槲皮素通过生长抑制特异性基因5调节微小RNA-23a-3p和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制垂体神经内分泌肿瘤的增殖机制

目的:探讨槲皮素对垂体神经内分泌肿瘤(PitNETs)生长的抑制作用及其可能机制。方法:通过Starbase工具预测生长抑制特异性基因5(GAS5)与微小RNA-23a-3p(miR-23a-3p)结合情况,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定GAS5和miR-23a-3p之间的结合关系。体外培养人垂体瘤细胞系RC-4B/C,分为对照组(Control)、槲皮素组(Quercetin)、GAS5抑制组(Si-GAS5)和槲皮素+si-GAS5组(Quercetin+si-GAS5),对比分析槲皮素对GAS5、miR-23a-3p及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响,以及人垂体瘤复苏细胞(RC-4B/C)生长和侵袭能力的影响。结果:Starbase工具预测GAS5与miR-23a-3p结合,双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀测定揭示了GAS5和miR-23a-3p之间的直接结合。槲皮素促进GAS5的表达,抑制miR-23a-3p和PI3K/AKT的表达,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);下调GAS5、miR-23a-3p表达增多,促进RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05);槲皮素可以逆转GAS5下调引起的miR-23a-3p、PI3K/AKT表达增加,抑制RC-4B/C细胞的增殖和侵袭(均P<0.05)。结论:槲皮素可能通过促进GAS5表达竞争性抑制miR-23a-3p,降低了PI3K/AKT,抑制垂体神经内分泌肿瘤的生长。

气道重塑与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路在支气管哮喘发病机制中的研究进展

支气管哮喘是一种以可逆性气流受限为特征的气道慢性炎症性疾病。在支气管哮喘众多发病机制中,气道重塑与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)通路联系紧密。气道重塑与支气管气道平滑肌细胞的增殖和凋亡密切相关。PI3K/PKB信号通路作为细胞内一条重要的信号传导通路,起到抑制细胞凋亡、促进细胞周期的进展,介导细胞增殖等作用,因而可以结合气道重塑与PI3K/PKB通路对支气管哮喘的发病和治疗进行探讨和研究。该研究现对支气管哮喘、气道重塑、PI3K/PKB通路的研究进展进行了综述,以期为支气管哮喘的治疗提供借鉴。

17β-雌二醇对子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路的活化

目的:探讨17β雌二醇(E2)对子宫内膜癌细胞系HEC1A磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号传导通路的激活作用以及PI3K抑制剂和雌激素受体(ER)拮抗剂对它的影响。方法:应用免疫印迹杂交技术检测1×106mol/LE2作用于HEC1A细胞不同时间和不同浓度E2作用细胞15min后PKB的活化情况,同法检测PI3K抑制剂LY294002和ER拮抗剂ICI182780对E2活化PKB的影响。结果:1×106mol/LE2作用于HEC1A细胞15min时,PKB活化最明显,Ser473位点磷酸化PKB和总PKB比值(pPKB/PKB)为0.7877±0.0346,而基础值为0.5198±0.0166(P<0.001),且持续至少达2h,随着E2浓度的增加,PKB活化逐渐增强;随着LY294002作用浓度增加,E2作用HEC1A细胞后PKB的活化水平逐渐下降,浓度为50μmol/L时已完全阻断了E2对HEC1A细胞PKB的活化;而随着ICI182780浓度的增加,E2作用HEC1A细胞后PKB的活化水平无明显改变。结论:E2可通过非转录效应,迅速激活HEC1A细胞的PI3K/PKB信号传导通路,而且是ER非依赖性的。

生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨生长抑素联合人转录因子叉头框蛋白D1(FOXD1)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路调控胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究。方法研究于2018年12月至2019年12月进行,通过体外培养PANC-1细胞,经过不同浓度(0 mg/L、100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的生长抑素(SST)处理细胞,记为生长抑素各剂量组,其中0 mg/L和400 mg/L的生长抑素作为对照组(Control)和生长抑素组(SST);将过表达载体(pcDNA)和过表达FOXD1(FOXD1)转染至PANC-1细胞,经过400 mg/L的生长抑素及20 mol/L的PI3K抑制剂LY294002处理细胞,记为SST+pcDNA组、SST+FOXD1组和SST+FOXD1+LY294002组。四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT)检测细胞增殖;Transwell检测细胞迁移和侵袭;蛋白质印迹法(Western blotting)检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、FOXD1和PI3K/AKT相关蛋白的表达;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)检测FOXD1 mRNA的表达。结果与Control组相比,SST组可以抑制FOXD1 mRNA(0.47±0.03)及蛋白表达(0.42±0.04)、增殖(0.52±0.05)、迁移(66.8±7.2)和侵袭(63.7±6.5)能力,下调p-PI3K(0.43±0.04)、p-AKT(0.39±0.03)蛋白表达;与SST+pcDNA组相比,SST+FOXD1组可以促进以抑制FOXD1 mRNA(0.67±0.05)及蛋白表达(0.64±0.06)、增殖(0.71±0.07)、迁移(86.9±8.5)和侵袭(81.5±7.3)能力,上调p-PI3K(0.62±0.05)、p-AKT(0.65±0.06)蛋白表达。与SST+FOXD1组相比,SST+FOXD1+LY294002组可以抑制FOXD1 mRNA(0.37±0.04)及蛋白表达(0.35±0.03)、增殖(0.53±0.05)、迁移(67.2±6.5)和侵袭(62.5±5.2)。结论生长抑素通过调控FOXD1的表达抑制胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。

DIDS对十字孢碱诱导心肌细胞凋亡中磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导的影响

目的探讨氯离子通道阻断剂DIDS对十字孢碱诱导心肌细胞凋亡与磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号及其下游分子一氧化氮合酶/一氧化氮的关系。方法实验分为对照组、十字孢碱组、DIDS组、LY294002(特异性磷脂酰肌醇3激酶抑制剂)组和L-NAME(非特异性一氧化氮合酶抑制剂)组。在十字孢碱诱导心肌细胞凋亡模型上,观察DIDS对心肌细胞存活率、凋亡和磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B及其下游分子一氧化氮合酶/一氧化氮的影响。结果与十字孢碱组比,DIDS明显改善了细胞存活率,提高了细胞磷酸化蛋白激酶B活性2.1倍(P<0.01),增加了一氧化氮合酶和磷酸化一氧化氮合酶的水平和一氧化氮水平(P<0.01);LY294002预处理完全抑制了磷酸化蛋白激酶B、一氧化氮合酶和磷酸化一氧化氮合酶水平的升高及升高的一氧化氮,完全阻断了DIDS的抗细胞凋亡作用;L-NAME预处理也使升高的一氧化氮水平下降,但仅部分阻断了DIDS的细胞保护作用。结论DIDS通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路发挥其抑制十字孢碱诱导的心肌细胞凋亡作用。

抵抗素通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大机制研究

目的探讨抵抗素激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大的分子机制。方法取生长状态良好的H9c2心肌细胞,使用含1 g·L^(-1)胎牛血清的高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)处理24 h使其细胞同步化后进行不同干预。随机将H9c2心肌细胞分为Con组、R50组、LY294002+R50组和LY294002组,Con组为空白对照;R50组细胞应用50μg·L^(-1)抵抗素处理48 h组;LY294002+R50组细胞预先应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002干预2 h后再用50μg·L^(-1)抵抗素处理46 h;LY294002组细胞应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002处理2 h组。4组心肌细胞加含药物DMEM培养48 h后进行细胞面积、单细胞蛋白质合成量测定,Western blot检测心肌细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、原癌基因c-myc蛋白及PI3K/Akt非磷酸化及磷酸化水平表达。观察抵抗素(50μg·L^(-1))处理细胞不同时间(0、1、2、3 h)后运用Western blot测定磷酸化(p-Akt)的蛋白表达水平,检测抵抗素处理1 h后4组心肌细胞PI3K/Akt信号通路磷酸化表达水平。结果抵抗素处理H9c2心肌细胞0、1、2、3 h组p-Akt蛋白表达水平分别为0.60±0.26、0.71±0.67、0.52±0.32、0.51±0.32;与0 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞1 h组p-Akt蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与1 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞2、3 h组pAkt蛋白表达水平显著降低(P<0.01);抵抗素处理H9c2心肌细胞2 h与处理3 h后H9c2心肌细胞中p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,与Con组比较,R50组、LY294002+R50组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而LY294002组其心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与R50组比较,LY294002+R50组、LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与LY294002+R50组比较,LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。Con组、R50组、LY294002+R50组、LY294002组c-myc蛋白表达水平分别为0.45±0.30、0.68±0.32、0.56±0.33、0.16±0.20,4组间比较差异有统计学意义(F=178.91,P<0.05);与Con组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,R50组c-myc蛋白表达水平显著增高(P<0.05);而LY294002+R50组c-myc蛋白表达水平较Con组、LY294002组升高但低于R50组(P<0.05)。经抵抗素处理H9c2心肌细胞3 h后,R50组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平较Con组、LY294002+R50组、LY294002组显著升高(P<0.05),其余各组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抵抗素通过激活PI3K/Akt通路,提高Akt磷酸化水平来诱导H9c2心肌细胞肥大。

整合素连接激酶经磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路促进胃癌细胞增殖和迁移

目的探讨整合素连接激酶(ILK)对胃癌细胞增殖、侵袭的影响及相关机制。方法利用基因转染建立过表达ILK基因的HGC-27及KATOⅢ胃癌细胞株;细胞计数试剂(CCK)8和Transwell实验研究上调ILK基因表达对HGC-27及KATOⅢ细胞增殖和迁移能力的作用;Western印迹实验检测上调ILK基因表达是否可影响HGC-27及KATOⅢ细胞Akt及p-Akt蛋白的表达。结果上调ILK基因表达可显著促进HGC-27及KATOⅢ细胞的增殖和迁移能力;上调ILK基因表达可明显上调HGC-27及KATOⅢ细胞p-Akt蛋白水平。结论 ILK经磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路参与及影响胃癌细胞的致癌潜能。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白信号通路在肺部疾病中的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamyc in,PI3K/Akt/mTOR)是细胞内重要信号通路,在细胞生长、增殖、分化和蛋白合成等过程中起重要作用。肺癌、哮喘、肺动脉高压、肺纤维化、慢性阻塞性肺疾病(chronic pulmonary obstructive disease,COPD)等疾病是呼吸系统常见疾病,其病理机制涉及细胞增殖及凋亡等,与PI3K/Akt/mTOR信号通路关系密切。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导通路在重症急性胰腺炎中性粒细胞活化中的作用

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/PKB)信号转导通路在重症急性胰腺炎中性粒细胞活化中的作用.健康成年♂SD大鼠30只,随机分为对照组、SAP组和SAP+wortmannin组,每组10只.胆胰管内逆行注射法制作SAP模型,模型制成6h后采用密度梯度离心方法分离出中性粒细胞,用ELISA法检测血中TNF-α和IL- 1β的含量,RT-PCR技术检测中性粒细胞内TNF-α和IL-1βmRNA的变化,Western blot法检测细胞中PKB的活性变化.结果：胰腺炎大鼠血中TNF-α和IL-1β的含量较对照组明显升高(150.8±31.7ng/L vs 22.4±5.2ng/L,P＜0.01；217.5±38.4ng/L vs 43.7±9.6ng/L,P＜0.01),同时中性粒细胞内TNF-α和IL-1βmRNA及p-PKB的水平也明显升高(0.72±0.06 vs 0.19±0.03,P＜0.01；0.84±0.11 vs 0.14±0.04,P＜0.01；0.63±0.08 vs 0.34±0.03,P＜0.01),wortmannin能显著抑制血中TNF-α(70.9±11.3 vs 150.8±31.7ng/L)和IL-1β(93.0±11.5 vs 217.5±38.4ng/L)含量,中性粒细胞中TNF-α和IL-1βmRNA(0.32±0.04 vs 0.72±0.06及0.22±0.04 vs 0.84±0.11,P<0.01)的表达及PKB活性(0.38±0.06 vs 0.63±0.08,P＜0.01)也显著下降.结论：PI3K/PKB信号转导通路介导了重症急性胰腺炎大鼠中性粒细胞的活化及促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的产生.

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路对MC3T3-E1细胞增殖和周期调控的研究

目的近年的研究显示,磷脂酰肌醇3激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(protein kenase B,PKB/Akt)信号通路是骨形成和骨重建的关键调控信号,文中研究抑制PI3K/Akt信号通路后对MC3T3-E1细胞增殖和细胞周期的影响。方法用PI3K/Akt信号抑制剂PF-04691502处理MC3T3-E1细胞后,通过MTS法检测细胞增殖的活性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,Western blot检测细胞周期相关蛋白的表达。结果应用抑制剂抑制PI3K/Akt信号通路后,与对照组细胞存活率(100±5.6)%比较,30、150、750 nmol/L的MC3T3-E1细胞增殖活性明显降低[(64.7±4.1)%、(42.3±1.1)%、(15.9±0.4)%,P<0.01],且随着药物浓度的增加,细胞增殖活性降低越明显。同时,与对照组比较,1μmol/L PF-04691502处理组sub-G1期细胞比例明显升高[(1.45±0.43)vs(0.27±0.21),P<0.01],且细胞周期蛋白D1表达降低。结论抑制PI3K/Akt信号通路能将MC3T3-E1细胞阻滞于G1期,能降低细胞的增殖能力。

槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞自噬及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白信号通路的影响

目的观察槲皮素对人前列腺癌PC-3细胞活力、凋亡、自噬及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响。方法体外培养PC-3细胞,采用CCK-8法检测PC-3细胞活力,TUNEL染色检测PC-3细胞凋亡,吖啶橙染色观察PC-3细胞自噬小泡,GFP-LC3质粒转染分析观察PC-3细胞自噬小体,Western blot分析检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3融合蛋白(LC3)、Beclin-1和PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白的表达。结果槲皮素以浓度-时间依赖性的方式抑制PC-3细胞活力,并诱导细胞凋亡;能够增加PC-3细胞自噬小泡和自噬小体的数量;能够升高PC-3细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ及Beclin-1表达,同时降低磷酸化-PI3K、磷酸化-Akt和磷酸化-mTOR的表达。结论槲皮素可能是通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路诱导PC-3细胞发生自噬。

枇杷叶提取物通过激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路减轻脂多糖诱导的肺细胞损伤

目的探讨枇杷叶提取物对脂多糖(LPS)诱导的人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549增殖、凋亡及氧化应激的影响及其可能作用机制。方法2019年6月至2020年7月,采用LPS诱导的A549细胞建立肺损伤模型(LPS组),同时将正常培养的细胞作为对照组。不同剂量(1 mg/L、2 mg/L、4 mg/L)的枇杷叶提取物处理细胞(LPS+枇杷叶-L组、LPS+枇杷叶-M组、LPS+枇杷叶-H组),添加磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路抑制剂LY294002与枇杷叶提取物处理细胞(LPS+枇杷叶-H+LY294002组);采用MTT法检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的含量;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)的含量;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛的含量;蛋白质印迹法(Westernblotting)检测磷酸化磷脂酰肌醇-3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白蛋白表达量。结果与对照组比较,LPS组吸光度[(1.38±0.06)比(0.55±0.02)]及SOD的含量[(81.66±5.36)U/L比(14.65±1.06)U/L]降低,凋亡率[(6.41±0.25)%比(27.43±1.00)%]、Bax蛋白水平及LDH[(242.86±6.09)U/L比(875.92±15.01)U/L]、丙二醛[(121.55±3.17)μmol/g比(424.46±6.48)μmol/g]的含量升高,Bcl-2、p-PI3K[(0.60±0.04)比(0.13±0.01)]、p-Akt[(0.51±0.04)比(0.09±0.01)]蛋白水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与LPS组比较,LPS+枇杷叶-M组、LPS+枇杷叶-H组吸光度[(0.55±0.02)比(0.86±0.03)、(1.18±0.05)]及SOD[(14.65±1.06)U/L比(36.84±2.08)U/L、(70.97±3.03)U/L]的含量升高,凋亡率[(27.43±1.00)%比(22.24±0.81)%、(14.78±0.49)%]、Bax蛋白水平及LDH[(875.92±15.01)U/L比(641.95±9.81)U/L、(365.47±7.02)U/L]、丙二醛[(424.46±6.48)μmol/g比(277.94±6.90)μmol/g、(156.30±3.26)μmol/g]的含量降低,Bcl-2、p-PI3K[(0.13±0.01)比(0.32±0.01)、(0.54±0.03)]、p-Akt[(0.09±0.01)比(0.25±0.02)、(0.42±0.03)]蛋白水平升高,均差异有统计学意义(P<0.05);添加LY294002可明显逆转枇杷叶提取物对LPS诱导的A549细胞增殖、凋亡及氧化应激的作用。结论枇杷叶提取物可通过激活PI3K/Akt信号通路减轻LPS诱导的A549细胞增殖抑制、凋亡和氧化应激效应,为探究枇杷叶治疗细菌感染引起的急性肺损伤提供依据。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导通路在胰蛋白酶激活中性粒细胞中的作用

目的:探讨胰蛋白酶对中性粒细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号转导通路的激活作用及PI3K抑制剂对其的影响。方法:应用Western blot技术检测特定浓度胰蛋白酶(40nmol/L)作用中性粒细胞后及应用PI3K抑制剂Wortmannin和LY294002后的p-PKB活化情况;同时应用ELISA及RT-PCR技术检测细胞培养液及中性粒细胞内TNF-α、IL-1β蛋白和mRNA的变化。结果:40nmol/L胰蛋白酶作用中性粒细胞后p-PKB的水平显著高于对照组(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白的表达也出现了同样的趋势;预先应用Wortmannin或LY294002后完全阻断了胰蛋白酶对中性粒细胞p-PKB的激活作用,与胰蛋白酶刺激组比较差异显著(P<0.01);TNF-α和IL-1β蛋白及mRNA也随着p-PKB活性的抑制而表达减弱。结论:胰蛋白酶能够激活中性粒细胞内PI3K/PKB信号传导通路,Wortmannin及LY294002可以抑制胰蛋白酶对此通路的激活。

机械张应变诱导的大鼠血管平滑肌细胞磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路相关基因的筛选

目的筛选机械张应变诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路的相关基因。方法应用FX-4000T细胞应变加载系统,对大鼠主动脉VSMCs施加1Hz、10%张应变,Western blotting检测细胞在不同加载时间下Akt磷酸化水平的变化;用抑制消减杂交法(SSH),筛选给予PI3K的抑制剂Wortmannin和给予DMSO两组细胞在加载张应变24h后的差异表达基因片段,得到的消减杂交产物连接到T载体上,经过蓝白斑筛选,对所有阳性克隆进行菌液PCR筛选及测序,应用BLASTN进行序列比对。结果机械张应变改变了VSMCs磷酸化Akt水平;SSH所获得的54个克隆随机挑选30个送测序,得到10个不同差异表达序列标签(EST),发现6个EST代表的大鼠基因可能与机械张应变诱导的VSMCs PI3K/Akt信号通路相关,它们是:Highmobility group box1(HMGB1),Neural precursor cell expressed(Nedd4a),Cyclin-dependent kinase5(CDK5),Histonedeacetylase3(HDAC3),Ubiquitin-like1(Uble1a),Heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H1(hnRNP)。结论SSH有效筛选到了机械张应变诱导的VSMCs PI3K/Akt信号通路的相关基因,为进一步研究机械张应变诱导的血管病理生理改变提供了资料。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导与卵巢癌

研究发现磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号传导通路异常活化在卵巢癌的发生、发展、凋亡、血管生成、转移及耐药等方面起着重要的作用,机制包括调节细胞周期促进细胞增殖,作用于凋亡相关因子抑制肿瘤细胞凋亡并导致化学耐药发生,影响血管生长因子及基质金属蛋白酶生成促进肿瘤侵袭转移等。已证明以该通路为靶点的抑制剂如LY294002、雷帕霉素等,抑制卵巢癌细胞增殖并增强其对化疗药物敏感性,在卵巢癌治疗中具有广阔的应用前景。

黄芩素抑制磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路并诱导MGC-803细胞自噬

目的研究黄芩素(BAI)对胃癌细胞系MGC-803细胞自噬的影响。方法使用(0、 5、 15、 25、 50)μmol/L BAI处理胃癌MGC-803细胞24、 48、 72 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,吖啶橙(AO)染色结合免疫荧光细胞化学染色观察微管相关蛋白1轻链3(LC3)和P62的表达确定MGC-803细胞的自噬情况, Western blot法检测细胞LC3、 P62、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化的PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(AKT)、 p-AKT的蛋白水平。结果与对照组相比, BAI可显著抑制MGC-803细胞的增殖,并呈时间和剂量依赖性;BAI处理的MGC-803细胞内酸性溶酶体显著增加, LC3表达增强;BAI处理后可显著降低PI3K和AKT蛋白的磷酸化, LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加、上调P62蛋白的表达。结论黄芩素抑制PI3K/AKT信号通路诱导MGC-803细胞发生自噬。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路与肿瘤化疗

化疗在肿瘤治疗中占据着不可替代的重要地位,如何预防或克服耐药已成为临床研究的热点和难点问题。随着对信号转导与肿瘤关系的深入研究,从信号转导角度探索肿瘤耐药机制,认识到针对信号转导异常环节进行干预是探索逆转耐药的新思路等,对提高肿瘤化疗敏感性有重要意义。以肿瘤分子生物学为基础,综述磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路在肿瘤化疗中可能的调节作用,有利于寻求新的治疗模式和提高治疗增益比。

磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路与宫颈癌

人乳头状瘤病毒(HPV)是宫颈癌最主要的危险因素,但不是独立致癌因子。人乳头状瘤病毒(HPV)感染后可能引起信号转导途径异常而促使宫颈癌发生。磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/PKB)信号通路转导促增殖与抗凋亡信号,通过多方面的作用机制参与肿瘤发生发展。该通路各组分表达水平及活性的异常改变也见于宫颈癌,可能和HPV致瘤机理及宫颈癌发生机制有关。PI3K抑制剂在体内外都可阻断PI3K/PKB通路,抑制增殖诱导凋亡,与传统抗肿瘤方案联合有增效作用。

骨化三醇通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路改善高糖诱导的血管内皮细胞损伤的研究

目的探讨骨化三醇(Cal)通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信号通路,改善高糖诱导的血管内皮细胞损伤的机制。方法选取对数生长期的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),分为正常对照组(Con)、甘露醇对照组(Hoc)、高糖(HG)组、HG+Cal组、HG+PI3K抑制剂(LY294002)+Cal(HG+LY294002+Cal)组、HG+PI3K激动剂(740Y-P)+Cal(HG+740Y-P+Cal)组。CCK-8法评估细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,q RT-PCR检测PI3K、AKT及VEGF mRNA表达,Western blot检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT和VEGF蛋白表达,ELISA检测TNF-α、IL-1β和IL-6水平。结果与Con、Hoc组比较,HG组细胞凋亡率、PI3K、AKT mRNA和p-PI3K、p-AKT蛋白表达、TNF-α、IL-1β和IL-6升高(P<0.05),细胞增殖能力、VEGF mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。与HG组比较,HG+Cal组细胞增殖能力、VEGF mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),细胞凋亡率、PI3K、AKT mRNA和p-PI3K、p-AKT蛋白表达、TNF-α、IL-1β和IL-6降低(P<0.05)。与HG+Cal组比较,HG+LY294002+Cal组细胞凋亡率、PI3K、AKT mRNA和p-PI3K、p-AKT蛋白表达、TNF-α、IL-1β和IL-6降低(P<0.05),细胞增殖能力、VEGF mRNA和蛋白表达升高(P<0.05)。与HG+LY294002+Cal组比较,HG+740Y-P+Cal组细胞凋亡率、PI3K、AKTmRNA和p-PI3K、p-AKT蛋白表达、TNF-α、IL-1β和IL-6升高(P<0.05),细胞增殖能力、VEGF mRNA和蛋白表达降低(P<0.05)。结论Cal通过调控PI3K/AKT通路,增加VEGF表达,降低炎症反应,促进血管损伤修复、再生与创面愈合。

骨化三醇通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路对糖尿病足溃疡大鼠创面愈合影响的研究

目的 探讨骨化三醇干预糖尿病足溃疡(DFU)大鼠对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路及创面愈合的影响。方法 32只雄性SD大鼠分为正常对照(Con)组、DFU组、骨化三醇低剂量(L)组、骨化三醇高剂量(H)组。各组大鼠左足背制造直径5 mm、深达筋膜的圆形创面。HE染色观察创面组织病理学变化,免疫组织化学法比较各组创面组织CD34阳性细胞分布及p-PI3K、p-AKT表达,ELISA法检测血清IL-6、干扰素γ(IFN-γ)、TNF-α和IL-7含量,RT-PCR检测各组PI3K、AKT mRNA表达,Western blot法检测PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT及VEGF蛋白表达。结果 与Con组比较,DFU、L、H组IL-6、IFN-γ、TNF-α、IL-7、CD34、PI3K mRNA、AKT mRNA、p-AKT蛋白表达、p-PI3K蛋白表达、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT升高(P<0.05),PI3K蛋白表达降低(P<0.05),DFU、L组VEGF、AKT蛋白表达降低(P<0.05)。与DFU组比较,L、H组VEGF、AKT、PI3K蛋白表达升高(P<0.05),p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT降低(P<0.05),L组IL-6降低(P<0.05),H组CD34表达升高(P<0.05),IL-6、IFN-γ、TNF-α及IL-7、PI3K mRNA、AKT mRNA、p-AKT蛋白、p-PI3K蛋白表达降低(P<0.05)。与L组比较,H组CD34、VEGF蛋白、AKT蛋白、PI3K蛋白表达升高(P<0.05),IL-6、PI3K mRNA、AKT mRNA、p-AKT蛋白、p-PI3K蛋白、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT降低(P<0.05)。结论 骨化三醇干预可能通过下调PI3K/AKT信号通路活性,抑制炎症反应,促进DFU大鼠新生血管生成及创面愈合。