检测多药耐药鲍氏不动杆菌的碳青酶烯酶及整合酶基因

目的检测多药耐药鲍氏不动杆菌(MDRAba)的碳青酶烯酶及整合酶基因。方法从70株对耐亚胺培南鲍氏不动杆菌中用PCR方法测定碳青酶烯酶OXA23类、OXA24类、OXA51类和OXA58类基因及Ⅰ类和Ⅱ类整合酶基因,对扩增阳性的碳青酶烯酶基因进行测序分析;抗菌药物敏感试验采用琼脂稀释法。结果获得OXA-23类基因阳性56株,占80.0%,OXA-58类基因阳性1株,仅1株菌OXA51类基因阴性;Ⅰ类整合酶基因阳性61株,占87.1%,未测得OXA24类碳青酶烯酶和Ⅱ类整合酶基因;序列分析提示分离的CRAba为OXA-23型和OXA-58型,所测菌株对环丙沙星、头孢他啶、庆大霉素、哌拉西林/他唑巴坦高度耐药,对多黏菌素B一致性敏感。结论新近出现的CRAba菌株主要是以Ⅰ类整合子携带的OXA-23型碳青酶烯酶。

4种酶抑制剂分类检测碳青酶烯酶的研究

目的 研究联合应用EDTA、二巯基乙酸 ( 2MA)、克拉维酸 (CLAV)和舒巴坦 (SUL) 4种 β 内酰胺酶抑制剂建立分类检测碳青酶烯酶 (CHBls)的简便实用方法。方法 采用多底物纸片 多抑制剂协同法 (MDMIST)分类检测 4 6株碳青酶烯类抗生素耐药的临床分离株 (铜绿假单胞菌 2 0株 ,嗜麦芽寡养单胞菌 12株 ,黄杆菌属 7株 ,不动杆菌属 5株 ,普罗威登斯菌属 2株 )的CHBls。结果 对多数菌 ,2MA检出率最高 ,但在铜绿假单胞菌以EDTA最高 ;CLAV、SUL检出率没有 2MA、EDTA高 ;2MA在嗜麦芽寡养单胞菌、普罗威登斯菌属、黄杆菌属中检出率最高 ,EDTA在铜绿假单胞菌中最高 ,SUL在不动杆菌最高 ;不同底物间 ,一般IMP检出率最高 ,但在黄杆菌属 ,CAZ最高 ;在 3种细菌 ,存在IMP敏感 /MER耐药表型 ,该表型多为SCHBLs ,少数为其他机制。结论 MDMIST简便实用 ;不同酶抑制剂在不同种菌间及同种菌中的检出率不同 ;不同菌所产的CHBLs的优势类型不同 ;不同底物检出率不同。

铜绿假单胞菌耐碳青酶烯类抗菌药物机制分类检测的研究

目的 研究铜绿假单胞菌(PA)耐碳青酶烯类抗菌药物机制的分布。方法 应用多底物 多抑制剂协同法检测34株耐碳青酶烯类抗菌药物PA临床分离株,推测其耐药机制并分析其分布。结果 D2 缺乏、外排泵和产金属酶分别占3种机制的14 7%、35 3%和50 0%。结论 产金属酶是PA耐碳青酶烯类抗菌药物最主要机制。

鲍氏不动杆菌对亚胺培南耐药性及碳青酶烯酶基因型分析

目的了解蚌埠医学院第一附属医院临床分离的鲍氏不动杆菌耐药性及碳青酶烯酶基因型。方法采用琼脂稀释法测定最低抑菌浓度(MICs),用PCR法扩增碳青酶烯酶blaOXA基因和金属酶基因IMP、VIM,对阳性基因型进行全长扩增并测序鉴定。结果临床分离108株鲍氏不动杆菌有56株对亚胺培南耐药,亚胺培南耐药菌株碳青酶烯酶基因型分析显示,检测出blaOXA-23型基因21株,3株检测出blaOXA-58,50株blaOXA-64-like检测阳性,blaOXA-20、blaOXA-24、blaOXA-48、blaOXA-50、blaOXA-55、blaOXA-60检测结果均为阴性,未检测到金属酶IMP、VIM基因。结论临床分离的鲍氏不动杆菌主要产OXA-23、OXA-51型碳青酶烯酶,这可能与临床上经常使用碳青酶烯类抗菌药物有关。

OXA-23碳青酶烯酶在鲍氏不动杆菌烧伤分离株中流行

目的了解烧伤科鲍氏不动杆菌分离株碳青酶烯酶的分布情况。方法测定20株分离自烧伤科鲍氏不动杆菌对20种抗菌药物的敏感性,采用PCR方法进行OXA-23群、OXA-24群、OXA-51群、OXA-58群、IMP、VIM及SIM等7种碳青酶烯酶基因检测,并对部分阳性产物进行基因测序。结果烧伤科20株鲍氏不动杆菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物耐药率除左氧氟沙星和头孢哌酮/舒巴坦外均>85%,PCR检测OXA-23群基因19株(95%)呈阳性,其他碳青酶烯酶基因均为阴性;部分阳性产物经测序比对与OXA-23群基因CAB69042.1相同。结论烧伤科鲍氏不动杆菌分离株对β-内酰胺类抗菌药物多药耐药非常严重,OXA-23碳青酶烯酶在鲍氏不动杆菌烧伤分离株中流行。

耐碳青酶烯鲍氏不动杆菌碳青酶烯酶基因型的研究

目的研究北京天坛医院耐碳青酶烯鲍氏不动杆菌产碳青酶烯酶的类型。方法收集北京天坛医院耐碳青酶烯鲍氏不动杆菌20株,对碳青酶烯酶基因OXA-23、OXA-24、IMP、VIM进行聚合酶链反应(PCR)及序列分析。结果20株耐碳青酶烯鲍氏不动杆菌全部检测到OXA-23型基因,所有菌株均未检测到OXA-24、IMP、VIM型基因。结论北京天坛医院耐碳青酶烯鲍氏不动杆菌的碳青酶烯酶基因型以OXA-23型为主。

鲍氏不动杆菌产碳青酶烯酶基因型检测及其耐药性研究

目的了解医院鲍氏不动杆菌（ABA）产碳青酶烯酶基因型分布及其与碳青酶烯类等临床常用抗菌药物耐药的相关性。方法收集医院2008年1-12月临床分离的100株ABA,PCR检测所有菌株I MP、VI M-1、VI M-2、SI M-1、OXA-23、OXA-24、OXA-51、OXA-58等碳青酶烯酶基因型;用纸片扩散（K-B）法检测其对16种常用抗菌药物的耐药性;用E-test法检测产不同碳青酶烯酶基因型ABA对亚胺培南、美罗培南的MIC值。结果 100株ABA有78株产OXA-66型碳青酶烯酶、31株产OXA-23型碳青酶烯酶、其中30株同时产OXA-66型和OXA-23型碳青酶烯酶;21株非产碳青酶烯酶菌株对常用抗菌药物的耐药率除头孢哌酮为38.1%外,其余均〈10.0%;单产OXA-66型碳青酶烯酶菌株除对亚胺培南、头孢哌酮/舒巴坦、氨苄西林/舒巴坦、哌拉西林/他唑巴坦的耐药率分别为0、10.4%、33.3%和47.9%外,对其他抗菌药物耐药率均〉50.0%;而同时产OXA-23、OXA-66型碳青酶烯酶菌株除对头孢哌酮/舒巴坦耐药率为53.3%外,对其余抗菌药物耐药率均〉95.0%;非产碳青酶烯酶菌株对IPM、MEM的MIC值均在0.19~0.5μg/ml,而单产OXA-66型碳青酶烯酶菌株则在2~4μg/ml,所有产OXA-23型碳青酶烯酶菌株则均〉32μg/ml。结论 OXA-66型碳青酶烯酶在医院ABA中广泛存在,产碳青酶烯酶菌株的耐药率显著高于非产碳青酶烯酶菌株;OXA-66型碳青酶烯酶对碳青酶烯类药物呈低水平耐药;OXA-23型碳青酶烯酶水解碳青酶烯类药物的能力可能强于OXA-66型;同时产OXA-23型和OXA-66型碳青酶烯酶可能是导致ABA对碳青酶烯类药物高度耐药的主要原因。

肝移植术后感染乙酸钙不动杆菌碳青酶烯酶的研究

目的研究医院肝移植术后感染乙酸钙不动杆菌产生碳青酶烯酶的基因型。方法用WHONET 5.4软件分析自肝移植患者分离的不动杆菌属的耐药性;收集对亚胺培南耐药且具有多药耐药性的乙酸钙不动杆菌8株;等电聚焦电泳测定酶的等电点;脉冲场凝胶电泳(PFGE)确定耐药株的亲缘关系;对TEM、SHV型基因及碳青酶烯酶基因OXA、IMP、VIM进行聚合酶链反应(PCR)及序列分析。结果肝移植术后感染的耐亚胺培南乙酸钙不动杆菌对多种药物耐药性高,PCR及序列分析证实8株菌均产生OXA-23型碳青酶烯酶(pI=6.7);PFGE发现器官移植病区有耐药株的克隆传播。结论医院器官移植病区存在产OXA-23型碳青酶烯酶乙酸钙不动杆菌的克隆株播散流行,加强细菌的耐药性监测,对控制感染有重要意义。

产碳青酶烯酶肺炎克雷伯菌的检测与分析

目的探讨医院临床分离的超广谱β-内酰胺酶阳性肺炎克雷伯菌产碳青酶烯酶的情况及对产碳青酶烯酶菌株进行分析,为临床合理选用抗菌药物提供依据。方法收集196株临床分离超广谱β-内酰胺酶阳性的肺炎克雷伯菌,通过改良Hodge法检测其碳青酶烯酶,用纸片琼脂扩散法和VITEK-AMS 60全自动微生物分析仪进行药物敏感性试验。结果 196株超广谱β-内酰胺酶阳性的肺炎克雷伯菌中检出1株产碳青酶烯酶菌株,该菌株对亚胺培南和美罗培南在内的碳青酶烯类、青霉素类、头孢菌素类抗菌药物耐药。结论通过改良Hodge法检测碳青酶烯酶操作简单,结果易判读,且准确性高,适合临床微生物实验室常规采用。

碳青酶烯类抗生素耐药弗劳地枸橼酸杆菌KPC-2基因的检测

目的研究弗劳地枸橼酸杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法采用琼脂对倍稀释法检测弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南以及其他常见药物的最低抑菌浓度(MIC)。等电聚集电泳分析其β-内酰胺酶类型,聚合酶链反应(PCR)和DNA序列分析检测β-内酰胺酶基因型,接合试验分析其耐药质粒传递情况。结果弗劳地枸橼酸杆菌对亚胺培南和美罗培南的MIC均为64 mg·L-1,对青霉素类、头孢菌素类、头孢西丁、氨曲南和氨基糖苷类均耐药。转移接合结果显示对亚胺培南和美罗培南的耐药性可以通过质粒转移。等电聚焦电泳结果显示转移接合子具有等电点(PI)约为5.0、7.5的2种β-内酰胺酶。PCR检测及序列分析结果显示该菌产生KPC-2基因。结论 KPC-2型碳青酶烯酶的产生是引起弗劳地枸橼酸杆菌对碳青酶烯酶耐药的主要原因,并且该耐药性能通过质粒进行转移。

多重PCR快速检测鲍氏不动杆菌D类碳青酶烯酶相关基因

目的建立一种快速的多重聚合酶链反应(PCR)方法检测鲍氏不动杆菌D类碳青酶烯酶基因。方法根据blaOXA-51、blaOXA-23的保守区设计引物,建立检测D类碳青酶烯酶blaOXA-51、blaOXA-23基因的多重PCR方法。结果30株鲍氏不动杆菌中有24株同时扩出blaOXA-51和blaOXA-23,另外6株只扩出blaOXA-51条带。结论实验所建立的多重PCR能快速检测鲍氏不动杆菌D类碳青酶烯酶基因。

革兰阴性杆菌产碳青霉烯酶表型检测及耐药性分析

随着碳青酶烯类抗生素（CAB）的应用增多,细菌对CAB的耐药性也在不断增加,而且CAB细菌（RCAB）大多数呈多重耐药,这就给临床治疗造成极大困难。革兰阴性菌对CAB耐药的主要机制之一是产生各种碳青酶烯酶（CHBLs）,CHBLs可分为丝氨酸类（SCHBLs）和金属类（MCHBLs）两大类,不同类型的CHBLs的特性不同,

铜绿假单胞菌耐碳青酶烯类抗菌药物机制分类检测的研究

目的研究铜绿假单胞菌(PA)耐碳青酶烯类抗菌药物机制的分布。方法应用复合纸片法检测47株临床分离的耐碳青酶烯类抗菌药物PA临床分离株,据表型推测其耐药机制并分析其分布。结果产金属酶、D2缺失、外排泵出分别占29.8%、31.9%、31.9%,产其他β-内酰胺酶占6.4%。结论产金属酶是PA耐碳青酶烯类抗菌药物最主要机制之一,准确的实验室检测不仅可以帮助临床合理选用抗菌药物并可减少细菌耐药性的传播。

铜绿假单胞菌耐碳青酶烯类抗菌药物机制分类检测的研究

目的研究铜绿假单胞菌(PA)耐碳青酶烯类抗菌药物机制的分布。方法应用复合纸片法检测47株临床分离的耐碳青酶烯类抗菌药物PA临床分离株,据表型推测其耐药机制并分析其分布。结果产金属酶、D2缺失、外排泵出分别占29.8%、31.9%、31.9%,产其他β-内酰胺酶占6.4%。结论产金属酶是PA耐碳青酶烯类抗菌药物最主要机制之一,准确的实验室检测不仅可以帮助临床合理选用抗菌药物并可减少细菌耐药性的传播。

铜绿假单胞菌耐碳青酶烯类抗菌药物机制分类检测的研究

目的研究铜绿假单胞菌(PA)耐碳青酶烯类抗菌药物机制的分布。方法应用复合纸片法检测47株临床分离的耐碳青酶烯类抗菌药物PA临床分离株,据表型推测其耐药机制并分析其分布。结果产金属酶、D2缺失、外排泵出分别占29.8%、31.9%、31.9%,产其他β-内酰胺酶占6.4%。结论产金属酶是PA耐碳青酶烯类抗菌药物最主要机制之一,准确的实验室检测不仅可以帮助临床合理选用抗菌药物并可减少细菌耐药性的传播。

多重PCR检测鲍曼不动杆菌OXA型碳青酶烯酶基因

目的:利用一种多重PCR方法检测鲍曼不动杆菌OXA型碳青酶烯酶基因。方法:利用耐药性试验筛选出耐药鲍曼不动杆菌菌株;根据OXA型碳青酶烯酶基因设计引物,利用多重PCR方法检测三类OXA基因(OXA-23-like,OXA-58-like andOXA-51-like)。结果:30株鲍曼不动杆菌中有25株同时扩出OXA-51和OXA-23,1株扩出OXA-58条带和OXA-51,4株只扩出OXA-51;结论:实验所的多重PCR方法简单、快速、准确,可广泛应用临床鲍曼不动杆菌OXA型碳青酶烯酶基因的检测。

临床分离CRE菌株碳青霉烯酶表型检测和耐药情况分析

目的 研究临床分离碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)的分离情况和耐药机制,为临床抗感染治疗提供参考。方法 从临床分离的200株非重复肠杆菌目细菌中筛选出亚胺培南或美罗培南耐药菌株,用碳青霉烯酶抑制剂增强法进行表型检测。结果 200株肠杆菌目细菌中检出CRE 25株,主要分布在重症监护室(ICU)(60%),其中以肺炎克雷伯菌为主(88%)。25株CRE碳青霉烯酶表型检测阳性19株,其中A类酶阳性17株,B类酶阳性2株。结论临床分离CRE菌株多分布在ICU,以肺炎克雷伯菌为主,耐药机制主要是产A类碳青霉烯酶,相关科室应重视该类菌的隔离与防护。

非发酵革兰阴性菌碳青酶烯酶检测方法的比较研究

细菌碳青酶烯酶的准确检测对于控制耐药基因的传播具有重要意义。截至目前，已有多种成熟的商业化检测方法用于产碳青酶烯酶肠杆菌科细菌检测，但这些检测方法对于非发酵菌碳青酶烯酶的检测能力目前不甚清楚。

对亚胺培南不敏感的肺炎克雷伯菌耐碳青霉烯类药物的机制研究

目的研究31株对亚胺培南不敏感的肺炎克雷伯菌的耐药基因及外膜蛋白的改变。方法纸片扩散法筛选对亚胺培南不敏感的肺炎克雷伯菌,进行金属酶表型初筛试验、常见耐药基因PCR及测序、外膜蛋白分析,研究其耐药基因及外膜蛋白改变。结果 31株肺炎克雷伯菌中,22株产KPC-2酶,1株产IMP-4酶,产碳青霉烯酶菌株外膜蛋白均有改变。结论 KPC型碳青霉烯酶仍为肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素不敏感的主要原因,但金属酶IMP的出现,提示应加强对金属酶的检测。

鲍氏不动杆菌医院感染株耐碳青酶烯类药物的耐药机制研究

目的了解医院内获得性耐碳青酶烯类鲍氏不动杆菌(CRAB)的耐药性、同源性、耐药机制。方法采用VITEK-32细菌鉴定仪配套药敏试剂GNS-448进行抗菌药物敏感性试验;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析同源性;通过改良三维试验、聚合酶链反应(PCR)、基因测序等方法分析耐药机制。结果7株耐碳青酶烯类鲍氏不动杆菌显示出同样的耐药情况,对13种抗菌药物均耐药,仅头孢哌酮/舒巴坦有一定的敏感性;PFGE结果表明,7株CRAB为同一克隆株;均产不能被克拉维酸和氯唑西林所抑制的酶;PCR扩增产酶基因检测结果以blaPER、blaVEB、blaVIM、blaIMP、blaOXA-24、blaOXA-51、blaOXA-58的特异引物扩增均未出现阳性条带,blaOXA-23群阳性,并经测序证实为blaOXA-23。结论鲍氏不动杆菌的耐药性严重,耐碳青酶烯类鲍氏不动杆菌流行是医院感染所致,CRAB均产OXA-23型碳青酶烯酶。