1,4,5-三磷酸肌醇受体及其在休克中的作用

1,4,5-三磷酸肌醇(IP3)受体(IP3R)是内质网释放钙离子(Ca2+)的主要通道之一,在维持细胞内钙稳态方面发挥着重要作用。休克作为一种严重的、发生器官功能障碍与结构损伤的病理过程,钙稳态失调是其重要的中间环节。鉴于IP3R功能或表达异常引起钙稳态失调参与了多种病理过程的发生、进展,本文对IP3R结构与调节的研究进展进行综述,总结IP3R在失血性休克、感染性休克中的作用,期望以IP3R为切入点,为防治重症休克提供理论基础,并探索靶向IP3R防治休克的新策略。

一氧化氮/环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶对血管平滑肌细胞三磷酸肌醇受体Ⅰ型表达及细胞内游离钙的调节

目的证明一氧化氮/环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶对血管平滑肌细胞三磷酸肌醇受体Ⅰ型的表达以及细胞内游离钙水平的调节。方法比色法测定血管平滑肌细胞增殖,激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度,逆转录聚合酶链反应以及免疫印迹法测定三磷酸肌醇受体Ⅰ型的表达水平。结果一氧化氮供体S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶选择性环磷酸鸟苷类似物Sp8-pCPT-cGMP抑制血管平滑肌细胞增殖,但环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶拮抗剂Rp-8-pCPT-cGMP促进血管平滑肌细胞增殖。且S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMPS可以进一步抑制经维拉帕米预处理后的血管平滑肌细胞增殖。维拉帕米抑制苯肾上腺素刺激的细胞内游离钙离子浓度升高,这一抑制作用能够被S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP进一步加强,但可被Rp-8-pCPT-cGMP减轻。三磷酸肌醇受体Ⅰ型mRNA转录与蛋白质表达被S-亚硝基-N-乙酰青霉胺和Sp-8-pCPT-cGMP降低,但被Rp-8-pCPT-cGMP增加。结论一氧化氮/环磷酸鸟苷依赖性蛋白激酶在转录水平和翻译水平抑制血管平滑肌细胞三磷酸肌醇受体Ⅰ型的表达,进而参与对细胞内游离钙离子浓度的调节。

灵芝多糖对小鼠T细胞三磷酸肌醇和二酰基甘油体外作用的研究

目的 研究灵芝多糖 (GLB7)对小鼠T细胞三磷酸肌醇 (IP3 )和二酰基甘油 (DAG)的作用 ,确定其对T细胞信号转导途径。方法 采用细胞培养、放射免疫分析、离子交换层析和薄层色谱法测定小鼠脾脏T细胞中IP3 和DAG的变化。结果 GLB7引起小鼠T细胞中IP3和DAG浓度升高。IP3 的达峰时间为 30s ,百日咳毒素 (PTX)对此现象有抑制作用 ;DAG的合成出现两个峰 ,第一个峰迅速短暂 ,峰值位于 30s,第二个峰是持续时间较长的迟发峰。GLB7对活化的T细胞中IP3 和DAG未产生明显影响。结论 IP3 /Ca2 +

电针“水沟”对脑梗死大鼠脑动脉血管细胞内三磷酸肌醇及二酰基甘油含量的影响

目的:探讨电针"水沟"穴对梗死脑动脉血管细胞内信息转导通路的影响。方法:Wistar大鼠56只,随机分为模型组24只、针刺组24只和空白对照组8只,前两组又分为大脑中动脉阻滞后1、3、6h3个时相组,每组8只。采用Longa腔内线栓法阻滞大鼠右侧大脑中动脉,复制脑梗死模型。电针"水沟"穴(15Hz,0.1mA),持续20min。镜下剥离脑表面动脉血管组织,应用蛋白质竞争结合分析法测定胞内三磷酸肌醇(IP3)含量;采用薄层定量分析法测定胞内二酰基甘油(DAG)含量。结果:①模型1、3、6h3个时相组胞内IP3及DAG含量均明显高于空白对照组(P<0.01),针刺1、3、6h3个时相组胞内IP3及DAG含量均明显低于相应模型组(P<0.01)。结论:电针"水沟"穴调节脑梗死大鼠脑血管舒缩运动从而促进侧支循环的效应可能与细胞内IP3及DAG等信使物质有关。

新生鼠缺氧缺血性脑损伤时三磷酸肌醇激酶信号通路与缺氧诱导因子1α的调节

目的探讨在体神经元缺氧缺血条件下缺氧诱导因子1α(hypoxia inducible factor1α,HIF-1α)蛋白的表达及三磷酸肌醇激酶(phosphoinositid 3-kinase/Akt,PI3K/Akt)信号通路的激活,推测PI3K/Akt信号通路与神经元HIF-1α表达调节的关系,以期更确切地阐明PI3K/Akt在发育期脑缺氧缺血性损伤(hypoxia ischemia brain damage,HIBD)神经元HIF-1α表达中的作用。方法10d龄SD大鼠56只,分为正常对照组(n=12)、假手术组(n=12)、实验组(n=24)、wortmannin干预组(n=4)和溶剂干预组(n=4)。实验组在乙醚麻醉下行右侧颈总动脉结扎,氮氧混合气(92%N2、8%O2)缺氧2.5h,即为HIBD模型;假手术组不结扎颈总动脉,不作缺氧处理;正常对照组不作任何处理。wortmannin干预组和溶剂干预组分别在侧脑室内注射wortmannin和DMSO、PBS3μL,30min后制备HIBD模型。分别于建模后4、8及24h处死动物取脑组织,应用免疫组织化学法检测HIF-1α、Akt蛋白的分布和表达,Western blot检测HIF-1α、Akt及p-Akt蛋白含量。结果实验组HIF-1α蛋白表达在术后4h明显升高,8h达高峰,24h后下降;p-Akt蛋白于术后4h明显升高,8h后下降。正常对照组各时间点HIF-1α和p-Akt均有极少量弱阳性表达。实验组各时间点HIF-1α蛋白表达明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.01);实验组p-Akt于4h和8h明显高于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。Akt蛋白表达随术后时间的延长无明显变化,与正常对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。术后4h wortmannin干预组的HIF-1α蛋白的表达明显下降,与溶剂干预组及实验组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论发育期HIBD时,可激活PI3K/Akt信号通路,并诱导HIF-1α表达增加,可针对PI3K/Akt信号通路和HIF-1α寻找新生儿HIBD新的治疗靶点。

灵芝多糖对小鼠巨噬细胞内三磷酸肌醇和二酰基甘油的作用研究

为研究灵芝多糖（ＧＬＢ７） 对小鼠腹腔巨噬细胞（ ＭΦ） 三磷酸肌醇（ＩＰ３） 和二酰基甘油（ＤＡＧ） 的作用，确定其对ＭΦ信号转导途径，采用细胞培养、放射免疫分析及离子交换层析和薄层层析法测定了小鼠腹腔ＭΦ中ＩＰ３ 和ＤＡＧ 的变化。结果显示ＧＬＢ７ 能引起小鼠ＭΦ中ＩＰ３ 和ＤＡＧ 浓度升高。ＩＰ３ 的达峰时间为３０ｓ，百日咳毒素（ＰＴＸ） 对此现象有抑制作用；ＤＡＧ 的合成出现两个峰，第一个峰迅速短暂，峰值位于３０ｓ，第二个峰是持续近２ｍｉｎ 的迟发峰。表明ＩＰ３／Ｃａ２ ＋ 和ＤＡＧ／ＰＫＣ

三磷酸肌醇对猪冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道的作用

应用膜片钳单通道电流记录技术,研究三磷酸肌醇(trisphosphate inositol,IP3)对猪冠状动脉平滑肌细胞大电导钙激活钾通道(large-conductance Ca2+-activated potassium channels,BK channels)的作用.结果显示:在内面向外式(inside-out)膜片下,IP3(10～50μmol/L)可以浓度依赖性地增加通道的开放概率,而对电流幅值无明显影响,开放概率的增加是通过明显缩短平均关闭时间实现的(n=11,P＜0.01);洗去药物后通道活性可以恢复到对照水平;IP3对通道的激活作用不随时间而衰减;IP3的降解产物对通道没有明显的激活作用.结果表明:在inside-out膜片下,IP3能够激活猪冠状动脉平滑肌细胞BK通道.

3-磷酸肌醇依赖性蛋白激酶-1激活AGC家族激酶的机制研究进展

3磷酸肌醇依赖性蛋白激酶1(3phosphoinositidedependentproteinkinase1,PDK1PDPK1)是蛋白激酶B(proteinkinaseB,PKBCAKT)的上游激酶,通过与3,4,5三磷酸磷脂酰肌醇[PtdIns(3,4,5)P3]作用激活相邻的PKB分子.同时,PDK1被称为AGC激酶的掌管者(master),能够激活包含PKB在内的一系列的AGC激酶家族成员.PDK1磷酸化这些激酶的保守区域Tloop区,使它们充分激活,从而调节细胞代谢,生长,扩散,生存,抗凋亡等诸多生理过程.本文就PDK1调节AGC激酶的活性,与功能上命名的PDK2的关系,PDK1分子自身的调节,PH结构域对自身活性及AGC激酶活性的影响,PDK1定位以及作为一个新药物靶标等方面做了综述.

杨树磷酸肌醇特异性磷脂酶C基因家族鉴定与分析

为了对已测序杨树Populus trichocarpa Torr.＆Gray中磷酸肌醇特异性磷脂酶C（phosphoinositidespecific phospholipase C,PI-PLC）家族基因进行系统分析,利用杨树基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定杨树PI-PLC家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过蛋白序列比对进行进化和分类分析。结果表明,杨树中含有7个PI-PLC家族基因,含有8-10个外显子,分布于杨树的4条染色体上。MEME和Pfam保守结构域分析显示,杨树PI-PLC蛋白均含有4个保守的EF、X、Y和C2结构域。蛋白质进化树分析结果表明PI-PLC可分为2个亚家族。

大承气汤颗粒剂对大鼠肠平滑肌细胞内三磷酸肌醇的影响

观察了大承气汤颗粒剂对大鼠肠平滑肌细胞内三磷酸肌醇（ＩＰ_３）的影响。体内外实验发 现：５０％，１００％，２５０％大承气汤可使肠梗阻大鼠肠平滑肌细胞内ＩＰ_３含量明显升高（Ｐ＜０．０５）。ＩＰ_３ 可介导肠道平滑肌的收缩，大承气汤的通里攻下，增强胃肠道推进功能的作用很可能是通过激活 肌醇脂质ＩＰ_３信号转导系统使胃肠平滑肌细胞内Ｃａ_（２＋）释放增加，再通过钙调蛋白间接地激活一系 列的蛋白激酶而实现的。

桃磷酸肌醇特异性磷脂酶C基因家族鉴定与分析

为了对桃(Prunus persica var.Lovell)中PI-PLC家族基因进行系统分析,利用桃基因组数据库,通过生物信息学手段,鉴定桃PI-PLC家族基因的基因结构、染色体定位和编码蛋白,通过序列比对进行进化和分类分析。结果表明,桃中含有5个PI-PLC家族基因,预测他们均含有9个外显子,分布于桃的2条染色体上。保守结构域分析结果显示,桃中PI-PLC蛋白均含有4个保守的EF、X、Y和C2结构域。进化树分析结果表明桃PI-PLC家族基因可分为4个亚家族。

钙调神经磷酸酶对钙化细胞Ⅰ型三磷酸肌醇受体表达的影响

目的探讨大鼠血管平滑肌细胞钙化过程中钙调神经磷酸酶对Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达的影响。方法大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞经传代培养后随机分为对照组、钙化组和环孢素A组,采用磷酸二氢钠诱导大鼠动脉血管平滑肌细胞钙化。应用免疫印迹法及实时荧光定量RT-PCR法测定钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体的表达变化,同时测定Ca2+浓度及碱性磷酸酶、钙调神经磷酸酶活性。结果与对照组比较,钙化组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著增加(P<0.01);与钙化组比较,环孢素A组钙调神经磷酸酶B亚基、Ⅰ型三磷酸肌醇受体蛋白和mRNA表达显著降低(P<0.01)。钙化组Ca2+浓度、钙调神经磷酸酶活性、碱性磷酸酶活性较对照组显著增高(P<0.01);环孢素A组碱性磷酸酶活性、Ca2+浓度较钙化组显著增加(P<0.05或P<0.01),钙调神经磷酸酶活性较钙化组显著降低(P<0.01)。结论钙调神经磷酸酶能够增强钙化细胞中Ⅰ型三磷酸肌醇受体mRNA和蛋白的表达。

肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞1,4,5-三磷酸肌醇受体表达的变化

目的 :检测肺动脉高压 ( PAH)大鼠肺动脉平滑肌细胞 ( PASMCs)上 1,4,5三磷酸肌醇受体 ( IP3 R)的亚型及 IP3 R各亚型在 PAH时表达水平的变化。方法 :采用大鼠一次性腹腔注射野百合碱 ( MCT) 6 0 mg/kg复制 PAH动物模型 ,用 Western blot法检测 IP3 R亚型的表达及在 PAH状态下其蛋白水平表达的变化。结果 :大鼠 PASMCs共同表达 3个 IP3 R亚型 ,在 PAH时 IP3 R1表达水平明显增高 ,约为对照组的 2倍 ( P<0 .0 1) ,而 IP3 R2和 IP3 R3的表达水平无明显变化。结论 :PASMCs的 IP3 R1表达增强可能参与了

桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体表达的影响

目的观察桃红四物汤对肢体缺血-再灌注损伤大鼠骨骼肌三磷酸肌醇受体(IP3R)表达的影响,从Wnt/Ca2+信号通路角度探讨其作用机制。方法取2月龄雄性SD大鼠80只,随机分为正常组、模型组、桃红四物汤组和阻滞剂组,每组20只,除正常组外,其余各组均阻断血流制备大鼠右后肢缺血-再灌注损伤模型,桃红四物汤组、阻滞剂组造模前分别给予桃红四物汤灌胃、阻滞剂腹腔注射预处理,HE染色和DAPI荧光染色观察再灌后8 h腓肠肌细胞凋亡,免疫组化检测再灌后8 h腓肠肌IP3R蛋白的表达,RT-PCR检测再灌后0、2、4、8 h腓肠肌IP3R mRNA的表达。结果HE染色和DAPI荧光染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显升高(P<0.05);与模型组比较,桃红四物汤组和阻滞剂组大鼠腓肠肌细胞凋亡率明显降低(P<0.05),桃红四物汤组低于阻滞剂组(P<0.05)。免疫组化及RT-PCR检测结果显示,与正常组比较,模型组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显上调(P<0.05);与模型组比较,桃红四物汤组、阻滞剂组大鼠腓肠肌IP3R蛋白和m RNA表达明显下调(P<0.05)。结论桃红四物汤通过下调Wnt5a/Ca2+信号通路IP3R的表达减轻肢体缺血-再灌注损伤。

三磷酸肌醇的研究进展

三磷酸肌醇 (简称为IP3 )具有多种同分异构体 ,不同结构的IP3 具有不同的功能。有的异构体对多种疾病具有预防和减轻病症的疗效 ,有的能消除或减轻一些药物对人和动物产生的副作用 ,有的异构体对动植物细胞内的信息传递具有非常重要的作用等。不同IP3 的制备方法不同 ,利用光谱和高压液相色谱方法可以检测其含量 ,利用核磁共振谱分析方法可以鉴别不同异构体的结构。米糠和玉米浸泡水中含有丰富的植酸盐 ,它是制备IP3

三磷酸肌醇与川芎嗪通过钙通道影响肝癌耐药细胞内药物蓄积

目的探讨三磷酸肌醇与川芎嗪对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM中多柔比星蓄积的影响,推测钙通道参与的机制。方法将人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM分成4组:对照组、维拉帕米组、川芎嗪组和三磷酸肌醇组,噻唑蓝(MTT)法测定4组细胞经不同浓度多柔比星作用后增殖被抑制情况,计算半数抑制浓度(IC50)。荧光显微镜观察4组细胞多柔比星蓄积程度。结果①川芎嗪组多柔比星的IC50值为对照组的(65.35±0.24)%(P<0.05),维拉帕米组为对照组的(64.89±0.18)%(P<0.05),三磷酸肌醇组为对照组的(337.60±0.12)%(P<0.05);②川芎嗪组、维拉帕米组荧光强度明显高于对照组,三磷酸肌醇组荧光强度明显低于对照组。结论三磷酸肌醇可降低人肝癌多药耐药细胞内多柔比星蓄积,增加多柔比星对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的IC50值,川芎嗪具有相反作用。推测三磷酸肌醇可能通过诱导人肝癌多药耐药细胞内钙激活P糖蛋白多药耐药,川芎嗪可逆转该过程。

三磷酸肌醇抗油脂氧化性的研究

本文通过在微波条件下 ,控制水解条件 ,当水解度达到 5 0 %时 ,将水解混和物通过装有 717型强阴离子树脂柱 ,并用 0 .0 5∽ 0 .7M的盐酸进行线性梯度洗脱 ,洗脱物分别取样消化 ,检测无机磷含量变化 ,并将同一峰值部分收集在一起 ,分离得到低磷酸肌醇各组分。各组分用HPLC和MS进行了确证。同时研究了三磷酸肌醇的抗油脂氧化活性。通过对菜籽色拉油在 6 0℃生化恒温箱中强化贮存 ,通过添加不同浓度的三磷酸肌醇 ,并用植酸 ,BHT作对照 ,用碘量法定期测定菜籽油的过氧化值 (POV值 ) ,用 2 ,4 -二硝基苯肼法测羰基值 ,并测定了酸值。实验发现三磷酸肌醇对菜籽油具有明显的抗氧化作用 ,但酸值有所升高。

生育酚结合蛋白通过磷酸肌醇3激酶途径抑制前列腺癌的生长

【目的】探讨生育酚结合蛋白(TAP)对前列腺癌细胞的生长调节及其分子机制。【方法】四甲基偶氮唑盐生长试验(MTT)测定细胞增殖情况,体外集落形成试验测定各细胞的致癌能力,高效液相层析法检测细胞内维生素E的浓度,利用基因转染、基因沉默、免疫印迹、Northern blot,RT-PCR、荧光定量PCR、免疫沉淀等方法研究TAP对前列腺细胞生长的作用及机制。【结果】TAP mRNA水平在前列腺癌细胞LNCaP、PC-3、DU-145、CWR22R中均较正常前列腺细胞RWPE-1低。TAP可促进癌细胞保留维生素E并增强其抗前列腺癌增殖的效应。无维生素E作用下,转染TAP可抑制前列腺癌细胞LNCaP、DU-145的生长,第6天细胞数比对照组分别减少35.8%与42.4%;LNCaP细胞克隆形成率下降54.3%(P<0.05)。利用siRNA在良性前列腺细胞HPr-1中沉默TAP基因,培养9d后,细胞数比对照组增加124.3%(P<0.01)。TAP通过抑制磷酸肌醇PI3激酶信号,而非通过影响细胞周期或雄激素受体信号发挥作用。免疫沉淀实验表明TAP通过抑制PI3K的亚单位p110与p85的相互作用,进而干扰PI3K-Akt信号通路;持续激活Akt的活性可削弱TAP对前列腺癌细胞生长的抑制能力。【结论】TAP不仅能促进前列腺癌细胞摄取和增强维生素E的抗前列腺癌效应,还可通过非维生素E途径发挥作用,可能是防治前列腺癌的有价值的分子靶点。

糖尿病肾病大鼠肾脏组织中Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体的表达

目的:检测糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏组织中Ⅰ型1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3R)的表达。方法:35只健康雄性清洁级SD大鼠随机分成正常对照组(NC组,n=10)和DN组(以新鲜配制的枸橼酸缓冲液稀释链脲佐菌素成10g/L的溶液,按60mg/kg腹腔注射进行造模,当血糖值超过16.7mmol/L,表明糖尿病模型成功。普通饮食继续喂养3周、6周、12周,用放射免疫法测定24h尿蛋白排泄量,≥30mg时确认DN大鼠模型成功),后将DN大鼠随机分为DN3周组(n=9)、DN6周组(n=8)和DN12周组(n=8)。应用免疫组织化学法、RT-PCR测定4组大鼠肾脏组织中Ⅰ型IP3R蛋白及mRNA的表达。结果:Ⅰ型IP3R蛋白主要分布于肾小球系膜区、毛细血管袢和血管平滑肌细胞内,而肾小管未见阳性染色。与NC组相比,各DN组Ⅰ型IP3R蛋白阳性细胞率和mRNA的表达明显增高,差异有统计学意义(F=41.536、53.635,P<0.001)。结论:肾脏组织中IP3R表达增强可能是导致DN产生的重要因素之一。

去甲肾上腺素促使血管平滑肌细胞内三磷酸肌醇含量的增加

研究去甲肾上腺素（ＮＥ）对自发性高血压大鼠（ＳＨＲ）的主动脉血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）内三磷酸肌醇（ＩｎｓＰ３）含量的影响，并与对照组京都威斯特大鼠（ＷＫＹ）相比较。结果显示，在基础状态下ＳＨＲ和ＷＫＹ的ＶＳＭＣｓ内ＩｎｓＰ３含量无明显差异。ＮＥ作用下，ＷＫＹ的ＶＳＭＣｓ内ＩｎｓＰ３值迅速增加，１０秒钟内即达高峰，而ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ内ＩｎｓＰ３的增加呈双相性，除快相峰值明显大于ＷＫＹ外，慢相峰值也显著大于对照组，并且ＩｎｓＰ３值增高后持续时间延长。ＧＴＰγＳ激活Ｇ蛋白后，ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ内ＩｎｓＰ３的增量显著大于ＷＫＹ。提示，ＳＨＲ的ＶＳＭＣｓ内α１肾上腺素受体－肌醇磷脂途径对激活剂的反应性过高，这一途径的一些成份数目、结构或功能可能存在着某些变异。