碱裂解法提取质粒DNA的研究

对质粒DNA及其结构、形态和功能进行了综述 ,介绍了碱裂解法提取质粒DNA的基本步骤 ,并对其提取过程中的注意事项进行了剖析 。

一种适合芽孢杆菌质粒DNA提取的改良碱裂解法

以Birnboim和Doly的质粒提取方法为基础 ,通过缩短菌体培养时间 ,增加菌体收集量 ,并对提取过程中所用的三种主要溶液的用量进行适当调整等 ,摸索出质粒提取的一种改良碱法 .用改良后的碱法对浸麻芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌进行质粒提取 。

采用碱裂解法提取DNA鉴定细菌和酵母菌

采用碱裂解法对分离自四川泡菜的8株细菌和4株酵母菌进行DNA提取,对菌株DNA提取物浓度和纯度、PCR扩增产物质量、核苷酸测序和菌株鉴定结果进行分析,并对该方法的测试成本和耗时进行估算。结果表明,采用碱裂解法提取菌株DNA的浓度均大于40 ng/μL,A260/A280大于1.9,表明该方法下提取菌株DNA的质量较好。12株泡菜菌株被鉴定至种水平,且鉴定结果与试剂盒法一致,表现出较高的测试准确性。该方法的测试成本估算为50元/100次,测试耗时为50 min,明显优于目前普遍使用的试剂盒法。

一种适于PCR扩增的快速提取猪基因组DNA的碱裂解法

以大白猪背最长肌、脾脏、耳组织为材料,用碱裂解法和酚-氯仿法分别提取猪基因组DNA,用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的产量和质量,结果发现2种方法提取的DNA产量没有明显差异。通过猪MC4R、TEF-1基因特异引物进行PCR扩增均能得到目的条带。碱裂解法提取的DNA原液稀释5倍、10倍后作为模板均获得了较为稳定的扩增产物。该结果表明,简单、快速、无毒的碱裂解法适用于动物定性PCR检测时DNA的提取。

碱裂解法提取重组质粒DNA及PCR验证

目的:筛选获得高质量质粒,为进一步克隆、测序奠定基础。方法:采用常规的碱裂解法从大肠杆菌重组质粒中提取质粒DNA,核酸检测仪测定提取质粒DNA产量和纯度,并用前期DDRT-PCR时采用的引物进行PCR验证性实验,琼脂糖凝胶电泳检测,并对电泳图谱加以分析和鉴定。结果:利用常规的碱裂解法提取重组质粒,通过酚和氯仿的抽提,可以有效地去除蛋白质杂质,用含有RNase抑制剂的无菌水溶解质粒提取效果最好,得到的质粒DNA无RNA污染,纯度比较高,OD260/OD280比值介于1.8～2.0之间,OD260/OD230比值大于2.0,经PCR反应验证后与预计相符。结论:通过该方法获得的重组质粒纯度和浓度都比较高,且PCR验证与预计相一致,可以满足后续分子生物学实验的要求。

稀碱裂解法从啤酒糟中提取核糖核酸的研究

研究了稀碱裂解法从啤酒糟中提取核糖核酸的方法,通过单因子和正交试验,获得了该工艺方法的最佳试验条件,即NaOH浓度为0.2%(体积质量),碱裂解煮沸时间为25min,pH值为5.5。

碱裂解法提取质粒DNA方法的改进

对碱裂解法提取质粒DNA的方法进行了一些改进 ,在室温下裂解菌体和变性DNA ;用NH4 Ac和LiCl同步沉淀除去样品中的蛋白质和RNA ,降低了对超螺旋质粒的剪切作用 ,得到高质量的质粒DNA。

不同碱裂解法快速提取甜菜大群体DNA的研究

尝试使用一种新的方法提取甜菜干种子DNA,该方法不需要使用CTAB、SDS及其它提取DNA中需要使用的常规药剂,该方法仅需要使用NaOH一种试剂,提取几十份DNA只需要10几分钟的时间,并且提取的DNA完整性很好,完全可以满足甜菜SSR扩增的需要,为将来快速鉴定甜菜品种纯度和真伪性等工作奠定了坚实的基础。

经典碱裂解法质粒大量提取方法的改良

利用滤膜过滤技术对经典碱裂解法进行改良,并将改良后的提取效果与经典碱裂解法和试剂盒法进行比较。结果表明,改良法提取的质粒DNA浓度显著高于经典碱裂解法和试剂盒法,并且质粒纯度与试剂盒法相近。改良方法适用于实验室的应用与推广。

一种制备质粒DNA的改良碱裂解法

目的介绍一种快速获取高纯度质粒DNA的方法。方法使用替代试剂,建立改良的碱裂解法进行质粒DNA提取,并用琼脂糖电泳验证所得的质粒的质量,紫外测量估算产量及纯度。限制性酶切验证其用度。结果琼脂糖电泳显示质粒DNA条带明亮,以超螺旋方式为主。A260/280为1.903,含量为320μg/mL,酶切后得到约500bp的目的片段。结论改良碱裂解法操作简单、实用,所得样品纯度高,达到了分子生物学常规实验的要求。

碱裂解法提取质粒DNA的研究

目的对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究。方法采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取。结果方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多。结论溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质粒DNA量的多少,溶液Ⅲ中的醋酸钾是蛋白质能否去除的一个重要因素。

一种利用碱裂解法快速筛选重组子的方法

根据碱裂解法提取质粒DNA的原理,利用碱裂解法快速筛选到重组子,该方法快迅、准确,可应用于基因克隆中的重组菌落快迅检测。

碱裂解法提取P.ananatis变异体质粒DNA改良研究

[目的]对常规碱裂解法进行改进。[方法]分别改变溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间,少量提取质粒DNA。根据产率和纯度,得出各溶液的最佳反应时间,以紫外分光光度法、琼脂糖凝胶电泳结果验证提取效果。[结果]将常规碱裂法中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及无水乙醇的反应时间由原来的5、5、5、15 min分别缩短至0、1、1、5 min,纯度达1.8~1.9,产率达180.0~248.0μg/ml。[结论]改良法提取质粒DNA,总提取时间缩短了23 min。

基于碱裂解法川贝母的鉴别

利用碱裂解法提取川贝母DNA,考察不同裂解液配比对川贝母DNA质量与电泳成功率的影响,并与现行方法相比较。结果表明,含有200 mmol/L NaCl溶液,5 mmol/L Mg 2 Cl溶液,1%Triton X-100,1%PVP,1%SDS,2 mmol/L EDTA,0.1 mol/L Tris-HCl配比液的碱裂解液具有最佳的DNA提取效果,此碱裂解液提取的DNA电泳条带与现行方法一致,可节省15~20 min,单个样品检验成本可降至0.01元。采用该方法对25个市售贝母样本进行鉴定,可快速鉴别出川贝母的真伪。

使用碱裂解法快速提取药材DNA方法的研究

目的:建立药材DNA快速提取方法。方法:使用碱裂解缓冲液提取药材DNA,考察提取液配方组成和中和剂种类对药材DNA纯度、浓度的影响。利用优化提取液提取了144个中药材DNA,动物药使用COⅠ、植物药使用psbA-trnH通用引物进行PCR扩增。结果:0.5 mol.L-1氢氧化钠、1%PVP和1%Triton×100具有最佳的DNA提取效果。对144个中药材进行PCR扩增,利用琼脂糖凝胶电泳可检测到123个中药材DNA的PCR产物。碱裂解法可用于快速提取蛇类药材DNA,并成功用于乌梢蛇、金钱白花蛇的分子鉴定。结论:优化的碱裂解法可用于提取中药材基因组DNA,其提取时间可控制在10 min左右,且避免了酚、三氯甲烷等对人体有毒试剂的使用,对药材快速分子鉴定体系的建立将发挥重要作用。

碱裂解法快速提取中药炒制品DNA的研究

该文旨在探索一种适用于中药炒制品DNA快速提取的方法。以氢氧化钠,1%PVP40和1%Triton X-100配制成碱裂解缓冲液,Tris-HCl为中和液,经加热裂解和中和2步提取不同炒制方法制备的中药炮制品的DNA,选择2种方法对DNA进行纯化,并以纯化后DNA作为模板利用通用引物进行PCR扩增。结果表明优化碱裂解法可简单快速的提取出药材DNA,槐米炒制品DNA质量浓度为(420.61±123.91)g·L-1,且使用5%Chelex-100树脂纯化可以提高DNA提取浓度。研究结果证明优化碱裂解法适用于中药炒制品的DNA快速提取。

碱裂解法快速提取虫草属真菌DNA研究

目的探索一种适用于虫草属基因组DNA快速提取的方法。方法在无液氮条件下使用碱裂解法提取虫草DNA,使用ITS通用引物进行PCR扩增。考察了提取液配方、煮沸时间对DNA提取的影响以及中和剂Tris-HCl用量对PCR扩增的影响。利用优化的提取方法提取了虫草属5种虫草并用ITS通用引物进行PCR扩增。结果 80μl 0.5 mol/L Na OH进行提取,加入160μl 0.1 mol/L Tris-HCl中和,离心即可在10min内提取出虫草属真菌的DNA,PCR扩增能获得清晰目的条带。结论优化的碱裂解法可用于虫草属DNA的快速提取。