与我们的动物实验以及临床观察所证实的一样,即中毒开始时是局部剧烈的疼痛而发展到肿胀、坏死,接着是呼吸麻痹呼吸停止到心跳停止。给予人工呼吸后还会出现DIC、休克,如果不采取有效治疗方法,最后死于多系统器官功能衰竭(MSOF)。

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的分离纯化和性质研究

目的 :广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶 A2 的分离纯化和性质研究。方法 :分离纯化采用 Sephadex G- 75 ,CM- Sepharose CL -6 B和 DEAE- Sephadex A- 5 0柱层析法 ;通过电泳 ,磷脂酶 A2 活力测定 ,氨基酸组成测定 ,N端序列分析及药理实验进行性质研究。结果 :从广西眼镜王蛇毒中分离到一种酸性的磷脂酶 A2 (命名为 APL A2 - 1) ,相对分子质量为 146 0 0 u,等电点 5 .4,酶的比活力为 10 8μmol/ m g· min- 1 ,N端序列为 NL IQFGNMIQCTVPGF。它对实验用小白鼠有致死性 (L D5 0 6 .6 m g/ kg) ,具有肌毒性 ,心脏毒性 ,抗血小板聚集活性 ,能诱导水肿形成。结论 :APL A2 - 1生化和药理性质的研究 ,为阐明蛇毒 PL A2结构和功能关系 ,及蛇伤中毒机制 ,打下了良好基础。

广西眼镜王蛇毒一种新的酸性磷脂酶A_2的基因克隆和性质

通过SephadexG 75 ,CM SepharoseCL 6B和DEAE SephadexA 5 0连续的柱层析 ,从广西眼镜王蛇 (Ophiophagushannah)蛇毒中分离到一种新的酸性磷脂酶A2 (pI 4 .0 ) ,命名为APLA2 2 .它的分子量约为 14 0 0 0 ,具有较高的磷脂酶活力 (4 2 9mol·g- 1·min- 1) .它对小鼠没有致死性 (LD50 >2 0mg·kg- 1) ,但具有抗血小板聚集功能及诱导水肿形成能力 .通过cDNA测序解决了它的完全的一级结构 .由cDNA推导的APLA2 2蛋白质全序列与福建眼镜王蛇和台湾眼镜王蛇蛇毒酸性磷脂酶A2 的同源性分别为73.9% ,64.7% ,它不存在 62～ 66位的“胰腺环” ,因而它可能是一种新的眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A2 .APLA2 2基因克隆及其生化药理性质的研究 ,为探讨蛇毒活性蛋白结构与功能关系及蛇伤中毒机理创造了良好的条件 .

眼镜王蛇泛素融合蛋白基因和核糖体蛋白L30基因的克隆及分析

从广西产眼镜王蛇(Ophiophagushannah)毒腺中抽提总RNA,经mRNA纯化后构建眼镜王蛇毒腺cDNA文库。从所构建的cDNA文库中,随机筛选200个克隆测序,得到两个在进化上高度保守的基因:泛素融合蛋白基因(GenBank登录号为AF297036)和核糖体蛋白L30基因(GenBank登录号是AF297033)。前者cDNA的开放阅读框为387bp,后者为348bp。前者编码128个氨基酸残基组成的泛素融合蛋白前体;后者编码115个氨基酸残基组成的核糖体蛋白L30前体。由cDNA序列推导出的氨基酸序列分析表明,泛素融合蛋白前体包括N-末端的泛素结构域(76个氨基酸残基)和C-末端的核糖体蛋白L40结构域(52个氨基酸残基)。该蛋白为一高碱性蛋白,C末端含有一个“锌指”模式结构。与16个物种比较的结果表明,眼镜王蛇与脊椎动物的泛素融合蛋白氨基酸序列相似度较高,具有高度的保守性。

眼镜王蛇线粒体基因组全序列分析

参照近缘物种线粒体基因序列共设计和合成了8对引物,结合Ex Taq-PCR、TA克隆和步移测序技术,文章首次获得眼镜王蛇线粒体基因组全序列(GenBank登录号:EU_921899)。该基因组全长17 267 bp,共编码13个蛋白、2个rRNA、23个tRNA——其中tRNA-Ile基因发生了复制,属于一种新的蛇类物种线粒体基因排列模式,另外还含有2个非编码的富含AT的控制区。除了8个tRNA基因和1个蛋白基因由L链编码外,其余均由H链编码,其中H链编码基因的A和T含量接近,而L链上A的含量则明显高于T。基于21种蛇合并的"12S+16S"rRNA基因序列的系统发育分析表明,眼镜王蛇属与眼镜蛇属亲缘关系较近,两者与环蛇属共同构成一个单系群。作为国内外眼镜王蛇线粒体基因组全序列的首次报道,上述结果对于蛇类物种分子系统发育和进化研究具有重要意义。

广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化及性质研究

目的:广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化和性质研究。方法:分离纯化采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析,Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose CL-6B离子交换柱层析;通过电泳,磷脂酶A2(PLA2)酶活力测定,氨基酸组成分析,N端序列测定及药理实验进行性质研究。结果:从广西眼镜王蛇毒中分离到一种电泳纯的碱性蛋白(命名为CM-IV),相对分子质量约为14000,等电点约为8.65;PLA2的比活力为23μmol·mg-1/min。氨基酸组成分析表明,其分子中Cys的含量占6.85%;利用蛋白质直接测序N端序列为TKCYVTPDVK。药理实验表明它对实验用小白鼠有致死性(LD50约为0.2mg/kg),并具有心脏毒性,但无血小板抑制活性。根据Genebank Blast分析软件,它的N端序列与神经毒素具有高度的同源性。结论:这种碱性蛋白可能为神经毒素,但却拥有PLA2的活力。

广西产眼镜王蛇毒α-神经毒素基因的分子克隆及序列分析

为获得眼镜王蛇 (Ophiophagus hannah ,简称 Oh)蛇毒 α-神经毒素 (α- NT)的基因序列 ,依据眼镜蛇科不同毒蛇种类来源的 α- NT基因有较高的同源性 ,设计 1对上下游引物 ,为克服引物带来模糊扩增 ,在蛋白编码部分再设计 1对上下游特异引物 ,用 Nacleospin RNA Kit法从 3条活眼镜王蛇毒腺中提取 m RNA,以 3′端引物合成的 c DNA作为模板进行 PCR扩增反应 ,测定产物的核苷酸序列 ,得到全长 4 74 bp的眼镜王蛇 c DNA基因核苷酸序列。该核苷酸序列的信号肽与眼镜蛇树属 Pseudonnaja textilis(Pt)、海蛇 L aticauda semif asciata (L s) 10 0 %同源 ,与眼镜蛇南洋亚种 N aja sputatrix (Ns)、银环蛇 (Bungarusmulticinctus) (Bm) 96 .8%同源 ;蛋白密码部分有83.3%与 Ns、79.2 %与 Pt、76 .4 %与 L s、74 .1%与 Bm同源。信号肽后紧接着的 72个氨基酸有 90 .3%与已发现的眼镜王蛇毒长链α- NT Toxin a同源 ,大约有 73.6 %与 Toxin b、6 9.7%与 Oh- 4、6 6 .7%与 Oh- 5、5 6 .9%与 Oh-6 A和 6 B同源 ,并与 α-银环蛇毒素 5 4 .2 %同源。说明新发现的眼镜王蛇 c DNA是一条长链 α- NT基因。

广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的肌毒性研究

目的 研究广西眼镜王蛇毒一种酸性磷脂酶 A2 (命名为 APLA2 -1 )的肌毒性。 方法 大鼠注射 2 .6 mg/ kg的 APLA2 -1后 ,分别于 6 h、2 4 h取心肌和骨骼肌通过光镜和电镜观察它们的病理改变 ;或于0 h、 3h、 6 h、 1 2 h、 2 4 h取尾静脉血测定血清肌酶的动态变化。 结果 光镜检查显示 ,大鼠注射 APLA2 -1 2 4 h后 ,骨骼肌发生变性和轻度坏死 ,心肌无明显改变 ;电镜结果显示 ,骨骼肌在 6 h、 2 4 h,心肌在 2 4 h,细胞超微结构均受到不同程度的破坏 ;血清肌酶检测显示 ,注射 APLA2 -1后 ,肌酶升高显著 ,1 2 h达到最大值。 结论 广西眼镜王蛇毒酸性磷脂酶 A2 具有肌毒性 ,骨骼肌比心肌对其更为敏感 ;与别的肌毒性PLA2 相比 。

成功救治1例眼镜王蛇咬伤致严重呼吸衰竭病人的护理体会

眼镜王蛇中毒主要是神经毒为主的混合毒,眼镜王蛇咬伤后,病情危重,发展迅速,在较短的时间内即可致严重呼吸衰竭并危及生命,眼镜王蛇咬伤病死率高达90%以上。但如果抢救和治疗及时,护理得当,会大大提高抢救成功率,降低病死率,因此,及时、正确、有效的救治和护理是抢救成功与否的关键。

救治眼镜王蛇咬伤的临床报告

目的 探讨眼镜王蛇咬伤中毒发病情况及合理有效的治疗方法。方法 收集2008年6月~2015年6月救治的16例眼镜王蛇咬伤中毒患者的临床资料进行回顾性总结分析。抢救方法为立即伤口去毒灭毒处理,人工辅助呼吸,主要药物有抗蛇毒血清,山茛菪碱＋地塞米松防治MODS,氨茶碱,新斯的明或加兰他敏。结果 16例患者治愈出院,无后遗症。结论 眼镜王蛇咬伤患者较早出现中毒症状,经采取设定的方案进行治疗是有效的。

眼镜王蛇毒中毒发病机理的研究报告

采用CM-Sepharose CL-6B柱层■可从广西产眼镜王蛇毒中得到28个蛋白峰,研究表明眼镜王蛇毒是一种含有多种毒性组份的毒性蛋白,可引起动物的局部损伤及心、肝、肺、肾、脑、肋肌和神经、血液等多个器官系统的病理学改变。眼镜王蛇毒中毒死亡的主要原因为神经毒素致呼吸麻痹引起全身重要生命器官缺氧加上急性微循环衰竭的综合作用所致,并提出有关抢救新方法。

眼镜王蛇蛇毒的柱层析分离及神经毒组份的研究

用羧甲基葡聚糖C—25和氯化钠直线梯度洗脱方法,对我国广西产眼镜王蛇蛇毒进行了柱层析分离,获得了17个蛋白峰,测定了17个蛋白峰的毒性和生理活性。结果表明有7个毒性峰,其中6个峰具有阻断神经—肌肉接头传递的作用,另一个峰毒性很小,在相同剂量下也不表现上述作用。

眼镜王蛇伤病人加用抗毒血清封闭、湿敷疗效观察

将44例眼镜王蛇咬伤病人分为观察组和对照组各22例。对照组行常规清创、局部封闭及静脉滴注抗蛇毒血清治疗;观察组在上述基础上加用抗蛇毒血清局部封闭及湿敷。比较两组病人局部创面反应和全身不良反应发生情况。结果观察组病人创面愈合较快,血清肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶值治疗后明显下降,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.01)。提示用抗毒血清局部封闭、湿敷疗法能明显减少蛇伤后引起的肿胀、坏死反应,减轻局部坏死程度,能不同程度降低血清肌酸磷酸激酶、乳酸脱氢酶值,缩短创面愈合时间。

抢救眼镜王蛇(Ophiophagus hannah)咬伤中毒12例临床报告

本文报告1986年至1992年作者主持抢救眼镜王蛇咬伤中毒12例的临床研究结果,其中男11例,女1例,年龄最大69岁,最小11岁,农民9例.临床主要局部表现为剧痛,肿胀,部分病例有轻度坏死,所有病人均有吞咽困难、眼睑下垂、呼吸困难等神经毒表现。引起自主呼吸停止8例(67%)。心跳停止1例,经抢救死亡1例,死亡率8.33%。抢救存活11例,救活率91.67%。

眼镜王蛇神经毒素CM—11^1H谱的计算机辅助谱峰自动归属

２ＤＮＭＲ谱的自动归属是核磁共振发展的一个方向，ＣＡＰＲＩ即是蛋白质１Ｈ谱的计算机辅助谱峰归属的一种程序。作者将其应用于眼镜王蛇神经毒素ＣＭ－１１１Ｈ谱的归属，讨论了ＣＡＰＲＩ的功能和特点以及运用在ＣＭ－１１后得到的分析结果。

眼镜王蛇三指毒素新cDNA序列的克隆及结构分析

目的:获得眼镜王蛇中多种三指毒素的新的cDNA序列,分析其结构特征,为王蛇三指毒素基因组特征的研究及重组药物的开发奠定基础。方法:采用类似蛇种的毒素信号肽编码序列及简并引物获得部分cDNA序列,再通过3’RACE法获得多种编码成熟三指毒素的完整新cDNA序列。通过BLAST检索,利用功能软件构建系统发生进化树进行分析。结果:获得了眼镜王蛇6类三指毒素共19条新基因的cDNA序列,GenBank的接收号为DQ273567～DQ273585。这些cDNA长度都在480bp左右,彼此之间序列相似度均在70%以上,且每类毒素的cDNA都呈现高度的序列多态性。结论:通过合理的引物设计及3’RACE法成功获得了眼镜王蛇中多种三指毒素的新的编码序列。

广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶A_2的分离纯化及抗血小板聚集作用

目的 研究眼镜王蛇毒中酸性磷脂酶 A2 对血小板的作用。方法 采用 CM-Sephadex C-2 5,Sephadex G-75,DEAE-Sephadex A-2 5,Sephadex G-75多步柱层析法 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳 ;酸性磷脂酶 A2 酶活性测定 ;血小板聚集实验。结果 从粗毒中分离纯化出一酸性磷脂酶 A2 单体 ,分子量为 1 4KD;等电点 p I3 .8;PLA2 比活力 2 0 μmol· mg- 1 ·min- 1 ;小鼠腹腔注射 LD5 0 为 ( 7.53± 1 .2 9) mg.kg- 1 ;对 ADP、花生四稀酸、凝血酶诱导的兔血小板聚集均有抑制作用 ,具有剂量依赖关系。结论 广东眼镜王蛇毒酸性磷脂酶单体具有抗血小板聚集的作用。

广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒冻干粉的鉴别及质量控制的研究 V．广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸分析

本文采用日立８３５－５０型氨基酸自动分析仪测定了广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸成分，结果表明两种蛇毒的氨基酸组成基本相同，但多种氨基酸的含量存在明显差异，为蛇毒鉴别和质控提供实验依据。

一起王锦蛇、眼镜王蛇疑似嗜水气单胞菌病的报道

养蛇是一门新兴产业，也是一项特种动物养殖业。养蛇场在华南地区（广东等地）有不少，在华中地区特别是湖北不多，荆州目前为止仅有一家。王锦蛇，别名大王蛇、菜花蛇，为无毒蛇，体型大，易于饲养，是野生蛇类中种群数量较多的品种之一，因成年蛇头部有“王”字样的黑斑纹，故称“王蛇”。王锦蛇长势快（仅次于蟒蛇）、肉多（可长到5～10kg）、耐寒能力强、季节差价大，成为目前开发利用的主要对象，在我国一般作肉用蛇。在我国南方，王锦蛇幼蛇阶段易患肺炎、霉斑病、口腔炎等。眼镜王蛇是剧毒蛇，饲养的目的皆为取毒药用。笔者在临床上见过一起王锦蛇、眼镜王蛇疑似嗜水气单胞菌病，现报道如下。