纳米石杉碱甲脂质体的热稳定性及分配系数

采用薄膜旋蒸-超声法制备了纳米石杉碱甲脂质体(Hup-A-Lip),并对其微观形貌、包封率、相变温度、分配系数及生物利用度等进行了研究.结果表明:Hup-A-Lip呈粒径约40 nm的球形结构;包封率为(82.74±2.68)%;相变温度为67℃,在25~60℃具有较好的热力学稳定性;Hup-A-Lip中药物与脂质体膜之间的作用力以静电相互作用和氢键为主;石杉碱甲(Hup-A)经脂质体包封后,明显提高了游离药物的生物利用度.

基于网络药理学和体外实验探究石杉碱甲对急性肺损伤中肺泡上皮细胞的作用及保护机制

基于网络药理学和体外实验,探讨石杉碱甲(huperzine A,Hup A)对急性肺损伤(acute lung injury,ALI)中肺泡上皮细胞的作用及机制。首先从公共数据库查找Hup A、ALI的相关靶点,获取二者交集即为Hup A保护ALI的潜在靶点并进行富集分析;通过构建蛋白互作网络及“成分-靶点-通路”网络进而筛选Hup A保护ALI的核心靶点并进行分子对接验证;进一步采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激小鼠肺泡上皮细胞(MLE-12)构建细胞模型加以Hup A预处理,分别检测细胞活性、白介素-6(interleukin-6,IL-6)水平、超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)水平、丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平验证Hup A的保护作用,最后蛋白免疫印迹实验验证关键靶点的蛋白水平变化。网络药理学分析结果显示Hup A共有144个潜在治疗靶点,Hup A参与调节蛋白激酶活性、氧化应激、炎症反应等生物学过程和磷脂酰肌醇-3-激酶-丝苏氨酸蛋白激酶(phosphatidyl-inositol 3-kinase-serine-threonine kinase,PI3K-Akt)通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)通路等信号通路;分子对接结果显示Hup A与Akt1、Akt2和Mapk1(又称细胞外蛋白调节激酶(extracellular regulated protein kinases,Erk))均具有较好的结合活性;细胞实验显示Hup A可以改善LPS诱导的细胞活性下降(P<0.05),降低IL-6、MDA、p-Erk1/2/Erk1/2水平(P<0.05),提高SOD与p-Akt1/Akt1水平(P<0.05)。综上,Hup A可能通过调控Akt1和Mapk1保护肺泡上皮细胞进而缓解LPS诱导的ALI。

高效毛细管电泳法测定石杉碱甲片中石杉碱甲含量

提出了毛细管电泳法分离测定石杉碱甲片中石杉碱甲含量的方法。以pH为4.6的乙酸盐溶液为电解质溶液,运行电压13kV,于波长310nm处进行紫外检测。石杉碱甲的质量浓度在5.0～60mg.L-1范围内与峰面积呈线性关系。采用该方法对石杉碱甲片样品中石杉碱甲的浓度进行了测定,所得加标回收率在97.8%～98.7%之间,测定值的相对标准偏差(n=5)在0.53%～0.85%之间。

老年痴呆症药物石杉碱甲类似物研究Ⅳ（±）-8，15-二氢-去-11，15-二甲基-8-羟基石杉碱甲的合成

石杉碱甲（１）是从我国草药千层塔中分到的一个可逆性的强效乙酰胆碱酯酶抑制剂，将成为新一代治疗早老性和老年痴呆症的药物．基于乙酰胆碱酯酶的Ｘ－衍射晶体结构及石杉碱甲抑制乙酰胆碱酯酶的作用机制研究结果，设计合成了（±）－８，１５－二氢－去－１１，１５－二甲基－８－羟基石杉碱甲（９ａ，９ｂ）．

HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量

目的 考察蛇足石杉不同产地、不同部位中石杉碱甲 (Hup A)和总碱含量 ;比较不同提取方法对石杉碱甲含量的影响。方法 采用 RP- HPL C法测定 Hup A的含量。结果 Hup A在根、茎、叶中的含量为茎、叶 >根 ;贵州、广东和安徽产地的 Hup A含量分别为 0 .0 18% ,0 .0 2 1% ,0 .0 2 0 % ,提取方法之间差异不显著。结论 Hup A含量在蛇足石杉中的分布为地上部分大于地下部分。不同产地 Hup A含量有一定差异。

石杉碱甲胶囊和片剂治疗阿尔采末病的多中心双盲研究

目的：比较石杉碱甲胶囊和片剂治疗轻中度阿尔采末病（ＡＤ）的疗效和不良反应。方法：９２例ＡＤ病人随机分２组，胶囊组５５例（男性２７例，女性 ２８例，年龄 ６９ ａ ± ｓ７ ａ）；片剂组 ３７例（男性１７例，女性 ２０例，年龄 ７１ａ± ６ａ）。给石杉碱甲胶囊或片剂 ０． １５ ｍｇ，ｐｏ， ｂｉｄ × ８ ｗｋ。结果：胶囊组和片剂组总有效率分别为 ６９％， ５７％，２组比较差异无显著意义（Ｐ＞０．０５）。结论：石杉碱甲是一个安全、有效的治疗ＡＤ药物，肢囊剂型与片剂剂型疗效相似。

石杉碱甲鼻用原位凝胶的制备及其经鼻脑靶向性评价

目的探索利用鼻腔嗅觉区的鼻-脑通道开发经鼻脑靶向给药系统的可行性。方法用阳离子敏感性成胶辅料结冷胶，采用pH梯度沉淀法制备了石杉碱甲鼻用原位凝胶。以市售片剂和注射液为对照，用小脑延髓池插管法采集脑脊液，股动脉插管取血，测定其在大鼠脑脊液和血中药物动力学参数；用组织匀浆法，测定其在大鼠脑组织中的分布；用Morris水迷宫法、跳台法和避暗法试验其对大鼠和小鼠模型的药效。结果大鼠鼻腔给药血浆AUC0→6h为静注的0．94倍，但脑脊液AUC0→6h为静注和灌胃的1．3和2．3倍；大鼠鼻腔给药后大脑、海马、小脑、左右嗅球的AUC0→6h分别为静注的1．5，1．3，1．0，1．2和1．0倍，为灌胃的2．7，2．2，1．9，3．1和2．6倍。药效学研究表明以1／4～1／2口服剂量鼻腔给药与口服等效，与药动学结果相符。结论石杉碱甲原位凝胶鼻腔给药较静注和灌胃显著增加了药物在脑内，特别在其改善记忆障碍作用的靶部位——大脑和海马的分布，提高了药物的脑靶向性。

石杉碱甲提取工艺研究

系统研究了石杉碱甲的提取工艺.系用有机酸浸提、萃取、反萃取、脱色和重结晶等化学分离技术从千层塔中提取、纯化石杉碱甲.结果表明:1pH对石杉碱甲的存在形态有很大影响;2一定酸度下的液液萃取除杂效果理想;3活性炭的用量及吸附条件对除杂效果影响显著;4低温下氯仿的重结晶可得到纯度大于99%的高纯度石杉碱甲.

尼尔雌醇并石杉碱甲改善阿尔茨海默病患者认知功能的研究

目的目前主要用于治疗阿尔茨海默病(Alzheimerdisease,AD)的乙酰胆碱酯酶抑制剂价格昂贵,难以普及应用,为进一步寻求费用合理、药效确切的AD的治疗药物,观察尼尔雌醇(雌激素替代疗法)并石杉碱甲治疗AD改善认知功能的有效性及安全性。方法把60例女性AD患者随机分为两组,每组30例,联合治疗组采用石杉碱甲片200μg/d分2次口服和尼尔雌醇片2mg,1次/2周,对照组服用石杉碱甲片200μg/d分2次口服,疗程均为24周;两组患者的病情治疗前、治疗后8,24周均采用简易精神状态检查(MMSE)、临床痴呆程度量表(CDR)、日常生活活动能力(ADL)评分。结果治疗8周后,治疗组与对照组的MMSE、ADL评分(分别为19.2±2.5与16.9±2.1、45.9±7.1与48.3±6.1)差异有显著性意义(t=2.140,t=2.616,P均<0.05)。治疗24周后,治疗组与对照组的MMSE、CDR、ADL评分(23.1±2.3与19.3±2.1,1.1±0.2与1.4±0.3,40.1±7.2与43.1±6.1)差异有显著意义(t=3.076、t=2.216、t=3.662,P依次<0.01、0.05、0.01)。体检及实验室检查无明显的乳腺、子宫及肝肾功能异常。结论雌激素配合石杉碱甲能有效地治疗女性轻、中度AD患者,对患者的认知功能和日常生活自理能力均有改善,耐受性好,安全性高。

石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经细胞[Ca^(2+)]_i及钙调蛋白、蛋白激酶Ⅱ信使核糖核酸表达的影响

目的 :观察石杉碱甲对血管性痴呆 (VD)小鼠海马神经细胞 [Ca2 + ] i 和钙调蛋白 (CaM) ,Ca2 +钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMPKⅡ )mRNA表达的影响。方法 :采用双侧颈总动脉线结法 ,制作小鼠VD模型 ,并设假手术对照组 ,石杉碱甲为治疗组 ;术后d 2 9,30测试学习、记忆成绩。利用激光共焦显微镜检测各组海马神经细胞 [Ca2 + ] i;用RT PCR技术检测CaM ,CaMPKⅡmRNA。结果 :模型组[Ca2 + ] i 荧光强度 (44±s 3)显著高于假手术组(2 6± 4) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (2 8.5± 2 .5) (P<0 .0 1 ) ;模型组CaMmRNA含量 (0 .76± 0 .2 1 )显著低于假手术组 (1 .1 3± 0 .2 3) (P <0 .0 1 )和石杉碱甲组 (0 .97± 0 .1 9) (P <0 .0 5) ,CaMPKⅡmRNA含量(0 .43± 0 .0 7)显著低于假手术组 (0 .67± 0 .1 0 )(P <0 .0 1 )和石杉碱甲 (0 .61± 0 .0 8) (P <0 .0 1 )。结论 :石杉碱甲可降低VD小鼠海马神经细胞[Ca2 + ] i,提高CaM ,CaMPKⅡmRNA表达水平 。

HPLC法测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量

目的 测定 6种石杉科植物中石杉碱甲的含量。方法 用 2 %酒石酸溶液提取总碱 ,HPL C法测定 ,外标法定量。结果 石杉碱甲在所测定的 5种石杉科植物蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉、金丝条马尾杉、柳杉叶马尾杉中均有较高分布 ,分别达到 0 .0 4 81% ,0 .0 5 79% ,0 .0 70 6 % ,0 .0 345 % ,0 .196 1% ,在闽浙马尾杉中含量较少 ,仅为0 .0 0 6 1%。结论 方法简便、准确 。

石杉碱甲的合成及结构改造研究进展

石杉碱甲是一高效、高选择性乙酰胆碱酯酶抑制剂，由于其独特的药理特征和低毒性，引起了人们的广泛注意。本文系统地综述了石杉碱甲的全合成方法、结构改造工作及构效关系的研究。

4种石杉科植物中产生石杉碱甲的内生真菌的分离及初步鉴定和HPLC测定石杉碱甲的含量

目的从4种石杉科植物中得到产生石杉碱甲(Huperzine A)的内生真菌,改进筛选内生真菌的培养条件。方法消毒后的材料在培养基上培养和分离其内生真菌,HPLC检测代谢产物,显微形态鉴定菌种。结果从蛇足石杉,长柄石杉,伏贴石杉,柳杉叶马尾杉中分离得到32株内生真菌,其中从柳杉叶马尾杉分离出的2株内生真菌能够产生石杉碱甲,分别是HA15.(芽胞菌属)和HA23.(葡萄孢属)。结论首次从柳杉叶马尾杉中分离出能产生石杉碱甲的内生真菌。

石杉碱甲鼻用原位凝胶喷雾剂的制备及稳定性研究

目的:开发石杉碱甲经鼻脑靶向给药系统。方法:制备了石杉碱甲溶液、环糊精包合物、微乳、嵌断共聚物纳米粒和原位凝胶5种剂型,通过考察各剂型的纤毛毒性和体外透牛嗅黏膜扩散特性,选择原位凝胶为最佳剂型。以每喷主药含量、黏度、渗透压、粒径和体外释药特性等为考察指标筛选出原位凝胶喷雾剂的优化处方,并对其进行了稳定性研究。结果:以优化处方制备的喷雾剂,加速试验和长期留样试验6个月,内容物性状、pH值、黏度、粒径、渗透压、有关物质、含量和每喷含量无明显变化。结论:石杉碱甲鼻用原位凝胶喷雾剂制备工艺简便,制剂稳定,纤毛毒性低,药物透牛嗅黏膜扩散快而完全,适宜开发为经鼻脑靶向给药系统。

从千层塔中微波协助提取石杉碱甲和石杉碱乙

首先从 8种溶剂中筛选出硫酸作为微波协助提取的浸提溶剂 ,然后用正交试验确立了千层塔生物碱的最佳提取条件。以石杉碱甲和石杉碱乙回收率为指标 ,考察了溶剂倍数、溶剂浓度、微波处理时间等因素。结果表明 ,在室温下微波协助提取的最优条件为 :酸浓度 0 8% (v v) ,液固比例 2 5∶1 ,微波处理时间 90s。 3次重复实验所得石杉碱甲和石杉碱乙回收率分别是 93 7%和 93 9% ,相对标准偏差分别为 1 79%和 1 5 6% (n =3)。与传统的回流提取工艺相比 ,过程时间从 2h缩短为 90s,回收率提高了 1 0 %以上。

野生蛇足石杉产生物碱和石杉碱甲内生真菌分离鉴定

目的从野生蛇足石杉中筛选产生物碱和石杉碱甲内生真菌。方法从野生蛇足石杉中分离获得的33株内生真菌为研究起点,采用生物碱沉淀法和酸性染料比色法筛选产生物碱菌株;构建乙酰胆碱酯酶抑制活性测定模型、通过薄层色谱(TLC)及高效液相色谱(HPLC)测定,分析是否产生石杉碱甲,并利用形态学对菌株进行初步鉴定。结果筛选出7株产生物碱菌株,并从中筛选出一株产石杉碱甲菌株V,初步鉴定为1株青霉菌属真菌。结论在分离自野生蛇足石杉叶片中内生真菌产生物碱真菌比例较高,内生真菌V能在发酵条件下产生石杉碱甲。利用生物碱沉淀法及酸性染料法共同筛选产生物碱菌株更具有高效性,利用乙酰胆碱酯酶抑制活性测定模型进行活性检测及TLC/HPLC进行结构检测筛选更具有方向性。

石杉碱甲透皮控释制剂督脉经穴给药改善东莨菪碱小鼠记忆障碍作用及机理初探

目的 :观察石杉碱甲透皮控释贴片 (Hup ATDDS)督脉穴位给药对东莨菪碱 (Scop)致小鼠学习记忆障碍的影响 ,比较穴位给药与一般部位给药的作用差异 ,探讨督脉穴位给药机理 ,为穴位透皮控释给药新途径提供初步实验依据。方法 :采用跳台、“Y”迷宫等行为药理学实验方法 ,观察Hup ATDDS穴位给药与一般部位给药对Scop小鼠记忆障碍的改善作用 ,并以小鼠脑胆碱酯酶活性等指标初步探讨穴位给药的作用机理。结果 :跳台试验和电迷宫试验表明 ,Hup ATDDS督脉百会穴用药后 3～ 6h间有明显的改善学习记忆作用 :13.4 μg/ 0 .2 5cm2 组用药后 4h为佳 ,5～ 6h时作用减弱 ;2 6 .7μg/ 0 .2 5cm2 组自药后 3h起作用明显 ,药后 4h作用最为显著 ,维持至 6h仍有良好作用 ;Hup ATDDS 2 6 .7μg/0 .2 5cm2 经百会、哑门、大椎、至阳和命门五个穴位给药均有明显的改善学习记忆作用 ,其中以百会穴组的作用最为显著 ;Hup ATDDS经百会穴或一般部位 (选臀位 )给药均有改善学习记忆作用 ,但以百会穴给药较臀位用药作用更为显著 ,且Hup ATDDS2 6 .7μg/ 0 .2 5cm2 组对小鼠脑胆碱酯酶活性有明显抑制作用。结论 :Hup ATDDS督脉穴位给药的改善记忆作用优于一般部位给药 ;其改善学习记忆作用可能是由于抑制脑CHE活性 。

石杉碱甲的研究进展

石杉碱甲(huperzine A,HupA)是来源于蕨类植物蛇足石杉的一种倍半萜生物碱,为高效、高选择性、可逆性的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂。HupA在治疗阿尔茨海默病(Alzheimersdisease,AD)方面的显著疗效,近年研究还证明HupA有神经保护和预防化学武器的潜力,引起世界各国药学工作者广泛关注和研究。现系统的综述石杉碱甲在药学研究各领域中的研究进展。

高效液相色谱法定量测定中药千层塔提取物中的石杉碱甲

建立了高效液相色谱快速定量测定中药千层塔提取物中石杉碱甲含量的分析方法。千层塔提取物经甲醇/水/甲酸(10/90/0.2,v/v/v)提取并定容后,过滤膜后直接分析。色谱分离选用XCharge C18色谱柱(150 mm×4.6mm,5μm),以水(含0.1%三氟乙酸)和乙腈(含0.09%三氟乙酸)为流动相进行梯度洗脱,流速为2 mL/min,于310 nm波长下检测,可在10 min内完成石杉碱甲的快速分离分析。结果表明,石杉碱甲在2.12～106 mg/L范围内线性关系良好(相关系数为0.999 9);平均加标回收率为102.34%,相对标准偏差(RSD)为0.46%;日内及日间精密度均小于2%,满足定量要求。该方法简便、快速,结果可靠,重现性好,可作为千层塔提取物质量评价的依据。

石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马NMDA受体及mRNA表达的影响

目的:观测石杉碱甲对血管性痴呆小鼠海马神经元N-甲基D-天门冬氨酸(NMDA)受体免疫组化和原位杂交变化的影响,探讨石杉碱甲干预作用的机制。方法:双侧颈总动脉线结,反复缺血-再灌注法制备模型,药物组用石杉碱甲溶液灌胃,跳台试验和水迷宫试验观测其行为学改变,采用免疫组化和原位杂交技术观测小鼠海马神经元NMDA受体及其mRNA的表达变化。结果:在跳台试验中,模型组小鼠学习阶段的反应时间延长、错误次数增加,记忆阶段的潜伏时间缩短、错误次数增加;水迷宫试验中,其学习阶段的游全程时间延长和错误次数增加,记忆阶段的游全程时间延长和错误次数增加(与假手术组相比,P<0.01)。石杉碱甲明显改善了模型小鼠上述学习、记忆成绩(P<0.01)。同时,药物组海马的NMDA受体及其mRNA表达也较模型组的表达明显增高(P<0.01),且海马两者的表达在药物组与假手术组间差异无显著性。结论:石杉碱甲改善血管性痴呆小鼠学习、记忆成绩与其恢复海马低水平的NMDA受体及其mRNA有关。