多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析

探究多重耐药肺炎克雷伯菌中碳青霉烯酶的检测和分析。方法 在2021年1月至2023年11月期间,本研究对黄河中心医院采集的78株肺炎克雷伯菌(一种多重耐药菌)进行深入研究。为了探究这些菌株中是否存在碳青霉烯酶基因,进行碳青霉烯酶表型试验。随后,为了进一步验证这些基因的存在,利用聚合酶链反应对它们进行检测,并对扩增产物进行DNA测序,确保能够准确地确定它们的基因型。经分析发现这78株肺炎克雷伯菌中,有48株被明确鉴定为超广谱β内酰胺酶(ESBL)阳性菌,而另外30株则为ESBL阴性菌。这一研究结果对肺炎克雷伯菌的耐药机制提供了更为精确的认识,对于指导临床用药和防控耐药菌的传播具有重要意义。结果 经过严格的检测,发现所检测的菌株中,产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)的阳性率高达61.54%。药敏分析结果显示,产ESBL菌株对第一,二代头孢菌素及青霉素类抗菌药物具有较高的耐药性。特别是针对单环类氨曲南,耐药率达到惊人的100.00%。值得注意的是,除了亚胺培南、厄他培南、美罗培南及左氧氟沙星外,产ESBL菌株相较于非产ESBL菌株具有更高的耐药性。在78株肺炎克雷伯菌中,Hodg试验阳性菌共有10株,占比12.82%;阴性菌68株,占比87.18%。在10株Hodg试验阳性菌中,仅有1株金属酶试验呈阳性。通过PCR扩增技术,成功确认10株阳性菌中的4株,其中3株为KPC型,阳性率为3.85%,另1株为IMP型,阳性率为1.28%。进一步的PCR产物测序分析显示,3株产KPC型菌株均携带KPC-2基因亚型,而产IMP型菌株携带的基因亚型为MP4。这些数据为研究和应对肺炎克雷伯菌的抗药性提供宝贵的线索和依据。结论 碳青霉烯酶在克雷伯菌中的检出率较高,尤其以KPC-2为最高,因此,在临床用药时应给予足够的关注,合理应用碳青霉烯,尽量减少耐药株,提高治疗效果,具有一定的意义。

评价快速碳青霉烯酶灭活试验在肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型检测中的应用价值

目的评价快速碳青霉烯酶灭活试验(rCIM)与改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)在肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型检测中的应用价值。方法选择86株耐碳青霉烯肠杆菌科细菌,使用聚合酶链式反应(PCR)检测常见碳青霉烯酶基因,比较rCIM与mCIM法检测碳青霉烯酶表型的性能。结果共检测到61株碳青霉烯酶基因型,检出率为70.9%。mCIM法发现阳性菌株61株,阴性菌株25株,rCIM法发现阳性菌株62株,阴性菌株24株。以PCR结果作为金标准,mCIM法的准确度、灵敏度和特异度分别为100.0%、100.0%和100.0%,rCIM法的准确度、灵敏度和特异度分别为98.8%、100.0%和96.0%。结论rCIM法检测肠杆菌科细菌碳青霉烯酶表型,操作简便,不需过夜培养,不需特殊的仪器或试剂,准确度较高。

南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶表型与基因型检测

目的了解南宁地区某院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性及碳青霉烯酶产生情况,为CRKP感染防控提供依据。方法收集2021年1月至2022年2月临床分离的CRKP共46株,用PhoenixM50全自动微生物鉴定药敏分析仪进行药敏试验,采用碳青霉烯酶抑制剂增强试验进行碳青霉烯酶表型筛选,用PCR扩增碳青霉烯酶耐药基因。结果46株CRKP对厄他培南100%耐药,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为76.1%和78.3%,对除氨曲南外的其他β-内酰胺类药物的耐药率均为100%,对替加环素耐药率为0,对多黏菌素B(4.3%)及阿米卡星(32.6%)耐药率较低;碳青霉烯酶表型筛选试验检出单产A类碳青霉烯酶菌株33株(71.7%),单产B类金属β-内酰胺酶9株(19.6%),单产D类OXA-48型碳青霉烯酶2株(4.3%),同时产A类和B类碳青霉烯酶2株(4.3%);46株CRKP均检出碳青霉烯酶耐药基因,其中,33株(71.7%)仅携带KPC-2基因,7株(15.2%)仅携带NDM-1基因,2株(4.3%)仅携带VIM-1基因,2株(4.3%)仅携带OXA-48基因,2株(4.3%)同时携带KPC-2和NDM-1基因,未检出IMP型。结论某院分离的CRKP对常见抗菌药物具有高度耐药性,主要产KPC-2型碳青霉烯酶,应加强抗菌药物合理使用、CRKP酶型检测与感染控制,有效防范院内感染。

临床分离碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌菌株的分子流行病学及碳青霉烯酶抑制剂增强试验的应用

目的:碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)的流行已成为临床抗感染治疗的巨大挑战。本研究探讨本地区CRE耐药情况及分子流行病学特征,并评估碳青霉烯酶抑制剂增强试验在临床实验室的应用价值,旨在为临床合理使用抗菌药物提供依据。方法:收集中南大学湘雅医院临床标本中分离的非重复性CRE,最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)联合纸片扩散法(Kirby-Bauer,KB)检测菌株的药物敏感性,PCR方法检测13种碳青霉烯酶基因。使用碳青霉烯酶抑制剂增强试验对126株经PCR确定为产碳青霉烯酶的菌株进行表型检测,了解该方法与金标准PCR结果的符合程度。结果:704株CRE呈现出高度耐药的情况,经检测,501株为产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌(carbapenemase producing Enterobacterales,CPE);CPE菌株以肺炎克雷伯菌为主,其次为阴沟肠杆菌和大肠埃希菌;碳青霉烯酶有9种,包括肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶(Klebsiella pneumoniae carbapenemase,KPC)、新德里金属β-内酰胺酶(New Delhi metallo-β-lactamase,NDM)、维罗纳整合子金属酶β-内酰胺酶(Verona integronencoded metallo-β-lactamases,VIM)、亚胺培南酶(imipenemase,IMP)、苯唑西林酶48型(oxacillinase-48,OXA-48)以及罕见的亚胺培南水解β-内酰胺酶(imipenem-hydrolyzingβ-lactamase,IMI)、阿德莱德亚胺培南酶(adelaide imipenemase,AIM)、圭亚那超广谱β-内酰胺酶(guiana extended-spectrumβ-lactamase,GES)和Bicêtre碳青霉烯酶(bicêtre carbapenemase,BIC),KPC型丝氨酸酶检出率最高,为61.7%(309/501);碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测单产A类丝氨酸碳青霉烯酶、单产B类金属酶以及同时产A类和B类酶菌株的符合率均为100%。结论:湖南省长沙市CRE菌株分布非常广泛,产碳青霉烯酶(特别是KPC型丝氨酸酶)是这类细菌对碳青霉烯类药物耐药的主要机制。在湖南省长沙市首次检出了肠杆菌目细菌携带GES、IMI型基因。碳青霉烯酶抑制剂增强试验结果显示该方法能准确检测产A类丝氨酸酶和B类金属酶的CRE,且操作简单、结果容易判读,能满足临床微生物实验室丝氨酸碳青霉烯酶和/或金属酶检测的需求,为临床精准用药提供依据。

黄芩消除产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌耐药质粒的研究

目的研究中药黄芩对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌(Carbapenemase-producing Klebsiella pneumoniae,CRKP)的抑菌及质粒消除作用。方法用肉汤稀释法测得黄芩、亚胺培南对CRKP的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC);用质粒消除试验测定黄芩对CRKP的质粒消除率;用质谱检测系统对质粒消除菌株的菌种进行鉴定,用K-B纸片琼脂扩散法(Kirby-Bauerdiscagar diffusion method,K-B法)确认消除子对亚胺培南、美罗培南的敏感性,用碳青霉烯灭活试验/乙二胺四乙酸碳青霉烯灭活试验(mCIM/eCIM)确认消除子是否产碳青霉烯酶,用聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测消除子是否携带blaKPC基因。结果黄芩对CRKP的MIC值为6.25mg/mL,在24、48、72h的质粒消除率分别为0%、0.3%、1%;消除子经全自动微生物质谱检测系统鉴定为肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,KPN),对亚胺培南、美罗培南敏感,mCIM/eCIM实验阴性,PCR未检测到blaKPC基因。结论黄芩对CRKP有一定的抑菌作用及质粒消除作用。

免疫层析技术在肠杆菌目细菌产碳青霉烯酶快速检测中的应用

目的比较两种免疫层析技术在快速检测碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(CRE)产碳青霉烯酶中的应用价值。方法收集390株临床分离的肠杆菌目细菌,以聚合酶链反应(PCR)方法作为金标准,采用两种免疫层析法同步进行CRE菌株的碳青霉烯酶基因型检测。结果采用碳青霉烯酶的表型检测390株临床分离肠杆菌目细菌,213株为CRE菌株,177株为碳青霉烯类敏感肠杆菌目细菌(CSE)菌株。经PCR基因型检测,213株CRE菌株中,207株产碳青霉烯酶,6株CRE菌株碳青霉烯类耐药机制不明确;207株产碳青霉烯酶菌株中,119株产KPC酶、71株产NDM酶、9株产IMP酶、7株产OXA-48-like酶和1株复合酶(KPC酶+NDM酶)。同步采用两种免疫层析法(丹娜DMK和NG-Test®CARBA5)进行检测,检测与PCR结果符合率均为100%。两种免疫层析法检测5种碳青霉烯酶的灵敏度均为100%(95%CI:97.7%~100%),特异度均为100%(95%CI:97.4%~100%)。结论免疫层析法操作简便、快速,可应用于检测临床分离的碳青霉烯类耐药菌株产碳青霉烯酶的分型。

外科ICU与内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌耐药性、碳青霉烯酶基因检测及流行病学研究

目的分析外科ICU和内科ICU碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药性、常见的碳青霉烯酶基因及菌株之间的亲缘性关系。方法收集2019年1月至2020年12月从某三甲医院外科ICU和内科ICU分离鉴定的CRKP非重复菌株,采用自动仪器法对菌株进行药物敏感性试验;采用mCIM联合eCIM试验进行碳青霉烯酶表型检测,并通过PCR技术联合DNA测序检测碳青霉烯酶基因;利用多位点序列分型(MLST)方法对碳青霉烯酶阳性菌株进行同源性分析。结果共收集15株CRKP菌株,其中外科ICU 8株,内科ICU 7株。CRKP菌株对临床多数抗菌药物表现高耐药性,仅对替加环素表现较高敏感性。mCIM联合eCIM试验并经PCR验证,共有14株CRKP携带碳青霉烯酶基因,其中7株单纯携带KPC⁃2基因,主要来源于内科ICU;5株单纯携带NDM⁃5基因,来源于外科ICU;1株携带KPC⁃2基因合并少见金属酶基因来源于内科ICU;1株携带NDM⁃1基因合并OXA⁃181基因来源于外科ICU。MLST结果显示,医院ICU分离的CRKP菌株为ST11、ST15、ST163个序列型别。内科ICU优势序列为ST11(6/6),全部携带KPC⁃2基因;外科ICU优势序列为ST15(5/8),主要携带NDM⁃5基因。结论医院外科ICU和内科ICU分离的CRKP菌株耐药性高,其携带的耐药基因和优势流行菌株存在差异。应加强多重耐药菌的监测及流行病学研究,及时采取有效治疗方案和防控策略,防止耐药菌株产生和流行播散。

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测的研究进展

近年来,细菌耐药已经成为公共卫生的一项重大挑战,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对抗生素的耐药形势尤为严峻。CRE的主要耐药机制是碳青霉烯酶的产生,不同菌株携带的耐药基因不同,产生的碳青霉烯酶也不同,因此,碳青霉烯酶和耐药基因的早期检测对于控制耐药菌的传播起到重要作用。目前对于碳青霉烯酶的表型检测方法有改良Hodge实验、改良碳青霉烯灭活试验、Carba NP试验、免疫学技术、质谱技术,对于耐药基因型的检测方法有实时荧光定量PCR技术、微阵列技术、等温扩增技术、测序技术,这些方法在碳青霉烯酶的检测中均具有广泛应用。了解各检测技术的优缺点对于在实际应用中选择最适检测方法是非常重要的。本文主要对CRE碳青霉烯酶检测方法的研究进展和各方法的优缺点进行综述,为CRE的检测、预防以及院内感染控制提供数据支持。

新型抗KPC-2型碳青霉烯酶纳米抗体的筛选与鉴定

目的:产KPC-2型肺炎克雷伯菌可引起β-内酰胺类抗生素、碳青霉烯类抗生素产生耐药性。通过噬菌体展示技术从抗KPC-2纳米抗体文库中筛选与KPC-2特异性结合的纳米抗体,为产KPC-2型肺炎克雷伯菌耐药性的检测和诊断提供技术支持。方法:利用重组KPC-2免疫双峰骆驼,从骆驼的外周血淋巴细胞中提取RNA,逆转录为cDNA,通过两轮嵌套式PCR扩增出纳米抗体片段,构建抗体文库,并通过噬菌体展示技术筛选特异性纳米抗体。通过HPLC和OCTET分别进行表位分析和亲和力测定。结果:构建了一个库容为5.47×10^(8)cfu/ml且插入有效片段不低于81.25%的纳米抗体文库;并建立抗KPC-2纳米抗体的免疫淘选方法;获得了2个不同CDR3区的纳米抗体K2和K5,亲和力分别为6.0 nmol/L和4.8 nmol/L。且在KPC-2上具有2个非竞争性结合表位。结论:成功淘选出2个不同表位的特异性纳米抗体,有望替代传统抗体用于肺炎克雷伯菌耐药性疾病的检测和诊断。

Autof MS1000质谱鉴定系统快速检测肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶的临床价值评估

目的探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速检测肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶的临床价值。方法收集2022年1月至2023年10月徐州医科大学附属邳州市人民医院分离的肺炎克雷伯菌60株和铜绿假单胞菌80株,其中碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)30株,碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)30株,碳青霉烯类耐药铜绿假单胞菌(CRPA)50株,碳青霉烯类敏感铜绿假单胞菌(CSPA)30株。分别采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM)、胶体金免疫层析法和Autof MS 1000质谱鉴定系统进行检测,评估Autof MS 1000质谱鉴定系统检测肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶的能力。结果Autof MS 1000质谱鉴定系统检测结果与mCIM和胶体金免疫层析法结果完全一致,30株CRKP中,有28株检测到碳青霉烯酶,2株阴性;50株CRPA中,有15株检测到碳青霉烯酶,35株阴性;30株CSKP和30株CSPA均为阴性。3种方法检测碳青霉烯酶的结果符合率为100%。结论Autof MS 1000质谱鉴定系统检测碳青霉烯酶的结果与mCIM法和胶体金免疫层析法一致,且既有mCIM法低成本的特点,又有胶体金免疫层析技术速度快、准确率高的优点,可用于临床肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌产碳青霉烯酶菌株的快速鉴定。

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的实验室检测和临床报告规范专家共识(第二版)

当前,细菌耐药已成为全球公共健康领域的重大挑战,其中尤以碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)引起的感染形势最为严峻。碳青霉烯类抗生素包括亚胺培南、美罗培南和厄他培南等,是治疗多重耐药革兰阴性杆菌所致感染最有效的抗菌药物之一。随着该类药物在临床的广泛使用,CRE菌株的检出率呈逐年快速上升趋势。

mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能

目的 分析改良碳青霉烯类失活法(mCIM)试验与EDTA-碳青霉烯类失活法(eCIM)试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。方法 80株对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科菌株,采用PCR法检测碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaNDM、blaIMP、blaVIM),采用mCIM试验与eCIM试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型。以碳青霉烯酶基因检测结果为金标准,计算mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,计算eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶、丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性和特异性,分析mCIM试验与eCIM试验在产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型检测中的联合应用效能。结果 80株菌株中,59株碳青霉烯酶基因阳性菌株,其中57株试验菌株mCIM试验结果阳性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的敏感性为96.6%(57/59)。21株碳青霉烯酶基因阴性菌株,mCIM试验结果均阴性,即mCIM试验检测产碳青霉烯酶菌株的特异性为100.0%(21/21)。33株金属-β-内酰胺酶基因(blaNDM、blaVIM、blaIMP基因)阳性,其中28株试验菌株eCIM试验结果阳性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的敏感性为84.8%(28/33)。47株金属-β-内酰胺酶基因阴性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产金属-β-内酰胺酶菌株的特异性为100.0%(47/47)。27株丝氨酸碳青霉烯酶基因(blaKPC基因)阳性,eCIM试验结果均阴性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的敏感性为100.0%(27/27)。53株丝氨酸碳青霉烯酶基因阴性,其中51株试验菌株eCIM试验结果均阳性,即eCIM试验检测产丝氨酸碳青霉烯酶菌株的特异性为96.2%(51/53)。结论 mCIM与eCIM联合实验检测产碳青霉烯酶肠杆菌耐药表型的敏感性和特异性较高。

革兰阴性杆菌血流感染的病原菌分布、耐药性及碳青霉烯酶基因的检测与分析

目的调查复旦大学附属华山医院革兰阴性杆菌血流感染的病原菌分布情况、对常用抗菌药物的耐药性以及碳青霉烯酶基因的流行现状。方法收集2012年3月1日—2013年2月28日该院血流感染分离获得的132株非重复革兰阴性杆菌菌株,按统一方案采用纸片扩散法进行抗菌药物敏感性试验,共筛选出33株碳青霉烯类不敏感菌株。采用PCR方法检测KPC、NDM、VIM、IMP、GIM、SPM、OXA23、OXA24、OXA51、OXA58型碳青霉烯酶基因。结果革兰阴性杆菌血流感染前5位的病原菌依次为克雷伯菌属(28.0%,37/132)、大肠埃希菌(26.5%,35/132)、不动杆菌属(13.6%,18/132)、铜绿假单胞菌(9.8%,13/132)和肠杆菌属(7.6%,10/132)。33株碳青霉烯类不敏感革兰阴性杆菌中有75.8%(25/33)的菌株检测出碳青霉烯酶基因,KPC、OXA23、OXA51、NDM型碳青霉烯酶基因检出率分别为42.4%(14/33)、30.3%(10/33)、30.3%(10/33)、3.0%(1/33),未检测到其他类型碳青霉烯酶基因。13株对碳青霉烯类药物不敏感的肺炎克雷伯菌100%携带KPC型耐药基因,10株对碳青霉烯类药物不敏感的鲍曼不动杆菌100%携带OXA23、OXA51型基因。结论革兰阴性杆菌血流感染中肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药形势严峻。携带KPC、OXA23型碳青霉烯酶基因是导致肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制之一。

鲍曼不动杆菌的同源性及碳青霉烯酶基因分析

目的:研究临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性演变、同源性、产碳青霉烯酶类型及碳青霉烯酶基因型。方法:收集临床分离的72株鲍曼不动杆菌,采用VITEK-II药敏分析系统对72株鲍曼不动杆菌进行18种抗菌药物的敏感性检测。采用肠杆菌科基因间一致重复序列聚合酶链技术(ERIC-PCR)进行基因分型和同源性比对。用改良Hodge试验检测杆菌的产碳青霉烯酶表型,对碳青霉烯酶基因blaOXA-23,blaOXA-40和blaOXA-58进行PCR扩增及序列分析。结果:72株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮/舒巴坦的耐药率最低,为8.33%,其次是阿米卡星,对其余抗菌药物的耐药率均高达70%以上。ERIC-PCR技术将其分为7个基因型,同源性分析显示其中4个基因型在医院内流行。产碳青霉烯酶的菌株有56株,blaOXA-23扩增阳性的有61株,blaOXA-58扩增阳性的有1株。结论:鲍曼不动杆菌耐药严重,且存在院内感染传播的现象;产碳青霉烯酶的菌株较多,主要的碳青霉烯酶基因型为blaOXA-23;湖南省存在blaOXA-58阳性鲍曼不动杆菌株。

产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点

目的研究分析产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌感染的临床和微生物学特点。方法收集2011年1—12月武警总医院18株产KPC酶的肠杆菌科细菌,使用PCR和测序的方法对菌株进行鉴定,用微量肉汤稀释法检测其对常用抗菌药物的耐药性,并对产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染的病例临床资料进行调查分析。结果 2011年从临床送检的标本中,通过表型鉴定和PCR检测,共分离出产KPC型碳青霉烯酶细菌18株,其中肺炎克雷伯菌13株,大肠埃希菌4株,产气肠杆菌1株。90%患者在产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌分离之前,使用过头孢菌素类(包括第二、三、四代头孢菌素)、头霉素、氨曲南和β内酰胺酶抑制剂复方制剂,70%患者使用过碳青霉烯类抗生素。所有菌株对头孢菌素类和碳青霉烯类抗生素耐药,对阿米卡星的敏感率为60.0%,对替加环素的敏感率为100%。经过治疗后,7例患者死亡,病死率43.8%。结论产KPC型碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的出现,提示临床上应严格控制抗生素的使用,加强医院感染控制措施,防止和减少此类耐药菌在医院内的传播。

耐亚胺培南鲍曼不动杆菌耐药性及OXA碳青霉烯酶检测

目的分析97株临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌的耐药特点及OXA碳青霉烯酶分布。方法用国际标准平皿二倍稀释法,明确研究菌株的耐药表型;用脉冲场凝胶电泳法,对其进行分型并用PCR的方法,检测OXA碳青霉烯酶。结果 97株耐亚胺培南鲍曼不动杆菌均为多药耐药菌株,其中2株为泛耐药菌株;主要存在7个流行克隆株;有78株菌携带blaoxa-23基因(80.4%);2株菌携带blaoxa-58基因(2.1%);未发现携带blaoxa-24基因的菌株。结论在我国的亚胺培南耐药的鲍曼不动杆菌中,OXA-23仍为主要分布的碳青霉烯酶。

临床克雷伯菌属碳青霉烯酶三种检测方法的实验比较研究

目的对聚合式酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)、改良碳青霉烯酶灭活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)+EDTA碳青霉烯酶灭活试验(EDTA-carbapenem inactivation method,eCIM)和GeneXpert三种方法检测碳青霉烯酶的性能进行了比较,为临床选择合适的检测方法提供依据。方法收集2019年1月~2021年5月临床分离的43株碳青霉烯类抗生素耐药及37株碳青霉烯类抗生素敏感克雷伯菌属菌株,用PCR法和GeneXpert试验检测碳青霉烯酶基因,mCIM+eCIM试验检测碳青霉烯酶。以PCR法为金标准,对三种试验方法检测结果进行比较。结果43株耐碳青霉烯克雷伯菌属经PCR扩增检测有40株携带碳青霉烯耐药基因,blaKPC 30株,blaNDM 8株,blaIMP 2株;37株碳青霉烯类敏感克雷伯菌属经PCR扩增均未检出碳青霉烯酶基因。与PCR法结果相比,mCIM+eCIM试验检测丝氨酸酶及金属酶表型结果敏感度和特异度均为100%,Kappa值为1;GeneXpert技术敏感度和特异度分别为94.9%,97.6%,Kappa值为0.925。结论mCIM+eCIM试验和GeneXpert与PCR结果一致程度强,但鉴于临床诊断的时效性,GeneXpert技术操作简单,耗时短,结果准确可信且易于判读,对于有条件的医院,可以用于临床微生物实验室常规开展。

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的实验室检测和临床报告规范专家共识

当前,细菌耐药已成为全球公共健康领域的重大挑战,其中尤以碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌(carbapenem-resistant Enterobacterales,CRE)引起的感染形势最为严峻.碳青霉烯类抗菌药物包括亚胺培南、美罗培南和厄他培南等,是治疗多重耐药革兰阴性杆菌所致感染最有效的抗菌药物之一.随着该类药物在临床的广泛应用,肠杆菌目细菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率呈逐年快速上升趋势.CHINET中国细菌耐药监测网历年监测结果显示[1-2],我国临床分离肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的耐药率从2005年的3%快速攀升至2019年的25%以上,上升幅度高达8倍.2018年全国细菌耐药监测网(CARSS)数据显示,全国1429所医院临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗菌药物的平均耐药率为10.1%,部分省市甚至超过20%[3].由于CRE菌株通常还携带有对其他抗菌药物耐药的基因,对抗菌药物呈广泛耐药甚至全耐药的特征,使临床的抗感染治疗面临无药可用的困境[4].

改良Hodge试验、CNPt及mCIM筛选肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值

目的探讨改良Hodge试验(MHT)、Carba NP试验(CNPt)及改良碳青霉烯酶灭活试验(mCIM)检测肺炎克雷伯菌产碳青霉烯酶的价值。方法收集某院2016年12月—2017年11月临床分离的117株肺炎克雷伯菌,所有菌株进行药敏试验,其中碳青霉烯类耐药57株,敏感60株。以PCR法检测碳青霉烯酶基因为标准,评价3种方法检测肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶的价值。结果 57株对碳青霉烯耐药的菌株中,PCR阳性40株,包括39株KPC,1株NDM-1,未检出其他耐药基因。MHT、CNPt、mCIM阳性率分别为87.7%(50/57)、89.5%(51/57)、91.2%(52/57)。60株敏感菌PCR均未检出碳青霉烯酶基因,3种表型筛选试验结果均为阴性。以PCR为金标准,MHT、CNPt、mCIM灵敏度分别为97.5%(39/40)、100%(40/40)和100%(40/40),特异度分别为85.7%(66/77)、85.7%(66/77)和84.4%(65/77)。结论 CNPt是一种可靠的表型筛选方法,可用于流行病学和医院感染的监测。mCIM操作简单,结果判断明确,更适合临床微生物实验室常规开展。

肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要类型和流行病学分析

目的了解对碳青霉烯类抗生素耐药的肠杆菌科细菌(CRE)中碳青霉烯酶的主要类型及流行情况。方法收集上海瑞金医院2011年5月至2013年6月对亚胺培南或美罗培南药敏纸片抑菌圈直径≤22 mm的CRE共114株,采用PCR方法扩增常见的碳青霉烯酶基因(blaKPC、blaIMP、blaOXA-48、blaVIM、blaNDM)并对PCR扩增产物进行测序;所有菌株均进行了质粒接合试验;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对KPC-2检测阳性的肺炎克雷伯菌进行同源性分析。结果 114株CRE以肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌和肠杆菌属细菌为主,其中98株产碳青霉烯酶,以KPC-2酶为主要类型(78/98)、其次为IMP-4酶(15/98),IMP-8酶(2/98),1株肺炎克雷伯菌同时携带有blaKPC-2和blaIMP-4基因,还发现4株产NDM-1酶的菌株,未见OXA-48酶及VIM酶阳性菌株。21株(21.4%,21/98)CRE菌株转移接合试验成功。PFGE结果显示49株blaKPC-2阳性肺炎克雷伯菌共分为12个型,其中34株属于同一谱型(type A)。CRE菌株主要分离自ICU,共39株,其次为普外科14株,血液科11株,呼吸科9株,其余科室共41株。结论本次分离的肠杆菌科细菌所产碳青霉烯酶的基因型以blaKPC-2为主,其次为blaIMP-4,并发现4株blaNDM-1阳性CRE菌株,产KPC-2酶的肺炎克雷伯菌在外科ICU、呼吸科及胸外科等科室间存在克隆株的流行传播,应采取及时有效的防控措施。