环状人网状蛋白4调节miR-582-5p/神经纤毛蛋白1轴对结直肠癌细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨环状人网状蛋白4(CircRTN4)调节miR-582-5p/神经纤毛蛋白1(NRP1)轴对结直肠癌(CRC)细胞恶性生物学行为的影响。方法选取2019年1月至2023年1月河南科技大学第一附属医院收治的CRC患者50例,通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、蛋白质免疫印迹法分别检测患者的癌组织、癌旁组织、人正常结肠黏膜上皮细胞和CRC细胞中CircRTN4、miR-582-5p mRNA及NRP1的蛋白表达;将SW480细胞分别转染si-RTN4、miR-582-5p inhibitor及相应对照,qRT-PCR检测转染效率;通过平板克隆实验、Transwell小室和流式细胞仪等研究CircRTN4对CRC细胞的影响;蛋白质免疫印迹法检测增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及NRP1蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验检测miR-582-5p与RTN4和NRP1的作用;构建肺癌裸鼠模型,分析敲低RTN4对肿瘤质量、体积及移植瘤中miR-582-5p、NRP1、Ki-67蛋白表达的影响。结果在CRC组织和细胞系中,RTN4、NRP1表达升高,miR-582-5p表达降低(P<0.05);敲低RTN4,降低SW480细胞迁移、增殖与侵袭,下调PCNA、Bcl-2、MMP-2、NRP1表达,促进miR-582-5p、Bax表达及细胞凋亡(P<0.05);miR-582-5p作为RTN4靶点,下调miR-582-5p可减弱RTN4敲低对SW480细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);体内实验显示,抑制RTN4可降低移植瘤质量和体积,降低Ki-67、NRP1表达水平,升高miR-582-5p表达(P<0.05)。结论在CRC组织和细胞系中,CircRTN4高表达,敲低CircRTN4可能通过调节miR-582-5p/NRP1轴抑制CRC细胞的恶性行为。

神经纤毛蛋白1及神经纤毛蛋白2在胃癌组织中的表达及临床意义

目的探讨神经纤毛蛋白1(NRP1)及神经纤毛蛋白2(NRP2)在胃癌组织中的表达及临床意义。方法回顾性分析重庆医科大学附属第一医院肿瘤科及胃肠外科2015年1月至2017年10月收集83例胃癌手术切除标本,每例标本均包括胃癌组织、癌旁组织(距肿瘤边缘1.5 cm)和正常组织(距肿瘤边缘≥5 cm),免疫组化法测定各组织NRP1和NRP2表达,CD105免疫组化染色测定微血管密度(MVD)值。结果胃癌组织NRP1和NRP2阳性率显著高于癌旁组织,差异具有统计学意义(72.29%vs 18.07%,χ2=49.25,P<0.0001;69.88%vs 20.48%,χ2=40.89,P<0.0001)。胃癌组织MVD值显著高于癌旁组织(36.95±5.74 vs 28.78±4.62)和正常组织(36.95±5.74 vs 17.94±4.02),差异有统计学意义(t=4.73,P<0.01;t=6.36,P<0.01),NRP1阳性表达胃癌组织MVP值显著高于NRP1阴性表达胃癌组织(38.47±5.82 vs 30.76±5.32,t=5.47,P<0.01),NRP2阳性表达胃癌组织MVD值显著高于NRP2阴性表达胃癌组织(38.22±5.71 vs 29.84±5.17,t=5.24,P<0.01),NRP2阳性表达和NRP1阳性表达胃癌组织MVD值比较,差异无统计学意义(t=0.95,P>0.05),高龄、肿瘤直径>5 cm、高分化、有淋巴结转移、有血管受侵和高TNM分期均增加胃癌组织NRP1及NRP2阳性表达率和MVD值(P<0.05)。胃癌组织NRP1评分与NRP2评分呈显著正相关(P<0.01),胃癌组织NRP1评分及NRP2评分均与MVD值呈显著正相关(P<0.01)。结论过表达NRP1和NRP2可能与胃癌的发展、浸润和转移密切相关。

神经纤毛蛋白1在卵巢癌组织标本中的表达及临床意义

目的检测神经纤毛蛋白1(neuropilin 1,NRP1)在卵巢癌组织中的表达水平与病理特征的关系,为其治疗和预后提供理论指导。方法选取2013年至2019年于西安交通大学第一附属医院治疗的120例卵巢癌患者及配对的癌旁组织23例,利用实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹分析、免疫组织化学染色分别检测NRP1在卵巢癌组织中的mRNA及蛋白表达水平,并分析NRP1免疫反应性与临床病理特征的关系。同时利用免疫荧光检测NRP1在卵巢癌细胞系SKOV3中的表达水平。结果NRP1蛋白在卵巢癌组织中表达水平显著高于癌旁组织,在卵巢癌组织中阳性表达率(76.67%)明显高于癌旁组织(47.83%)。NRP1的高阳性表达率与肿瘤组织低分化相关,与肿瘤组织高分期相关,与淋巴结转移及CA125血清表达水平均呈正相关。NRP1在卵巢癌细胞系中表达水平也较高。结论NRP1蛋白在卵巢癌中高表达,与卵巢癌的病理分级分期密切相关,可作为一个预后指标指导卵巢癌治疗。

外源性拮抗神经纤毛蛋白1对人舌癌细胞SCC9细胞迁移及分化的影响

目的:利用小分子肽ATWLPPR(A7R)对人舌癌细胞SCC9进行靶向拮抗其神经纤毛蛋白1(Neuropilin-1,NRP-1),研究其对人舌癌细胞SCC9迁移、分化的影响。方法:通过免疫印迹实验检测NRP-1蛋白在舌癌组织及人舌癌细胞SCC9中的表达情况,利用划痕实验及Transwell检测小分子肽A7R对SCC9细胞迁移的影响,以及利用实时定量荧光PCR检测相关上皮、间充质标记蛋白的m RNA表达变化,研究小分子肽A7R对SCC9细胞分化的影响。结果:NRP-1在SCC9中呈高表达,A7R拮抗后SCC9细胞迁移能力明显下降,同时SCC9细胞上皮相关标记蛋白(E-cad,β-cate)m RNA表达水平增高,而间充质相关标记蛋白(snail,FN,α-SMA)m RNA表达水平下降。结论:外源性拮抗SCC9细胞NRP-1可抑制其迁移能力并影响其细胞分化。

贞芪扶正胶囊联合吉西他滨和顺铂化疗方案对晚期非小细胞肺癌患者血清神经纤毛蛋白1、B7-H3水平的影响

目的探讨贞芪扶正胶囊联合吉西他滨和顺铂(GP)化疗方案对晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者的临床疗效及对血清神经纤毛蛋白1(NRP-l)、B7-H3水平的影响。方法根据随机数字表法将62例晚期NSCLC患者随机分为对照组和观察组,每组31例。对照组采用GP化疗方案,观察组在此基础上加用贞芪扶正胶囊。比较两组患者的临床疗效、免疫功能指标(CD3+、CD4+和CD4+/CD8+)、血清NRP-l水平、B7-H3水平和不良反应发生情况。结果观察组患者的有效率为48.39%,高于对照组的22.58%(P﹤0.05)。治疗后,观察组患者的CD3+、CD4+水平和CD4+/CD8+均高于对照组患者(P﹤0.05)。治疗后,两组患者的血清NRP-l、B7-H3水平均低于本组治疗前,且观察组患者的血清NRP-l、B7-H3水平均低于对照组患者(P﹤0.05)。观察组患者胃肠道反应、肝肾功能损害、心脏毒性和白细胞减少的发生率均低于对照组患者(P﹤0.05)。结论贞芪扶正胶囊联合GP化疗方案治疗晚期NSCLC疗效显著,能够增强患者的免疫功能,降低血清NRP-l、B7-H3水平,且不良反应少。

血清神经纤毛蛋白1在早期老年非小细胞肺癌患者中改变及临床价值

目的明确血清神经纤毛蛋白(NRP)-1在早期老年肺癌患者中改变及临床价值。方法老年非小细胞肺癌患者45例为观察组。另纳入老年健康体检者40例为对照组。检测两组外周血癌胚抗原(CEA)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21-1)和NRP-1水平,分析以上指标对早期肺癌的诊断价值。结果观察组外周血CEA(t=4.558;P<0.01)、CYFRA21-1(t=6.271;P<0.01)和NRP-1(t=7.571;P<0.01)水平均显著高于对照组。受试者工作特征(ROC)分析结果显示,以2.41 ng/L为截断值,NRP-1诊断老年早期肺癌的敏感性为82.50%,特异性为82.22%,曲线下面积为0.89,优于CYFRA21-1和CEA。相关性分析显示,老年早期肺癌患者外周血NRP-1和CEA(r=0.821;P<0.01)及CYFRA21-1均呈现显著正相关关系(r=0.838;P<0.01)。结论NRP-1在老年肺癌患者外周血中的水平显著升高且具有一定早期诊断价值。

肝细胞生长因子及其受体与神经纤毛蛋白1在骨肉瘤中的表达及意义

目的检测骨肉瘤组织中肝细胞生长因子(HGF)、肝细胞生长因子受体(C-met)和神经纤毛蛋白1(NRP1)的表达特征,探讨三者的关系及临床意义。方法选择70例骨肉瘤术后留取的蜡块及临床资料作为观察组,选择50例成熟的骨组织脱钙后的蜡块及临床资料作为对照组,应免疫组织化学技术检测2组中HGF、C-met和NRP1蛋白的表达,探讨HGF、C-met和NRP1在肿瘤患者不同临床病理特征的表达差别及其相关性。结果观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率明显高于对照组,观察组中HGF、C-met和NRP1蛋白表达的阳性率与肿瘤的转移、脉管浸润、临床分期及Ki67的表达密切相关。观察组中HGF、C-met和NRP1之间的表达具有正相关性。结论骨肉瘤组织中HGF、C-met和NRP1高表达,三者对病变的进展具有重要作用,术后联合检测HGF、C-met和NRP1的表达可能对判断预后有一定价值。

神经纤毛蛋白1和血管内皮生长因子受体2在肝细胞癌组织中的表达和临床意义

目的检测神经纤毛蛋白1(NRP-1)和血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)在肝细胞癌组织及其癌旁正常肝组织中的表达情况,同时探讨NRP-1和VEGFR2的表达与肝细胞癌病人预后的关系。方法收集2014年11月至2018年11月在徐州医科大学附属医院肝胆外科行手术切除并经病理学确诊为肝细胞癌病人的肿瘤石蜡标本40例及其癌旁正常肝组织标本20例,应用免疫组织化学法检测肝细胞癌组织及正常肝组织中NRP-1和VEGFR2的表达情况。对病人进行至少为期1年的随访,末次随访时间为2019年11月。结果NRP-1、VEGFR2在肝细胞癌组织中的表达[(0.398±0.051)、(0.454±0.058)]明显高于正常肝组织[(0.244±0.095)、(0.337±0.064)](均P<0.05)。NRP-1、VEGFR2表达与肝细胞癌病人的肿瘤最大径、有无血管侵犯、分化程度、TNM分期明显相关(均P<0.05),而与病人的性别、年龄、有无慢性肝炎病毒感染、甲胎蛋白水平、肿瘤数目、有无肝硬化、Child-Pugh分级无关(均P>0.05)。NRP-1和与VEGFR2的表达呈正相关(r=0.789,P<0.001)。此外,NRP-1、VEGFR2表达高的肝细胞癌病人的术后1年内复发率高[63.64%(14/22)、55.00%(11/20)],而NRP-1、VEGFR2表达低的肝细胞癌病人的术后1年复发率较低[5.56%(1/18)、20.00%(4/20)](均P<0.05)。结论NRP-1、VEGFR2在肝细胞癌组织中均有高表达,在肝细胞癌的发生和发展中起重要作用,而NRP-1、VEGFR2的高表达提示病人预后不良。

胃腺癌组织中神经纤毛蛋白1、2的表达及意义

目的检测胃腺癌中神经纤毛蛋白(NRP)1、2表达,分析二者关系及意义。方法确诊为胃腺癌的患者94例为观察组,非肿瘤性胃黏膜组织21例为对照组,均留取术后蜡块组织。应用免疫组化SP法检测两组NRP1和NRP2表达。结果观察组NRP1和NRP2表达阳性率明显高于对照组,观察组中NRP1和NRP2表达的阳性率与肿瘤脉管累犯和淋巴结转移密切相关,NRP1表达与肿瘤浸润深度密切相关。二者均与性别、年龄及分化程度无相关性。线性相关分析显示观察组中NRP1和NRP2表达呈正相关。结论胃腺癌术后组织中NRP1和NRP2表达增高对肿瘤性病变形成和进展有一定作用,二者可能具有正向协同作用。

老年子宫内膜样癌患者术后组织神经纤毛蛋白1、2和锌指E-盒结合同源异形盒-1的表达及意义

目的检测对老年子宫内膜样癌患者癌组织中神经纤毛蛋白(NRP)1、2和转录因子锌指E-盒结合同源异形盒(ZEB)-1的表达,探讨三者关系及在不同临床特征中的表达差别。方法收集145例老年子宫内膜样癌患者手术后存留的蜡块及临床资料作为研究组,收集90例子宫平滑肌瘤行子宫全切术后的正常子宫内膜组织作为对照组,应用免疫组化方法检测NRP1、2和ZEB-1表达。结果研究组NRP1、2和ZEB-1蛋白表达阳性率明显高于对照组(P<0.000 1),研究组NRP1、2和ZEB-1表达均与肿瘤TNM分期、浸润深度、脉管累犯和Ki67指数密切相关。NRP1、2和ZEB-1的表达呈正相关。结论老年子宫内膜样癌患者癌组织NRP1、2和ZEB-1高表达,三者可以有效促进肿瘤发生和进展且可能具有一定的协同作用。

数据挖掘技术分析神经纤毛蛋白1在脑胶质瘤中的表达及意义

目的研究神经纤毛蛋白1(NRP1)在脑胶质瘤中的表达及意义。方法利用BioGPS数据库分析NRP1在正常组织中的表达;挖掘Oncomine数据库中关于NRP1的信息,并对资料进行二次分析,研究其在脑胶质瘤中的意义;利用癌症细胞系百科全书(CCLE)数据库查询NRP1在脑胶质瘤细胞系中的表达。结果BioGPS数据库显示,NRP1在平滑肌组织、心脏、肝脏、甲状腺、视网膜、神经节及免疫细胞中表达量较高。Oncomine数据库中关于NRP1表达有统计学差异的研究结果有30个,NRP1表达增高的研究有15个,表达降低的研究有15个。其中4项涉及NRP1在胶质母细胞瘤与正常脑组织中表达的研究,共包含922个样本,meta分析表明,与正常脑组织相比,NRP1在胶质母细胞瘤中高表达(P=5.70×10-7)。4级脑胶质瘤与正常脑组织、2级脑胶质瘤和3级脑胶质瘤比较NRP1均呈高表达(P<0.05),而正常脑组织、2级胶质瘤和3级胶质瘤组间NRP1表达量比较差异无统计学意义(P>0.05)。CCLE数据库分析显示,在脑胶质瘤细胞系中NRP1 mRNA高表达。结论通过对多个数据库的分析挖掘,发现NRP1在胶质瘤中高表达,且与胶质瘤的分级程度有关,这将为胶质瘤分子诊断的开发提供重要的理论依据,为深入研究NRP1在胶质瘤发生、发展中的作用奠定基础。

喉鳞癌患者术后组织中神经纤毛蛋白1、2的表达及对血管生成的作用

目的观察喉鳞癌组织中神经纤毛蛋白(NRP)1、2的表达特点,关注二者对肿瘤中CD34阳性的血管生成的作用。方法收集79例喉鳞癌标本作为观察组,收集53例正常喉黏膜组织作为对照组,应用免疫组织化学技术检测二组中NRP1、NRP2和CD34的表达,分析其在不同临床特征中的表达差别及相关性。结果喉鳞癌中NRP1、NRP2表达的阳性率和CD34标记的微血管密度(MVD)明显高于对照组,观察组中NRP1、NRP2表达的阳性率和MVD与肿瘤体积、淋巴结转移、淋巴结转移数量及Ki67的表达密切相关,线性相关分析显示NRP1和MVD、NRP2和MVD具有正相关性,生存分析显示NRP1、NRP2和MVD与患者的预后相关。结论 NRP1、NRP2和MVD高表达在喉鳞癌的发生发展中具有重要作用,NRP1、NRP2具有促进CD34阳性的血管生成的作用,联合检测NRP1、NRP2和MVD可能与喉鳞癌的预后密切相关。

神经纤毛蛋白1和C-MET在不同临床病理特征的非小细胞肺癌中的表达特点及其对肿瘤血管生长的关系

目的探讨神经纤毛蛋白1(NRP1)和C-MET在不同临床病理特征的非小细胞肺癌中的表达特点及其对肿瘤血管生长的关系。方法选取107例肺癌患者和79例正常患者的蜡块组织,分为观察组和对照组,通过免疫组化技术检测所有组织中的NRP1、C-MET的阳性表达率和MVD值,采用统计学方法对两组值进行对比并比较观察组的不同临床症状与的NRP1、CMET的阳性表达率和MVD值的相关性。结果观察组的NRP1、C-MET的表达和MVD值明显高于对照组(P<0.05)。NPR1、C-MET阳性率,MVD值与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、胸膜侵犯、Ki67表达、脉管浸润有明显相关性(P<0.05)。NRP1的阳性率与C-MET的阳性率存在正相关性(r=0.485,P<0.001),NRP1的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.447,P<0.001),C-MET的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.493,P<0.001)。结论 NRP1和C-MET在非小细胞肺癌中存在高表达,二者均可促进肿瘤血管的生成,同时还存在一定的正向协同作用。

孕晚期妊娠期高血压患者血清串珠素、神经纤毛蛋白-1水平与病情、围生结局的关系

目的 探讨孕晚期妊娠期高血压患者血清串珠素(perlecan)、神经纤毛蛋白-1(NRP-1)水平与病情、围生结局的关系。方法 将2021年1月至2023年1月该院收治的103例孕晚期妊娠期高血压患者作为研究对象,根据病情严重程度将其分为单纯高血压组46例、轻度子痫组35例、重度子痫组22例。记录患者的围生结局情况,分为结局良好组72例和结局不良组31例。采用酶联免疫吸附试验法检测血清perlecan、NRP-1水平,采用受试者工作特性(ROC)曲线分析探讨血清perlecan、NRP-1对孕晚期妊娠期高血压患者围生结局的预测价值,采用多因素Logistic回归分析探讨孕晚期妊娠期高血压患者围生结局的影响因素。结果 轻度子痫组、重度子痫组血清perlecan、NRP-1水平低于单纯高血压组,差异有统计学意义(P<0.05);重度子痫组血清perlecan、NRP-1水平低于轻度子痫组,差异有统计学意义(P<0.05)。结局良好组血清perlecan、NRP-1水平高于结局不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。血清perlecan、NRP-1两项指标联合预测孕晚期妊娠期高血压患者围生结局的临床效能优于单项指标预测。结局不良组年龄≥35岁占比、孕前体重指数(BMI)≥24 kg/m2占比、有流产史占比、收缩压、舒张压、24 h尿蛋白高于结局良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,孕前BMI≥24 kg/m2、有流产史、收缩压高、perlecan≤8.63 nmol/L、NRP-1≤4.37 ng/mL是孕晚期妊娠期高血压患者不良围生结局的独立危险因素(P<0.05)。结论 血清perlecan、NRP-1水平降低与孕晚期妊娠期高血压患者的病情加重及不良围生结局有关,两项指标可作为预测患者围生结局的生物学标志物。

基于CiteSpace的神经纤毛蛋白-1研究的可视化分析

目的运用CiteSpace分析神经纤毛蛋白-1(NRP1)的研究现状、热点和趋势。方法检索中国知网、万方数据知识服务平台、维普网及Web of Science核心合集数据库从建库至2022年9月NRP1的相关文献,利用CiteSpace对年份、作者、机构及关键词进行可视化分析。结果共纳入中文文献536篇和英文文献2444篇,年发文量呈现波动上升趋势。中文文献发文量最多的作者是颜江华和韩正祥,英文作者是Ruhrberg,Christiana。厦门大学和哈佛大学分别是中英文文献发文量最多的机构。胃癌、血管生成、乳腺癌是中文研究热点,表达、受体、内皮生长因子是英文研究热点。结论NRP1的研究仍处于发展阶段,研究热点和趋势是机制和临床研究。团队间应加强合作,使研究更为系统。

神经纤毛蛋白1对非小细胞肺癌放射敏感性的影响

目的 探讨神经纤毛蛋白1（neuropilin 1,NRP1）在不同种类非小细胞肺癌（NSCLC）细胞系的表达情况及其与肿瘤放射敏感性的关系,方法 通过Western blot技术检测不同来源的5种人NSCLC细胞系（H358、H460、H1299、A549、SK-MES-1） NRP1的基础表达水平,MTT方法检测经不同剂量X射线照射后肺癌细胞的存活情况,初步筛选5种细胞中辐射敏感和辐射抵抗的2种细胞;采用克隆形成实验及流式细胞术分别检测细胞存活分数及凋亡率的变化,分析2种肺癌细胞的放射敏感性,采用Western blot检测2种细胞受X射线作用后NRP1的表达变化,通过克隆形成实验检测靶向抑制NRP1对A549细胞放射敏感性的影响,结果 5种肿瘤细胞NRP1表达量由高到低依次为：A549＞ SK-MES-1＞ H358＞ H460＞ H1299;X射线对肿瘤细胞的抑制能力呈剂量依赖性增强,其抑制率由高到低依次为：H460＞ H1299＞H358＞ SK-MES-1＞A549,因此选取A549细胞和H460细胞做后续研究.克隆形成实验显示,A549在2 Gy照射下的存活分数（SF2）是0.887,而H460细胞为0.313。A549细胞受照后的凋亡率为对照组的122.54％,明显低于H460细胞的238.88％,辐射可以诱导A549细胞NRP1的表达上调达40％,同时靶向抑制NRP1则可以增强A549细胞的放射敏感性,结论 在NSCLC细胞中A549细胞具有较强的辐射抗性,且辐射抗性的形成与其NRP1表达上调有关。

人非小细胞肺癌中神经纤毛蛋白1表达及其与临床病理特征和预后的关系

目的:检测神经纤毛蛋白1(neuropilin-1,NRP-1)在人非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)及其癌旁正常组织中的表达情况,并探讨NRP-1表达与NSCLC患者各临床病理参数及预后的关系。方法:选取2009年6月—2012年6月在徐州医科大学附属医院行手术切除并经病理学确诊为NSCLC患者的肿瘤石蜡包埋标本92例及其癌旁正常肺组织标本88例,应用免疫组织化学法检测NSCLC及癌旁正常组织中NRP-1的表达情况。以患者手术时间为起始,对患者进行电话随访,末次随访时间为2016年6月。分析NRP-1表达与NSCLC患者各项临床病理指标及预后的关系。结果:NRP-1在NSCLC组织中的高表达率明显高于癌旁正常肺组织(P=0.004)。NRP-1表达与NSCLC患者的肿瘤最大直径、是否有淋巴结转移、TNM分期和病理分级明显相关(P值均<0.05),而与患者的年龄、性别、组织学类型及是否吸烟无关(P值均>0.05)。NRP-1高表达组患者的总生存期明显长于NRP-1低表达组(P<0.001)。COX多因素分析显示,NRP-1表达与TNM分期是NSCLC患者预后的独立危险因素(P值均<0.05)。结论:NRP-1高表达与NSCLC临床病理特征及预后较差相关,提示NRP-1可能成为NSCLC患者的一个预后分子标志及潜在治疗靶点。

密骨方对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨折愈合过程中神经纤毛蛋白1表达的影响

目的采用密骨方干预去卵巢骨质疏松骨折大鼠,观察密骨方对骨折断端神经纤毛蛋白1(Nrp-1)表达的影响,探讨中药密骨方影响骨质疏松骨折愈合的机制。方法将3月龄雌性Wistar大鼠随机分为假手术对照组、模型对照组、密骨方治疗组3组适应性饲养1周后采取摘除双侧卵巢的方法建立骨质疏松模型。术后5个月,克氏针右侧股骨骨髓腔固定徒手骨折,并复位固定,建立骨折模型。骨折术后第2天,密骨方组以密骨方灌胃干预。分别在密骨方干预后第2、4、6周采集血液样本及骨组织,用酶联免疫吸附测定法检测大鼠雌激素含量及用Western Blot实验方法检测骨折断端神经纤毛蛋白1含量。结果模型组大鼠骨折断端雌激素含量与假手术组比较显著降低(P<0.05);密骨方组与模型组比较雌激素含量显著升高(P<0.01)。模型组大鼠骨折断端Nrp-1蛋白含量与假手术组比较显著降低(P<0.01);密骨方组大鼠骨折断端Nrp-1蛋白含量与假手术组比较亦显著降低(P<0.01),但与模型组比较,在第4、6周则显著升高(P<0.01)。结论密骨方能提高去卵巢大鼠骨折断端雌激素含量及神经纤毛蛋白1的表达且神经纤毛蛋白1可能作为一个多功能的受体抑制了破骨细胞的生成增强成骨细胞作用,促进绝经后骨折疏松骨折的愈合。

神经纤毛蛋白1在辐射诱导肺上皮细胞转化中的调控作用

目的通过利用神经纤毛蛋白1(NRP1)不同表达水平的肺上皮细胞模型,检测电离辐射诱导上皮-间充质转化(EMT)标志物及相关转录因子表达变化,探讨NRP1对辐射诱导肺上皮细胞EMT发生中的作用。方法对人肺Ⅱ型上皮细胞(A549)构建NRP1过表达(NRP1high-A549)和NRP1敲低(NRP1^low-A549)细胞模型,同时对小鼠正常肺上皮细胞(MLE-12)构建siNRP1-MLE-12细胞模型并进行验证。对NRP1high-A549、NRP1^low-A549和siNRP1-MLE-12细胞模型分别进行单次10GyX射线照射,于照射后0、12、24和48h提取总蛋白和总RNA。利用Westernblot法和q-PCR法检测各组细胞模型中EMT标志物(β-catenin、N-cadherin和Vimentin)及相关转录因子(Twist和ZEB1)的变化。结果野生型A549和MLE-12细胞照射后NRP1mRNA和蛋白表达显著升高,间充质标志物(Vimentin和N-cadherin)显著升高(A549:t=2.917、7.361,P<0.01;MLE-12:t=9.652、31.357,P<0.01),ZEB1和Twist转录因子表达显著升高(A549:t=4.852、9.278,P<0.01;MLE-12:t=30.985、17.266,P<0.01)。NRP1^low-A549和siNRP1-MLE-12组受照后Vimentin和N-cadherin表达显著下降(NRP1^low-A549:t=10.077、15.707,P<0.01;siNRP1-MLE-12:t=5.745,P<0.01),上皮标志物(β-catenin)蛋白表达显著升高;而NRP1high-A549组照射后N-cadherin和Vimentin显著升高(t=16.055、5.560,P<0.01),而β-catenin显著下降。检测NRP1^low-A549组Twist转录因子在照射后显著下降(t=3.987,P<0.01),而NRP1high-A549组ZEB1和Twist转录因子照射后呈时间依赖性升高(t=11.289、2.903,P<0.01);siNRP1-MLE-12细胞模型照射后ZEB1转录因子显著下降(t=13.449,P<0.01),siNRP1-MLE-12组ZEB1和Twist蛋白表达均低于对照组,呈时间依赖性下降。结论NRP1可促进辐射诱导人和小鼠上皮细胞的EMT发生,而这种促进作用可能通过上调转录因子ZEB1和Twist的表达。

神经纤毛蛋白-1与膜相关转化生长因子-β共表达对调节性T细胞免疫抑制功能的影响

目的探讨神经纤毛蛋白-1（Nrp-1）与膜相关转化生长因子-β（TGF-β）共表达对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋Treg）免疫抑制功能的影响。方法体外培养Balb/c小鼠CD4＋CD25＋Treg细胞，在抗CD3/CD28和脂多糖（LPS）诱导下，给予不同浓度的抗Nrp-1抗体（Ab-Nrp-1）封闭24 h后收集细胞，采用流式细胞分析仪检测细胞表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达。分别将不同浓度Ab-Nrp-1封闭1 h后的Treg与小鼠正常CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养，观察抗CD3/CD28和LPS诱导下12、24和48 h后对CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖能力的影响。结果在抗CD3/CD28和LPS诱导下，Treg表面Nrp-1与膜相关TGF-β表达率明显增加（均P＜0.05），Treg膜相关TGF-β表达随着Ab-Nrp-1浓度的增加逐渐降低，呈明显的浓度依赖性（P＜0.05）；正常Treg与CD4＋CD25-T淋巴细胞共培养后，能显著抑制CD4＋CD25-T淋巴细胞增殖功能（P＜0.05），而不同浓度Ab-Nrp-1处理能逆转抑制作用，其中5μg/ml已达最大效应（P＜0.05），且24 h后作用最强，具有明显的浓度-时间依赖性（P＜0.05）。结论 Treg通过膜相关TGF-β发挥免疫抑制功能，共表达Nrp-1能够明显增强其免疫抑制作用。