基于杂交链式反应扩增检测奶粉中阪崎肠杆菌的适配体磁珠荧光传感器

构建一种基于杂交链式反应(hybridization chain reaction,HCR)扩增的适配体磁珠荧光传感器。巧妙设计序列HP和发卡序列H1、H2,其中HP是由适配体序列与触发序列结合而成的,并且序列互补形成稳定的二级结构。然后采用戊二醇反应和亲和素-生物素反应进行适配体功能化磁珠的制备。将阪崎肠杆菌与适配体磁珠一起孵育,HP中的适配体序列识别靶标,引起HP构象变化,露出触发序列,通过HCR触发H1和H2的链状组装,产生长双链DNA。荧光指示剂SYBR Green I以插层和小槽结合的方式与HCR产物的长双链结合。最后加入氧化石墨烯(graphene oxide,GO)后,游离的H1、H2和SYBR Green I将通过π-π堆积紧密吸附在GO表面,荧光信号被猝灭。HCR产物不能被吸附在GO表面,因此与HCR产物结合的SYBR Green I发出依赖于靶浓度的强荧光信号,从而实现阪崎肠杆菌的定量检测。本方法在纯培养条件下的检出限为2CFU/mL,对奶粉的检出限为8CFU/g,对奶粉样品的检测结果与传统微生物培养法具有良好的一致性。该方法具有无需DNA提取,快速、稳定性高、高特异性和高灵敏度等优点,因此为阪崎肠杆菌的现场快速检测提供了一种很有潜力的方法。

自动化磁珠法提取血清脂溶性维生素应用LC-MS/MS检测的性能评价

目的评估自动化磁珠法提取血清脂溶性维生素应用液相色谱串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)检测的性能。方法收集200例临床剩余血清样本,采用自动化磁珠法提取血清中脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K;同时联合LC-MS/MS检测脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K的线性、定量限、精密度、正确度、携带污染率等性能指标以及基质效应。并比较此方法与传统萃取法检测结果的一致性。结果自动化磁珠法提取脂溶性维生素A,D_(2),D_(3),E和K线性相关系数均>0.99;五种物质的定量限分别为5,0.25,0.25,125和0.025ng/ml;批内精密度和批间精密度分别为0.66%~4.83%,0.15%~3.70%;平均加标回收率为87.05%~111.11%;基质效应为95.43%~99.07%;高-低值样本循环进样结果均值与低-低值样本循环进样结果均值之差,均小于低-低值样本循环进样结果均值的3s;统计学结果显示自动化磁珠法和传统萃取法提取的脂溶性维生素结果相关性良好(r>0.99),两种方法的检测结果无显著偏倚。结论自动化磁珠法提取脂溶性维生素的检测性能良好,有望提高样品通量和分析效率。

围绕FFPE样本特性的DNA纯化纳米磁珠优化

目的 探讨围绕福尔马林固定石蜡包埋(formalin fixed paraffin embedded, FFPE)样本特性获取更高质量/得率的纳米磁珠核酸提取方案,改进分子病理技术。方法 合成4大类15个小类的备选磁珠,以FFPE样本为中心,筛选高质量/得率磁珠。模拟常规组织、粗针穿刺(肝脏)、纤维支气管镜样本(肺),装管相同张数连片。采用筛选的最佳磁珠与市场出售的常见磁珠试剂提取核酸,横向对比纯化总量、片段大小等质量参数。应用PCR和Sanger验证核酸的下游应用。结果 以FFPE样本DNA为中心筛选自制纳米磁珠,获得最佳性能纳米磁珠总回收率为58.5%±1.58%,5种市售商品化磁珠和3种国产磁珠总回收率为18.68%~40.71%。相同组织量(连片)提取的DNA总量,在模拟常规组织、粗针穿刺和纤维支气管镜样本核酸得率比市售试剂盒提高39.49%~181.72%(P<0.05)。模拟纤维支气管镜样本1张(4μm)总量可达100 ng以上、5张总量可达400 ng以上。结论 以FFPE样本DNA为中心筛选的DNA纯化纳米磁珠,与商品化磁珠相比有较大提升,为临床分子病理检测的质量保证、自动化检测和项目拓展提供空间。

免疫磁珠富集水中鲤春病毒血症病毒的初步研究

为建立一种富集水中鲤春病毒血症病毒(SVCV)的技术,本研究利用SVCV多克隆抗体制备免疫磁珠,通过对磁珠耦联抗体量的优化,确定该免疫磁珠有效富集SVCV的最低浓度,建立一种富集SVCV的免疫磁珠分离技术,并联合荧光定量RT-PCR(RT-qPCR)技术对水中SVCV进行检测。结果显示,1 mg磁珠与75μg SVCV多克隆抗体耦联时,耦联的抗体量最大,耦联率为98.48%;耦联后的免疫磁珠对SVCV(200μL,浓度为1.54×10^(6)拷贝/μL)的富集效率最高为91.56%。以该多克隆抗体量制备的免疫磁珠富集10倍倍比稀释的SVCV(3.54×10^(6)拷贝/μL~3.54×10^(3)拷贝/μL),以确定其有效富集SVCV的最低浓度。结果显示,1 mg免疫磁珠能够使200μL病毒液(3.54×10^(3)拷贝/μL)富集率达到61.58%。表明该免疫磁珠能够有效富集SVCV。在免疫磁珠分离技术联合RT-qPCR技术检测水样品中SVCV(浓度约为1.16×10^(4)拷贝/μL)的结果显示,免疫磁珠组富集SVCV核酸量是裸磁珠组富集SVCV核酸量的1.77×10^(3)倍,是未处理组富集SVCV核酸量的1.68×10^(3)倍,免疫磁珠组富集SVCV均极显著高于裸磁珠组和未处理组(P<0.01),裸磁珠组富集的SVCV与未处理组则无显著差异(P>0.05)。本研究首次建立了一种能够有效富集水中SVCV的方法,为SVCV的监测提供了技术手段。

改性磁珠吸附剂脱汞及脱附再生动力学研究

为了有效控制燃煤烟气中的汞排放和有效解决燃煤飞灰的资源化利用问题,制备出一种新型的氯化铜改性磁珠脱汞吸附剂(Cu-MF)。在固定床吸附系统中,系统研究了反应温度(100℃~180℃)、烟气流量(0.8 L/min~1.5 L/min)、吸附剂用量(0.2 g~1.0 g)、SO_(2)体积分数(800×10^(-6)~1200×10^(-6))和NO体积分数(100×10^(-6)~300×10^(-6))对改性磁珠吸附剂汞吸附性能的影响。分别采用准一级和准二级动力学模型分析了改性磁珠吸附剂的汞吸附机制和控制过程,通过程序升温脱附(temperature programmed desorption,TPD)的方法探讨了改性磁珠吸附剂的汞脱附再生过程。结果表明:改性磁珠吸附剂在120℃~150℃区间内具有较高的汞脱除能力,吸附剂用量的增加有利于汞的脱除,而烟气流量和烟气组分(SO_(2),NO)对改性磁珠吸附剂汞吸附性能的影响较小。在不同反应温度和不同烟气流量下,改性磁珠吸附剂的脱汞过程可以通过准一级和准二级动力学模型描述。当吸附剂用量大于0.5 g时,改性磁珠吸附剂的吸附行为受物理吸附及化学吸附行为双重因素控制,可以分别用准一级和准二级动力学模型来描述改性磁珠吸附剂在SO_(2)和NO存在时的汞吸附过程。改性磁珠吸附剂的汞脱附行为更符合准一级动力学模型。

多合一免疫磁珠全自动净化高效液相色谱法测定辣椒粉中5种真菌毒素

建立了一种基于多合一免疫磁珠自动净化,采用高效液相色谱同时测定辣椒粉中4种黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A含量的方法。样品经乙腈-水涡旋振荡提取后,经多合一免疫磁珠净化,利用高效液相色谱同时测定5种真菌毒素。复杂基质辣椒粉样品经多合一免疫磁珠对多种毒素同时净化,实现了前处理的自动化、步骤简化,提高了多毒素的检测效率。在优化条件下,辣椒粉阴性样品的不同水平的加标回收率在99.2%~119%,相对标准偏差≤4.75%。通过对本方法和免疫亲和柱净化法进行配对t检验差异分析及相关性拟合,结果表明这两种方法相关性良好,无显著差异。本方法的检出限为0.05~0.25μg/kg,定量限为0.16~0.84μg/kg,可满足辣椒粉中4种黄曲霉毒素和赭曲霉毒素A的同时检测需求。

磁珠法核酸提取设备的专利申请现状

为了获取基于磁珠法核酸提取装置相关的国内外申请状况的基本数据,本文在incoPat数据库中选择“磁珠or磁5W粒”和“核酸提取”和“装置or设备or仪or系统”等关键词进行检索,总共获得1 410件专利申请,其中国内申请1 258件,国外152件。通过对数据不同维度的分析,探讨了该领域相关专利申请的趋势、全球申请人情况、主要分类号等方面。

粉煤灰磁珠对环氧树脂聚合物阻燃性能的影响

为了实现粉煤灰固体废弃物的资源化利用,从粉煤灰中分选出元素含量不同的磁珠(MSs),探究MSs添加量和MSs中Fe元素含量对环氧树脂(epoxy resin,EP)阻燃性能的影响。采用锥形量热仪(CC)、热重分析(TG)等测试手段对MSs/EP复合材料的阻燃性能进行测试。研究结果表明:随着粒径减小,磁珠中的Fe元素含量从55.73%升高至64.83%。当MSs添加量分别为2 wt%,4 wt%,6 wt%,8 wt%和10 wt%时,复合材料的耐火性能先升高后下降;当MSs中Fe元素含量分别为55.73%,57.06%,60.35%和64.83%时,复合材料的耐火性能单调升高。与纯EP相比,当MSs添加量为6 wt%,Fe元素含量为64.83%时,MSs/EP复合材料的热释放速率峰值p-HRR降低39.6%,总热释放量THR降低30.7%,火灾性能指数FPI提高53.73%,阻燃指数FRI从1提高至3.118,火灾增长指数FGI降低51.96%,残炭率提高47.5%。MSs/EP良好的阻燃性能主要归因于MSs能够催化EP形成连续稳定的炭层,从而隔绝热量和氧气,降低复合材料的燃烧强度。研究结果可提高粉煤灰磁珠的高附加值利用,同时为低成本阻燃聚合物提供参考。

免疫磁珠高通量全自动净化结合高效液相色谱快速测定饲料中玉米赤霉烯酮含量

本研究旨在建立利用免疫磁珠高通量全自动净化结合高效液相色谱快速测定饲料中玉米赤霉烯酮含量的方法。饲料样品用80%乙腈水提取,经全自动免疫磁珠净化、富集后,采用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)测定,外标法定量。结果表明:玉米赤霉烯酮在0.01~1.00μg/mL范围内线性关系良好(相关系数≥0.9999),方法检出限为2μg/kg,定量限为10μg/kg;玉米赤霉烯酮在0.01、0.02、0.10和1.00 mg/kg添加水平下的平均回收率为86.90%~100.27%,批内相对标准偏差(RSD)为3.18%~9.88%,批间RSD为4.94%~9.40%。由此可见,与传统固相萃取、免疫亲和柱净化法相比,免疫磁珠净化集提取、分离、净化、浓缩于一体,可实现完全自动化处理,提高工作效率和检测通量,避免因人为操作导致的结果偏差,适用于大批量饲料样本中玉米赤霉烯酮含量的测定。

不同生物活性基团修饰的纳米磁珠在核酸提取中的效能比较

目的评价不同生物活性基团修饰的纳米磁珠核酸提取效能,为临床应用及结果评价提供一些依据。方法通过不同生物活性基团修饰的纳米磁珠对检测乙型肝炎病毒的标本进行核酸提取,采用微量分光光度计(NanoDrop One~c)检测核酸的浓度及纯度,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测样本的CT值。结果在几种纳米磁珠提取法中,超顺磁性羧基纳米微粒提取的核酸浓度及纯度最高(浓度平均为953.3 IU/mL),其次是二氧化硅磁性微球与羧基微球混合纳米磁珠及纳米磁性氧化物MnFe_(2)O_(4)提取法。羟基修饰二氧化硅颗粒以及壳聚糖包覆的磁珠提取的核酸浓度较高,但纯度较差(A260/280及A260/230比值均超出标准范围)。对于同一样本,超顺磁性羧基纳米微粒提取的核酸扩增CT值为(21.28±0.36),核酸提取效率明显高于离心柱提取法,且具有统计学意义。二氧化硅磁性微球和羧基微球混合纳米磁珠、羟基修饰二氧化硅纳米磁珠及壳聚糖包覆的纳米磁珠核酸提取效率均低于离心柱提取法。此外,超顺磁性羧基纳米微粒的提取时间可缩短至15分钟。结论超顺磁性羧基纳米微粒核酸提取效率、精密度及核酸产物纯度最高,有较大的临床应用价值。

基于全自动免疫磁珠净化技术快速测定中药材中4种黄曲霉毒素

基于全自动免疫磁珠净化前处理技术,建立了适用于多种中药材基质中4种黄曲霉毒素的快速测定方法。中药材中的黄曲霉毒素经乙腈-水(9∶1)提取后,采用免疫磁珠自动富集净化后,由0.5%乙酸甲醇洗脱后定容;经Inertsil ODS-3 C18柱(250 mm×4.6 mm,5µm)分离,以乙腈-甲醇-水为流动相等度洗脱,采用高效液相色谱-荧光检测器(HPLC-FLD)测定。以5种易污染黄曲霉毒素的中药材基质进行方法学验证。结果表明该方法的线性关系良好,相关系数(r^(2))均达到0.9999;检出限为0.06~0.2µg·kg^(-1),定量下限为0.12~0.40µg·kg^(-1);不同基质中的平均回收率为71.9%~116%,相对标准偏差为0.10%~6.9%;在18 min内可完成24批样品的净化,比免疫亲和柱法的检测效率提高近85%。该方法快速、准确,通用性强,可用于多种中药材中4种黄曲霉毒素的批量快速测定。

磺胺间二甲氧嘧啶纳米抗体免疫磁珠的制备及其鉴定

基于纳米抗体(nanobody,Nb)和磁小体(bacterial magnetic particles,BMPs)的免疫磁珠在污染物分离分析中具有良好的应用前景,然而,不同长度柔性连接肽(linker)对免疫磁珠性能的影响尚未见相关报道。为了探究柔性连接肽长度对免疫磁珠的性能影响,本研究使用pET-28a作为载体,在磺胺间二甲氧嘧啶(sulfadimethoxine,SDM)Nb基因上融合了不同长度的柔性连接肽,分别为pET28a-SDM-Nb-(G4S)1-Cys和pET28a-SDM-Nb-(G4S)4-Cys,并使用大肠杆菌BL21(DE3)作为重组工程菌进行表达,最终获得Nb-(G4S)1-Cys和Nb-(G4S)4-Cys重组蛋白质。利用异源双功能试剂3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithiol)propionate,SPDP),分别将重组蛋白质与BMPs进行偶联,构建了免疫磁珠。利用免疫印迹对偶联结果进行了初步鉴定,并对偶联条件进行了优化。同时,使用透射电镜和Zeta电位分析仪对免疫磁珠的水合粒径、Zeta电位和分散性进行了分析。研究结果表明,SPDP能有效地将Nb-(G4S)1-Cys和Nb-(G4S)4-Cys定向固定在BMPs表面。通过差值法计算发现,Nb-(G4S)1-Cys与BMPs的偶联效率高于Nb-(G4S)4-Cys与BMPs的偶联效率。进一步表征结果显示,BMP-(G4S)1-Nb的Zeta电位绝对值更高,水合粒径更小,并且具有较低的多分散性指数,说明其在水相体系中具有更强的胶体稳定性。综上所述,利用BMPs和Nb-(G4S)1-Cys构建的免疫磁珠性能优于BMPs和Nb-(G4S)4-Cys构建的免疫磁珠。这为今后选择合适长度的连接肽构建高效的免疫磁珠分离分析SDM提供了理论依据。

表面偶极离子亲水磁珠固定化异柠檬酸裂解酶及其表征

比较两种亲水磁珠固定化结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(Mycobacterium tuberculosis isocitrate lyase,Mt ICL)并优化,为天然产物中Mt ICL先导抑制剂的亲和富集筛选提供适用的固定化酶。构建6×His-pET28a-ICL,经E.coli BL21(DE3)重组表达、Ni^(2+)-NTA柱纯化和酶学性质表征获得Mt ICL(重组蛋白质)。用羧基功能化和Ni^(2+)-NTA功能化制备两种表面偶极离子亲水磁珠固定化Mt ICL,比较其固载量、酶活力、稳定性及对已知抑制剂的响应。羧基磁珠固定化酶表观保留比活显著高于Ni^(2+)-NTA固定化酶。当羧基磁珠与重组蛋白质加样质量比为60∶1时,固定化酶表观保留比活可达游离酶的85%,此时羧基磁珠对Mt ICL表观固载量为(7.2±0.2)mg/g(以磁珠质量计,n=3)。羧基磁珠固定化Mt ICL对衣康酸的亲和力与游离酶无显著差异(P>0.05),且稳定性更强。此羧基磁珠固定化Mt ICL可望作为磁分离、亲和富集筛选天然产物中Mt ICL抑制剂类抗结核先导化合物。

氮掺杂粉煤灰磁珠@碳纳米管的制备及活化过硫酸盐去除罗丹明B试验研究

近年来,氮掺杂碳材料因无金属浸出和良好的过硫酸盐活化能力而受到越来越多的关注,但其存在易团聚、回收难等问题。本文利用燃煤废料粉煤灰磁珠的磁性和易于回收的特点,通过化学气相沉积法和水热法合成高缺陷氮掺杂碳纳米(MSs@N-CNTs)。采用扫描电子显微镜(SEM)、X射线衍射(XRD)、X射线光电子光谱学(XPS)、拉曼光谱(Raman spectra)、比表面分析仪(BET)等手段对MSs@N-CNTs的成分和微观结构进行了分析。并以罗丹明B(Rh B)为目标污染物,探究了不同掺氮量以及催化剂、过单硫酸盐(PMS)用量、温度、pH等因素对降解的影响。结果表明:在中性室温条件下,60 mL初始浓度为50 mg/L的Rh B溶液中,当催化剂用量为0.4 g/L、PMS用量为5 mg/L时,40 min内MSs@N-CNTs/PMS体系降解Rh B的效率可达99.2%;MSs@N-CNTs在去除污染物3个循环后降解率仍高达72%;MSs@N-CNTs的饱和磁化值为18.47 emu/g,在外加磁场的作用下可迅速从溶液中分离。本研究成果为粉煤灰磁珠在催化领域的高值利用提供了一条新途径。

古音六字诀音律操联合磁珠耳穴在癌因性疲乏患者中的应用效果

目的探讨古音六字诀音律操联合磁珠耳穴疗法对癌因性疲乏患者生活质量、心理状态、疲乏程度、治疗依从性及护理满意度的影响。方法选取2021年6月—2022年12月广西中医药大学第一附属医院肿瘤科收治的168例住院患者作为研究对象,按随机数字表法分为常规护理组、六字诀音律操组、磁珠耳穴组及六字诀音律操联合磁珠耳穴组,每组各42例。常规护理组实施常规护理,六字诀音律操组在常规护理基础上实施六字诀音律操,磁珠耳穴组在常规护理基础上实施磁珠耳穴,六字诀音律操联合磁珠耳穴组则在常规护理基础上实施六字诀音律操及磁珠耳穴。比较4组护理前及护理8周后的生活质量、心理状态、癌因性疲乏程度、治疗依从性、护理满意度。结果护理后,4组癌症患者生命质量测定量表各维度得分显著高于护理前(P<0.05),且联合组显著高于其他3组(P<0.05);90项症状自评量表各维度得分、癌症疲乏量表各维度得分均显著低于护理前(P<0.05),且联合组显著低于其他3组(P<0.05);联合组治疗依从性及护理满意度均高于其他3组(P<0.05)。结论对癌因性疲乏患者实施古音六字诀音律操联合磁珠耳穴疗法可提高其生活质量,改善其心理状态,并能进一步减轻其癌因性疲乏程度,提高其治疗依从性与护理满意度。

柴胡桂枝汤联合耳穴磁珠贴压治疗老年睡眠障碍的临床疗效观察

目的观察柴胡桂枝汤联合耳穴磁珠贴压治疗老年睡眠障碍的疗效和安全性,体现中医药简便廉效的特点,为失眠患者提供更多的选择。方法选择2020年4月—2022年3月四川省中医药科学院中医研究所(四川省第二中医医院)门诊及住院部60例患者作为研究对象,采用随机数表法将其分成综合治疗组和对照组,每组30例。其中,综合治疗组采用柴胡桂枝汤加耳穴磁珠贴压治疗,对照组采用安慰剂口服治疗,疗程均为4周(28 d),在第28天判定疗效。比较两组间中医证候评分和匹兹堡睡眠指数量表(PSQI)评分在治疗前后的变化,生命体征、三大常规、肝肾功能、ECG检测等不良事件发生情况。结果患者治疗前在PQSI评分及中医证候积分方面,进行独立样本t检验,两组差异无统计学意义(P>0.05)。在第2周、第4周,综合治疗组PSQI总分、中医证候评分低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。两组三大常规(血液及大小便常规)、肝功能、肾功能(丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、直接胆红素、间接胆红素、肌酐、尿素氮)及心电图(ECG)结果在治疗前和治疗后无明显变化。本研究过程中,发生不良事件2例,均对症处理,与试验药物无因果关系。结论柴胡桂枝汤联合耳穴磁珠贴压治疗老年睡眠障碍有明显效果,安全性可靠,该方法值得应用。

磁珠耳穴联合穴位贴敷疗法对缓解肺癌患者癌因性疲乏症状的应用研究

观察肺癌患者开展穴位贴敷+磁珠耳穴疗法改善癌因性疲乏症状的效果。方法 研究对象选为肺癌患者,样本共计110例,经电脑盲选法均等划分为采用肿瘤专科护理的参照组与采用穴位贴敷+磁珠耳穴的干预组,样本时间为2021.06-2022.08,比较两组护理结果。。结果 2组护理前癌症疲乏量表(CFS)相比未见可比性,P>0.05;干预组评分在护理后与参照组相比较低,P<0.05;两组疼痛视觉模拟评分(VAS)与健康调查简表(SF-36)评分护理前对比无可比性,P>0.05;干预组VAS评分护理后比参照组低,SF-36比参照组高,P<0.05。结论 肺癌患者开展穴位贴敷+磁珠耳穴疗法能够有效改善癌因性疲乏症状,缓解肺癌患者的疼痛程度,提高其生活质量,值得临床应用与推广。

免疫磁珠净化-高效液相色谱法测定香辛料中的黄曲霉毒素

为更好地监测辣椒、花椒等香辛料中黄曲霉毒素暴露状况,建立了基于免疫磁珠净化的高效液相色谱法测定香辛料中4种黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2。样品经乙腈-水(84+16,V+V)提取后,通过黄曲霉毒素总量免疫磁珠试剂盒净化,并结合CLOVER免疫磁珠自动工作站,显著提升了净化效率。加标回收试验结果表明,在辣椒、花椒等复杂样品基质中,4种毒素的平均回收率为86%~111%,相对标准偏差小于7%。总体而言,所建立的方法准确、灵敏,适用于调味品中4种黄曲霉毒素的同步定量检测。

M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术检测肺炎克雷伯菌

一直以来,人类健康都在承受着病原微生不同程度的威胁,其中肺炎克雷伯菌是常见的条件致病菌之一,当机体免疫力低下时,容易发生炎性病变,从而引起肺炎、尿路感染和败血症等院内感染。综合分析肺炎克雷伯菌的致病特征,认为快速、准确地从患者血液中检出病原菌,对感染患者进行及时的治疗具有重要意义。方法 传统病原微生物的检测有培养法、免疫检测或者生化鉴定等方法,随着分子生物学技术不断发展,使病原微生物的快速和灵敏检测成为了可能,结合我们新型的聚合酶链式反应技术,产生新的实验方法,探讨分析M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术检测的可行性以及临床样本中病原菌核酸的最优提取方法。结果 在已经建立的PCR方法中的引物作为内引物的基础上,根据RAA的引物设计原则设计RAA反应过程的外引物,筛选出最优引物对,建立RAP的方法和检测技术,预期核酸扩增特异性达到100%,检测下限达到10CFU/mL。结论 分析肺炎克雷伯菌的病原学特征、基因的特点,建立了这套灵敏度高、特异性强、反应迅速可靠的M1磁珠富集联合重组酶介导的聚合酶链式反应技术,使得检测血液样本中的肺炎克雷伯菌更具特异性,有助于发现早期细菌感染患者并给予其及时的治疗,为今后肺炎克雷伯菌的准确诊断提供了新的选择。

免疫磁珠净化/高效液相色谱检测植物油中黄曲霉毒素含量

采用基于免疫磁珠净化的高效液相色谱技术测定植物油中黄曲霉毒素B_(1)(AFB_(1))、黄曲霉毒素B_(2)(AFB_(2))、黄曲霉毒素G1(AFG1)和黄曲霉毒素G_(2)(AFG_(2))含量。样品以甲醇-水(70∶30,体积比)提取后,经黄曲霉毒素总量免疫磁珠试剂盒净化,并结合免疫磁珠自动工作站,显著提升了净化效率。4种黄曲霉毒素在一定质量浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数(r^(2))均大于0.99,AFB_(1)与AFB_(2)、AFG1与AFG_(2)的定量下限分别为0.05μg/kg和0.10μg/kg。4种毒素在5种商品植物油基质中的平均回收率为74.0%~96.0%,日间和日内相对标准偏差(RSD)均小于7.0%。所建立的方法与国标GB 5009.22-2016的免疫亲和柱法无显著性差异,方法准确、灵敏,适用于植物油中4种黄曲霉毒素的同时定量分析。