水甘草碱抑制破骨细胞活化缓解磨损颗粒诱导的炎性骨溶解

背景:水甘草碱因其抗炎生物活性在心肌重塑、急性肾损伤和肺损伤等疾病中表现出良好的治疗作用。假体磨损颗粒常引发无菌性炎症,炎性因子的大量释放进一步导致了假体周围骨质的破坏和骨量丢失,然而目前尚无水甘草碱对假体周围骨溶解确切疗效的基础研究。目的:探讨水甘草碱对破骨细胞活化、炎症因子表达及磨损颗粒诱导炎性骨溶解的影响。方法:①细胞实验:将RAW264.7细胞分4组培养:对照组细胞加入完全培养基;破骨诱导组加入破骨诱导培养基(含50 ng/mL RANKL的完全培养基);水甘草碱低、高剂量组分别加入1,5μmol/L水甘草碱处理4 h后加入破骨诱导培养基。破骨诱导5 d后,分别进行抗酒石酸酸性磷酸酶染色、F-actin染色及RT-PCR检测。②动物实验:采用随机数字表法将20只C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、骨溶解组、水甘草碱低及高剂量组,每组5只。骨溶解组、水甘草碱低及高剂量组通过将钛颗粒注射至颅骨表面的方法建立颅骨骨溶解模型,造模后第2天,水甘草碱低、高剂量组分别腹腔注射10,20 mg/kg水甘草碱,每隔1 d注射1次,直至造模2周后,收集小鼠动脉血血清进行炎性因子(白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)检测,收集颅骨进行micro-CT扫描和骨参数分析。结果与结论:①细胞实验:抗酒石酸酸性磷酸酶和F-actin染色显示,与破骨诱导组比较,水甘草碱低、高剂量组可抑制破骨细胞的活化及骨吸收,其中以高剂量组抑制更显著。RT-PCR检测结果显示,与对照组比较,破骨诱导组3种炎症因子的mRNA表达升高(P<0.01);与破骨诱导组比较,水甘草碱低及高剂量组3种炎症因子的mRNA表达降低(P<0.01),其中以高剂量组降低更明显。②动物实验:与假手术组比较,骨溶解组3种炎性因子水平升高(P<0.01);与骨溶解组比较,水甘草碱低及高剂量组3种炎性因子水平降低(P<0.05,P<0.01),其中以高剂量组降低更明显。micro-CT扫描结果显示,钛颗粒导致小鼠颅骨骨溶解破坏,水甘草碱可抑制钛颗粒诱导的骨溶解,其中以高剂量组抑制作用更显著。③结果表明:水甘草碱可通过抑制炎症因子释放下调破骨细胞的骨吸收功能来改善钛颗粒诱导的骨溶解、骨破坏。

连翘苷对牙周炎大鼠p38 MAPK/c-Fos信号通路及破骨细胞活化的影响

目的:探讨连翘苷对牙周炎大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)/c-Fos信号通路及破骨细胞活化的影响。方法:建立牙周炎大鼠模型,随机分为模型组、连翘苷低剂量组、连翘苷中剂量组、连翘苷高剂量组、维生素C组,每组12只,另取12只设为对照组,分组处理后,亚甲蓝染色检测大鼠牙槽骨吸收(釉牙骨质界到牙槽嵴顶距离)情况;HE染色检测各组大鼠牙周组织病理形态;TRAP染色检测各组大鼠牙周组织中破骨细胞数目;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹实验检测大鼠牙周组织p38 MAPK/c-Fos通路相关蛋白表达情况。结果:与对照组相比,模型组大鼠牙周组织呈现上皮残缺、破裂,形态异常,牙周膜纤维排列紊乱,可见炎性细胞浸润等病理损伤,釉牙骨质界到牙槽嵴顶距离、破骨细胞数目、TNF-α、IL-6水平、牙周组织p38 MAPK/c-Fos通路相关蛋白c-Fos表达、p-p38 MAPK/p38 MAPK明显升高(P<0.05)。与模型组相比,连翘苷低、中、高剂量组及维生素C组大鼠牙周组织病理损伤减轻,釉牙骨质界到牙槽嵴顶距离、破骨细胞数目、TNF-α、IL-6水平、牙周组织c-Fos蛋白表达、p-p38 MAPK/p38 MAPK降低,且连翘苷各组呈剂量依赖性(P<0.05),连翘苷高剂量组与维生素C组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:连翘苷可下调p38 MAPK/c-Fos信号通路,抑制牙周炎症及破骨细胞活化,减轻牙周组织损伤,改善牙周炎大鼠症状。

利格列汀调控巨噬细胞极化和破骨细胞形成缓解磨损颗粒诱导的骨质溶解

背景:研究发现,在利格列汀的干预下,巨噬细胞更多的由M1转向M2极化,降低了相关炎性因子的释放,缓解了局部炎症。目的:探讨利格列汀对巨噬细胞极化、破骨细胞活化及磨损颗粒诱导炎性骨溶解的影响。方法:(1)细胞实验:①巨噬细胞极化:将RAW264.7细胞分4组培养,对照组细胞加入高糖培养基;M1诱导组加入M1诱导培养基(含脂多糖100 ng/mL和干扰素γ20 ng/mL的高糖培养基)模拟炎症环境;利格列汀低、高剂量组分别加入50,200 nmol/L利格列汀处理4 h后加入M1诱导培养基。巨噬细胞极化诱导24 h后,分别进行巨噬细胞极化免疫荧光染色和RT-PCR检测。②破骨细胞活化:将RAW264.7细胞分为4组培养,对照组使用高糖培养基培养,破骨细胞诱导组、利格列汀低剂量组及高剂量组进行破骨细胞诱导,待微小破骨细胞成形后,用利格列汀(50,200 nmol/L)分别干预细胞3 d,进行细胞抗酒石酸酸性磷酸酶染色和RT-PCR检测。(2)动物实验:将24只雄性C57BL/6J小鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、利格列汀低剂量组及高剂量组,后3组通过将钛颗粒悬浊液注射至颅骨表面建立颅骨骨溶解模型,从造模后第2天开始,利格列汀低、高剂量组分别灌胃利格列汀(2,10 mg/kg),每天1次,造模3周后,检测血清巨噬细胞极化标志蛋白及炎性因子水平,收集颅骨进行micro-CT扫描、骨参数分析及苏木精-伊红染色评估骨溶解及形态学变化。结果与结论:①细胞实验:与M1诱导组比较,利格列汀低、高剂量组可显著抑制巨噬细胞的M1极化、促进M2极化(P<0.01),且以高剂量组效果更显著(P<0.01)。与破骨诱导组比较,利格列汀低、高剂量组可抑制破骨细胞的活化及骨质吸收,且以高剂量组抑制更显著。与对照组比较,M1诱导组炎性因子mRNA表达升高(P<0.01),而与M1诱导组相比较,利格列汀低、高剂量组炎性因子mRNA表达显著降低(P<0.01)。与对照组比较,破骨诱导组破骨功能标志物的mRNA表达升高(P<0.01);与破骨诱导组比较,利格列汀低、高剂量组破骨功能标志物的mRNA表达降低(P<0.01),且以高剂量组降低更明显。②动物实验:钛颗粒植入导致小鼠颅骨骨溶解破坏,利格列汀可抑制钛颗粒诱导的骨溶解,其中以高剂量组抑制作用更显著。结果表明利格列汀具有调节巨噬细胞极化、抑制破骨细胞活化及对骨骼系统的保护作用。

基于NF-κB信号通路倍半萜烯内脂化合物对牙周病破骨细胞活化因子作用的研究

目的:探究基于NF-κB信号通路倍半萜烯内脂化合物对牙周病破骨细胞活化因子作用的研究。方法:选取2周龄的牙周病大鼠动物模型15只为观察组,2周龄的健康大鼠6只为对照组。观察组实验大鼠随机分为3组:观察组1实验大鼠注射小白菊内酯(PAR)2.5 mg/kg/d;观察组2注射粘毛鼠尾草活性单体2 mg/kg/d;观察组3及对照组每天注射等量的生理盐水。通过荧光定量PCR技术、酶联免疫反应(ELISA)等方法对观察组与对照组牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLF)中基于NF-κB信号通路的牙周病破骨细胞活化因子(IL-1β)mRNA和蛋白表达进行测定,并观察实验动物模型牙周病的治疗状况。结果:与对照组(1.02±0.08,3.2±0.1)ng相比,观察组1(1.1±0.11,3.4±0.15)ng、观察组2(1.12±0.05,3.36±0.13)ng大鼠牙周组织中NF-κB以及IL-1β含量的差异均无统计学意义(P>0.05)。NF-κB以及IL-1β含量在观察组3(3.92±0.03,8.59±0.16)ng中与在观察组1、观察组2中的差异均有统计学意义(P<0.05),并且治疗2周后发现经倍半萜烯内脂化合物(小白菊内酯、粘毛鼠尾草活性单体)治疗的观察组1与观察组2中牙周状况均得以改善。结论:倍半萜烯内脂化合物可以通过NF-κB信号通路作用于牙周病破骨细胞活化因子(IL-1β)进而改善牙周病状况。

Apelin-13抑制巨噬细胞M1极化缓解全身炎症性骨丢失

背景:Apelin-13因具有抗炎和抗氧化等生物活性,在神经炎症、心血管损伤和肺炎等临床常见疾病中发挥着有效的治疗作用,然而对于Apelin-13在治疗炎症性骨丢失中是否同样具有良好的疗效目前尚无相关基础研究。目的:探究Apelin-13对炎症性骨丢失的治疗作用及其机制,以期探究治疗炎症性骨丢失的潜在药物。方法:①体外实验:将RAW264.7细胞分为3组:对照组,脂多糖组和治疗组。对照组只加入DMEM完全培养基;脂多糖组加入脂多糖(100 ng/mL)诱导炎症DMEM培养基;治疗组加入10 nmol/L Apelin-13+脂多糖诱导炎症DMEM培养基。诱导炎症24 h后,使用Western Blot检测M1型巨噬细胞的标志蛋白诱导型一氧化氮合酶和CD86的表达,并使用细胞免疫荧光染色检测诱导型一氧化氮合酶的表达。并在对照组、脂多糖组和治疗组中同时加入等量的核因子κB受体活化因子配体(50 ng/mL)诱导破骨细胞,诱导6 d后使用抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色评估破骨细胞诱导的结果。②体内实验:将18只C57BL/6雄性小鼠随机分为3组:假手术组、脂多糖组、治疗组。假手术组连续1周在小鼠腹腔内注射0.1 mL的PBS;脂多糖组注射0.1 mL含脂多糖(5 mg/kg)的PBS稀释液;治疗组注射0.1 mL含脂多糖(5 mg/kg)+Apelin-13(100μg/kg)的PBS稀释液。3组小鼠连续腹腔注射7 d,于第8天处死小鼠,收集每只小鼠的2个股骨,一半进行micro-CT扫描和骨参数分析,另一半进行苏木精-伊红染色。结果与结论:①体外实验:Western Blot结果显示,脂多糖组诱导型一氧化氮合酶和CD86的表达较对照组明显增多,而Apelin-13能够显著抑制脂多糖诱导的巨噬细胞M1极化,细胞免疫荧光的结果也显示治疗组诱导型一氧化氮合酶的表达较脂多糖组减少,同时抗酒石酸酸性磷酸酶染色和F-actin染色结果显示Apelin-13抑制脂多糖诱导的破骨细胞异常活化及骨吸收能力。②体内实验:micro-CT结果显示全身炎性导致股骨远端骨质出现明显丢失,而Apelin-13则能够显著抑制骨质的流失,苏木精-伊红染色结果也表明Apelin-13能够有效缓解炎症诱导的小鼠股骨远端骨质流失。③结果表明:Apelin-13能够通过抑制巨噬细胞M1极化,抑制破骨细胞的异常激活和骨吸收能力,缓解全身炎症诱导的骨丢失。

影响破骨细胞功能的主要因素

骨是一种不断重塑的活性组织.骨重塑是由骨吸收和新骨形成两个过程协调完成.对骨吸收起主要作用的是多核-破骨细胞.破骨细胞是一种多核巨细胞,每个细胞具有2-100个核不等,直径可达100μm,位于哈佛系统内的骨内膜表面和骨膜下表面.尽管许多调节破骨细胞生成及骨吸收的因素仍然未知,但对破骨细胞的分子和细胞生物学的认识已有了很大进步.

共培养体系中重组结核杆菌热休克蛋白10对破骨细胞相关基因表达的影响(R68)

目的观察重组结核杆菌热休克蛋白10(CPN10)对成骨细胞(OB)-外周血单个核细胞(PBMs)共培养体系中破骨细胞生成及相关基因表达的影响。方法建立培养上清相通但二者互相不接触的成骨细胞一单个核细胞共育模型。实验分对照组和CPN10(10μg/ml)处理组。主要观察指标:①采用TRAP染色及扫描电镜检测破骨细胞生成及小牛骨磨片吸收陷窝,②应用Realtime PCR检测与破骨细胞生成相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。结果两组细胞均有TRAP阳性多核破骨细胞生成,并在小牛骨磨片上形成吸收陷窝;但对照组所获TRAP阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及面积均显著小于CPN10组。Realtime PCR检测结果显示CPN10组与对照组相比NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG相对浓度分别为7.410±1.738、8.844±1.981、22.4272±2.058、2.445±0.2517(P<0.05),对照组各基因表达均显著低于CPN10组。结论 CPN10在成骨细胞-单个核细胞(OB-PBMs)共培养体系中可促进OC的生成及骨吸收,CPN10通过对成骨细胞的作用,致其分泌的OPG/RANKL比例失调,并上调破骨细胞相关基因NFATc1、c-Fos、RANKL、OPG的基因表达。

多发性骨髓瘤骨病发生机制及诊疗研究进展

多发性骨髓瘤骨病(MBD)以全身骨质破坏亢进和新骨生成受抑为主要特征,临床表现为骨痛、骨质疏松、病理性骨折以及相关神经压迫症状等。MBD是多发性骨髓瘤(MM)最常见的并发症之一,其发病隐匿,误诊率较高,患者的生存质量及预后较差。该文通过对其发病机制及诊疗进展进行综述,为临床治疗MBD提供参考。

骨癌痛发病机制及临床治疗进展

转移性癌性骨痛（metastatic cancer—induced bonepain、CIBP）的发病率较高，然而由于其发病机制复杂、研究不清使得传统镇痛疗法效果不佳。现有研究结论提示．该病的发病机制分为外周因素和中枢因素．肿瘤骨微环境中破骨细胞的持续活化、免疫细胞和炎症因子激活导致的疼痛敏化、肿瘤组织对骨膜的直接压迫浸润、以及脊髓神经生化改变等因素均影响CIBP的发生。目前常用的镇痛方法仍为多药联合治疗。药物包括阿片类药物．非甾体类抗炎药、双膦酸盐、谷氨酸抑制剂和NMDA拮抗剂等。

不同熔附金属全冠对种植体周围组织中炎症因子、黏附分子、OPG/RANKL表达的影响

目的:研究不同熔附金属全冠对种植体周围组织中炎症因子、黏附分子、OPG/RANKL表达的影响。方法:选取在本院接受熔附金属全冠修复的90例患者纳入研究,包括镍铬合金修复、钴铬合金修复、金合金修复各30例,分别纳入镍铬合金组、钴铬合金组和金合金组,检测龈沟液中炎症因子、黏附分子、OPG/RANKL的表达情况。结果:(1)炎症因子:镍铬合金组龈沟液中白细胞介素-6(IL-6)、NO以及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)含量均高于钴铬合金组和金合金组,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)黏附分子:镍铬合金组龈沟液中可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)、可溶性血管黏附分子-1(sVCAM-1)、E型钙粘附分子(E-cadherin)含量均高于钴铬合金组和金合金组,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)OPG/RANKL:镍铬合金组患者的RANKL含量、RANKL/OPG比例低于钴铬合金组和金合金组,OPG含量高于钴铬合金组和金合金组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:钴铬合金和金合金熔附金属全冠对牙周组织的刺激较弱,龈沟液中炎症因子、黏附分子含量以及OPG/RANKL比例较低。

杜仲醇提取物通过NF-κB信号通路改善大鼠牙周组织病的作用研究

目的探讨杜仲醇提取物通过NF-κB信号通路作用于牙周病破骨细胞活化因子(IL-1β)改善大鼠牙周组织病的疗效。方法选取SPF级Wistar大鼠60只,♂,随机数字表法分成4组,正常组,模型组,杜仲醇提取物低、高剂量组,各15只。除正常组外,其他大鼠制备牙周病模型,造模1周后杜仲醇提取物低、高剂量组分别在大鼠上颌右侧第一、第二磨牙间腭、颊侧的龈沟底内注入0.2m L0.1,1.0μg·mg·mL^-1的杜仲醇提取物,正常组与模型组大鼠注入等剂量生理盐水,连续注入5 d。Western-blot、荧光定量PCR检测大鼠牙周膜成纤维细胞内破骨细胞活化因子(IL-1β)蛋白、mRNA表达状况。结果与正常组相比,模型组大鼠成纤维细胞内IL-1β、NF-κB mRNA相对表达量显著上升(P<0.05);与模型组相比,杜仲醇提取物低、高剂量组大鼠成纤维细胞内IL-1β、NF-κB mRNA相对表达量显著下降(P<0.05)。与正常组相比,模型组大鼠血清IL-6、IL-1β及TNF-α含量显著上升(P<0.05);与模型组相比,杜仲醇提取物低、高剂量组大鼠血清IL-6、IL-1β及TNF-α含量显著下降(P<0.05)。与正常组相比,模型组大鼠上颌组织内NF-κB、IL-1β蛋白表达显著上升(P<0.05);与模型组相比,杜仲醇提取物低、高剂量组大鼠上颌组织内NF-κB、IL-1β蛋白表达下降(P<0.05)。结论杜仲醇提取通过NF-κB信号路径对牙周病破骨细胞活化因子(IL-1β)产生作用,降低牙周组织内炎症因子含量,对牙周病起到治疗作用。