米非司酮混悬液灌胃制备小鼠不完全型胚胎着床障碍模型的适宜剂量选择

目的选择米非司酮混悬液制备小鼠不完全型胚胎着床障碍(EID)模型的适宜剂量。方法将32只昆明雌性小鼠随机分为4组,每组8只,低剂量组、中剂量组、高剂量组于妊娠第4天分别灌胃给予0.12、0.14、0.16 mL米非司酮混悬液(1 mg/mL)制备不完全型EID模型,对照组给予适量生理盐水,于妊娠第8天处死小鼠,采用ELLSA法检测血清雌二醇(E_(2))、孕酮(P),肉眼观察子宫形态,计算妊娠率及胚胎着床数,HE染色观察子宫内膜组织,免疫组化法检测子宫内膜组织孕激素受体(PR)。结果各组血清E_(2)、P水平比较,P均>0.05。对照组全部妊娠,双侧子宫均匀增大,子宫血供丰富,胚胎着床点分布紧密且无出血点,胚胎发育良好;低剂量组全部妊娠,双侧子宫外观形态及胚胎发育无异常,子宫血供较对照组差;中剂量组全部妊娠,两侧子宫胚胎着床点分布不规则,部分胚胎着床处有积血,胚胎体积小,未着床处的子宫较细,颜色苍白,血供不佳;高剂量组仅有1只妊娠,双侧子宫形态规则,颜色苍白,血供较差,双侧子宫弹性差。高剂量组妊娠率低于其他3组,P均<0.05。与低剂量组、对照组比较,中剂量组、高剂量组胚胎着床数少(P均<0.05);与中剂量组,高剂量组胚胎着床数少(P<0.05)。对照组子宫内膜间质广泛蜕膜化反应,腺体数量多,腺腔面积大,腺腔内含有分泌物,小血管增生;低剂量组子宫内膜间质蜕膜明显,腺体数量多;中剂量组子宫内膜有蜕膜化改变,间质较致密,腺体较少而小,血管扩张不明显;高剂量组子宫内膜间质区蜕膜化不完全,腺体小而少,分泌不足,内膜间质致密,仍呈增生期样改变,发育明显滞后。与对照组和低剂量组比较,中剂量组、高剂量组PR AOD减少(P均<0.05);与中剂量组比较,高剂量组PR AOD减少(P<0.05)。结论米非司酮制备小鼠不完全型EID模型稳定可靠,适宜剂量为0.16 mL/只(1 mg/mL)。

HCG动态监测诊断冻胚移植胚胎延迟着床1例

人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,HCG)由胚胎滋养层合胞细胞分泌,是胚胎或胎儿释放到母亲体内的第一个有效信号,并贯穿整个妊娠过程^([1])。研究表明当β-HCG水平“翻倍”时,80.7%的周期发生活产;当β-HCG水平在卵母细胞回收15天也就是胚胎移植后12天。

反复着床失败患者的临床病例对照研究

目的回顾分析在行体外授精胚胎移植(IVF-ET)助孕过程中反复着床失败(RIF)患者的临床资料,旨在发现反复着床失败的高危因素,以期早期识别并降低反复着床失败的发生率。方法选取2015年-2016年诊断为反复着床失败患者196例作为RIF组,并选取与RIF组患者同期行第一次IVF助孕且成功获得妊娠的患者392例作为正常对照组。分析两组患者的基本资料、不孕病因及第一次IVF周期的相关资料。此外,根据患者的年龄将以上统计资料进行年龄的分层分析。结果患者丈夫年龄和子宫内膜异位症是反复着床失败的危险因素,而总2PN率、优质胚胎率及A型内膜则是反复着床失败的保护因素。年龄分层分析显示女方年龄≥35岁组中丈夫年龄、ICSI-2PN率在RIF组和对照组间有统计学差异。30≤年龄<35岁组中无排卵性不孕、男方因素、优质胚胎数、总2PN率、IVF-2PN率、ICSI-2PN率及优质胚胎率在两组间有统计学差异。而年龄<30岁组中雄激素水平、内膜厚度、获卵总数及2PN数在两组间有统计学差异。结论不孕患者的丈夫年龄越大发生反复着床失败的风险越高;合并子宫内膜异位症的不孕患者更容易发生反复着床失败,而受精率高、胚胎质量好及HCG日为A型内膜形态的的患者行IVF助孕的成功率高。此外,应根据患者的年龄进行分层化管理。

脂质代谢对子宫内膜容受性及胚胎着床影响的研究进展

脂类包括脂肪(三酰甘油)及类脂(磷脂、固醇类),除为机体提供能量外,脂质代谢也在整个生殖过程中发挥重要作用,尤其是早期妊娠的建立和维持(包括调节早期胚胎的发育和子宫的容受性,以及促进胚胎的着床)阶段。鉴于脂质种类繁多,本文着重从多不饱和脂肪酸、内源性大麻素、前列腺素、溶血磷脂酸、鞘磷脂、类固醇激素等被广泛研究的脂质介质,系统阐述脂肪酸、磷脂、胆固醇代谢对子宫内膜容受性形成及胚胎着床的调控作用,以及可能的潜在机制,以期为预测和改善自然妊娠和(或)辅助生殖助孕的结局提供新的切入点及可行的干预途径。

调经促孕方对胚胎着床障碍性不孕症小鼠子宫内膜容受性及AREG/EGFR/HIF-1α信号通路的影响

目的观察调经促孕方对胚胎着床障碍(EID)性不孕症小鼠子宫内膜容受性及AREG/EGFR/HIF-1α信号通路的影响,探讨其改善子宫内膜容受性的可能机制。方法80只昆明小鼠于妊娠第1日随机分为正常组、模型组、黄体酮组和调经促孕方组,每组20只,黄体酮组和调经促孕方组分别予相应药物灌胃。妊娠第4日,除正常组外,其余各组小鼠皮下注射米非司酮溶液(2.3 mg/kg)建立EID性不孕症模型,正常组皮下注射等体积丙二醇。妊娠第5日,每组随机取10只小鼠,剖腹取子宫,HE染色、Masson染色观察子宫内膜组织形态,扫描电镜观察子宫内膜胞饮突形态及数量,ELISA检测子宫内膜组织双调蛋白(AREG)含量,Western blot和免疫荧光检测子宫内膜组织表皮生长因子受体(EGFR)、p-EGFR、缺氧诱导因子(HIF)-1α表达。其余小鼠灌胃至妊娠第8日取材,记录平均胚胎着床点数。结果与正常组比较,模型组小鼠平均胚胎着床点数显著减少(P<0.01),子宫内膜腺体发育不良,胶原纤维增加,血管及胞饮突数量减少,子宫内膜组织AREG含量显著降低(P<0.01),p-EGFR、HIF-1α蛋白表达显著降低(P<0.05);与模型组比较,调经促孕方组小鼠平均胚胎着床点数显著增加(P<0.05),子宫内膜胶原纤维增生减少,间质内腺体、血管及胞饮突数量均明显增加,胞饮突发育饱满、均匀,子宫内膜组织AREG含量显著升高(P<0.01),p-EGFR、HIF-1α蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01),免疫荧光检测结果与Western blot一致。结论调经促孕方能促进子宫内膜腺体和血管发育,增加胞饮突数量,改善EID性不孕症小鼠子宫内膜容受性,利于胚胎黏附及植入,从而提高妊娠率,其机制可能与激活AREG/EGFR/HIF-1α信号通路,改善子宫内膜血流灌注,恢复子宫内膜相对缺氧环境有关。

昼夜节律紊乱与胚胎着床失败关系的研究进展

胚胎着床失败可能与昼夜节律紊乱有关。人体的生理功能和代谢活动受昼夜节律的调控,昼夜节律紊乱可能对生殖系统功能产生负面影响。昼夜节律紊乱会导致激素分泌异常、免疫功能紊乱及细胞周期调控失衡,这些因素可能影响子宫内膜的状态和胚胎着床过程。因此,维持良好的昼夜节律对于胚胎着床的成功至关重要。该综述旨在探讨昼夜节律与胚胎着床失败的关系,以此为基础进行调护,为隐性流产患者提供更有效的治疗策略,从而提高胚胎植入成功的机会。

湖羊围着床期血浆外泌体miRNA差异分析

本研究从围胚胎着床期的湖羊血浆中提取外泌体并进行miRNA测序,发现在着床前、着床期、着床后的湖羊血浆外泌体中存在显著差异表达的miRNA。着床期与着床前有36个差异表达miRNA,其中17个上调,19个下调;着床后与着床期有23个差异表达miRNA,其中7个上调,16个下调。通过BLAST软件比对GO、KEGG等数据库信息,对差异表达的miRNA靶基因进行注释,分析差异表达miRNA靶基因及其相关生物过程,发现富集的生物过程与胚胎着床的过程相关。其中miR-451的表达量较高且在胚胎着床期、着床后与着床前相比差异显著,可能在胚胎着床过程中发挥作用。通过荧光定量PCR检测证明miR-451表达量变化趋势与测序结果一致。本研究提示血浆外泌体miRNA可能参与了湖羊胚胎着床过程的调控。本研究为绵羊胚胎着床调控过程提供了新见解,可能有助于设计绵羊妊娠识别手段,并提高绵羊繁殖效率。

小鼠子宫内膜中AMPK蛋白及mRNA表达对胚胎着床调控作用的实验研究

目的探究妊娠小鼠子宫内膜中AMP依赖的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)表达对胚胎着床调控作用的实验研究。方法使用ICR小鼠建立1~8天正常妊娠小鼠、1~5天假妊娠小鼠模型、阴性对照(NC)组和AMPK抑制剂(Dorsomorphin)组。免疫组织化学染色检测小鼠子宫内膜中AMPK蛋白的表达位置,逆转录实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测子宫内膜中AMPK及子宫着床处相关指标黏蛋白1(Muc1)、同源框蛋白A10(HoxA10)和心脏神经嵴衍生物表达蛋白2(Hand2)的mRNA水平,Western blotting检测子宫内膜中AMPK蛋白水平,统计妊娠小鼠胚泡数量。结果妊娠第1~5天,AMPK蛋白及mRNA表达逐渐增加(F=683.50,678.20,均P<0.05),且主要表达于子宫内膜管腔细胞和腺上皮细胞。与妊娠第5天相比,妊娠第6天小鼠子宫AMPK蛋白及mRNA表达减少(t=25.98,68.41,均P<0.05),且主要表达于初级蜕膜化区(PDZ)和次级蜕膜化区(SDZ),妊娠第6~8天,AMPK蛋白及mRNA在子宫内膜中表达逐渐增加(t=86.00,54.05;29.96,127.60,均P<0.05)。与假妊娠第1天比较,假妊娠第2~5天,AMPK mRNA及蛋白的表达减少(t=38.97,30.05,33.00,13.98;22.71,26.90,53.81,65.00,均P<0.05),且主要表达于腺体和管腔上皮细胞。与NC组小鼠(18.20±3.19)相比,Dorsomorphin组小鼠(9.40±2.41)平均胚泡数量减少(t=8.73,P<0.05),子宫着床处Muc1 mRNA(5.97±0.32 vs 1.10±0.15)表达增加,HoxA10(0.20±0.10vs 1.03±0.06)及Hand2(0.23±0.15 vs 0.97±0.12)mRNA表达减少(t=32.15,3.46,2.65,均P<0.05)。结论小鼠子宫内膜组织中AMPK在胚胎着床中发挥重要作用,抑制该蛋白表达将不利于胚胎着床。

瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的 探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果 瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论 瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。

外源性LIF和IL-1对围着床期小鼠子宫内膜整合素β_3亚基表达的调节

Objective:To study regulation of external leukemia inhibitory factor(LIF) and interlukin 1(IL 1) on the expression of integrin β 3 in the mouse endometrium during peri implantation period and explore the mechanism which LIF participate in embryonic implantation.Methods:The mice were injected peritoneally with LIF,IL 1 or IL 1ra at different administration on day 2～4 of pregnancy.The level of integrin β 3 protein was measured with Westernblot method and mRNA measured with RT PCR.Results:The levels of integrin β 3 protein and mRNA were increased by LIF and IL 1(P<0.05) and which relied on administration.The level of integrin β 3 mRNA was decreased by IL 1ra (P<0.05).Conclusion:LIF and IL 1 of cytokines can improve the expression of integrin β 3 in the peri implantation endometrium of mouse.Both of them may take part in implantation by regulating cell adhesion molecules.

综合护理干预对反复胚胎着床失败患者的效果评价

目的观察综合护理干预对反复胚胎着床失败(repeated implantation failure,RIF)患者生活质量、用药依从性、心理情绪、服务满意度的影响。方法随机选取2020年2月—2023年1月淄博市妇幼保健院收治的100例胚胎移植失败次数≥2次未妊娠的患者作为研究对象,根据不同护理方法分为对照组和观察组,各50例。对照组采用常规护理干预,观察组采用综合护理干预,对比两组患者护理前后心理情绪评分、生活质量评分、用药依从性和护理满意情况。结果护理后,观察组世界卫生组织生存质量测定量表(World Health Or⁃ganization Quality of Life-100,WHOQOL-100)评分高于对照组,汉密尔顿焦虑量表(Hamilton Anxiety Scale,HAMA)和汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)评分均低于对照组,差异有统计学意义(P均<0.05)。观察组护理满意率[94.00%(47/50)]高于对照组[72.00%(36/50)],差异有统计学意义(χ^(2)=8.576,P<0.05)。结论针对反复胚胎着床失败的患者采用综合护理干预措施能够改善患者的生活质量、用药依从性以及焦虑抑郁情绪,提高护理满意率。

盐酸西部曲明对小鼠生殖力和着床前后胚胎发育的影响

目的 评价减肥新药盐酸西部曲明对♀亲代动物的生殖毒性和受精卵着床前的发育毒性。方法 持续饮水内给药 ,♂小鼠交配前给药 8周并持续给药至交配成功处死之前 ;♀小鼠交配前给药 2周并持续给药至妊娠d6。设 32、2 83、0 .2 5mg·kg-1·d-13个剂量组及 1个阴性对照组 ,观察亲代动物的一般状况、交配、受孕和妊娠 ,胎仔的着床、存活、体长、体重、外观、内脏和骨骼畸形等检测指标。结果 除相当于人预期摄入量 12 8倍的高剂量引起了亲代雄鼠体重减轻外 ,亲代和子代小鼠均未见其他毒性反应。结论 未见盐酸西部曲明对亲代有生殖毒性和对子代有发育毒性。

胚泡着床不全的实验动物模型

目的 建立胚泡着床不全的实验动物模型及观测指标。方法 妊娠动物皮下注射米非司酮或利洛司酮 ,皮下注射吲哚美辛 (消炎痛 ) ,皮下注射催产素 ,给避孕药酒灌胃 ,宫腔注射纤连蛋白抗体或层粘蛋白抗体 ,皮下注射卵泡刺激素抗血清等。结果 上述方法处理后着床动物明显减少 ,着床位点数减少 ,着床率降低 ,卵巢组织上黄体数目减少 ,血清孕激素水平下降 ,绒毛膜促性腺激素水平降低。

调经助孕胶囊对着床障碍小鼠胚泡着床位点数和雌、孕激素及其受体的影响

目的:研究调经助孕胶囊对着床障碍小鼠胚泡着床位点数和雌、孕激素及其受体(ER、PR)的影响。方法:将48只妊娠小鼠随机分为正常对照组(生理盐水)、病理模型组(生理盐水)与调经助孕胶囊组(24 g/kg),每组16只,ig给药,每天1次,连续3 d。第4天上午9:00,除正常对照组小鼠外,剩余小鼠均sc米非司酮溶液0.1 ml复制着床障碍模型。第5天处死小鼠,观察各组小鼠胚泡着床位点数;放射免疫法测定血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平;免疫组化法测定子宫内膜ER、PR蛋白表达水平。结果:妊娠第5天,病理模型组小鼠胚泡着床位点数显著少于正常对照组,血清E_2、P水平与子宫内膜ER、PR蛋白表达水平均显著低于正常对照组(P<0.05);调经助孕胶囊组小鼠胚泡着床位点数显著多于病理模型组,血清E_2、P水平与子宫内膜ER、PR水平均显著高于病理模型组(P<0.05)。结论:调经助孕胶囊可显著提高小鼠血清E_2、P水平和ER、PR水平,增加胚泡着床位点数。

一氧化氮对小鼠胚胎着床的作用

为探讨一氧化氮 (NO)在胚胎着床中可能发挥的作用及其机制 ,进行小鼠胚胎着床实验 ,分 3个实验进行。实验 1及实验 2 ,于小鼠妊娠第 3d和第 1～ 6 d分别腹腔内注射 N-硝基 - L-精氨酸甲酯〔L- NAME,一氧化氮合酶(NOS)的非特异性竞争抑制剂〕 0 .5～ 5 mg和 3m g,观察其对胚胎着床的影响。实验 3,给予 L- NAME+L-精氨酸(NO的前体 ) ,观察 L-精氨酸对 L- NAME作用的影响 ,并评价胚胎发育情况。上述 3个实验均取子宫内膜行组织学检查。结果发现 :与对照组相比 ,妊娠第 3d腹腔注射 L- NAME1～ 5 m g可减少胚胎的着床位点数 (P<0 .0 5 ) ,腹腔注射 4、 5 mg的 L- NAME可完全抑制小鼠胚胎着床的发生。围着床期 (妊娠 3～ 5 d)给予 L- NAME均可减少胚胎着床位点数。此时 ,子宫内膜血管通透性的改变被抑制 ,缺少蜕膜样变 ,同时胚胎发育阻滞。 L- NAME的这种抑制作用可被同时给予的 L-精氨酸抵消。提示 NO通过增加子宫内膜的血管通透性。

健胎液对小鼠着床期子宫内膜孕激素受体及mRNA的影响

目的:研究健胎液对胚泡着床障碍小鼠着床期子宫孕激素受体(PR)的影响。方法:将受孕小鼠随机分为正常组、模型组和中药组,采用米非司酮诱导小鼠胚泡着床障碍,予健胎液进行干预,于妊娠第8天处死小鼠,观察子宫内膜形态学变化,采用免疫组化技术检测子宫 PR 的表达,Western 印迹和 RT-PCR 技术检测子宫 PR 及 PR mRNA 表达。结果:模型组子宫内膜发育不良,中药组子宫内膜的发育与正常组相似;中药组子宫内膜腺体、间质 PR 表达范围和强度均较模型组显著增高(P<0.05),与正常组无显著性差异(P>0.05);中药组 PR 蛋白及基因表达均较模型组显著提高(P<0.05),与正常组无显著性差异(P>0.05)。结论:健胎液通过调节胚泡着床障碍小鼠子宫 PR 及 mRNA 的表达,促进子宫内膜发育,改善胚泡着床。

小鼠胚泡着床相关基因的差减筛选

目的:筛选新的小鼠胚泡着床相关基因。方法:对孕4.5 d小鼠着床和非着床位点的子宫内膜组织进行PCR差减。获得了2个新的在小鼠胚泡着床位点高表达的EST(EST8和EST81)。结果:EST8在孕4.5 d小鼠着床位点、肝脏中表达较高,在非着床位点和卵巢中亦有微量表达。EST81主要在孕4.5 d小鼠子宫着床组织和卵巢中表达,其它各种组织中也有微量表达。用PCR方法获得了相应的全长。cDNA,长度分别为1665bp和1364bp。结论:用差减筛选获得的两种cDNA是孕小鼠着床相关基因,其功能有待进一步研究。

哺乳动物的延迟着床及其分子调控

延迟着床是指胚胎在发育到胚泡阶段时暂时进入休眠状态,并不立即着床。在这个时期,胚泡或者停止细胞分化与增长,以使其大小及内部细胞数量保持稳定,或者经历一个少量细胞发生分化的缓慢增长阶段。共有7个目中的近100种哺乳动物有延迟着床现象。延迟着床受光周期、哺乳刺激和营养等各方面因素的影响,同时还受激素和多种生长因子等调节。虽然各种动物中延迟着床的机制各不相同,但延迟着床均可有效地延长妊娠期,使该物种在一年中最适宜的时期进行交配和产仔。利用在小鼠或大鼠中建立的延迟着床模型,可模拟正常的胚胎着床过程,有利于研究胚胎着床过程中的分子调控机制。