MiR-515-5p通过调控硫酸软骨素蛋白聚糖4表达对卵巢癌A2780细胞增殖和转移的影响及其机制

目的探讨miR-515-5p对硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)的靶向调控作用,以及对卵巢癌细胞系A2780细胞增殖和转移的影响。方法通过生物信息学工具预测miR-515-5p的靶基因。Real-time PCR和Western blotting法检测65例卵巢癌组织和与其对应的癌旁组织中miR-515-5p和CSPG4的表达。将A2780细胞分为miR-NC组、miR-515-5p组、si-NC组、si-CSPG4组、miR-515-5p+pcDNA组和miR-515-5p+pcDNA-CSPG4组。MTT法检测细胞增殖活力,Transwell检测细胞迁移和侵袭数,Western blotting检测细胞周期蛋白D1(cyclinD1)、P21、基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blotting验证miR-515-5p对CSPG4基因的调控作用。结果生物信息学分析显示,CSPG4是miR-515-5p的潜在靶基因之一。与癌旁组织相比,卵巢癌组织miR-515-5p的表达较低,CSPG4的表达较高(P<0.05)。与miR-NC组、miR-515-5p组相比,A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较低,P21蛋白的表达较高,细胞活力较低,细胞迁移和侵袭数较少(P<0.05)。与si-NC组相比,si-CSPG4组A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较低,P21蛋白的表达较高,细胞活力较低,细胞迁移和侵袭数较少(P<0.05)。与miR-515-5p+pcDNA组相比,miR-515-5p+pcDNA-CSPG4组A2780细胞cyclinD1、MMP-2和MMP-9蛋白的表达较高,P21蛋白的表达较低,细胞活力较高,细胞迁移和侵袭数较多(P<0.05)。MiR-515-5p靶向并负性调控CSPG4表达。结论MiR-515-5p通过靶向CSPG4可抑制卵巢癌细胞A2780增殖和转移。

鲨鱼硫酸软骨素二糖组成分析及其4S/6S比值的讨论

目的研究鲨鱼来源硫酸软骨素的二糖组成,并对鲨鱼硫酸软骨素(shark-CS)4S/6S(N-乙酰半乳糖胺上4-硫酸化基团/N-乙酰半乳糖胺上6-硫酸化基团)比值进行探讨。方法通过酶解液相色谱法及文献比较对鲨鱼来源的硫酸软骨素二糖组成进行分析。结果鲨鱼硫酸软骨素主要由6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-6S)、4-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-4S)、2,6-硫酸化软骨素二糖(ΔDi-2,6diS)以及无硫酸化的软骨素二糖(ΔDi-0S)组成,其百分含量分别为28%~65%、10%~44%、9%~25%、0.5%~23%。Shark-CS 4S/6S比值不超过0.8。结论提出Shark-CS 4S/6S比值的正确计算方法,解决了数据相互矛盾的问题。指出USP43中关于shark-CSΔDi-6S峰面积百分比大于ΔDi-4S峰面积百分比的不合理规定,为USP43修订提供参考与依据。

硫酸软骨素蛋白聚糖4在肿瘤免疫治疗中的作用

硫酸软骨素蛋白聚糖4 （ chondroitin sulfate proteoglycan 4, CSPG4）最先被认定为具有高免疫原性的黑色素瘤细胞表面抗原，是一种跨膜蛋白聚糖。CSPG4虽然也像其他硫酸软骨素蛋白聚糖一样，人体发育过程中在许多正常组织都有少量表达，但是在像恶性黑色素瘤等许多人类癌症和肉瘤中都普遍存在过度表达的现象。另外，CSPCA也在头颈部的鳞状细胞癌和基底细胞样乳腺癌的肿瘤干细胞中表达，这说明CSPG4可能与这些癌症的恶化和复发有关。对CSPG4细胞分子生物学的研究发现，CSPG4通过与其它细胞表面蛋白和酪氨酸激酶受体作用来调控细胞内多条信号通路，这些信号通路影响着肿瘤细胞的转移、生长、存活和对化疗药物的抗性。尽管目前还不能将CSPG4作为黑色素瘤或者基底细胞样乳腺癌预后诊断的标志．但是大量体外和体内的实验结果已经证明CSPG4的单克隆抗体对肿瘤有抑制作用。斟此，CSPG4可以作为具有研究前景的药物靶标，用于开发针对相关肿瘤的综合治疗药物。

蛋白聚糖NG2中硫酸软骨素糖胺聚糖链调节稳定转染NG2的U251细胞迁移能力

应用PCR反应使编码蛋白聚糖NG2的核苷酸在3064 3065位置的AG突变成为GC,构建突变型NG2/S999A.用表达野生型NG2和突变型NG2/S999A及空白表达载体分别稳定转染人成胶质细胞瘤U251.应用WesternBlot方法鉴定转染后的U251细胞表达野生型及突变型NG2的状态,证实突变型NG2A999稳定转染的U251细胞株表达的NG2缺失硫酸软骨素葡糖胺聚糖链(CS GAG).比较了3种U251细胞株的迁移,表明蛋白聚糖NG2中CS GAG链影响细胞的迁移能力.

嗅鞘细胞抑制脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的实验研究

目的:探讨嗅鞘细胞(OECs)移植的治疗作用及其对影响硫酸软骨素蛋白聚糖类分子(CSPGs)表达的影响。方法:将培养的OECs移植于脊髓半横断的Wistar大鼠,移植术后对模型进行数个时间点的BBB运动功能评分,损伤即移植术后4周,对实验组和对照组动物取材,进行免疫组织化学和Western blotting检测。结果:移植后4周,实验组动物的BBB评分高于对照组动物。免疫组织化学和Western blotting检测发现,实验组动物损伤处CSPGs物质表达低于对照组动物。结论:OECs促进脊髓损伤动物运动功能恢复的作用可能与抑制CSPGs分子表达有关。

云芝多糖B对巨噬细胞膜硫酸软骨素-蛋白聚糖结合氧化修饰低密度脂蛋白的影响

目的探讨野生云芝多糖水溶性新组分CVPS-B对RAW264.7巨噬细胞膜硫酸软骨素-蛋白聚糖(CS-PGs)结合氧化修饰低密度脂蛋白(Ox-LDL)的影响。方法分别用溴化氰活化的Sepharose CL-4B亲和层析及体外结合CS-A的方法分别测定CS/PGs与Ox-LDL的结合率;用离子交换层析提取RAW264.7巨噬细胞膜PGs;用1,9-二甲基亚甲基蓝(DMMB)分光光度法测定糖胺聚糖。结果在17μmol MDA·g-1protein Ox-LDL水平,不同剂量CVPS-B(10、50及100μg)在体外降低Ox-LDL(200μg)与CS-A(100μg)结合,分别降低14%、29%(P<0.05)及43%(P<0.01)。不同剂量CVPS-B(10、50及100μg)在体外降低Ox-LDL(17μmol MDA·g-1 protein)与巨噬细胞膜表面PGs结合,分别降低8%、27%(P<0.05)及38%(P<0.01)。不同剂量CVPS-B可抑制Ox-LDL(50mg·L-1,17μmol MDA·g-1 protein)诱导泡沫细胞的形成。结论CVPS-B可体外抑制巨噬细胞膜CS-PGs结合Ox-LDL。

动脉粥样硬化高低发区年轻人冠状动脉硫酸软骨素蛋白聚糖的比较研究

选取动脉粥样硬化高发区（北京）１９例、低发区（宁波）１３例年轻人冠状动脉，行硫酸软骨素蛋白聚糖免疫组织化学染色，应用图象分析系统对切片中硫酸软骨素蛋白聚糖行定量分析及比较。１例心脏标本的冠状动脉行硫酸软骨素蛋白聚糖免疫电镜染色。观察分析结果为：①硫酸软骨素蛋白聚糖阳性物质是丝网状分布于细胞外间质中，内膜中硫酸软骨素蛋白聚糖含量高于中膜；②胶体金颗粒多分布于细胞外间质的疏松区，少量贴附于胶原纤维上；③北京地区年轻人冠状动脉内硫酸软骨素蛋白聚糖含量高于宁波地区。提示硫酸软骨素蛋白聚糖在冠状动脉内含量差异可能与高、低发区冠状动脉粥样硬化发病率不同有关。

大鼠脊髓硫酸软骨素蛋白多糖4细胞的生后发育特征

目的研究大鼠脊髓中硫酸软骨素蛋白多糖4(NG2)细胞生后发育特征。方法采用免疫组织化学及West-ern blot,观察大鼠生后不同发育阶段的脊髓中NG2细胞形态变化。结果大鼠生后各发育阶段的脊髓内均有NG2阳性细胞表达;NG2细胞的胞体逐渐增大,其形态由圆形或卵圆形变为不规则形,突起数目和长度随之增加,与同时期大脑皮质的NG2细胞形态比较,脊髓内的NG2细胞胞体要大,突起短而少。P1d脊髓内NG2表达值最高,为0.75±0.11,P7d显著下降为0.40±0.05,P21d表达值降至最低,为0.16±0.06,P60d回升为0.37±0.06。结论在大鼠不同发育阶段的脊髓内,NG2细胞形态数量有所不同;P7d到P21d是脊髓内神经纤维髓鞘主要形成期;脊髓内NG2细胞可能处于少突胶质细胞系发育的早期阶段。

寡核苷酸对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达调控的实验研究

目的用人工合成的内切磷硫酰寡脱氧核糖核苷酸(ODN-PSs)对脊髓损伤进行干预,分析硫酸软骨素蛋白聚糖表达,探讨ODN-PSs与神经损伤修复的关系。方法采用改良AllenWD法[1]制成脊髓损伤模型后,再随机分为ODN-PSsXT-1实验组30只和实验对照组30只进行干预实验;利用免疫组化染色,Western blot和RT-PCR方法对细胞表达的硫酸软骨素蛋白聚糖和木糖基转移酶-1(XT-1)mRNA进行分析。结果免疫印迹和RT-PCR分析结果表明,XT-1ODN-PSs可减少减少CSPG蛋白和XT-1基因的表达。结论人工合成XT-1ODN-PSs寡核苷酸对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达有明显的抑制作用,从而有利于损伤神经核突起的再生。

寡核苷酸对星形胶质细胞硫酸软骨素蛋白聚糖表达调控的实验研究

目的用人工合成的内切磷硫酰寡脱氧核糖核苷酸(ODN-PSs)对星形胶质细胞进行体外干预培养,分析硫酸软骨素蛋白聚糖表达,探讨ODN-PSs与神经损伤修复的关系。方法采用星形胶质细胞体外诱导培养技术,制备得到ODN-PSs条件培养的细胞;利用斑点杂交、免疫印迹和RT-PCR方法对细胞表达的硫酸软骨素蛋白聚糖和木糖基转移酶-1(XT-1)mRNA进行分析。结果制备的星形胶质细胞采用抗GFAP抗体进行免疫细胞化学染色法进行鉴定,纯度在95%以上;条件培养星形胶质细胞的免疫印迹和RT-PCR分析结果表明,XT-1 ODN-PSs可减少星形胶质细胞CSPG蛋白和XT-1基因的表达。结论人工合成XT-1 ODN-PSs寡核苷酸对星形胶质细胞硫酸软骨素蛋白聚糖表达有明显的抑制作用,从而有利于损伤神经核突起的再生。

鹿茸硫酸软骨素蛋白聚糖的分离纯化研究

报道了用DEAE-纤维素(DE-23)离子交换柱层析从鹿茸二杠中分离、纯化及鉴定硫酸软骨素的方法。首先用适量蒸馏水浸泡鹿茸二杠并将其捣碎,离心取沉淀用盐酸胍浸提,浸提液对尿素液透析后经DEAE-纤维素(DE-23)离子交换柱层析,吸附大量的硫酸软骨素;再用含盐尿素溶液梯度洗脱、分离后,经软骨素酶消化及琼脂糖凝胶电泳,与硫酸软骨素标准品比较,证实得到的物质为纯的硫酸软骨素蛋白聚糖,其得率约为48.77%。该方法使硫酸软骨素分离纯化一步完成,大大简化了纯化步骤。

胰腺癌组织中硫酸软骨素蛋白多糖4的表达及其临床意义

目的探讨硫酸软骨素蛋白多糖4（chondroitin sulfate proteoglycan 4,CSPG4）在胰腺癌（pancreatic carcinoma）中的表达及其临床意义。方法收集2007年6月至2010年6月西南医院肝胆外科的胰腺导管腺癌及正常胰腺组织（距肿瘤边缘〉2 cm）标本各160例,其中男性124例,女性36例;年龄33-75（56.98±10.75）岁。应用免疫组织化学染色法检测其中CSPG4的表达,分析CSPG4的表达与临床病理参数的相关性;采用Kaplan-Meier法分析胰腺癌中CSPG4的表达与患者预后的关系,Cox回归模型分析胰腺癌患者预后的影响因素。结果胰腺导管腺癌组织中CSPG4的阳性表达率显著高于正常胰腺组织（46.25%vs 10.00%,P〈0.01）。胰腺癌中CSPG4的表达与有无淋巴结转移或血管侵犯、肿瘤T分期、TNM分期显著相关（P〈0.01）。胰腺癌中CSPG4阳性表达患者术后总生存率显著低于阴性表达者（P〈0.01）。CSPG4的表达是影响胰腺癌患者预后的独立危险因素之一（P〈0.01）。结论 CSPG4在胰腺导管腺癌中异常高表达,其表达水平是评估患者预后的独立预测指标,提示CSPG4可能成为胰腺癌治疗的一个新靶点。

硫酸软骨素蛋白多糖4细胞在成年大鼠中枢神经系统的定位分布及其异质性

目的：研究硫酸软骨素蛋白多糖4细胞（NG2细胞）在成年大鼠大脑与脊髓的定位分布及其异质性.方法：应用免疫组织化学、免疫荧光方法观察大脑与脊髓NG2阳性细胞分布及其形态特征.采用Image Pro Plus6.0图像分析软件对NG2阳性细胞胞体面积、突起个数、突起长度进行测量.应用SPSS17.0软件对结果进行统计学分析.结果：NG2细胞在成年大鼠中枢神经系统内广泛分布;在脑内NG2细胞突起数目较多,胞体较小;而在脊髓内NG2细胞突起较少,但其胞体却较大.结论：在脑和脊髓内NG2细胞的形态存在异质性,提示其在成年大鼠中枢神经系统两个部位具有不同的功能.

督脉电针对脊髓损伤后硫酸软骨素蛋白聚糖表达的影响

目的：探索督脉电针对大鼠脊髓损伤（spinal cord injury SCI）后硫酸软骨素蛋白聚糖类分子（CSGPs）表达和后肢功能的影响。方法：取Wistar大鼠80只,用改良的Allen法制成脊髓损伤模型,随机分为对照组（40只）、督脉电针组（40只）,督脉电针组于术后开始接受督脉电针治疗。于术后第1、3、7、14、21、28天进行BBB（Basso-Beattle-Bresnahan）运动功能评分,应用免疫组织化学技术检测脊髓组织硫酸软骨素蛋白聚糖类分子（CSGPs）的表达,并用图像分析仪进行定量分析。结果：术后第3~28天,督脉电针组的BBB评分较对照组明显提高,术后第1天,对照组和督脉电针组受损脊髓中CS-GPs的表达明显增加;第3天时均达到高峰,但督脉电针组低于对照组（P〈0.05）。第7、14、21、28天,与对照组比较,督脉电针组CSGPs表达也较低（P〈0.01）。结论：督脉电针使脊髓损伤后CSGPs表达减少,促进其肢体运动功能恢复。这可能有利于抑制脊髓损伤后抑制因子的表达、消除脊髓继发性损伤,保存了残存正常脊髓组织并促进神经轴突再生,改善其肢体运动功能。

硫酸软骨素蛋白多糖4在口腔鳞状细胞癌组织中的表达及其临床意义

目的:研究硫酸软骨素蛋白多糖4(CSPG4)在口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的表达及其临床意义。方法:应用荧光定量PCR及免疫组织化学技术检测42例OSCC组织及相应的癌旁正常组织(>2cm)中CSPG4mRNA及其蛋白的表达,并分析其与患者临床特征之间的关系。结果:CSPG4 mRNA及其蛋白在OSCC组织中的表达均较癌旁组织显著上调(均P<0.05),CSPG4mRNA及其蛋白的表达与患者年龄、民族、OSCC分化程度无关(P>0.05),与性别、淋巴结转移及临床分期相关,男性患者中的表达较女性患者高,转移组高于非转移组,Ⅲ～Ⅳ期高于Ⅰ～Ⅱ期(均P<0.05)。结论:CSPG4与OSCC的发生、发展及转移有着密切的联系。

硫酸软骨素蛋白聚糖与脑损伤神经修复

硫酸软骨素蛋白聚糖是由硫酸软骨素链和核心蛋白共价结合形成的大分子复合物,作为脑组织损伤后胶质瘢痕的增生产物参与了脑神经的修复过程。不同类型的硫酸软骨素蛋白聚糖在脑组织损伤后的表达有着时间性和空间性差异,从而对脑损伤神经修复过程中的轴突再生及突触重建发挥不同的调节作用。

硫酸软骨素蛋白聚糖对MC3T3-E1细胞株矿化的影响

目的:观察硫酸软骨素蛋白聚糖(chondroitin sulfate proteoglycan,CSPG)对前成骨细胞株MC3T3-E1矿化过程中碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性和钙离子沉积量的影响。方法:MC3T3-E1细胞株在含不同浓度CSPG(0、5、10、15mg/L)诱导液中培养,不加CSPG组为对照组,其余3组为实验组,细胞诱导14d时行ALP染色和活性检测,21d时行茜素红染色和钙离子沉积量检测。结果:与对照组比较,各实验组ALP和茜素红染色面积随CSPG浓度增加逐渐减小,颜色变浅;定量分析结果显示,钙离子沉积量整体差异有统计学意义(P<0.05),ALP活性整体差异无统计学意义。结论:在本实验周期内,CSPG以剂量依赖方式抑制MC3T3-E1细胞株钙离子的沉积。

软骨素酶ABC去除化学去细胞神经中硫酸软骨素蛋白多糖

目的:观察软骨素酶ABC(ChABC)是否能降解化学去细胞神经(CEAN)中的硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)。方法:取SD大鼠的坐骨神经,按化学法制备去细胞神经,ChABC浸泡16h,行HE染色、CSPG及基底膜素层粘连蛋白(LN)免疫组化染色,观察去细胞神经的结构及成分变化。Wistar大鼠15只,切除左坐骨神经5mm,随机分为A、B、C 3组各5只,分别采用自体神经、CEAN、经ChABC处理的CEAN修复缺损,术后15d测量各组神经纤维生长情况。结果:ChABC处理去细胞神经后,CSPG免疫组化染色示CSPG表达显著降低;HE染色显示结构无明显变化;LN免疫组化染色无明显变化。术后2周A组神经再生距离长于B、C组(P<0.05),C组优于B组(P<0.05)。结论:ChABC可降低化学去细胞神经中的CSPG,有利于促进神经再生。