高效液相色谱-氢化物发生-原子荧光光谱法测定富硒大豆中硒代氨基酸的含量

取0.1 g脱脂后富硒大豆样品于离心管中,用5 mL pH 7.5的130 mmol·L^(-1)三(羟甲基)氨基甲烷-盐酸缓冲液超声振荡30 min,用15 mg链霉蛋白酶于37℃振荡酶解5 h,离心后取上清液,过0.22μm尼龙有机滤膜。滤液中的硒代半胱氨酸(SeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)在Agela MP-C_(18)色谱柱上分离,以含2%(体积分数)甲醇和0.5 mmol·L^(-1)四丁基溴化铵的40 mmol·L^(-1)磷酸氢二铵溶液(pH 7.0)进行等度洗脱,并采用氢化物发生-原子荧光光谱法测定3种硒代氨基酸的含量。结果表明,3种硒代氨基酸在7 min内可以实现基线分离,标准曲线的线性范围均为5~100μg·L^(-1),检出限依次为0.086,0.075,0.047 mg·kg^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为85.5%~103%,测定值的相对标准偏差(n=7)不大于3.0%。方法用于分析富硒大豆中的硒代氨基酸,大豆中硒赋存形态多为SeMet,含量占总硒量的85.5%~94.5%。

超高效液相色谱-串联质谱法测定孜然中3种硒代氨基酸含量

目的采用超高效液相色谱-串联质谱法(ultra performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS),对新疆不同地区的孜然进行硒代氨基酸含量分析。方法样品采用水提取法进行提取,以0.1%的乙腈(A)和水(B)二元流动相体系、多反应监测模式进行监测,基质匹配外标法进行定量,对硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸和Se-(甲基)硒基-L-半胱氨酸等3种硒代氨基酸进行色谱分离、测定。结果全疆和东疆的3种硒代氨基酸总含量分布较为接近,且东疆总量均值2.635μg/kg与全疆2.705μg/kg接近,北疆总量均值最小,为2.396μg/kg,南疆总量均值最大,为3.003μg/kg,其中产自吐鲁番的孜然中3种硒代氨基酸含量较高。环节中硒代氨基酸总含量的大小顺序为批发环节>零售超市环节>农贸环节,3种硒代氨基酸中硒代胱氨酸含量最多,占比最大。结论本研究采用水提法以及UPLC-MS/MS分析3种硒代氨基酸测定结果准确且操作便捷。结果分析各含量显示同一区域内所产孜然中硒代氨基酸的含量和质量仍可能呈现较大差异,在不同环节下的各种物质含量有明显差异,其中批发环节保持了硒代氨基酸的稳定性,3种硒代氨基酸含量较高。以期对孜然中硒代氨基酸高效测定提供数据支持。

超高效液相色谱-串联三重四级杆质谱法测定富硒食品中的硒代氨基酸

目的建立一种用于检测富硒食品中4种硒代氨基酸的超高效液相色谱-串联质谱法。方法考虑3种样品前处理方法的影响,采用0.1%的甲酸(A)和乙腈(B)二元流动相体系对N-乙酰-L-硒代蛋氨酸、Se-(甲基)硒基-L-半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代胱氨酸等4种硒代氨基酸进行色谱分离。采用多反应监测模式(multiple reaction monitoring,MRM)进行监测,基质匹配外标法进行定量。结果口服液中,4种硒代氨基酸的线性关系良好(r>0.996),平均回收率范围为89.0%~104.5%,相对标准偏差均小于7%。结论该方法对简单基质的样品中硒代氨基酸的测定结果准确可靠,但基质效应较为明显。

反相高效液相色谱法测定富硒脱水菜心中的硒代氨基酸

建立了柱前衍生反相高效液相色谱-紫外检测富硒脱水菜心中硒代胱氨酸(SeCys)、硒甲基半胱氨酸(SeMeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)的方法,优化了样品预处理方法,并评价其定量分析的线性、准确性、重复性和检出限,结果显示:以0.1mol/LHCl为提取溶剂,超声处理8h,提取效果最佳;3种硒代氨基酸的平均加标回收率为95.7%～112.9%;在各硒代氨基酸的线性范围内,线性关系良好(R>0.999);保留时间和峰面积重复性的相对标准偏差(RSD)均分别低于2.0%和5.0%;酸性条件下的检出限为0.004～0.009mg/L。

生物体系中硒代氨基酸的手性形态分析进展

综述了近年来利用高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)以及毛细管电泳(CE)等分析手段与其它高灵敏检测器联用对生物体系中硒代氨基酸进行手性形态分析研究情况,参考文献40篇。

高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱(HPLC-ICP-MS)联用测定富硒小麦中硒代氨基酸

为科学补硒和促进富硒小麦的种植推广,用蛋白酶XIV辅助微波振荡提取富硒小麦中硒代氨基酸,采用C18分离柱分离,以磷酸氢二铵(30.0 mmol/L)+甲醇(1.0%)+四丁基溴化铵溶液(2.0 mmol/L,pH=6.5)为流动相,能在10 min内实现5种硒代氨基酸的分离。在高能氦气模式(HEHe)下,用^(78)Se的色谱峰面积积分作为定量依据,建立了高效液相色谱-电感耦合等离子体质谱联用技术(HPLC-ICP-MS)检测富硒小麦中硒代氨基酸的方法。5种硒代氨基酸在1.0~200.0μg/L线性相关性良好,检出限在0.11~0.29μg/L。以富硒小麦为基体进行加标回收,除硒代胱氨酸(SeCys_(2))可能不稳定,易分解造成回收率偏低外,其他4种硒代氨基酸的加标回收率在92.3%~102%,相对标准偏差为1.6%~4.2%(n=7)。用所建立的方法测定农业科技工作者种植推广的富硒小麦,结果发现小麦中的硒赋存形态多为硒代蛋氨酸(SeMet),此外,小麦中还含有少量硒代胱氨酸(SeCys_(2))、硒代半胱氨酸(SeCys)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代乙硫氨酸(SeEt)。方法具有良好的精密度和准确度,适用于富硒小麦中硒代氨基酸的形态分析。

硒代氨基酸的分析

本文介绍了用日立835-50氨基酸分析仪分析硒代氨酸(硒代胱氨酸、硒代蛋氨酸的方法,由于采用了较高浓度的盐酸水解,中性氨基酸沉淀等技术使两种硒代氨基酸实际样品的同时分析得以实现,国内未见报导。

高效液相色谱串联质谱法检测蚯蚓体内硒代氨基酸

建立了高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术(HPLC-ESI-MS)检测蚯蚓体内硒代氨基酸的分析方法.采用振荡超声辅助酶解法提取蚯蚓(赤子爱胜蚓(Eisenia fetida))体内的硒代蛋氨酸(SeMet)和甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys).用HPLC-ESI-MS正离子多反应离子监测模式(MRM)对这两种硒代氨基酸进行分离检测,外标法定量.SeMet和MeSeCys在4-600 ng·mL^-1有良好的线性关系,线性相关系数R^2均大于0.9999.SeMet和MeSeCys的方法检出限分别为0.49μg·g^-1和0.67μg·g^-1.样品加标回收率在81.1%-112.4%之间,并且相对标准偏差RSD均小于3.1%.本方法不需要柱前衍生化,增加反向气等繁琐操作,简单快速的实现对两种硒代氨基酸的分离检测.

富硒农产品中硒代氨基酸形态及其在不同蛋白组分中的分布

目的:探究富硒西兰花、富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗不同溶解性蛋白组分中硒代氨基酸形态及分布情况。方法:利用高效液相色谱—氢化物发生—原子荧光光谱联用技术测定4种富硒禾谷类和十字花科农产品中硒代蛋氨酸(SeMet)、硒代胱氨酸(SeCys2)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代乙硫氨酸(SeEt)含量,并分析各硒代氨基酸在清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白等不同溶解性蛋白组分中的分布特点。结果:4种富硒植物的硒代氨基酸在不同蛋白组分中的含量及分布存在显著差异(P<0.05)。富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗的有机硒以SeMet形式存在,在4类蛋白组分中分布较一致且相对含量均高于66%,不存在SeEt;富硒西兰花的有机硒主要以SeCys2和SeMet为主、MeSeCys次之,前二者在清蛋白和谷蛋白组分中的分布较一致且约占有机硒含量的36%,但在球蛋白和醇溶蛋白组分中均以SeMet存在,相对含量最高达60%,其次为SeCys2约占有机硒含量的34%。富硒西兰花中存在极少量的SeEt约占有机硒含量的5%。结论:3种禾谷类农产品(富硒大豆、富硒玉米、富硒大麦苗)的不同溶解性蛋白中均以SeMet为主;而富硒西兰花的不同溶解性蛋白则以SeMet和SeCys2为主,并且其清蛋白和谷蛋白还富含较多的MeSeCys。

硒代氨基酸提取与检测技术研究进展

硒元素人体健康有重要作用,硒代氨基酸具有很强的抗癌功效。介绍了水提取法、酸提取法、酶解法、辅助提取法和循环提取法等硒代氨基酸的提取方法,并对液相色谱-质谱联用法、柱前衍生液相色谱法、毛细管电泳法、电化学检测法和氨基酸分析仪法等检测技术进行了系统的阐述,为生物体内硒形态研究和有机硒定量分析提供理论基础和技术借鉴。

微波水解-液相色谱-原子荧光光谱法测定硒蛋白中的硒代氨基酸

针对酶解法测定硒代氨基酸操作复杂,时间长,水解不完全且水解产物不稳定等问题,建立一种微波水解-液相色谱-原子荧光光谱仪测定硒蛋白中硒代氨基酸的方法。样品经HCl(6 mol/L)微波水解后,调节pH值至7.5,采用阴离子色谱柱,pH=6.0的(NH_(4))_(2)HPO_(4)(40 mmol/L)溶液为流动相,流速0.6 mL/min,等度洗脱12 min的条件对硒代胱氨酸(SeCys_(2))、甲基-硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)进行分离,用原子荧光光谱仪测定其含量。微波水解条件采用星点设计-响应面法进行优化,优选最佳水解条件为:称样量20 mg,水解温度150℃,水解时间40 min。SeCys_(2)、MeSeCys和SeMet均在0~100 ng浓度范围内呈线性关系,相关系数均大于0.999,检出限分别为0.07、0.03和0.14 mg/kg,RSD分别为5.6%、4.6%、3.7%(n=6)。用来测定硒代氨基酸,耗时短,成本低,水解完全,操作简单,水解产物稳定,能够科学评价硒蛋白中硒代氨基酸的组成,对硒蛋白产品的质量控制和溯源提供了科学方法,值得推广应用。

UPLC-Q-TOF-MS测定赣南脐橙中的硒代氨基酸

建立了测定赣南脐橙中硒代胱氨酸(SeCys_(2))、甲基-硒代半胱氨酸(MeSeCys)和硒代蛋氨酸(SeMet)的UPLC-Q-TOF-MS分析方法.样品通过超声水提取,选取AccQ·Tag^(TM)氨基酸色谱柱(3.9 mm×150 mm),以水-甲醇(90∶10)为流动相进行分离,经电喷雾离子源(ESI)正离子化后,采用多反应离子监测方式(MRM)和外标法定量.实验结果表明,SeCys_(2)、MeSeCys、SeMet在5 ng/mL~100 ng/mL范围线性良好,相关系数R^(2)≥0.997;3种硒代氨基酸的加标回收率在78.8%~92.2%之间,相对标准偏差在2.1%~7.5%之间;SeCys_(2)、MeSeCys、SeMet的检出限分别为6 ng/mL、10 ng/mL、1 ng/mL.因此,该方法可以用于富硒脐橙中3种硒代氨基酸的准确和高效检测.

利用HPLC-ESI-MS技术测量硒代氨基酸

硒在自然界中以无机硒和有机硒的形式存在,有机硒又多以硒代氨基酸的形式存在。富硒食品和饲料添加剂作为硒补充来源,通过研究HPLC-ESI-MS技术测量硒代氨基酸,可以为富硒作物的开发利用提供技术手段。一、有机硒的存在形式植物中有机硒主要有硒蛋白、硒核糖核酸以及含硒多糖等,其中,硒蛋白是大分子有机硒的主要形态,硒的抗氧化作用主要就是以硒蛋白和硒酶等形式发挥的。在生物硒丰富的产品中,硒是以硒蛋白、硒多糖和硒核酸的形式存在,其中硒蛋白的比例最高。

硒代氨基酸的化学合成及抗癌活性的研究进展

硒是目前已知的14种人体必需微量元素之一,科学补硒对人类健康十分有益。硒代氨基酸是补硒的重要物质,是近年来硒研究领域的热点。本文总结了近年来硒代胱氨酸、硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒甲基硒代半胱氨酸的合成途径和抗癌活性,为进一步研究和应用硒代氨基酸提供理论基础。

外源硒肥对茶树叶中硒代氨基酸形态及含量影响的研究

通过土施和喷施不同浓度亚硒酸钠的盆栽及大田实验,研究不同浓度的外源硒肥对茶树叶中硒代氨基酸形态及含量的影响;采用离子色谱-积分脉冲安培检测法(HPAEC-IPAD)对茶树叶中硒代氨基酸进行定性和定量分析。结果显示:3种硒代氨基酸在其线性范围内的相关系数R2在0.9994～0.9999之间,相对标准偏差RSD(%)分别为2.47、3.17和3.77,具有很好的相关性;茶树叶中硒代甲基半胱氨酸(SeMeCys)是硒代氨基酸存在的主要形式,随着喷施和土施亚硒酸钠浓度的增加,其含量呈现先增加后降低的趋势,茶树叶中总的硒代氨基酸的含量变化与此变化相符;茶树叶中总的硒代氨基酸在喷施Se180μg ml-1、12天左右时采摘最为理想,所含硒代氨基酸总量为336.1μg g-1,但喷施浓度不宜高于Se 180μg ml-1,否则茶树叶面上会出现褐色的斑点及焦化,影响其外观和品质;土施亚硒酸钠时以Se 0.25～0.5 mg kg-1,施后6个月采摘较佳,茶树叶中总的硒代氨基酸的含量为293.9～471.7μg g-1,大田试验结果与盆栽试验结果相符。

HPLC-ICP-MS测定硒蛋白中硒代氨基酸的方法

目的建立一种适用于检测硒蛋白中硒代氨基酸的有效方法。方法硒蛋白样品采用酸脱蛋白质的方法,在酸性条件下使蛋白质变性沉淀,取沉淀物运用蛋白酶K、胰蛋白酶、链蛋白酶酶解硒蛋白样品;在5 mmol/L的柠檬酸铵中加2%的甲醇溶液作为流动相,并用柠檬酸或氨水精确调节流动相的p H值(p H=4.9),用离子交换柱分离硒代半胱氨酸(Se Cys)、硒代蛋氨酸(Se Met)等硒代氨基酸,通过ICP-MS检测其含量,并运用方法学验证实验结果。结果所建立的硒蛋白中硒代氨基酸检测方法,检出限分别为3.5μg/kg、11.2μg/kg,线性范围(以Se计)为0μg/L^200μg/L,加标回收率为75%~120%。结论经实验证明,该检测方法适用于食品营养强化剂硒蛋白中硒代氨基酸的分析,此方法的建立对食品的成分分析和食品的开发利用具有重要意义。

硒蛋白中硒代氨基酸形态检测技术进展

对近年来硒蛋白中硒代氨基酸形态分析领域最新的研究成果,包括从硒蛋白中硒代氨基酸的提取技术、分离技术、检测技术等方面进行了综述。

硒代氨基酸的保健作用

硒代氨基酸是根据中国发明专利ZL 0113443.1"硒化合物的生物合成法"生产的,其商用名称是生物硒。生物硒的活性中心与活性氧自由基O.反应,消除自由基而起到抗氧化作用。生物硒活性中心结构与活性氧自由基O.结构匹配时,反应顺利进行,起到保健治疗作用,否则效果不明显。

富硒对纳豆菌发酵鹰嘴豆产血管紧张素转化酶抑制肽的影响

该研究将富硒能力较强的纳豆芽孢杆菌作为发酵菌种,鹰嘴豆为原料,以血管紧张素转化酶(angiotensin I converting enzyme,ACE)抑制率为指标,采用单因素试验和响应面优化法对纳豆芽孢杆菌富硒后产ACE抑制肽的最佳条件进行优化。同时采用超高效液相色谱-电喷雾电离-串联质谱(ultra performance liquid chromatography electrospray ionization tandem mass spectrometry,UPLC-ESI-MS/MS)法对鹰嘴豆纳豆富硒后硒代氨基酸进行定性定量分析。结果表明,L-硒代胱氨酸是鹰嘴豆纳豆富硒后主要的硒代氨基酸,纳豆芽孢杆菌富硒后产ACE抑制肽的最佳条件为接种量2%、液料比18∶1(mL/g)、发酵温度40℃,ACE抑制率可达89.24%。对比试验的结果显示,纳豆芽孢杆菌不富硒发酵鹰嘴豆产ACE抑制肽活性为66.35%,表明富硒纳豆芽孢杆菌发酵鹰嘴豆对ACE活性有良好的抑制作用。

跳出硒代蛋氨酸的固有思维模式

拉曼动物营养公司最近进行了一项比较不同形式硒的生物利用率研究。此项研究作为一种动物生产模式在蛋鸡上进行。