红景天苷对类风湿关节炎患者血清脯氨酸羟化酶2及蛋白磷酸酯酶2A和丝裂原活化蛋白激酶表达水平的影响

目的分析红景天苷对类风湿关节炎(RA)患者血清脯氨酸羟化酶2(PHD2)及蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)表达水平的影响。方法选取青海省中医院2022年12月至2023年7月收治的RA患者96例。采用随机数字表法分为对照组和观察组,各48例。对照组采用常规西医治疗,观察组在常规西医治疗的同时予以红景天苷治疗,2组均治疗3个月。比较治疗前后2组中医证候评分、临床症状与体征、实验室检查指标[包括红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(anti-CCP)]、临床疗效,健康状况评定量表(HAQ)与28个关节疾病活动度评估(DAS28)评分,血清PHD2、PP2A、MAPK水平与基因表达,不良反应。结果治疗后2组主症、次症评分均低于治疗前且观察组均低于对照组(均P<0.05)。治疗后观察组临床症状与体征均轻于对照组,ESR、CRP、RF和anti-CCP水平均低于对照组(均P<0.05)。观察组总有效率高于对照组[95.8%(46/48)比80.4%(37/46)](P=0.020)。治疗后观察组HAQ与DAS28评分均低于对照组[(5.0±1.0)分比(7.2±1.2)分、(3.1±0.5)分比(4.1±0.7)分](t=9.528、7.444,均P<0.001)。治疗后观察组PHD2、MAPK水平及基因表达均低于对照组,PP2A水平及基因表达均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。2组不良反应发生率差异无统计学意义(P=0.528)。结论红景天苷治疗RA可增强临床效果、减轻患者症状、改善实验室指标且安全。推测与降低PHD2和MAPK表达、增加PP2A表达有关。

德国小蠊羧酸酯酶、酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶的活力与抗药性的关系

目的 :了解德国小蠊的羧酸酯酶 (β NACarE)、酸性磷酸酯酶 (ApE)和碱性磷酸酯酶 (BpE)与抗药性的关系。 方法 :采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和分光光度法。结果 :(1)Rp品系的 β NACarE活力明显高于S品系 ;(2 )Rp、Rc、Rz品系的ApE和BpE的活力均明显高于S品系。 结论 :(1)德国小蠊对拟除虫菊酯和有机磷的抗性与羧酸酯酶的活力增强有关 ;(2 )酸性磷酸酯酶和碱性磷酸酯酶可能与拟除虫菊酯的抗性有关 ,而与有机磷的抗性无关 ,但此结论还有待进一步探讨。

牙齿矿化的低磷酸酯酶血症成因及对策

低磷酸酯酶血症是罕见的遗传性疾病,其典型特征有骨、牙齿矿化异常及血清、骨内碱性磷酸酯酶活性缺乏,临床表现多样.研究其分子发病机理、临床表现及治疗的最新进展,建议口腔医师接诊牙齿异常脱落患者应考虑其早期病史并做针对性诊断和治疗.

磷酸酯酶活性对餐厨垃圾单相厌氧消化抑制的预警作用

为了研究磷酸酯酶活性对键厨垃圾单相厌氧消化抑制的预警作用，考察了单相CSTR反应器在容积负荷2．0-8．5kgVS／（m3.d）条件下的酸性和碱性磷酸酯酶活性，并同步分析了挥发性脂肪酸（VFAs）、容积产气率、pH值的变化．结果表明，酸性和碱性磷酸酯酶活性在容积负荷为2．0-4．0kgVS／（m3．d）时，平均值为14．1，9．8ugNP／（h.mL）；容积负荷为5．0-7．5kgVS／（m3.d）时，其平均值为138．4，23．6ugNP／（h.nlL）；容积负荷为8．5kgVS／（m3．d）的超负荷阶段达到峰值318．1，51．5rtgNe／（h.mL）后快速下降．磷酸酯酶活性骤升的时间较VFAs、容积产气率骤降超前2d、较pH值的骤降提前1d．磷酸酯酶活性较常规指标VFAs、容积产气率和pH值等对单相厌氧消化抑制具有一定的预警作用。

信号肽去除的耐热碱性磷酸酯酶FD-TAP在大肠杆菌中的亚克隆和高表达

通过计算机辅助分析 ,发现在耐热碱性磷酸酯酶 (简称FD TAP)的N端存在 2 6个氨基酸的信号肽序列。但一般信号肽切点并非是完全专一的 ,所以利用基因工程手段将FD TAP的N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸 ,得到了N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸的克隆子 pTAPND2 4、pTAPND2 5、pTAPND2 6和 pTAPND2 7。考虑到这样的克隆子其翻译起始区所形成的能量较低结构稳定的二级结构可能阻碍基因的表达 ,所以在保证氨基酸序列不变的前提下另外设计了 4个引物 ,得到了二级结构能量大大提高的 4个克隆子pTAPND2 4C、pTAP ND2 5C、pTAPND2 6C和 pTAPND2 7C。结果表明pTAPND2 4、pTAPND2 5和 pTAPND2 7没有表达 ;pTAPND2 6和pTAPND2 4C的表达量较低 ,pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达量较高。通过测定 pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达蛋白TAPND2 5、TAPND2 6和TAPND2 7的比活和热稳定性 ,发现无论比活和热稳定性TAPND2 7明显比TAPND2 5和TAPND2 6高且比野生型FD TAP略高。

刺参酸性磷酸酯酶的分离纯化及部分性质研究

以刺参内脏为原料提取一种酸性磷酸酶(ACPase,EC.3.1.3.2),进一步用硫酸铵沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一酶带。该酶紫外最大吸收峰波长为220nm和280nm,荧光发射波长在300nm处,激发峰为306.3nm和606.3nm,等电点为4.2,该酶水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)最适pH值为4.4,最适温度为45℃,酶促反应初速度为0.2591μmol/min,米氏常数Km值为0.816×10-4mol/L。重金属Hg2+、Ag+、Cd2+和Pb2+对该酶有明显的抑制作用,其中Hg2+对该酶的抑制作用最强,抑制程度依次为:Hg2+>Ag+>Pb2+>Cd2+。

异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A和氯化锂对大鼠电休克后学习记忆及海马内谷氨酸含量的影响

目的观察异丙酚、人参皂苷Rg-1、蛋白磷酸酯酶-2A(PP-2A)和氯化锂对电休克(ECT)后嗅球切除抑郁模型大鼠学习记忆和海马内谷氨酸(Glu)浓度的影响。方法按随机单位组设2个干预因素,即ECT干预(2水平:无处置、施行1疗程ECT)和药物干预(5水平:海马CA1区分别微量注射生理盐水、异丙酚、人参皂苷Rg-1、PP-2A、氯化锂,20 g/L)的所有组合(2×5析因设计)。全部ECT处置结束24 h内开始Morris水迷宫检测,高效液相色谱法检测Glu在海马内的浓度。结果单独使用异丙酚或ECT均可造成学习记忆障碍,而二者联合使用则会缓解ECT后的学习记忆障碍;人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂对学习记忆无明显影响,但与ECT合用则可改善ECT后的学习记忆;ECT干预与药物干预存在交互作用。ECT可明显增加海马中Glu浓度;异丙酚和人参皂苷Rg-1在ECT前后均可减少Glu浓度;且ECT干预与药物干预存在交互作用。PP-2A和氯化锂在ECT前后对Glu浓度无明显影响。结论 ECT可使海马Glu浓度升高,导致学习记忆障碍;异丙酚与人参皂苷Rg-1、PP-2A和氯化锂均可改善ECT后的学习记忆;前两者与降低海马中Glu浓度有关,后两者与此无关。

草鱼酸性磷酸酯酶的性质及金属离子对其活性的影响

以草鱼肝脏为材料提取一种酸性磷酸酯酶(ACPase,EC.3.1.3.2),进一步用(NH4)2SO4沉淀分离,Sephadex G-200柱纯化,经聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度鉴定呈现单一酶蛋白带,该酶紫外吸收峰为240nm和280nm,等电点为4.8,相对分子质量为100046.1。该酶水解对硝基苯磷酸二钠(pNPP)的最适pH值为4.4,最适温度为45℃,并有热激活现象,热激活温度为60℃。耐热实验表明,该酶在最适温度下耐热时间为33min,最适温度下20min时表现出最大活性。在60℃下耐热时间为25min,15min时表现最大活性。酶促反应初速度为0.0475μmol/min,最大反应速度为0.153μmol/min。米氏常数Km值为3.56×10-3mol/L。金属离子对酶活性影响的研究结果表明,K+对酶有激活作用,Li+、Na+对酶的活性没有明显影响;碱土金属离子Mg2+、Ca2+和Ba2+对酶有激活作用,其激活程度由大到小依次为:Ba2+、Mg2+、Ca2+;Mn2+对酶有激活作用,Zn2+、Cu2+、Co2+则有抑制作用;重金属离子Hg2+、Pb2+、Ag+和Cd2+对酶有抑制作用,其中Hg2+的抑制效应最强。Mg2+和Cu2+的作用机制研究结果表明,Mg2+对酶具有混合型激活作用,Cu2+对酶具有竞争性抑制作用。

干旱对玉米叶SOD、CAT及酸性磷酸酯酶活性的影响(简报)

干旱条件下玉米叶中SOD、CAT活性下降，酸性磷酸酯酶活性增强，MDA和可溶性磷含量增加，膜脂肪酸不饱和指数下降，膜透性增大。轻度干旱对玉米叶细胞膜无损伤。在恢复供水条件下中度干旱造成的伤害有一定程度的恢复，重度干旱的恢复程度则较小。

德国小蠊磷酸酯酶及谷胱甘肽S-转移酶生化特性的变化与抗药性的关系研究

目的了解德国小蠊的抗药性与磷酸酯酶和谷胱甘肽S-转移酶(GSTs)生化特性变化的关系,以初步揭示其抗性机制。方法参照Bessey等的方法测定磷酸酯酶活性与动力学参数Km和Vmax。参照Clark、Kao和Booth等的方法测定GSTs活性与动力学参数Km和Vmax。结果敏感品系与野生品系德国小蠊的酸性磷酸酯酶活力分别为0.98和26.95 nmol/(只.30 min),比活力分别为1.45和1.59μmol/(mg pro.30 min),Km值分别是26.14和0.89 mmol/L,Vmax值分别是3.33和0.85 nmol/(mg pro.30 min);敏感品系与野生品系德国小蠊的碱性磷酸酯酶活力为(0.03±0.00)和(0.28±0.06)nmol/(只.30 min),比活力分别为(0.33±0.00)和(0.37±0.00)μmol/(mg pro.30 min),Km值分别是70.38和61.24 mmol/L,Vmax值分别是16.20和14.00 nmol/(mg pro.30 min);敏感品系与野生品系德国小蠊GSTs活力分别是0.13和0.47 nmol/min,比活力分别为8.94和17.37 nmol/(mg pro.30 min);Km值分别是2.08和5.81 mmol/L,Vmax值分别是0.08和0.17 nmol/min。结论磷酸酯酶与GSTs在野外品系的抗性形成过程中起一定作用。

水稻叶片酸性磷酸酯酶活性及其部分特性

从水稻叶片部分纯化了水解磷酸烯醇式丙酮酸的磷酸酯酶，其Ｋｍ（ＰＥＰ）为０．１ｍｍｏｌ／Ｌ，最适ＰＨ５．３．在偏酸性ＰＨ条件下（ＰＨ４．０～７．２）稳定，对热亦较稳定．酶活性受Ｐｉ强烈抑制．它对其底物要求不专一，能水解多种含磷酯键的化合物．表明它是一种非专一性的酸性磷酸酯酶。各种含磷酯键的代谢物对酶活性起竞争性抑制作用，且表现出叠加性．Ｃｕ（２＋）、Ｚｎ（２＋）和Ｆｅ（２＋）抑制酶活性，Ｍｇ（２＋）、Ｍｎ（２＋）、Ｃａ（２＋）、Ｃｏ（２＋）和ＥＤＴＡ无影响．

以对硝基磷酸苯酯为底物电化学分析法检测碱性磷酸酯酶

研究了对硝基磷酸苯酯（ＰＮＰＰ）为底物伏安法测定碱性磷酸酯酶（ＡＬＰ）的方法。ＰＮＰＰ在ＡＬＰ的催化作用下水解生成对硝基苯酚（ＰＮＰ）。ＰＮＰ在玻碳电极上＋１．０２Ｖ（ｖｓＡｇ／ＡｇＣｌ）左右产生氧化峰，借助此氧化电流可以测定ＡＬＰ，并进而可用于以ＡＬＰ为标记物的酶免疫分析。用微分脉冲伏安法对酶催化反应条件和酶催化反应产物的测定条件进行了详细的研究，测定ＡＬＰ的线性范围是４．０×１０２～１．０×１０６ｍＵ／Ｌ；检测限为２．８ ×１０２ｍＵ／Ｌ。

不同光湿环境对葡萄花芽分化和叶绿体类囊体膜磷酸酯酶活性的影响

以欧亚种葡萄美人指(Vitisviniferacv.ManicureFinger)为试材,正常光湿为对照,采用正常光偏高湿、偏弱光正常湿度、偏弱光高湿、偏弱光临界高湿、临界弱光偏高湿和临界弱光临界高湿6种处理。试验表明:单一偏弱光处理,葡萄叶片叶绿素含量上升,其余处理叶绿素含量下降;6种处理叶绿体类囊体膜磷酸酯酶活性都低于对照,叶绿体类囊体膜磷酸酯酶活性与光照和湿度有关;正常光偏高湿和偏弱光正常湿度部分芽能分化花原基,但在偏弱光高湿或偏弱光临界高湿花芽分化质量严重下降,临界弱光偏高湿和临界弱光临界高湿几乎未发现花原基;单一的弱光因子比单一的高湿因子对叶绿体类囊体膜磷酸酯酶活性和花芽形态分化影响更大,但弱光与高湿同时存在比单一弱光或高湿因子作用于葡萄时,叶绿体类囊体膜磷酸酯酶活性下降更为显著,花芽更难以形成。

水杨酸对高温强光胁迫下小麦叶片蛋白激酶和磷酸酯酶活性的调节作用

为了探讨外源水杨酸对高温强光胁迫下小麦叶片蛋白激酶和磷酸酯酶活性的调节作用,在灌浆期对小麦叶面喷施0.5 mmol/L水杨酸后,进行高温强光胁迫处理,并测定蛋白激酶活性和磷酸酯酶活性。同时用1 mmol/L蛋白激酶抑制剂(FSBA)处理进行验证。结果表明,外源水杨酸处理显著提高了2种酶活性,蛋白激酶相对活性最高达312%,磷酸酯酶相对活性最高达217%。外源水杨酸通过促进高温强光胁迫下小麦叶绿体蛋白的可逆磷酸化反应,保护了光合机构的完整性。

转Bt基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫磷酸酯酶活性的影响

研究了转Bt基因抗虫玉米对亚洲玉米螟幼虫磷酸酯酶活性的影响,结果表明:取食Bt玉米后亚洲玉米螟幼虫体内的酸性磷酸酯酶活性在72h后显著降低,碱性磷酸酯酶的活性则在24h后就受到抑制,72h时酶活与对照组的比值仅为0.3。随着取食时间增长,酶活力减弱,幼虫的体重也显著低于对照,两者存在一定相关性。

羧酸酯酶和酸性磷酸酯酶在抗有机磷和敏感淡色库蚊发育期的变化

本文研讨羧酸酯酶(CarE)和酸性磷酸酯酶(ApE)在抗马拉硫磷(RM)、抗敌百虫(RD)和敏感(s)品系淡色库蚊Culex pipiens pallens不同发育期中的变化,以及某些杀虫剂和抑制剂对α-醋酸萘酯羧酸酯酶(α-NA CarE)的抑制作用。RD和s品系不同发育期的ApE变化情况如下:(1)RD和S品系间无明显差异;(2)幼虫发育期的ApE水平较低,而在变态期的ApE活性突然上升为最高,表明ApE可能参与蚊虫的发育和分化。RM、RD和S品系的CarE水平在幼虫期随虫龄增长而增高。RM和S品系的CarE活性比维持在20—35倍,RD品系在10—25倍,但三个品系的CarE活性在变态期突然下降。新羽化成蚊的CarE活性出现一个很高的峰。羽化后十天内CarE活性有一定的波动,十天后CarE活性逐渐下降,但仍高于幼虫期和蛹期。此外还讨论了对氧磷、敌敌畏、速灭威、毒扁豆碱、TPP和异稻瘟净对RM、RD和S品系α-NA CarE的抑制作用。

大豆磷酸烯醇式丙酮酸磷酸酯酶研究 Ⅲ、非专一性酸性磷酸酯酶的纯化与特性

从大豆叶片中分离能水解磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)的酸性磷酸酯酶,通过硫酸胺分部(20%～50%饱和度)沉淀、DEAE纤维素层析、刀豆球蛋白琼脂糖凝胶亲和层析将酶纯化了422.47倍,活性达78.16U/mg蛋白。该酶对PEP专一性不强,Km为1.09mmol/L(PEP),最适pH5.8,在pH4.8～7.0范围内及60℃以下较稳定,水解PEP的活性被Mg2+、Mn2+激活,F、Cu2+、Zn2+、PO43、MoO42及3磷酸甘油酸(3PGA)、三磷酸腺苷ATP等代谢物抑制,受异柠檬酸等有机酸影响较小。

寄生植物无根藤吸器发育过程中酸性磷酸酯酶与细胞分裂素变化的研究

无根藤（ＣａｓｓｙｔｈａｆｉｌｉｆｏｒｍｉｓＬ．）吸器发育过程中，细胞内酸性磷酸酯酶与细胞分裂素含量表现出动态变化。吸器发生时，其发生部位的异成烯基腺昔（ｉＰＡ）与玉米素核昔（ＺＲ）含量较对照部位分别高２０倍和６倍，表明吸器的发育与细胞分裂素密切相关。吸器的侵入生长是由于酸性磷酸酯酶影响寄主组织细胞，然后通过吸器生长的压力挤碎寄主细胞而侵入生长，是化学作用与物理作用共同作用的结果。

异双核配合物金属胶束模拟磷酸酯酶催化磷酸单酯水解

合成和表征了四种含过渡金属离子Cu(Ⅱ )和Ni(Ⅱ )的草酰胺桥联异双核配合物 ,并将这些配合物与Brij35表面活性剂胶束构成金属胶束作为金属水解酶模拟物用于催化对硝基苯酚磷酸单酯 (NPP)水解 .研究了金属胶束对NPP水解反应的催化机理 ,建立了异双核配合物催化NPP水解的动力学数学模型 .结果表明 ,四种草酰胺桥联异双核配合物在NPP水解反应中表现出较高的催化活性 ,随着胶束溶液 pH的增大 ,配合物催化NPP水解的速率提高 .配合物中的两个金属离子在催化NPP水解过程中表现出较好的协同效应 .

1型糖尿病大鼠海马Alzheimer样磷酸酯酶2A活性降低导致tau蛋白过度磷酸化

目的为探讨1型糖尿病增高阿尔茨海默病(Alzhei mer disease,AD)发病风险的机制,采用1型糖尿病大鼠模型,研究tau蛋白过度磷酸化及其形成机制。方法以同龄Wistar大鼠为对照组(CTL),大剂量链脲佐菌素(strepto-zotocin,STZ)造成1型糖尿病大鼠模型(T1DM)。葡萄糖氧化酶法检测血糖,放射免疫法检测血浆胰岛素;蛋白质印迹分析海马内总tau蛋白及tau蛋白上部分位点(Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422)的磷酸化水平及胞质内总糖原合成激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK-3β)、磷酸化GSK-3β水平;免疫组化技术分析海马神经细胞内tau蛋白上位点Ser396磷酸化状态;蛋白磷酸酯酶2A(PP2A)、蛋白磷酸酯酶2B(PP2B)试剂盒检测PP2A、PP2B活性。结果T1DM组血糖水平较对照组(CTL)显著升高,血浆胰岛素水平显著下降。T1DM组大鼠海马总tau蛋白水平与CTL组比较差异无显著性意义,但tau蛋白上位点Ser199/202、Ser214、Ser396及Ser422上磷酸化程度有明显升高,Tau-1所检测的Ser199/202位点的非磷酸化水平较CTL组显著降低。免疫组化结果显示T1DM组海马区tau蛋白位点Ser396磷酸化水平显著高于CTL组。两组总GSK-3β水平差异无显著性意义,T1DM组磷酸化GSK-3β水平较CTL组下降,但差异无显著性意义。磷酸酯酶活性检测结果显示,T1DM组PP2A活性显著下降至CTL组的1/3,而PP2B活性不变。结论1型糖尿病大鼠海马中,主要由于PP2A活性下降导致tau蛋白呈Alzhei mer样过度磷酸化改变。