增生性瘢痕中磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶和c-Jun蛋白的表达特征及其与瘢痕形成的关系

目的 观察磷酸化 P38丝裂原活化蛋白激酶 (P38MAPK)和 c- Jun蛋白在增生性瘢痕组织中的表达特征及其影响瘢痕形成和成熟的机制。 方法 取 16例住院的增生性瘢痕患者的瘢痕组织 ,并将其分为生长活跃期组(形成时间在 1年以内 ,含 1年者 )、生长稳定期组 ,每组各 8例 ;另取正常皮肤 8例。所有取材均未经任何治疗。用免疫组织化学方法和常规病理技术检测磷酸化 P38MAPK和 c- Jun两种蛋白 ,在增生性瘢痕组织和正常皮肤组织中的表达和分布规律。 结果 正常皮肤组织中 ,磷酸化 P38MAPK主要分布于表皮基底层细胞的胞浆和胞核内 ,c- Jun蛋白则主要定位于表皮细胞和内皮细胞中 ,两种蛋白的阳性细胞率分别为 2 1.3%± 3.6 %和 33.4 %± 3.5 %。在处于生长活跃期的增生性瘢痕组织中 ,磷酸化 P38MAPK和 c- Jun的阳性信号主要定位于表皮细胞和部分成纤维细胞内 ,阳性细胞率分别上升至 6 9.5 %± 3.3%和 5 9.6 %± 4 .3% ,明显高于正常皮肤组织 (P<0 .0 1) ;而在成熟稳定的增生性瘢痕中 ,两种蛋白表达有所下降 ,但仍高于正常皮肤组织。 结论 增生性瘢痕的形成和成熟可能与激活 P38MAPK信号传递通路 ,影响c- Jun蛋白表达有关。

电针夹脊穴在佐剂性关节炎大鼠镇痛过程中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的变化及作用

目的:观察电针夹脊穴对佐剂性关节炎大鼠背根神经节(dorsalrootganglion,DRG)内磷酸化p38MAPK表达的影响,从信号转导的角度研究电针镇痛的机制。方法:以完全福氏佐剂(CFA)佐剂性关节炎大鼠为疼痛模型,采用免疫组化技术,分别检测空白对照组、模型组、及电针治疗组SD大鼠DGG内磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedproteinki-nase,MAPK)表达特征。结果:与空白对照组犤(7.65±0.72)s犦相比,造模后24,48h及7d后,模型组大鼠痛阈下降分别为(6.67±0.59),(6.53±0.73),(6.64±0.76)s,同时DRG内p38MAPK磷酸化明显增多(P<0.05),尤以48h后增加明显;电针治疗组大鼠在电针夹脊穴治疗后,24,48h及7d后痛阈检测发现其痛阈回升,分别为(7.31±0.79),(7.42±0.93),和(7.44±0.89)s,DRG内p38MAPK磷酸化水平下降(P<0.05)。结论:p38MAPK可能为电针镇痛中一个重要的信号转导分子,其磷酸化在疼痛及电针镇痛过程中其重要作用。

辛伐他汀抑制高糖损伤乳鼠心肌细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-p38丝裂原活化蛋白激酶通路抑制心肌细胞凋亡

目的:观察辛伐他汀对高糖损伤乳鼠心肌细胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶-p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路、培养液中半胱天冬氨酸蛋白激酶-3(Caspase-3)的干预作用以及对乳鼠心肌细胞凋亡的影响,探讨其可能机制。方法:原代培养新生1~3d SD乳鼠心肌细胞72 h后,随机分为五组并加入相应的处理药物,即对照组、高糖组和三组不同浓度的辛伐他汀干预组即分别为高糖+10-7M辛伐他汀组、高糖+10-6M辛伐他汀组、高糖+10-5M辛伐他汀组。培养72 h后通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定各组心肌细胞活力,化学比色法测定心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活力,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞内NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA的表达,通过Western blot测定细胞内p38MAPK蛋白表达,双抗体夹心酶联免疫吸附法(ABC-Elisa)测定各组心肌细胞培养液中Caspase-3浓度,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡情况。结果:高糖组、高糖+10-7M辛伐他汀组和高糖+10-6M辛伐他汀组心肌细胞的细胞活力、SOD活力均较对照组明显降低,LDH活力均较对照组明显升高(P均<0.01);三组不同浓度的辛伐他汀干预组心肌细胞的细胞活力、SOD活力均较高糖组明显升高,LDH活力较高糖组明显降低,且呈浓度依赖性(P均<0.05)。高糖组、高糖+10-7M辛伐他汀组、高糖+10-6M辛伐他汀组心肌细胞培养液Caspase-3浓度较对照组明显升高,其NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA的相对表达水平以及p38MAPK蛋白表达水平均较对照组明显升高,TUNEL阳性细胞数较对照组升高;三组不同浓度的辛伐他汀干预组心肌细胞培养液Caspase-3浓度较高糖组呈浓度依赖性地降低,其NADPH氧化酶亚基p22phox、p47phox mRNA的相对表达水平以及p38MAPK蛋白表达水平均较高糖组明显降低,且呈浓度依赖性(P均<0.05),TUNEL阳性细胞数呈浓度依赖性地降低。结论:辛伐他汀通过抑制NADPH氧化酶-p38MAPK信号通路抑制心肌细胞凋亡,从而对高浓度葡萄糖诱导的心肌细胞损伤发挥保护作用。

磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶与转化生长因子β1在正常和腰椎间盘退变组织中的表达

背景:研究表明p38丝裂原活化蛋白激酶信号转导通路与椎间盘退变过程中炎症反应密切相关。目的:检测腰退变椎间盘组织和正常腰椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达。方法:选取经手术切除的36例退变椎间盘组织和10例正常椎间盘组织为对象,应用免疫组织化学法检测两组中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的表达,并应用真彩色病理图像分析系统进行分析。结果与结论:腰退变椎间盘组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1的阳性表达率均高于正常椎间盘组织(P<0.05),证实磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和转化生长因子β1在退变椎间盘组织中呈高表达。

糖尿病大鼠肾脏组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的表达特征及意义

目的 :探讨糖尿病 ( DM)大鼠肾组织 p38丝裂原活化蛋白激酶 ( MAPK)及其下游转录因子 c AMP反应元件结合蛋白 ( CREB)的表达特征及与肾小球肥大、细胞外基质积聚的关系。方法 :70只雄性 Wistar大鼠 ,行右肾切除术 2周后 ,随机分为两组 :右肾切除对照组 ( CN)和 DM组。 DM组经腹腔注射链脲佐菌素( STZ,6 5 mg/kg)诱发 DM。 CN组注射等量枸橼酸缓冲液。两组分别于注射后第 1、2、4、8和 12周各取 6只大鼠 ,收集 2 4 h尿液 ,测定尿蛋白 ( Upro)、肌酐 ( UCr) ;股动脉放血分离血清 ,测血糖 ( Glu)、血肌酐 ( SCr)、尿素氮( BU N) ,并计算肌酐清除率 ( CCr) ;免疫组化法检测肾皮质磷酸化 p38MAPK( P p38MAPK)及其磷酸化CREB( P CREB)的表达特征 ,并检测转化生长因子 β1 ( TGFβ1 )、纤维粘连蛋白 ( FN)及层粘连蛋白 ( L N)的表达 ,应用图像分析系统进行定量分析。流式细胞术检测 P p38MAPK和 P CREB蛋白的表达。结果 :与 CN组比较 ,DM组 P p38MAPK在第 1、2、4和 8周升高 ( P均 <0 .0 1) ,第 12周降至正常。DM组 P CREB在第2、4和 8周增高 ( P均 <0 .0 1) ,在 12周时降至正常。 TGFβ1 、FN、L N分别于第 2、4周开始升高。结论 :肾小球p38MAPK及其下游转录因子 CREB活性在早期糖尿病肾病大鼠肾组织中升高 。

小肠缺血-再灌注后磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的表达特征及与干细胞定位的关系

目的 :观察大鼠肠缺血再灌注 (I R)后磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶 (MAPK)的表达特征及与干细胞定位的关系。方法 :雄性 Wistar大鼠 4 8只 ,随机分为假手术组 (C)、肠缺血组 (I)和肠缺血再灌注组(R)。 C组仅分离肠系膜上动脉根部而不夹闭 ;I组用微血管夹夹闭肠系膜上动脉根部 4 5分钟后即刻活杀 ;R组动物在缺血 4 5分钟之后放松血管夹 ,分别于再灌注后 2、6、12和 2 4小时活杀。取血检测血浆二胺氧化酶(DAO)活性 ,取小肠组织进行形态学观察 ,用免疫组织化学方法研究磷酸化 p38的表达特征。结果 :与 C组相比 ,I组和 R组血浆 DAO活性升高 ,R组动物的小肠黏膜表现为充血、水肿、炎细胞浸润及坏死糜烂 ,以再灌注后 12小时最显著。磷酸化 p38染色显示 ,C组和 I组大鼠每个小肠隐窝仅有 5～ 6个阳性细胞 ,主要在隐窝的下1/ 2 ,大部分表现为分布在胞浆中的棕色颗粒 ,与肠道干细胞及其初级子代细胞的位置一致。再灌注后 2小时阳性细胞数量下降 ,在 6小时隐窝底部的阳性细胞数量增多 ,主要分布在隐窝的中下 1/ 3,在 12小时达到高峰 ,为隐窝细胞总数的 35 .6 % ,在 2 4小时明显下降接近正常。绒毛基质偶有阳性细胞 ,绒毛上皮无表达。结论 :磷酸化 p38在肠道的表达与干细胞及其初级子代细胞的分布非常接近 ,肠 I R?

大鼠创伤失血性休克复合内毒素打击模型中p38丝裂原活化蛋白激酶磷酸化水平的改变

目的 探讨创伤失血性休克复合内毒素打击模型中大鼠腹腔巨噬细胞 (M)内p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)磷酸化水平的改变。方法 制作大鼠创伤失血性休克复合内毒素打击动物模型 ,检测伤后 90min、4h血清中TNF-α、IL - 1β含量的改变及大鼠腹腔M内p38MAPK磷酸化水平的变化 ,并观察致伤组大鼠肺及小肠组织的病理改变。 结果 大鼠在创伤失血性休克复合内毒素打击后血清TNF -α、IL - 1β的含量较对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,腹腔M内p38MAPK磷酸化水平较对照组明显升高 (P <0 .0 1) ,致伤组大鼠肺及小肠组织炎症病理改变显著。结论 p38MAPK的激活状态可能在大鼠创伤失血性休克复合内毒素打击模型的炎症反应中占有重要地位。

角蛋白及p38丝裂原活化的蛋白激酶磷酸化对角质形成细胞增殖抑制的调控

目的:研究抗角蛋白抗体对角蛋白及p38丝裂原活化的蛋白激酶(MAPK)磷酸化的影响。方法:提取抗体作用过的人舌鳞状细胞癌(Tca)细胞角蛋白,以未经抗体作用的细胞作阴性对照。角蛋白经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离、转膜,用抗酪氨酸磷酸化抗体作用和显色。超声裂解抗体作用细胞,设置阴性对照。经SDS-PAGE分离、转膜后用抗磷酸化p38MAPK抗体作用,化学发光剂发光显影。结果:角蛋白在分子质量大约为58ku处出现阳性条带;阴性对照未出现条带。抗磷酸化p38MAPK抗体作用后在分子质量大约44ku处有阳性条带;阴性对照在相应处未出现条带。结论:角蛋白及p38MAPK磷酸化是Tca细胞增殖抑制的重要调控方式。

鞘内注射氯胺酮对切口痛大鼠脊髓磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和cAMP反应元件结合蛋白表达的影响

目的观察鞘内注射氯胺酮对切口痛大鼠脊髓化p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和cAMP反应元件结合蛋白（pCREB）含量的影响。方法成年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠36只,体重250~300 g,随机分为3组：假手术组（Ⅰ组）,0.9%氯化钠溶液组（Ⅱ组,鞘内注射0.9%氯化钠溶液25μL）,氯胺酮组（Ⅲ组,鞘内注射100μg氯胺酮）。Ⅱ组、Ⅲ组均在切口痛术后立即给药,Ⅲ组鞘内给药用0.9%氯化钠溶液稀释至20μL,注射药物后再用0.9%氯化钠溶液5μL冲洗导管。采用von Frey丝测定术前1 h（T0）及术后2（T1）、4（T2）、8（T3）、16（T4）、24 h（T5）时大鼠后爪机械缩足阈值（PWT值）,随后在T5时间点取大鼠脊髓腰膨大部,采用Western印迹法测定磷酸化p38MAPK（p-p38MAPK）和CREB（pCREB）的表达。结果与Ⅱ组比较,Ⅰ组、Ⅲ组在术后各时间点（T1~T5时间点）的PWT值均显著升高（P值均〈0.05）。在T5时间点,与Ⅰ组比较,Ⅱ组大鼠脊髓p-p38MAPK和pCREB表达量均显著升高（P值均〈0.05）;与Ⅱ组比较,Ⅲ组大鼠脊髓p-p38MAPK和pCREB均显著降低（P值均〈0.05）。结论在大鼠切口痛模型中,鞘内注射氯胺酮可减轻大鼠急性切口痛,其镇痛作用可能是通过抑制p-p38MAPK/pCREB信号传导通路实现的。

环氧合酶-2和磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶在扁平苔藓皮损中的表达

目的:检测环氧合酶-2(COX-2)及其上游调控蛋白磷酸化P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)在扁平苔藓皮损中的表达,探讨其在发病中的意义。方法:采用免疫组化技术检测20例扁平苔藓皮损标本中COX-2和p-P38MAPK的表达情况,20例正常皮肤组织作为对照。结果:20例扁平苔藓皮损标本中COX-2和p-P38MAPK的积分光密度值(IOD)分别为(8.46±1.79)×10^3和(11.54±2.85)×10^3,均明显高于对照组(3.14±2.35)×10^3和(6.26±3.12)×10^3,差别具有统计学意义(均P<0.01),同时COX-2与p-P38MAPK的表达强度呈正相关(r=0.62,P<0.01)。结论:扁平苔藓皮损中COX-2表达上调,可能与上游P38MAPK的活化有关,可能是引起扁平苔藓发病的环节之一。

急性呼吸窘迫综合征大鼠血小板丝裂原活化蛋白激酶p38磷酸化水平

目的研究ARDS发病时血小板激活的信号传导途径。方法将SD大鼠30只分为5组,其中4组制作油酸型ARDS模型(经尾静脉注射油酸0.25 mL/kg),1组为对照组(注射等体积生理盐水)。注油酸后2、6、24、72 h或盐水后2 h,从腹主动脉收集血液以分离血小板,提取血小板蛋白,用免疫印迹法检测血小板丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 MAPK)的磷酸化水平。将其与肺病理变化情况进行比较分析。结果 2～72 h ARDS模型组血小板内p38 MAPK磷酸化的水平均高于对照组,以2 h组为最高,变化规律与肺病理变化情况大体一致。结论 MAPKs信号转导通路的启动可能参与了ARDS的发病。

重楼皂苷Ⅶ通过p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路对肝癌细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察重楼皂苷Ⅶ对肝癌细胞恶性生物学行为的影响,并探讨相关机制。方法 于2021年6月至2022年6月,取对数期人肝癌HepG2细胞,分为对照组(常规培养)、重楼皂苷Ⅶ组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L)、SB203580[p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路抑制剂]组(SB203580 10μmol/L)、联合组(重楼皂苷Ⅶ0.8μmol/L、SB203580 10μmol/L)。噻唑蓝法检测细胞增殖能力;膜联蛋白Ⅴ(AnnexinⅤ)/碘化丙啶(PI)双染法检测细胞凋亡率;划痕实验检测细胞迁移能力;小室实验检测细胞侵袭能力;蛋白质印迹法检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)蛋白表达。结果 与对照组24、48、72 h吸光度值,迁移率(74.33±9.37)%,凋亡率(3.25±0.78)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2及侵袭细胞数(364.92±47.99)个比较,重楼皂苷Ⅶ组24、48、72 h吸光度值,迁移率(11.21±3.35)%降低,凋亡率(39.87±8.94)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数(54.84±7.41)个减少(P<0.05);SB203580组24、48、72 h吸光度值,迁移率(89.30±14.56)%升高,凋亡率(1.05±0.15)%,p-p38MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(617.04±75.34)个增加(P<0.05)。与重楼皂苷Ⅶ组比较,联合组24、48、72 h吸光度值,迁移率(40.52±8.18)%升高,凋亡率(11.30±2.80)%,p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2降低,侵袭细胞数(141.36±16.75)个增加(P<0.05);与SB203580组比较,联合组24、48、72 h吸光度值、迁移率降低,凋亡率、p-p38 MAPK/p38MAPK、p-ERK1/2/ERK1/2升高,侵袭细胞数减少(P<0.05)。结论 重楼皂苷Ⅶ可抑制肝癌HepG2细胞增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为,并诱导其凋亡,作用机制可能与激活p38 MAPK信号通路相关。

甘草次酸通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路促进脂多糖诱导的小胶质细胞M2极化

目的探究甘草次酸(GA)通过抑制p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路促进脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞M2极化。方法将小鼠BV2小胶质细胞分为阴性对照(NC)组、LPS组(100μg/ml LPS)、GA组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA)、GA+抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)、抑制剂组(100μg/ml LPS+10μmol/ml p38 MAPK通路抑制剂)和GA+激活剂组(100μg/ml LPS+10μmol/L GA+300 ng/ml p38 MAPK通路激活剂)。用细胞计数试剂盒8法测定细胞活力,酶联免疫吸附测定炎性因子水平,倒置显微镜观察细胞形态,Western blot检测精氨酸酶1(Arg-1)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及p38 MAPK通路相关蛋白表达水平。结果与LPS组比较,GA组和抑制剂组细胞足突增多、胞体变大、细胞间隔缩小,白细胞介素(IL)1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)表达显著降低(22.53±0.53、24.13±1.00 vs 29.56±1.46,10.37±0.59、10.16±0.21 vs 15.13±1.00,0.39±0.01、0.38±0.01 vs 1.12±0.01,0.34±0.01、0.31±0.01 vs 0.89±0.01,0.40±0.01、0.40±0.02 vs 0.88±0.01,P<0.05),IL-10、Arg-1表达显著升高(177.33±7.57、187.21±6.87 vs 64.67±11.50,0.41±0.01、0.44±0.03 vs 0.10±0.01,P<0.05)。与GA组比较,GA+抑制剂组细胞足突增多、胞体变大,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著降低,IL-10、Arg-1表达显著升高(P<0.05);GA+激活剂组细胞足突减少、胞体变小,IL-1β、IL-6、iNOS、P53蛋白、p-p38 MAPK表达显著升高,IL-10、Arg-1表达显著降低(P<0.05)。结论GA可通过阻断p38 MAPK信号通路促进LPS诱导的小鼠BV2小胶质细胞M2极化。

电针对糖尿病神经痛模型大鼠背根神经节磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶的干预作用

目的观察电针对糖尿病神经痛大鼠背根神经节磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(pp38MAPK)表达的影响。方法将20只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为空白组6只,造模组14只,造模组大鼠采用单次腹腔注射链脲佐菌素(65mg/kg)建立糖尿病神经痛模型,造模成功的12只大鼠按随机数字表法分为模型组和电针组,每组6只;电针组于2周后介入电针,取双侧足三里和昆仑穴,每天1次,每次30min,干预1周。空白组、模型组大鼠予以同电针组相同的固定。采用动态足底触觉仪检测大鼠造模前、造模后1、2、3周机械痛阈,采用免疫荧光法检测大鼠腰4至腰6背根神经节中p-p38MAPK阳性细胞表达。结果与空白组比较,造模后1周模型组和电针组大鼠机械痛阈[(31.06±0.66)g、(32.51±0.84)g比(31.04±1.63)g,P>0.05]无显著性差异,造模后2、3周模型组大鼠机械痛阈[(25.20±1.03)g比(31.17±0.68)g,(18.29±2.01)g比(31.92±0.95)g,P均<0.05]均显著降低;与模型组比较,造模后3周电针组大鼠机械痛阈[(26.91±2.81)g比(18.29±2.01)g,P<0.05]显著升高。与空白组比较,模型组大鼠L4-L6背根神经节上的p-p38MAPK阳性细胞个数[(37.76±0.38)个比(21.49±1.57)个、(35.63±1.84)个比(22.49±2.66)个、(33.95±1.34)个比(21.79±1.09)个,P均<0.05]表达显著升高;与模型组比较,电针组大鼠腰4至腰6背根神经节上的p-p38MAPK阳性细胞个数[(26.69±1.35)个比(37.76±0.38)个、(23.54±3.22)个比(35.63±1.84)个、(26.38±2.65)个比(33.95±1.34)个,P均<0.05]表达显著降低。结论电针对糖尿病神经痛模型大鼠有良好的镇痛效果,其机制可能与抑制背根神经节神经元p-p38MAPK表达相关。

丹皮酚通过调节p38丝裂原活化蛋白激酶对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的探讨丹皮酚对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响及其机制。方法使用SPF级雄性SD大鼠构建缺血性脑卒中大鼠模型,将大鼠分为假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、丹皮酚组(Paeonol组,20 mg/kg丹皮酚)、丹皮酚联合p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)激活剂组(Paeonol+Anisomycin组,20 mg/kg丹皮酚+2 mg/kg Anisomycin)。造模48 h后观察大鼠神经功能缺损评分,检测脑梗死体积,使用TUNEL染色及免疫荧光染色观察神经元凋亡及小胶质细胞激活情况,酶联免疫吸附测定法检测缺血半暗带区脑组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和IL-6水平,Western blot检测p-p38 MAPK、p38 MAPK蛋白表达。结果与Sham组比较,Model组大鼠神经功能损伤严重,脑组织出现白色梗死灶,神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK蛋白表达水平升高,差异均有统计学意义(P<0.05);与Model组比较,Paeonol组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积、神经元凋亡率、小胶质细胞数量及TNF-α、IL-1β和IL-6水平、p-p38 MAPK表达水平降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与Paeonol组比较,Paeonol+Anisomycin组大鼠神经功能缺损评分及脑梗死体积增加,且丹皮酚改善缺血性脑卒中大鼠脑损伤及炎症反应的作用可被Anisomycin逆转(P<0.05)。结论丹皮酚可能通过抑制p38 MAPK通路,抑制小胶质细胞激活及炎症反应,减轻缺血性脑卒中引起的脑损伤。

二甲双胍降低2型糖尿病大鼠主动脉磷酸化丝裂原活化蛋白激酶的蛋白表达

目的:探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)与2型糖尿病大鼠主动脉病变的关系及二甲双胍的干预作用。方法:25只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和实验组,实验组采用高脂高糖饲料喂养联合链脲佐菌素注射建立2型糖尿病大鼠模型。将成模糖尿病大鼠随机分为2组:2型糖尿病空白对照组(2型糖尿病组,n=7)、2型糖尿病+二甲双胍干预组(二甲双胍组,n=8)。二甲双胍组给予二甲双胍200 mg/kg灌胃8周,于干预末行腹腔葡萄糖耐量试验,次晨心尖取血并分离血清,全自动生化分析仪测定血糖、血脂等生化指标;放免法测定胰岛素水平;采用酶联免疫吸附方法测定血清细胞间黏附分子-1(ICAM-1),血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)和核因子-κB水平;取胸主动脉进行苏木素伊红(HE)染色,光镜下观察血管病理变化;免疫组化法检测大鼠胸主动脉磷酸化p38 MAPK、核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1蛋白的表达。结果:(1)HE染色可见2型糖尿病组大鼠主动脉管壁结构层次不清,内膜增厚,内皮细胞肿大变性,中膜平滑肌细胞排列紊乱,胶原纤维增生。(2)与对照组相比,2型糖尿病组大鼠空腹胰岛素[(20.00±5.91)m IU/L vs(11.34±3.88)m IU/L]、核因子-κB[(170.22±21.53)μmol/L vs(78.68±12.15)μmol/L]、ICAM-1[(130.59±16.00)pg/ml vs(75.63±19.52)pg/ml]、VCAM-1[(990.19±119.18)ng/ml vs(616.54±54.51)ng/ml]、总胆固醇[(4.15±0.41)mmol/L vs(2.18±0.93)mmol/L]、甘油三酯[(1.83±0.40)mmol/L vs(0.81±0.27)mmol/L]、低密度脂蛋白胆固醇[(2.53±0.44)mmol/L vs(1.24±0.47)mmol/L]水平明显升高(P<0.05),胰岛素曲线下面积(30.78±11.25)m IU·L-1·h vs(47.55±5.23)m IU·L-1·h明显降低(P<0.05),主动脉磷酸化p38 MAPK、核因子-κB、MCP-1蛋白表达水平升高(P<0.05),差异均有统计学意义。(3)实验结束时二甲双胍组大鼠空腹血糖、空腹胰岛素、核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1、VCAM-1、甘油三酯、总胆固醇水平较2型糖尿病组明显降低(P<0.05);二甲双胍组和2型糖尿病组间胰岛素曲线下面积无明显差异(P>0.05)。二甲双胍组大鼠主动脉磷酸化p38 MAPK、核因子-κB、单核细胞趋化蛋白-1蛋白表达水平也较二甲双胍组明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。结论:p38 MAPK信号通路的激活在糖尿病大血管病变发生发展中起重要作用,二甲双胍通过降低p38 MAPK磷酸化水平、抑制炎症反应、调节脂代谢而起到血管保护作用。

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠视网膜缺血再灌注损伤后的磷酸化及其意义

目的:观探讨大鼠视网膜缺血再灌注损伤后p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)的磷酸化及其意义.方法:采用升高眼内压的方法,制作实验性视网膜缺血再灌注大鼠模型.将30只Wistar大鼠随机分为正常组(n=6)和缺血再灌注组(n=24),其中缺血再灌注组又分为再灌注后2,12,24,72h等4个时间段(每时间段6只).应用Western Blot法检测视网膜组织中p38 MAPK及磷酸化p38 MAPK(p-p38MAPK)蛋白的表达变化.结果:p38 MAPK在缺血再灌注组各时间点的视网膜组织内的表达保持相对恒定,与正常对照组相比无统计学上的变化(P>0.05).p-p38 MAPK的表达水平在缺血再灌注组12h时即有明显升高,24h时达到高峰,72h时仍维持较高的表达水平,与正常对照组相比有统计学著差异(P<0.01).结论:p38 MAPK信号通路的激活可能与缺血再灌注所造成的视网膜损伤有密切关系.

Anisomycin过度激活丝裂原活化蛋白激酶使tau发生过度磷酸化(英文)

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的病理特征之一是神经元内存在神经原纤维缠结(neurofibrillary tangles,NFTs),后者是由过度磷酸化的微管相关蛋白tau形成的双股螺旋细丝(pairedhelical filaments,PHFs)构成。为了探讨丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)在微管相关蛋白tau磷酸化中的作用及机制,本实验用0.1μg/mL、0.2μg/mL和0.4μg/mL三种不同浓度的MAPK激动剂anisomycin处理小鼠成神经瘤细胞株(mouse neuroblastoma cells,N2a),检测MAPK活性的变化及其与tau蛋白多个AD相关位点过度磷酸化的关系,并检测糖原合酶激酶-3(glycogen synthase kinase-3,GSK-3)和蛋白激酶A(protein kinase A,PKA)的活性变化。结果显示,anisomycin以剂量依赖的方式激活MAPK活性,但免疫印迹结果显示tau蛋白的Ser-198/199/202位点和Ser-396/404位点的过度磷酸化只在anisomycin浓度为0.4μg/mL时出现,三种浓度的anisomycin均未引起tau蛋白Ser-214位点磷酸化的改变;同时,GSK-3活性在anisomycin为0.1μg/mL时没有明显变化,当anisomycin浓度升高到0.2μg/mL和0.4μg/mL时出现明显增高,而PKA的活性没有明显的改变。使用GSK-3的特异性抑制剂氯化锂(LiCl)则完全阻断MAPK被过度激活导致的tau蛋白磷酸化水平的增高,而同时MAPK活性不受影响。以上结果提示:过度激活MAPK可以导致tau蛋白Ser-198/199/202和Ser-396/404位点过度磷酸化,其机制可能涉及MAPK激活GSK-3的间接作用。

电针干预自发性高血压大鼠主动脉丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1及磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白的表达

背景:近年来大量临床研究表明针刺风池、太冲、曲池等穴位能有效降低血压,可用于高血压,但对其治疗的分子机制尚未阐明。目的:观察针刺大鼠风池、太冲、曲池等穴位对丝裂原活化蛋白激酶信号转导调控系统的影响,从而探讨针刺治疗高血压的分子机制。方法:选取8月龄自发性高血压雄性Wistar大鼠14只,随机分为针刺组和模型组,每组7只;另选取同月龄正常血压雄性Wistar-Kyoto大鼠7只作为对照组。对针刺组大鼠采用电针针刺双侧风池、曲池和三阴交穴,毫针刺太溪和太冲穴。3周后采用RT-PCR方法检测各组大鼠主动脉组织丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRAN的表达,Western blot方法检测丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达。结果与结论:与对照组比较,模型组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平升高,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平降低(P<0.01);与模型组比较,针刺组主动脉组织磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达水平降低,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1mRNA及其蛋白表达水平升高(P<0.05)。提示针刺治疗自发性高血压大鼠可能是通过调控丝裂原活化蛋白激酶信号转导途径,增强磷酸化细胞外信号调节激酶1/2蛋白表达,降低丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶1蛋白表达,从而改善血管重塑,降低血压。

磷酸化丝裂原活化蛋白激酶在大鼠髓核源性背根神经节炎性损伤中的变化

目的:观察背根神经节磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)表达的变化与非压迫性髓核所致的炎性反应及病理性神经痛的关系。方法:选择成年SD雄性大鼠54只随机分为假手术组(18只)和模型组(36只)。模型组在左L5神经背根神经节(DRG)应用自体髓核组织移植建立大鼠非压迫性腰椎间盘突出模型,假手术组应用自体肌肉移植。测量各组大鼠术前至术后21d时左后肢50%机械性撤足阈值(50%PWT)以测定机械痛敏的变化,假手术组术后7d及模型组术后7d、14d、21d取左L5DRG分别进行HE染色观察组织学变化和免疫组化法测定环氧化酶-2(COX-2)与p-p38MAPK的阳性细胞比率。结果:假手术组50%PWT术后无明显变化,模型组术后7d时出现明显的50%PWT下降损伤,术后14d达最低值,术后21d部分恢复。假手术组术后7d时DRG无明显组织损伤,COX-2和p-p38MAPK微弱表达。模型组术后7d时DRG组织损伤严重,COX-2、p-p38MAPK高表达;术后14d时组织损伤进一步加重,COX-2、p-p38MAPK表达更高;术后21d时组织损伤减轻,COX-2、p-p38MAPK表达减弱。结论:背根神经节p-p38MAPK的表达与非压迫性髓核所致炎性反应和病理损伤及病理性神经痛的变化密切相关。